β-咔啉类生物碱抑制SGC-7901细胞迁移和侵袭的机制研究

该研究主要探索β-咔啉类生物碱抑制SGC-7901细胞迁移和侵袭的机制与黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)基因表达的相关性。采用CCK-8法测定不同浓度条件下β-咔啉类生物碱对胃癌SGC-7901细胞的增殖抑制率;并通过Transwell小室测定β-咔啉类生物碱对SGC-7901细胞迁移与侵袭能力的影响;qRT-PCR及Western blot技术检测FAK基因mRNA及蛋白的表达差异。然后将si-FAK-1051重组质粒转染到SGC-7901细胞中,再次采用qRT-PCR及Western blot技术鉴定FAK基因沉默效果,最后采用同样的方法检测FAK基因沉默对胃癌SGC-7901细胞增殖和迁移的影响。随着β-咔啉类生物碱浓度增加,人胃癌SGC-7901细胞增殖抑制率逐渐升高,IC50=13.364 mg·L-1;阳性对照组(5-FU,5 mg·L-1)和β-咔啉类生物碱组中Transwell小室内SGC-7901细胞均可见显著减少(P0.01),且β-咔啉类生物碱组SGC-7901细胞数目较阳性对照组明显降低(P0.01);阳性对照组、β-咔啉类生物碱实验组FAK基因mRNA及蛋白表达水平较空白对照组显著降低(P0.05)。si-FAK-1051转染入胃癌SGC-7901细胞后,FAK基因的mRNA及蛋白表达被明显下调(P0.05),细胞增殖和细胞迁移能力也显著降低(P0.05)。β-咔啉类生物碱较5-FU具有更有效的抑制胃癌SGC-7901细胞迁移与侵袭能力,而该机制可能与β-咔啉类生物碱抑制FAK基因mRNA及蛋白表达水平有关。     

orchinol对胃癌SGC-7901细胞侵袭迁移和Wnt3a/β-catenin信号通路的影响

研究中药绶草中分离得到的主要的9,10-二氢菲类单体化合物orchinol对人胃癌SGC-7901细胞侵袭和迁移的抑制作用及初步的分子机制。体外培养人胃癌SGC-7901细胞,分别加入终浓度为5,10,20,40,80μmol·L-1的orchinol处理细胞24,48,72 h,采用MTT法检测orchinol对SGC-7901细胞活力的影响;利用伤口愈合实验、Transwell实验分别分析5,10,20μmol·L^-1orchinol作用48 h后对SGC-7901细胞的迁移和侵袭能力的影响;Western blot法检测orchinol对SGC-7901细胞β-catenin,Wnt-3a,DvL2,cyclinD1,GSK-3β蛋白表达水平的影响。结果显示,orchinol在5~80μmol·L^-1能以剂量和时间依赖性的方式抑制SGC-7901细胞的活力,orchinol分别处理细胞24,48,72 h后,其对SGC-7901细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为77.79,42.96,7.85μmol·L^-1;与对照组相比,5,10,20μmol·L^-1orchinol作用48 h,可明显抑制SGC-7901细胞侵袭和迁移的能力(P<0.05,P<0.01),且呈剂量依赖关系;Western blot结果显示,orchinol可显著下调β-catenin,Wnt3a,DvL2,cyclinD1蛋白、显著上调GSK-3β蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。以上结果提示orchinol能显著抑制SGC-7901细胞侵袭和迁移能力,其机制可能是与orchinol抑制Wnt3a/β-catenin信号通路及下游基因蛋白的表达有关。     

β咔啉类生物碱对人胃癌SGC-7901小鼠移植瘤生长及凋亡相关蛋白表达的影响

目的探讨新疆地道药材骆驼蓬中提取物β咔啉类生物碱对人胃癌细胞SG-7901昆明小鼠移植瘤生长及凋亡相关蛋白表达的影响。方法建立人胃癌昆明小鼠移植瘤模型,随机分为β咔啉类生物碱组,5-FU组及空白对照组,每组各15只。β咔啉类生物碱行口服给药,5-FU组及空白对照组行腹腔灌注给药。给药21天后,检测小鼠体质量、肿瘤体积、瘤质量,并计算抑瘤率。使用免疫组化和Western Blotting技术检测各组瘤组织中Bcl-2、Bax、Survivin、Fsa、P53蛋白表达。结果β咔啉类生物碱能较好的抑制胃癌小鼠移植瘤的生长,能明显使肿瘤缩小。免疫组化及Western Blotting结果显示,经β咔啉类生物碱处理后的移植瘤中Bcl-2、Survivin、Fsa、P53蛋白表达较空白对照组下降,而Bax蛋白表达较空白对照组上升。结论咔啉类生物碱对人胃癌SGC-7901小鼠移植瘤有明显的抑制作用,其机制可能与下调Bcl-2、Survivin、Fsa、P53的表达,上调Bax的表达,诱导胃癌细胞凋亡有关。     

