菟丝子醇提液对衰老模型大鼠肝细胞p16和cyclinD1基因表达的影响

目的 研究菟丝子醇提液对衰老模型大鼠肝细胞p16和cyclinD1基因表达的影响,探讨菟丝子延缓衰老作用的机制.方法 实验以50只Wistar大鼠为研究对象,采用D-半乳糖法制作衰老模型,采用经胃灌服法按照0.8g·kg-1 ·d-1给药,采用半定量RT-PCR法测定大鼠肝组织p16和cyclinD1 mRNA的表达,免疫组化SABC法检测p16和cyclinD1蛋白的表达,并观察菟丝子醇提液对其影响.结果 衰老模型大鼠p16 mRNA及蛋白表达较青年组明显增高(P＜0.01),而cyclinD1 mRNA及蛋白表达降低(P＜0.05).菟丝子醇提液可降低p16基因表达(P＜0,01),使cyclinD1基因表达增强(P＜0.05),并呈现时间渐进性改变.结论 菟丝子醇提液通过影响细胞调控因子p16、cyclinD1表达延缓肝细胞的衰老.     

老年胃癌及癌前病变中p16及cyclinD1蛋白的表达

目的　探讨老年胃癌及癌前病变中p16、cyclinD1蛋白的表达、相互关系及其意义。　 方法 　应用免疫组化链霉卵白素 (SP)法检测老年胃癌、不典型增生、萎缩性胃炎、浅表性胃炎及正常胃组织中p16、cyclinD1蛋白的表达。　结果　p16蛋白在正常胃粘膜表达率最高 (85 7% ) ,并随病变进展 (浅表性胃炎 -萎缩性胃炎 -不典型增生 -腺癌 ) ,表达率呈下降趋势 (分别为 84 4% ,76 9% ,2 9 0 % ,3 4 3 % ) ,其中不典型增生 ,腺癌组与正常组比较有显著差异 (P <0 0 5 ) ,cy clinD1蛋白随病变发展 (萎缩性胃炎、不典型增生、腺癌 )表达率升高 (分别为 19 2 % ,3 8 7% ,5 5 7% ) ,其中腺癌与萎缩性胃炎比较差异显著 (P <0 0 5 )。相关性分析显示大多数受检老年胃癌组织中 ,p16与cyclinD1呈反向表达。　 结论　p16和cyclinD1在胃上皮癌变过程中起着重要作用 ,其在胃癌中的反向表达趋势提示两者可能存在相互抑制机制。p16蛋白低表达和cyclinD1蛋白高表达可能是胃癌发生过程中的早期分子事件。     

何首乌饮对衰老大鼠下颌下腺磷酸化cyclinD1蛋白表达的影响

目的观察何首乌饮对衰老大鼠下颌下腺磷酸化细胞周期素D1(cyclinD1)蛋白表达的影响。方法实验90只SD雌性大鼠,随机分为何首乌饮干预预防组和治疗组两大部分,采用免疫组化方法检测大鼠下颌下腺磷酸化cyclinD1蛋白的表达,并观察何首乌饮对其影响。结果磷酸化cyclinD1阳性产物散在分布于细胞质内,呈黄色或棕黄色,在各组大鼠下颌下腺的腺泡细胞、颗粒曲管及导管上皮细胞中均有表达(P0.01)。多重比较结果显示,以正常组最高,模型组最低,各预防组中以预防中剂量组效果最好。治疗各组间比较,以阴性对照组最高,自然恢复组最低,各治疗组中以治疗中剂量组(Tm)最高。结论何首乌饮延缓下颌下腺细胞衰老的作用可能与提高磷酸化cyclinD1蛋白表达有关。     

食管癌组织中CtBP1、p16蛋白的表达变化

目的观察食管癌组织中C端结合蛋白（CtBP）1和p16蛋白的表达变化。方法采用免疫组化法检测57例食管癌组织（观察组）及30例癌旁组织（对照组）中的CtBP1和p16蛋白,并分析其与食管癌临床病理参数的关系。结果观察组51例、对照组29例CtBP1蛋白表达阳性,两组CtBP1蛋白阳性表达率相比P〉0.05。观察组30例、对照组24例p16蛋白表达阳性,两组p16蛋白阳性表达率相比P〈0.05。食管癌组织中p16表达与临床分期、淋巴结转移有关（P均〈0.05）,与病理分型无关（P〉0.05）;CtBP1表达与临床分期、淋巴结转移、病理分型均无关（P均〉0.05）。结论食管癌组织中p16蛋白表达下调,CtBP1蛋白表达无明显变化。     

