高效液相色谱-荧光检测法快速测定脊髓和脑内氨基酸

目的 建立快速测定脊髓和脑内氨基酸浓度的方法.方法 通过邻苯二甲醛和β-巯基乙醇柱前衍生、反相高效液相色谱结合荧光（激发波长280 nm,发射波长340 nm）检测氨基酸浓度.用0.1 mol/L磷酸盐缓冲液（pH值6.00～6.25）和甲醇（46%）混合液（加入四氢呋喃2%）作流动相,流速为1 ml/min.结果 在0.1～40.0 μmol/L范围内,氨基酸浓度与相对峰面积之间的相关系数（r）均值为0.999 2,日内和日间变异系数（CV）分别为2.41%～5.23%、3.51%～6.48%,平均回收率为90.13%～98.47%.结论 本法灵敏度高、快速、简便易行,可用于脊髓和脑内氨基酸测定.     

高效液相色谱-荧光检测法快速测定脊髓和脑内氨基酸

目的建立快速测定脊髓和脑内氨基酸浓度的方法。方法通过邻苯二甲醛和β-巯基乙醇柱前衍生、反相高效液相色谱结合荧光(激发波长280nm,发射波长340nm)检测氨基酸浓度。用0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH值6.00~6.25)和甲醇(46%)混合液(加入四氢呋喃2%)作流动相,流速为1ml/min。结果在0.1~40.0μmol/L范围内,氨基酸浓度与相对峰面积之间的相关系数(r)均值为0.9992,日内和日间变异系数(CV)分别为2.41%~5.23%、3.51%~6.48%,平均回收率为90.13%~98.47%。结论本法灵敏度高、快速、简便易行,可用于脊髓和脑内氨基酸测定。     

α-氨基丁酸为内标物高效液相法测定脑微透析液中氨基酸含量

目的研究以α 氨基丁酸 (AABA)为内标物 ,用高效液相色谱仪测定大鼠脑微透析液中的神经递质类氨基酸含量。方法以AABA为内标 ,用高效液相色谱仪测定大鼠脑微透析液中的神经递质类氨基酸含量 ,采用OPA柱前衍生 ,ODS C18色谱柱 ,荧光检测器 ,AABA作为内标 ,使用磷酸缓冲液和甲醇二元梯度洗脱方法 ,3 5min内完成。结果氨基酸与内标在给定条件下分离良好 ,每种氨基酸的回收率为 88.2 %— 10 2 .3 % ,线性回归相关系数平均为 0 .998± 0 .0 0 15 ,每种氨基酸的检测限为 1.0— 8.6ppm。 结论本方法准确、灵敏 ,可用于微透析样品中氨基酸的测定     

体液游离氨基酸反相高效液相色谱测定法

介绍了以异硫氰酸苯酯为柱前衍生剂，蛋氨酸砜为内标物，在反相高效液相色谱仪上测定体液２９例游离氨基酸的方法，线性范围在０．０１－１０．００μｍｏｌ／之间，最低检测浓度为μｍｏｌ／Ｌ氨基酸浓度与相对响应值之间的相关系数均在０．９９４以上，批内变异系数为１．５％－４．８％。批间变异系数为３．２％－５．１％。１５例健康者和１８例肾病患者血清游离氨基酸含量测定结果表明，两者必需氨基酸与非必需氨基酸比值之间的     

HPLC法测定小儿复方氨基酸注射液（19AA-I）中各种氨基酸含量

目的 测定小儿复方氨基酸注射液（19AA-I）中各种氨基酸含量。方法 氨基酸采用柱前衍生后用HPLC法以紫外检测器测定。结果 各种氨基酸的线性、稳定性、重复性和准确性均符合方法学要求。     