夏龙方对人胃癌SGC-7901细胞黏附和侵袭的影响

目的:观察夏龙方对胃癌细胞SGC-7901黏附、侵袭、移动等转移生物学行为的影响。方法:体外培养SGC-7901细胞,分为夏龙方50,100,200 mg·L-1(低、中、高剂量)组和对照组,采用Cytoselect 48-Well Cell Adhesion Assay检测胃癌细胞与基质黏附能力;利用Transwell侵袭转移模型评价夏龙方对胃癌细胞侵袭能力的影响、划痕实验观察夏龙方对SGC-7901细胞移动能力的影响。结果:终浓度100,200 mg·L-1夏龙方能显著降低SGC-7901细胞黏附能力,50～200 mg·L-1可抑制SGC-7901细胞侵袭,终浓度50 mg·L-1夏龙方可显著抑制SGC-7901细胞迁移。结论:夏龙方可降低SGC-7901细胞的黏附能力,侵袭能力,抑制细胞迁移。     

巴豆生物碱对人胃癌细胞SGC-7901 p53基因表达的影响

目的 :研究巴豆生物碱对人胃癌细胞SGC - 790 1p5 3基因表达的影响。方法 :应用流式细胞术检测p5 3基因的表达。结果 :巴豆生物碱中、大剂量组 p5 3基因的表达明显下降。结论 :巴豆生物碱能明显降低人胃癌细胞SGC - 790 1p5 3基因的表达 ,具有诱导人胃癌细胞株SGC - 790 1分化的倾向。     

松萝烟酰胺对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡、细胞周期及迁移的影响

目的探讨松萝烟酰胺对胃癌SGC-7901细胞的增殖抑制作用及机制。方法体外培养SGC-7901细胞,分为对照组和不同浓度的松萝烟酰胺实验组,显微镜观察各组细胞形态;MTT法测定SGC-7901细胞增殖;AnnexinV/PI双染和DAPI荧光染色检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞周期;细胞划痕实验检测细胞的迁移。结果松萝烟酰胺处理SGC-7901细胞后,细胞发生皱缩、变形,贴壁细胞脱落;MTT结果显示,松萝烟酰胺对SGC-7901增殖抑制作用呈明显的浓度依赖性和时间依赖性;AnnexinV/PI双染结果显示,松萝烟酰胺使SGC-7901细胞的晚期凋亡率增加,且DAPI染色可观察到明显的细胞凋亡的核浓缩、核碎裂;流式结果显示,松萝烟酰胺使SGC-7901细胞周期停滞在S期;划痕实验显示,随着时间的延长、浓度的增加,松萝烟酰胺使SGC-7901细胞迁移率下降越明显。结论松萝烟酰胺对SGC-7901细胞具有增殖抑制作用,其作用机制可能是通过诱导细胞凋亡、阻滞细胞于S期,从而抑制细胞的迁移。     

复方苦参注射液对胃癌SGC-7901细胞侵袭转移能力的影响

目的:研究复方苦参注射液对胃癌SGC-7901细胞侵袭转移能力的影响。方法:体外培养胃癌细胞系SGC-7901,MTT法测定药物对细胞增殖的抑制作用,应用粘附试验、Transwell趋化运动和Matrigel侵袭实验,研究复方苦参注射液及其不同浓度下对SGC-7901细胞的粘附、运动以及侵袭能力的影响。结果:复方苦参注射液浓度在0.25、0.5、1.0、1.5 mg/ml时均有一定的抑制胃癌SGC-7901细胞增殖的作用,且呈明显的量效和时效关系。复方苦参注射液不同浓度处理SGC-7901细胞后,体外粘附、侵袭和运动能力呈剂量依赖性下降。经复方苦参注射液(1.5 mg/ml)作用后SGC-7901细胞CD44V6蛋白表达减弱,胞浆棕黄色颗粒减少。结论:复方苦参注射液可以抑制胃癌细胞生长,降低细胞粘附、侵袭和运动能力,其机制可能与抑制CD44V6蛋白表达有关。     