有氧运动对衰老大鼠胸主动脉形态结构的影响

目的研究有氧运动对抗大鼠衰老的胸主动脉形态结构变化的影响。方法采用两月龄雄性SD大鼠48只,随机分为正常对照(NC)组、衰老模型对照(AC)组和衰老模型训练(AE)组。分别在6 w和9 w后对大鼠胸主动脉结构进行观察。结果 9 w后,AC组胸主动脉血管壁增厚,硬化及胶原纤维排列改变且顺序紊乱;AE组胸主动脉组织的胶原纤维和弹力纤维重新排列有序并恢复弹性。同时胶原组织减少、排列整齐、血管柔韧度增加并且血管内膜表面光滑有弹性,且两组差异显著(P<0.01)。结论有氧运动可以有效改善心血管的结构和功能,延缓血管衰老。     

何首乌饮对衰老大鼠下颌下腺p16/Rb细胞转导通路相关蛋白的影响

目的观察何首乌饮对衰老大鼠下颌下腺p16/Rb细胞信号转导通路相关蛋白的影响。方法选用8周龄SD雌性大鼠50只,随机分为何首乌饮干预预防和治疗性实验两大部分,分为五组,每组5只,用D-半乳糖制造衰老大鼠模型,Western印迹法检测p16、非磷酸化Rb蛋白含量。结果预防各组间p16和非磷酸化Rb蛋白表达均以模型组最高,正常组最低,各预防组处于中间水平,其中以预防中剂量组(Pm)最低(P0.01)。治疗各组间p16和非磷酸化Rb蛋白表达均以自然恢复组(S-R)最高,阴性对照组最低,各治疗组中以治疗中剂量组(Tm)最低(P0.01)。结论何首乌饮延缓下颌下腺细胞衰老的作用可能与激活Rb/p16通路有关。     

氧化应激对D-半乳糖致衰老小鼠的影响

目的 探讨氧化应激与衰老的相互关系.方法 应用腹腔注射D-半乳糖方法建立衰老模型,观察实验小鼠的外观特征,测定其运动能力、免疫器官指数(胸腺指数、脾脏指数)、脾淋巴细胞增殖活性、血清和脑组织中的SOD及MDA含量,并进行统计学分析.结果 与对照组相比,D-半乳糖腹腔注射后小鼠运动能力、脾指数、胸腺指数及脾细胞增殖活性下降(均P＜0.01),SOD的活性降低(P＜0.01),MDA的含量升高(P＜0.01).结论 氧化应激参与了衰老的发生发展过程,降低了机体的免疫功能和抗氧化能力.     

氢化珊瑚钙对衰老小鼠的抗氧化作用的影响

目的通过建立小鼠衰老模型,研究氢化珊瑚钙(CCH)的抗氧化作用和机制。方法将小鼠随机分为对照组,模型组和CCH组,灌胃30 d后取血清、脑及肝组织,检测过氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性、Na+-K+-三磷酸腺苷酶(Na+-K+-ATPase)活性及总抗氧化能力(T-AOC)。结果氢化珊瑚钙能够提高血清、脑组织及肝组织的T-AOC和GSH-PX活性,降低血清、脑组织及肝组织的MDA含量,提高血清及肝组织的SOD活性及脑组织Na+-K+-ATPase活性。结论口服CCH能够提高机体组织抗氧化能力。     

何首乌饮对D-半乳糖所致衰老大鼠下颌下腺β-半乳糖苷酶表达的影响

目的 通过观察何首乌饮干预的衰老大鼠下颌下腺β-半乳糖苷酶(β-gal)表达的改变,探讨何首乌饮的抗衰老作用.方法 用D-半乳糖制造衰老大鼠模型,何首乌饮的干预作用分治疗和预防两部分,检测β-半乳糖苷酶活性,观察下颌下腺衰老细胞数目改变.结果 预防性实验部分:模型组衰老细胞数目多于正常组和各预防性用药组;治疗性实验部分:用药各组与自然恢复组相比,衰老细胞数目明显减少,其中治疗中剂量组最低.结论 何首乌饮具有抗模型大鼠下颌下腺细胞衰老的作用.     