脑微透析法监测动脉瘤术中临时阻断对脑局部兴奋性氨基酸水平的影响

目的：应用微透析技术研究动脉瘤显微手术中临时阻断载瘤动脉前后患者脑细胞间液中兴奋性氨基酸（EAA）水平的变化规律，了解临时阻断前后脑血流的改变对脑生化代谢的影响。方法：选取18例行术中临时阻断的开颅动脉瘤夹闭术患者，术中将微透析探针置入相应载瘤动脉供血的脑皮质中，Ringer’s液为灌流液，灌流速度2μL／min，分别于临时阻断开始前和阻断后每间隔10min采样1次，收集微透析液标本并用高效液相色谱（HPLC）法检测其中谷氨酸（Glu）、天冬氨酸（Asp）的含量。结果：载瘤动脉临时阻断后10min内Glu、Asp的含量与阻断前相比变化不明显（P〉0．05），临时阻断后10～20min时已明显升高（P〈0．05），20min后水平升高较阻断前差异有极显著性（P〈0．01）。结论：应用微透析技术可以从细胞代谢的分子水平监测临时阻断对EAA水平的影响，随临时阻断时间的延长EAA显著升高，术中应尽量少用临时阻断并缩短阻断时间。     

预运动训练对脑梗死大鼠脑保护作用的兴奋性氨基酸递质效应

目的：动态观察预运动训练对大鼠脑梗死后纹状体处兴奋性氨基酸水平变化的影响，探讨预运动对缺血脑损伤的保护作用机制。方法：将SD大鼠随机分为5组，每组实验用时均为4周：运动1周组（运动训练1周，在第4周实施），运动2周组（运动训练2周，在后2周实施），运动4周组（运动训练4周），假手术组和缺血组。各组大鼠在4周后，立体定位在脑内纹状体（尾状核）留置微透析管，进行大脑中动脉缺血术，采用在体微透析技术收集大鼠缺血前、缺血期间（40，80和120min）和再灌注后（40，80，120，160，200和240min）的脑细胞外液。测定纹状体（尾状核）脑区兴奋性氨基酸谷氨酸（Glu）和天门冬氨酸（Asp）含量的变化。同时测量计算缺血再灌注24h的脑梗死体积。结果：2周和4周的预运动训练可以显著下调因缺血而过度释放的Glu和Asp水平（P<0.01）。缺血再灌注24h的不同组的脑梗死体积变化差异有显著意义（P<0.05）。结论：至少2周的预运动训练对随后发生的脑缺血及再灌注期间，纹状体（尾状核）脑区内兴奋性氨基酸递质Glu和Asp的过度释放有一定程度的抑制作用，这种抑制效应对早期缺血脑损伤具有一定的保护作用。     

高效液相色谱法快速测定氨基酸类神经递质

目的建立一种同时快速测定大鼠纹状体中谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、γ-氨基丁酸(GABA)、甘氨酸(Gly)、牛磺酸(Tau)5种氨基酸类神经递质的高效液相色谱法.方法采用Kromasil C18(4.6×250 mm,5 μm)为色谱柱,丹酰氯为柱前衍生试剂,以曲唑酮为内标,以0.1 mol/L醋酸钠缓冲液∶甲醇＝58∶ 42、14 mmol/L庚烷磺酸钠为流动相等度洗脱.结果在1～200 mg/L范围内,各组分线性关系良好(r=0.999).各氨基酸的平均回收率为79.1%～92.9%.结论本方法简便、快速、准确, 可用于临床大样本测定和研究神经及精神疾病氨基酸类神经递质的改变.     