半夏泻心汤对胃腺癌SGC-7901细胞形态及STAT3通路相关蛋白的影响

目的:研究半夏泻心汤及其拆方对胃腺癌SGC-7901形态的影响及诱导其凋亡的机制。方法:把半夏泻心汤拆分为苦降(黄芩:黄连=3:1)、辛开(干姜:半夏=3:4)、补益(人参:甘草=3:3)3个组方,采用倒置显微镜观察用药后细胞形态变化,采用S-P免疫组化法检测半夏泻心汤全方及其拆方组对凋亡相关基因STAT3、P-STAT3的表达。结果:倒置显微镜下显示,不同浓度的半夏泻心汤全方组、苦降组(黄芩、黄连)及辛开组(干姜、半夏)作用于SGC-7901胃癌细胞株48小时后均能使细胞密度下降,细胞出现变圆、萎缩、不贴壁的现象;高浓度下的半夏泻心汤全方组,苦降组(黄芩、黄连),辛开组(干姜、半夏)作用于SGC-7901胃癌细胞48h后均能使STAT3、P-STAT3蛋白表达降低,与空白组阳性比例(39.12%,41.12%)相比,均有明显降低(14.45%、13.65%,13.41%、17.32%,21.42%、19.01%),其效果强于低浓度,补益组(人参、甘草)则无效。结论:半夏泻心汤全方及苦降组(黄芩、黄连)、辛开组(干姜、半夏)可抑制肿瘤细胞的生长,改变细胞的形态。其抑制细胞生长可能与干预STAT3转录因子的表达,促进肿瘤细胞凋亡有关。     

蛇六谷提取物对人胃癌SGC-7901细胞MAPK信号通路的影响

目的:探讨蛇六谷提取物抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖的作用机制。方法:以体外培养胃癌SGC-7901细胞为研究对象,应用WesternBlot方法检测不同质量浓度的蛇六谷提取物对胃癌SGC-7901细胞内ERK、JNK、P38表达及其磷酸化水平的影响。结果:蛇六谷提取物对胃癌SGC-7901细胞内ERK、JNK、P38的表达无明显影响,但激活ERK、JNK和P38的磷酸化水平,并表现出良好的剂量依赖性。结论:蛇六谷提取物可能通过激活MAPK信号通路抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖。     

巴豆生物碱对人胃癌细胞SGC-7901的诱导分化作用研究

以人胃癌细胞SGC-7901为研究材料,胃细胞分化标志酶碱性磷酸酶(ALP)和乳酸脱氢酶(LDH)为实验指标,观察人胃癌细胞SGC-7901在含有不同剂量巴豆生物碱培养液中的生长情况,结果发现经不同剂量巴豆生物碱处理的细胞,其碱性磷酸酶(ALP)和乳酸脱氢酶(LDH)的活力显著低于培养相同天数而未用巴豆生物碱处理的对照胃癌细胞,显示了巴豆生物碱对胃癌细胞具有诱导分化作用.     

巴豆生物碱对人胃癌SGC-7901细胞PCNA、Ki-67及Bax、Fas表达的影响

目的:观察巴豆生物碱(Croton Alkaloid,CA)对人胃癌SGC-7901细胞PCNA、Ki-67及Bax、Fas表达的影响,初步探讨其抗肿瘤的分子机制。方法:体外培养SGC-7901细胞,给予不同浓度的巴豆生物碱干预。免疫组化法检测不同浓度CA作用于SGC-7901细胞后,PCNA、Ki-67、Bax、Fas蛋白表达的情况。结果:随着巴豆生物碱浓度的升高,SGC-7901细胞中PCNA、Ki-67表达逐渐下降,Bax、Fas表达逐渐上升,具有剂量依赖性。结论:巴豆生物碱抑制SGC-7901细胞增殖的作用机制可能与其下调PCNA、Ki-67表达相关,而其上调Bax、Fas表达可能是其诱导SGC-7901细胞凋亡的机制之一。     

巴豆生物碱对人胃癌细胞SGC-7901的诱导分化作用研究

以人胃癌细胞SGC-7901为研究材料，胃细胞分化标志酶碱性磷酸酶(ALP)和乳酸脱氢酶(LDH)为实验指标，观察人胃癌细胞SGC-7901在含有不同剂量巴豆生物碱培养液中的生长情况，结果发现经不同剂量巴豆生物碱处理的细胞，其碱性磷酸酶(ALP)和乳酸脱氢酶(LDH)的活力显著低于培养相同天数而未用巴豆生物碱处理的对照胃癌细胞，显示了巴豆生物碱对胃癌细胞具有诱导分化作用。     