十二指肠胃反流模型大鼠胃黏膜组织Cyclin D1、p16蛋白表达

目的探讨十二指肠胃反流(DGR)引起大鼠胃黏膜损伤及癌变的发病机制.方法健康成年雄性SD大鼠75只随机分为两组①DGR模型组55只.根据手术造模方式及反流量大小分为全反流组与部分反流组.②假手术对照组20只.采用pH监测仪测定胃液pH,用酶法测定胃液胆汁酸(TBA),确定DGR模型成功.进行为期3个月和9个月胃黏膜损伤的动态观察.采用免疫组化方法(S-P)分析不同病变胃黏膜组织Cycli nD1、p16蛋白的表达.结果DGR模型大鼠胃液pH及TBA明显升高(P＜0.01),证明DGR模型成功.模型大鼠病理政变出现浅表性胃炎→萎缩性胃炎→异型增生的动态演变过程.萎缩性胃炎组及异型增生时Cyclin D1蛋白表达显著高于假手术对照组及浅表性胃炎组(P＜0.05),癌基因Cyclin D1为高表达.在萎缩性胃炎与异型增生之间Cyclin D1表达差异无显著性(P＞0.05).而p16蛋白表达则相反,在假手术对照组最高,在异型增生组最低,两组之间差异有显著性(P＜0.01),抑癌基因p16在异型增生时为低表达.Cyclin D1与p16表达呈负相关(r=-0.53).结论Cyclin D1、p16蛋白表达异常是DGR胃黏膜损伤及癌变的分子机制之一.     

P16和CyclinD1在不同胃病患者胃粘膜中表达的临床意义

为探讨多瘤抑制基因P^16和细胞周期素D1（CyclinD1)在正常胃、慢性胃炎、不典型增生及胃癌中的表达，以及其与胃癌发生、发展及临床、病理参数的关系，采用mRNA原位杂交技术检测了P^16CyclinD1在不同胃粘膜病变中的表达情况。结果显示，正常胃粘膜P^16阳性率为90．9％，CyclinD1为阴性、浅表性胃炎、萎缩性胃炎、不典型增生、胃癌的P^16阳性率分别为87．1％、78．6％、37．5％、26．25％，CyclinD1的阳性率依次为16％、21％、56％、73．75％，癌组织与正常胃粘膜比较有显著性差异。P^16的阳性率与肿瘤恶性程度呈负相关，CyclinD1与癌分化无明显相关性。胃癌有淋巴结转移者的P^16阳性率低于无淋巴结转移者（P＜0．01）。CyclinD1明显高于无淋巴结转移者。随访2年，80例胃癌患者中13例死亡，均为P^16阴性、CyclinD1阳性者。胃癌中P^16与CyclinD1两种基因变化与胃癌的形成关系密切；随病变加重，P^16缺失率增加，CyclinD1阳性率增加，两者可单独或协同促进胃癌的发生、发展。其反向表达趋势提示两者可能存在相互抑制机制。多基因异常病例易发生淋巴结及远处转移，预后差。     

大肠癌组织中P16蛋白和血管内皮生长因子的表达及其临床意义

目的：探讨大肠癌组织中P16蛋白和血管内皮生长因子（VEGF）表达及其临床意认。方法：用S－P免疫组织化学方法测定66例大肠癌组织和20例正常大肠组织中P16蛋白和VEGF的表达。结果：大肠癌中P16蛋白阳性率为48．5％（32／66）明显低于对照组的70．0％（14／20）（P＜0．01），VEGF阳性率为72．7％（48／66）则明显高于对照组的15．0％（3／20）（P＜0．01）：P16蛋白和VEGF在大肠癌中表达具有明显负相关性；P16蛋白和VEGF表达与大肠癌组织学类型、肿瘤直径、肿瘤部位无关（P＞0．05），而与淋巴结转移、Duke's分期五年生存率有明显的关系（P＜0．01）。结论：大肠癌中存在P16蛋白下调和VEGF上调，P16蛋白和VEGF表达可作为反映大肠癌生物学行为的指标之一。     

Effects of ischemic preconditioning on cyclinD1 expression during early ischemic reperfusion in rats

