麦考酚酸产生菌原生质体诱变育种的研究

对麦考酚酸产生菌（Penicillium brevicomactum）的原生质体制备、再生条件进行了研究，建立了原生质体诱变筛选体系。在此基础上，采用紫外线和亚硝酸复合诱变处理麦考酚酸产生菌的原生质体，经原生质体再生获得了A-S-8的菌株，该菌株比对照菌株生产能力提高28．2％，摇瓶和50L发酵实验的效价均可达到6000mg／L以上。     

新型免疫抑制剂麦考酚酸酯

新型免疫抑制剂麦考酚酸酯（ｍｙｃｏｐｈｅｎｏ－ｌａｔｅ 　ｍｏｆｅｔｉｌ， ＭＭＦ）是麦考酚酸（ｍｙｃｏｐｈｅｎｏｌｉｃ ａｃｉｄ，ＭＰＡ）的２－乙基酯类衍生物，在体内脱酯化后形成具有免疫抑制活性的代谢产物ＭＰＡ，后者通过抑制鸟嘌呤的合成，选择性阻断Ｔ和Ｂ淋巴细胞的增殖，对移植排异和自身免疫性疾病均有显著疗效。临床上已应用于器官移植和自身免疫性疾病，且副作用少，显示了良好的应用前景。本文对其作用机制、药物动力学及临床应用等方面进行了综述。     

人血浆中麦考酚酸的HPLC法测定

建立人血浆中麦考酚酸酯活性代谢物麦考酚酸的HPLC测定法.以10%三氯乙酸的乙醇溶液直接沉淀血浆蛋白,色谱柱为Lichromsorb RP-18(200×3.9mm,5μm),预柱为岛津ODS(5×3.9mm,     

多因素复合诱变选育克拉维酸高产菌株

采用多因素连续复合诱变的方法,对克拉维酸产生菌带小棒链霉菌(Streptomyces clavuligerus)进行系列诱变,以抗生素抗性作为理性筛选标记,从含青霉素35 μg/ml的琼脂平板上筛选到青霉素抗性突变株YT-201-57#,在摇瓶实验中,对青霉素的抗性由8μg/ml提高到45 μg/ml,克拉维酸产景较出发菌株提高10.3%,且高产遗传特性经5次传代仍稳定.     

麦考酚酸产生菌的诱变育种及发酵的研究

麦考酚酸(MPA)经过酯化后形成的麦考酚酸酯(MMF)是一种新型的免疫抑制剂。麦考酚酸在发酵液中的含量较低，仅200u／ml。以Penicillium brevicompactum D-4为出发菌株，经紫外线诱变和自然分离纯化的分离．筛选出一株MPA的产量明显地高于出发菌株的突变株U8-S-5。它在10m^3发酵罐上的MPA效价可以达到1600u／m1．较出发菌株提高8倍多。     

新型免疫抑制麦考酚酸酯

新型免疫抑制剂麦考酚酸酯（ｍｙｃｏｐｈｅｎｏｌａｔｅ ｍｏｆｅｔｉｌ,ＭＭＦ）是麦考酚酸（ｍｙｃｏｐｈｅｎｏｌｉｃ ａｃｉｄ,ＭＰＡ）的２－乙基酯类衍生物,在体内脱酯化后形成具有免疫抑制活性的代谢产物ＭＰＡ,后者通过抑制鸟嘌呤的合成,选择性阻断Ｔ和Ｂ淋巴细胞的增殖,对移植排异和自身免疫性疾病均有显著疗效。临床上已应用于器官移植和自身免疫性疾病,且副作用少,显示了良好的应用前景。本文对其作用机制、药     

麦考酚酸酯在肾移植中的应用

目的：观察麦考酚酸酯（ ｍｙｍcoｐｈｅｎｏｌａｔｅｍｏｆｅｔｉｌ,ＭＭＦ）预防移植肾急性排斥的安全性及有效性。方法：４０例肾移植病人分为２组,２０例［男性１２例,女性 ８例,年龄（４３ ± ｓ １０） ａ］为治疗组,给予ＭＭＦ1ｇ, ｐｏ, ｂｉｄ;另 ２０例［男性 １３例,女性 ７例,年龄（４５±１１） ａ］为对照组,给予硫唑嘌呤（Ａｚａ） １５０ｍｐ,ｐｏ, ｑｎ。共 ６ ｍｏ。结果： ＭＭＦ组急性排斥反应发生率为０,Ａｚａ组为２例,２组间差异无显著意义（Ｐ＞０．０５）。２组病人的消化道反应、肝中毒、感染等并发症的发生率的差异无显著意义（Ｐ＞０．０５）。结论：ＭＭＦ是一种能预防移植肾急性排斥反应的安全、有效的免疫抑制剂。     