卫一豆生物碱对人胃癌SGC-7901细胞PCNA、Ki-67及Bax、Fas表达的影响

目的：观察巴豆生物碱（CrotonAlkaloid,CA）对人胃癌SGC-7901细胞PCNA、Ki-67及Bax、Fas表达的影响．初步探讨其抗肿瘤的分子机制。方法：体外培养SGC-7901细胞,给予不同浓度的巴豆生物碱干预。免疫组化法检测不同浓度CA作用于SGC-7901细胞后,PCNA、Ki-67、Bax、Fas蛋白表达的情况。结果：随着巴豆生物碱浓度的升高,SGC-7901细胞中PCNA、Ki-67表达逐渐下降,Bax、Fas表达逐渐上升,具有剂量依赖性。结论：巴豆生物碱抑制SGC-7901细胞增殖的作用机制可能与其下调PCNA、Ki-67表达相关,而其上调Bax、Fas表达可能是其诱导SGC-7901细胞凋亡的机制之-。     

汉黄芩素对胃癌细胞SGC7901凋亡、侵袭迁移及Wnt/β-catenin信号通路的影响研究

目的:探讨汉黄芩素对胃癌细胞SGC7901凋亡、侵袭迁移及Wnt/β-连接素(β-catenin)信号通路的影响。方法:常规培养3种常见胃癌细胞株(SGC7901、BGC-823及MKN-45)至对数生长期,采用终浓度0、20、50、100、200μmol/L汉黄芩素处理24、48、72、96 h后采用四甲基偶氮唑盐比色法检测细胞增殖情况,分别采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术、划痕实验及Transwell细胞侵袭实验检测各浓度汉黄芩素作用24、48 h后SGC7901细胞的凋亡率及迁移、侵袭能力,Western blotting检测各浓度汉黄芩素作用48 h后SGC7901细胞Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin及下游靶分子C-myc、细胞周期素D1(Cyclin D1)的蛋白水平。结果:汉黄芩素在20~200μmol/L范围内可呈浓度和时间依赖性抑制SGC7901、BGC-823及MKN-45细胞增殖。与汉黄芩素0μmol/L组比较,各浓度汉黄芩素作用24、48 h后SGC7901细胞凋亡率均升高,迁移距离和穿膜细胞数均降低(P0.05);除汉黄芩素20μmol/L组的β-catenin水平外,其余浓度SGC7901细胞β-catenin、C-myc及Cyclin D1蛋白水平均低于0μmol/L(P0.05),其作用呈量-效关系。结论:汉黄芩素对胃癌细胞的增殖有抑制作用,同时可诱导凋亡和抑制细胞侵袭和迁移,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin通路激活有关。     

解毒益气方对胃癌细胞SGC-7901凋亡及相关基因的影响

目的:观察解毒益气方体外对胃癌细胞SGC-7901增殖、凋亡及凋亡相关基因的影响。方法:1应用MTT法检测解毒益气方体外对胃癌细胞SGC-7901增殖的影响;2应用Annexin V/PI检测该方对胃癌细胞早期凋亡率的影响;3RT-PCR法检测该方体外对胃癌细胞凋亡相关基因表达的影响。结果:1解毒益气方对SGC-7901有良好的增殖抑制作用。2解毒益气方大、小剂量组作用胃癌细胞SGC-7901后早期凋亡率分别为27.79%、11.09%。3解毒益气能上调凋亡相关基因Bax表达,下调Bcl-2的表达。结论:解毒益气方对胃癌SGC-7901有明显的抑制增殖、促进凋亡的作用,其分子机制可能与上调Bax表达,下调Bcl-2表达有关。     