高效液相色谱法快速测定氨基酸类神经递质

目的建立一种同时快速测定大鼠纹状体中谷氨酸(G lu)、天冬氨酸(Asp)、γ-氨基丁酸(GABA)、甘氨酸(G ly)、牛磺酸(Tau)5种氨基酸类神经递质的高效液相色谱法。方法采用Krom asil C18(4.6×250 mm,5μm)为色谱柱,丹酰氯为柱前衍生试剂,以曲唑酮为内标,以0.1 mol/L醋酸钠缓冲液∶甲醇=58∶42、14 mmol/L庚烷磺酸钠为流动相等度洗脱。结果在1~200 mg/L范围内,各组分线性关系良好(r=0.999)。各氨基酸的平均回收率为79.1%~92.9%。结论本方法简便、快速、准确,可用于临床大样本测定和研究神经及精神疾病氨基酸类神经递质的改变。     

体液游离氨基酸反相高效液相色谱测定法

介绍了以异硫氰酸苯酯为柱前衍生剂，蛋氨酸砜为内标物，在反相高效液相色谱仪上测定体液２９种游离氨基酸的方法。线性范围在０．０１～１０００ｕｍｏｌ／Ｌ之间，最低检测浓度为２ｕｍｏｌ／Ｌ，氨基酸浓度与相对响应值之间的相关系数均在０．９９４以上，批内变异系数为１５％～４．８％，批间变异系数为３２％～５１％。１５例健康者和１８例肾病患者血清游离氨基酸含量测定结果表明，两者必需氨基酸与非必需氨基酸比值之间的差异有非常显著意义（Ｐ＜０．００１）。     

脑蛋白水解物注射液中氨基酸含量测定分析方法

目的:建立高效液相色谱分离检测脑蛋白水解物注射液各种氨基酸的测定方法。方法:氨基酸含量测定采用异硫氰酸苯酯柱前衍生化;色谱柱为C18柱(VP-DOS;150mm×4.6mm);流动相:A为0.1mol/L醋酸钠溶液(冰醋酸调节pH6.5)-乙腈(93:7),B为水-乙腈(1:4);检测波长:254nm;流速:1mL/min;柱温:40℃。结果:16种氨基酸在32min内完全分离,各种氨基酸之间没有出现干扰现象,且多次重复测定结果误差很小。结论:建立的高效液相色谱法准确性高、重现性好,可以有效地控制脑蛋白水解物注射液的质量。     

脑微透析技术在癫痫中的研究进展

癫痫作为一种常见的的神经系统疾病,具有反复发作和不可预知的特点,单一且常规的监测手段如脑电图对癫痫的预测或治疗指导起到的效果有限,因此结合新的手段可以进一步预测或指导其治疗。脑微透析技术作为一种新兴技术,其能够对大脑中的化学物质浓度等变化进行监测,在一定程度上可以很好地预测癫痫的发作,并且能研究其发生背后的机制,对治疗起到一定指导作用。本文就目前改进时间分辨率的脑微透析技术、微型化取样探针、光遗传学结合脑微透析技术作一综述,旨在为检测癫痫发作中的脑神经化学物质提供新的思路。     

RP-HPLC-荧光法测定大鼠海马组织中5种氨基酸类神经递质

目的采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)-荧光检测技术建立一种用于测定脑海马组织中5种氨基酸[天门冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、天冬酰胺(Aspa)、谷胺酰胺(Gln)、甘氨酸(Gly)]类神经递质的方法。方法采用甲醇∶水=1∶1提取大鼠脑海马组织中多种氨基酸类神经递质。用6-氨基喹啉基-N-羟基-琥珀酰亚胺氨基甲酸酯(AQC)柱前衍生RP-HPLC-荧光法测定海马组织中Asp、Glu、Aspa、Gln、Gly含量。结果 5种氨基酸类神经递质在15 min内完全分离,分离效果良好;在0.5~100.0μg/μL范围有较好的线性关系,相关系数(r)≥0.999 90;Asp、Glu、Aspa、Gln、Gly的检出限分别为0.05、0.068、0.037、0.05、0.02μg/μL。精密度[相对标准偏差(RSD)]为0.4%~2.5%,加样回收率为70.27%~128.20%,RSD均5%;8只正常大鼠海马组织中Asp、Glu、Aspa、Gln、Gly含量分别为38.98±9.66、126.42±34.06、216.00±0.75、90.44±33.75、(12.95±4.42)μg/g。结论 RP-HPLC-荧光法快速、准确、灵敏度高,适用于脑组织中氨基酸类神经递质含量的测定。     