国产麦考酚酸酯分散片免疫抑制的疗效

目的:观察国产麦考酚酸酯(MME)分散片的临床疗效。方法:40例首次肾移植术后病人分为2组,20例为治疗组,应用国产MME分散片 环孢素 泼尼松进行免疫抑制治疗。另20例为对照组,应用进口MME 环孢素 泼尼松进行免疫抑制治疗。结果:国产MME分散片组肾移植术后免疫抑制治疗中排斥反应发生3例,进口药组排斥反应发生2例,2组间无统计学差异。副作用2组无统计学差异。结论:国产MME分散片在肾移植术后免疫抑制治疗中疗效确切,安全,且费用低廉。     

HPLC/MS/MS法测定人血浆中麦考酚酸浓度

目的 建立测定人血浆中麦考酚酸(免疫抑制剂)含量的HPLC/MS/MS方法 .方法 血浆样品经乙腈沉淀蛋白后,以15 mmol·L-1醋酸铵-甲醇梯度洗脱,用Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18色谱柱,通过电喷雾离子化三重四极杆串联质谱,经多反应监测模式检测,m/z321.2→m/z 303.0(麦考酚酸),m/z237.0→m/z194.0(卡马西平,内标).结果 血浆中麦考酚酸的线性范围为0.1～10 μg·mL-1,方法 回收率为104.1%～106.6%,日内、日间精密度均小于7%.结论 本法简便、快速、灵敏、准确,已应用于肾移植后患者麦考酚酸酯的治疗药物监测.     

复合诱变和抗性筛选高产谷胱甘肽酵母菌株

对75株酵母菌经初筛、复筛和单倍体分离,得到胞内还原型谷胱甘肽(GSH)含量较高的单倍体酵母菌株S1(a),并进行遗传标记.经硫酸二乙酯诱变、紫外诱变及两者的复合诱变,ZnCl2、乙硫氨酸抗性交替筛选得GSH含量较高的单倍体F4(a,Arg-,ZnCl2r,Ethr),GSH含量与产量分别比出发单倍体提高了73.5%和118.1%.     

人血浆中麦考酚酸及其葡糖苷酸代谢物HPLC法测定

目的:建立HPLC测定人血浆中麦考酚酸(MPA)及其代谢物葡糖醛酸结合物(MPAG)浓度的方法。方法:以安定为内标,血浆经乙腈蛋白沉淀后直接进样。采用Zorbax Eclipse XDB C_(18)(150 mm×4.6 mm,5μm),柱温:30℃,流动相:甲醇-0.1%三氟乙酸(55:45,pH=2.2),流速:1.0 mL·min~(-1),检测波长215 nm。结果:血浆内源性杂质和常用合并用药对样品测定无干扰,MPA和MPAG血药浓度分别在0.5-40μG·mL~(-1)和2.5—200μg·mL~(-1)范围内线性关系良好。MPA和MPAG的日内、日间RSD均小于8%,样品提取后在24 h内及3次冻融后稳定性良好。结论:该法快速,简便,准确,可用于MPA和MPAG的体内分析及常规的治疗药物监测。     

N-氨甲酰基-D-氨基酸酰胺水解酶生产菌的选育

以产N-氨甲酰基-D-氨基酸酰胺水解酶的恶臭假单胞菌MZ0315为出发菌株，应用紫外和硫酸二乙酯的复合诱变，经底物类似物5-氟尿嘧啶的筛选，获得高产、稳定的优良菌株MF0506。经过发酵培养基优化，诱变株的产酶活力由出发菌株的0．443u／ml提高至0．680u／ml。     

Bioavailability Improvement of Mycophenolic Acid Through Amino Ester Derivatization

The potential bioavailability improvement of mycophenolic acid (MPA), 1, through ester derivatization was evaluated in monkeys at a dose of 20 mg/kg in this study. The acetyl solketal ester 3 was found to have excellent partition properties but poor aqueous solubility. Thus, even though it can be converted rapidly to MPA by plasma and liver enzymes, it showed poor oral bioavailability (56% of MPA) in monkeys. The bioavailability of the morpholinoethyl ester 4 and the acetyl morpholinoethyl ester 5, on the other hand, was found to be 236 and 150% that of MPA, respectively. Since ester 5 has greater aqueous solubility, but similar chemical stability and enzymatic hydrolysis rates compared to ester 4, the better bioavailability of ester 4 may result from its greater partitioning into the gastrointestinal membranes.     