三物白散对Survivin-RNA基因沉默转染胃癌SGC-7901细胞的影响

目的观察中药三物白散对含存活素(Survivin)基因沉默的慢病毒颗粒(Survivin-RNAi-LV)转染人胃癌SGC-7901细胞的影响。方法分别采用RT-PCR(聚合酶链式反应)、Western blot方法检测人胃癌SGC-7901细胞中Survivin m RNA和蛋白的表达;采用甲基噻唑基四唑(MTT)方法检测胃癌SGC-7901细胞的增殖情况、流式细胞仪检测凋亡率及三物白散对其增殖抑制率及凋亡率的影响。结果重组慢病毒颗粒介导的Survivin基因沉默转染人胃癌SGC-7901细胞可有效使Survivin m RNA和蛋白的表达沉默;三物白散对人胃癌SGC-7901细胞的生长具有抑制作用,并诱导肿瘤细胞凋亡;Survivin基因沉默转染胃癌SGC-7901细胞组应用三物白散,其细胞增殖弱于、细胞凋亡率高于三物白散+空白对照组和三物白散+阴性对照组(P0.05)。结论含Survivin基因沉默的重组慢病毒颗粒转染人胃癌SGC-7901细胞,能够抑制SGC-7901细胞Survivin的表达,三物白散对Survivin基因沉默转染后胃癌细胞的杀伤力较未转染细胞有明显的提高。     

巴豆生物碱对人胃腺癌细胞SGC-7901 Fas基因表达影响的研究

目的:研究巴豆生物碱对人胃腺癌细胞SGC-7901 Fas基因表达的影响.方法:应用流式细胞术检测Fas基因的表达.结果:巴豆生物碱中、大剂量组能明显诱导人胃腺癌细胞SGC-7901 Fas基因的表达.结论:巴豆生物碱具有诱导人胃腺细胞SGC-7901分化作用.     

黄芩苷对胃癌SGC-7901细胞TLR8、HIF-1α、PDGFβ和pten表达的影响

目的:探讨不同浓度的黄芩苷对胃癌SGC-7901细胞增殖的抑制作用,以及对pten和survivin基因的影响。方法:以不同浓度(10、20、40、80、160、320μmol/L)的黄芩苷处理胃癌SGC-7901细胞后,采用MTT法测定细胞活力;80、120、160μmol/L的黄芩苷处理胃癌SGC-7901细胞后,采用RT-q PCR法检测Toll样受体8(TLR8)、低氧诱导因子(HIF-1α)、血小板衍生生长因子β(PDGF-β)和第10号染色体上磷酸酶和张力白同源缺失性基因(pten)的表达,Western-blot法分别检测胃癌细胞TLR8、HIF-1α、PDGF-β和pten蛋白的表达。结果:不同浓度的黄芩苷均能抑制细胞增殖,RT-q PCR法检测显示TLR8、HIF-1α、PDGF-β基因表达下调,pten基因表达上调。结论:不同浓度的黄芩苷可抑制胃癌细胞增殖,并能上调pten和下调TLR8、HIF-1α、PDGF-βm RNA及蛋白的表达。     

双苓扶正抗癌制剂对SGC-7901细胞凋亡及其相关基因表达的影响

目的:研究双苓扶正抗癌制剂对人胃癌SGC-7901细胞凋亡及其凋亡相关基因表达的影响。方法:应用体外培养方法和流式细胞技术,检测双苓扶正抗癌制剂对人胃癌SGC-7901细胞的细胞凋亡率及其凋亡相关基因bax、bcl-2的阳性蛋白标记率。结果:双苓扶正抗癌制剂80~320μg/ml可诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡,同时可促进凋亡诱导基因bax和下调凋亡抑制基因bcl-2的表达。结论:双苓扶正抗癌制剂的抗肿瘤作用机制之一可能与其影响bax基因及bcl-2基因的表达而诱导癌细胞凋亡有关。     

附子生物碱对人胃癌细胞株SGC-7901 凋亡及细胞周期的影响

目的：观察附子生物碱对人胃癌细胞株SGC-7901 的增殖以及凋亡的影响。方法：运用MTT 法,测定经附子生物碱处理后体外培养SGC-7901 细胞的增殖活性。分别采用Annexin-V/PI 双染法、流式细胞仪检测附子生物碱对细胞凋亡周期的影响。结果：淤附子生物碱分别作用人胃癌细胞株SGC-7901 24 h、48 h、72 h 后的IC50 为0.231 8±0.002 2、0.160 1±0.022 7、0.103 1±0.023 1 mg·mL-1,与空白对照组比较有显著性差异（P<0.01）。于当附子生物碱浓度达到0.8 mg·mL-1 时出现明显的凋亡,凋亡率为（59.38±5.05）%。盂流式细胞仪检测发现,与空白对照组相比,给药组处于S 期细胞的比例显著增多,并且G0/G1 期前出现凋亡亚二倍体峰。结论：附子生物碱体外对人胃癌细胞SGC-7901 具有增殖抑制作用,并促进其凋亡,还可使SGC-7901 细胞阻滞于S 期。