人早期胚胎解冻后氨基酸代谢变化的研究

目的：通过检测冻融胚胎解冻后的氨基酸代谢水平,研究人类早期胚胎解冻后的氨基酸代谢规律,为确定冻融胚胎解冻后的适宜移植时机提供依据。方法：选择2010年9-12月接受体外受精-胚胎移植治疗的13例患者共18个取卵后第3日6～8细胞废弃胚胎,20μl囊胚培养液微滴中单独培养2 h后行玻璃化冷冻保存,分别于冷冻前2 h、解冻后1/2、1、2、4、6、24 h收集胚胎培养液微滴15μl,同一培养皿中未培养胚胎的培养液为空白对照组。采用高效液相色谱法（HPLC）检测标本中20种游离氨基酸浓度。观察胚胎冷冻前、解冻后不同时间点氨基酸代谢的变化。结果：HPLC检测发现,空白对照组培养液中谷氨酰胺、组氨酸、色氨酸及赖氨酸在不同时间点的浓度变化有统计学意义,但是没有随培养时间的延长而逐渐增高或降低;其余16种氨基酸在冷冻前和解冻后不同时间点的浓度基本保持不变。解冻后1 h胚胎培养液中20种游离氨基酸浓度较相应时间点的空白对照组增加,且氨基酸增加量和氨基酸转换量高于冷冻前（P〈0.05）;解冻后2 h胚胎培养液中20种氨基酸浓度也较空白对照组增加,解冻后2、6及24h氨基酸增加量和冷冻前比较差异均无统计学意义（P〉0.05）;解冻后1/2、4、6及24 h胚胎培养液中氨基酸减少量高于冷冻前（P〈0.05）;解冻后1/2、4 h胚胎培养液中氨基酸增加量低于冷冻前（P〈0.05）,氨基酸转换量也低于冷冻前,但差异无统计学意义（P〉0.05）;解冻后24 h胚胎培养液中氨基酸转换量高于冷冻前（P〈0.05）;解冻后1/2、4及6 h胚胎培养液中氨基酸转换量低于解冻后1 h（P〈0.05）。结论：人类早期胚胎解冻后1/2 h已经从冷冻时的代谢停滞状态恢复,开始了氨基酸代谢,此时氨基酸代谢水平已接近于胚胎冷冻前的状态。     

液相色谱-串联质谱在全谱氨基酸检测中的应用

全谱氨基酸检测是指利用液相色谱串联质谱技术、采用同位素内标的方法,精确测定人体内42种氨基酸含量。全谱氨基酸失衡是众多疾病的诱因或表现形式,涉及代谢、肿瘤、免疫、病毒、心脑血管、神经系统、肾病、糖尿病、亚健康、老年病等各类疾病和儿童生长发育、营养健康、肌肉骨骼生长、激素分泌、解毒功能等人体各种健康环节。     

微透析活体采样比较静脉和玻璃体内注射万古霉素在兔玻璃体内的通透性

背景:目前眼部药代动力学研究的人体及动物实验采样方法,均是在体外进行,存在诸多的弊端。目的:利用微透析活体采样技术,建立眼后节清醒动物药代动力学模型,比较静脉注射和玻璃体内注射万古霉素在兔玻璃体内的通透性。方法:纳入15只兔,制备眼内炎模型。将微透析探针植入清醒兔眼玻璃体内24h后,随机分成3组,即静脉注射组、玻璃体内注射组及静脉注射+玻璃体内注射组,分别根据不同的给药方式注射万古霉素。高效液相色谱-紫外检测法连续检测兔眼玻璃体万古霉素的浓度,3p97药代动力学软件拟合药动学参数。结果与结论:静脉注射组兔眼玻璃体内的药物浓度较低,达不到有效的治疗效果;玻璃体内注射组及静脉注射+玻璃体内注射组兔眼给药后72h,玻璃体内万古霉素的浓度均高于有效治疗浓度。提示微透析方法联合高效液相色谱-紫外检测法,可以连续、在线、活体检测清醒动物玻璃体内药物浓度;单次静脉注射万古霉素后,玻璃体内不能达到有效治疗剂量。     