HPLC测定人血浆中霉酚酸及其代谢物浓度

目的建立反相高效液相色谱法,同时测定人血浆中霉酚酸（mycophenolic acid,MPA）、酚化葡萄糖醛麦考酚酸（phenol glucuronide metabolite,MPAG）、酰基化MPAG（acyl-MPAG,AcMPAG）的浓度。方法用蛋白沉淀法对样品进行处理。固定相为Zorbax Eclipse XDB C18柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,流动相：甲醇：20 mmol-L-1 NaH2PO4（用20%磷酸调至pH 3.0）为55∶45,流速：1.2 mL-min-1,检测波长：304 nm,柱温：45℃。结果 MPA、MPAG、AcMPAG浓度在0.2~50μg-mL-1（r=0.999 7）、2.8~531μg-mL-1（r=0.999 9）、0.3~24μg-mL-1（r=0.999 4）内呈良好的线性关系。MPA及其代谢物的绝对回收率均大于80%,MPA、MPAG、AcMPAG的相对回收率分别为94.0%~101.4%,98.4%~101.9%和96.1%~104.2%。日内及日间RSD远低于15%。结论采用反相高效液相色谱法测定人血浆中MPA、MPAG、AcMPAG的浓度和进行药物代谢动力学研究,方法灵敏度高、重复性强。     

霉酚酸与代谢物的血药浓度测定及基于UGTs酶的性别相关的药动学研究

目的 应用UPLC同时测定大鼠血浆中霉酚酸(mycophenolic acid,MPA)及代谢物霉酚酸葡萄糖醛酸苷(MPA-glucuronide,MPAG)的血药浓度,并对其性别相关的药动学特征进行分析研究。方法 选取12只SD大鼠,雌雄各半,灌胃给予90 mg·kg^-1·d^-1霉酚酸酯,于给药后不同时间点眼眶采血,血浆样本经液液萃取处理,采用UPLC测定血浆中MPA及代谢物MPAG的药物浓度。选用Waters BEH C₁₈色谱柱,采用梯度洗脱程序,流动相为乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B),流速为0.35 mL·min^-1,检测波长为266 nm,柱温为40 ℃,使用DAS 2.0软件计算药动学参数。结果 MPA和MPAG的血药浓度分别在0.31~160 µg·mL^-1(R²=0.999 8)和0.62~320 µg·mL^-1(R²=0.999 4)内线性关系良好,建立的MPA和MPAG的分析测定方法均符合方法学验证要求。雌性大鼠体内MPA和MPAG的AUC_0-t和C_max均高于雄性大鼠(P<0.05或P<0.01),染料木素[葡萄糖醛酸转移酶(UDP-glucuronosyltransferases,UGTs)底物]和MPA在雄性大鼠肝微粒体酶中的代谢速率均明显快于雌性大鼠肝微粒体酶。结论 该方法灵敏、准确、专属性强,适用于MPA及代谢物MPAG的血药浓度测定,大鼠体内MPA和MPAG的药动学具有性别差异性,可能与UGTs活性的性别差异有关。     

阿卡波糖产生菌的诱变育种

阿卡波糖(acarbose)是α-葡萄糖苷酶抑制剂,用于口服降血糖,其生物合成主要受到易利用的结构类似物麦芽糖(maltose)的阻遏和终产物的反馈抑制.通过诱变育种可部分解除其合成途径中的阻遏和抑制作用,促进产物合成.本文采用了紫外光预处理、在种子培养基中递增添加高剂量麦芽糖的连续诱变模式,希望获得抗性突变株或解除前体生物合成途径中反馈抑制的突变株,以提高前体的生成速率,满足生物合成需要[1].结果表明,此法优于涂布平板诱变方法,所得的M-20突变株的生产能力比出发菌株提高74%.     

肾移植受者霉酚酸临床药代动力学研究

目的研究肾移植受者的霉酚酸(MPA)药代动力学。方法 采用高效液相色谱法监测19名肾移植受者术后多剂量口服霉酚酸酯(MMF)后的MPA血药浓度,采用非线性混合效应模型法计算多剂量口服达稳态的MPA药代动力学参数。结果 MPA达峰时间Tmax为1.0 h,峰浓度Cmax为8.3μg/ml,谷浓度Cmin为2.6μg/ml,药时曲线下面积AUC0～12 h为44.9μg.h/ml。MPA药动学参数群体值CL=27.7 L/h,Vd=85.3 L,个体间变异分别为22.0%2、5.7%。结论本研究建立的群体药动学模型可较准确地描述MPA在肾移植受者的药动学特征,其预测能力尚需进一步评估。     

麦考酚酸产生菌液体发酵条件的优化

研究了短密青霉菌L产生麦考酚酸的发酵工艺条件，包括斜面培养基种类、初始pH、培养温度、碳氮源种类等，并通过均匀设计法优化了发酵培养基的组成。在优化条件下，摇瓶发酵单位达8565μg／ml，比优化前提高了89％。