微透析活体采样比较静脉和玻璃体内注射万古霉素在兔玻璃体内的通透性

背景：目前眼部药代动力学研究的人体及动物实验采样方法,均是在体外进行,存在诸多的弊端。目的：利用微透析活体采样技术,建立眼后节清醒动物药代动力学模型,比较静脉注射和玻璃体内注射万古霉素在兔玻璃体内的通透性。方法：纳入15只兔,制备眼内炎模型。将微透析探针植入清醒兔眼玻璃体内24h后,随机分成3组,即静脉注射组、玻璃体内注射组及静脉注射＋玻璃体内注射组,分别根据不同的给药方式注射万古霉素。高效液相色谱-紫外检测法连续检测兔眼玻璃体万古霉素的浓度,3p97药代动力学软件拟合药动学参数。结果与结论：静脉注射组兔眼玻璃体内的药物浓度较低,达不到有效的治疗效果;玻璃体内注射组及静脉注射＋玻璃体内注射组兔眼给药后72h,玻璃体内万古霉素的浓度均高于有效治疗浓度。提示微透析方法联合高效液相色谱-紫外检测法,可以连续、在线、活体检测清醒动物玻璃体内药物浓度;单次静脉注射万古霉素后,玻璃体内不能达到有效治疗剂量。     

脑梗塞患者血及脑脊液中兴奋性氨基酸递质的改变及意义

目的　通过观察脑梗塞患者血及脑脊液 (CSF)中兴奋性氨基酸 (EAA)浓度的动态变化与梗塞面积、神经损害的关系 ,从临床方面探讨EAA在脑梗塞发展过程中的作用。方法　采用高效液相色谱法对 33例脑梗塞患者急性期和病后 1 0d的血和脑脊液中谷氨酸 (Glu)和天门冬氨酸 (Asp)浓度进行测定 ,进行不同时程间对照 ,并与 1 0例正常人对照。结果　Glu及Asp的浓度在 2 4h后开始明显升高 ,3d达高峰 ,5d开始下降 ,7d后基本接近正常。急性期脑脊液EAA升高与梗塞体积呈正相关。结论　谷氨酸、天门冬氨酸的兴奋毒性是神经元缺血损伤的重要因素 ,其浓度可作为推测脑梗塞病程及预后的一项生化指标     

高效液相色谱-荧光检测法测定盐酸格拉司琼在小鼠体内的血药浓度

目的 建立高效液相色谱-荧光检测法测定小鼠全血中格拉司琼浓度的方法,考察方法的专属性、线性关系、准确度、精密度、稳定性、提取回收率等效能指标.方法 采用腈基柱;流动相：磷酸三乙胺缓冲盐溶液-乙腈（85∶15 v/v）;检测波长：λex=302 nm,λem=360 nm;柱温26℃;流速1.0 ml/min;进样量20μl.生物样品预处理采用氢氧化钠碱化,二氯甲烷：乙醚（2：3）萃取.结果 小鼠全血中格拉司琼在0.5～ 50.0 ng/ml浓度范围内线性关系良好,回归方程为Y=5.35＆#215;102X＋ 6.40＆#215;102,r=0.9968.本方法在低、中、高3个浓度质控样品的日内精密度分别为7.32％,4.74％,6.86％,日间精密度分别为11.2％,13.03％,7.68％;提取回收率均在76％以上.结论 高效液相色谱-荧光检测法测定血中格拉司琼浓度简便、快速、准确、专属性强.