AIM: To observe the effect of ischemic preconditioning on cyclinD1 expression in rat liver cells during early ischemic reperfusion. METHODS: Fifty-four SD rats were randomly divided into ischemic preconditioning group (IP), ischemia/ reperfusion group (IR) and sham operation group (SO). The IP and IR groups were further divided into four sub-groups (n - 6). Sham operation group (SO) served as the control group (n = 6). A model of partial liver ischemia/reperfusion was used, in which rats were subjected to liver ischemia for 60 min prior to reperfusion. The animals in the IP group underwent ischemic preconditioning twice for 5 min each time prior to the ischemia/reperfusion challenge. After 0, 1, 2, and 4 h of reperfusion, serum and liver tissue in each group were collected to detect the level of serum ALT, liver histopathology and expression of cyclinDi mRNA and protein. Flow cytometry was used to detect cell cycle as the quantity indicator of cell regeneration. RESULTS: Compared with IR group, IP group showed a significantly lower ALT level in 1 h to 4 h sub-groups (P < 0.05). Proliferation index(PI) indicated by the S-phase and G2/M-phase ratio [(S G2/M)/(G0/G1 S G2/M)] was significantly increased in IP group at 0 and 1 h (26.44±7.60% vs 18.56±6.40%,41.87±7.27% vs 20.25±6.70%, P < 0.05). Meanwhile, cyclinDi protein expression could be detected in IP group. But in IR group, cyclinDi protein expression occurred 2 h after reperfusion. The expression of cyclinDi mRNA increased significantly in IP group at 0 and 1 h (0.568±0.112 vs 0.274±0.069, 0.762±0.164 vs 0.348±0.093, P < 0.05). CONCLUSION: Ischemic preconditioning can protect liver cells against ischemia/reperfusion injury, which may be related to cell proliferation and expression of cyclinD1 during early ischemic reperfusion.     

结缔组织生长因子和周期蛋白D1在烟雾暴露大鼠肺血管重塑中的表达变化

目的 探讨烟雾暴露致大鼠肺血管重塑中结缔组织生长因子(CTGF)和周期蛋白D1的表达变化及其意义.方法 健康雄性Wistar大鼠24只,按随机数字表法分为对照组,烟雾暴露2周、4周和8周组检测PaO2,HE染色和平滑肌细胞α肌动蛋白染色观察肺血管重塑情况,行免疫组织化学染色观察CTGF和周期蛋白D1在肺动脉平滑肌中的表达,实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肺动脉CTGF mRNA和周期蛋白D1 mRNA表达,Western blot法检测CTGF和周期蛋白D1的蛋白表达量.结果 各组大鼠PaO2分别为(91±4),(92±5),(91±4),(93±4)mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),差异均无统计学意义(F=0.15,P＞0.05).随烟雾暴露时间的延长,肌化血管比例、肺血管壁厚度和血管直径比值(W/T)、CTGF和周期蛋白D1的mRNA和蛋白表达均呈时间依赖性增加,各组间比较差异均有统计学意义(F=51.06～590.20,P＜0.05).CTGF与周期蛋白D1表达与肺W/T呈显著正相关(r=0.097～0.918,P＜0.01),二者的表达之间也呈显著正相关.结论 烟雾暴露大鼠的CTGF和cyclinD1表达量均随暴露时间延长而显著升高,二者可能与烟雾暴露致肺动脉平滑肌细胞异常增殖有关.     

氟对大鼠骨组织3-磷酸肌醇激酶和蛋白激酶B1表达的影响

目的 观察慢性氟中毒对大鼠骨组织中3-磷酸肌醇激酶(PI3K)、蛋白激酶B1(Akt1)蛋白和mRNA表达的影响,探讨PI3K/Akt信号通路在氟骨症发病机制中的作用.方法 将36只SD大鼠按性别和体质量随机分为3组:对照组、低氟组、高氟组,每组12只.对照组自由饮用自来水(含氟量<0.5 mg/L),低、高氟组大鼠分别饮用氟化钠(NaF)配制的含氟量为5.0、50.0 mg/L的自来水.实验6个月后处死大鼠,收集血清,用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测骨钙素(BGP)、组织蛋白酶K(Cath-K).取大鼠股骨下段,用免疫组织化学方法和实时荧光定量PCR法检测骨组织中PI3K、Akt1蛋白和mRNA的表达.结果 各组大鼠血清BGP、Cath-K 水平比较,差异有统计学意义(F值分别为73.45、39.36,P均<0.05).与对照组[(0.15±0.03)μg/L、(18.32±2.27)pmol/L]比较,低、高氟组血清BGP[(1.99±0.62)、(2.38±0.16)μg/L]、Cath-K[(89.07±19.66)、(110.16±9.81)pmol/L]明显升高(P均<0.05),且高氟组明显高于低氟组(P均<0.05).各组大鼠骨组织PI3K、Akt1蛋白和mRNA表达水平比较,差异有统计学意义(F值分别为178.16、118.08,38.81、52.31,P均<0.05).与对照组(181.55±4.24、188.46±2.18,3.84±1.69、4.33±0.89)比较,低、高氟组大鼠骨组织PI3K(171.66±2.85、154.12±4.15,11.31±4.18、20.54±6.68)、Akt1蛋白和mRNA表达(177.47±3.16、156.42±3.18.12.52±3.13、19.43±5.36)明显增高(P均<0.05),且高氟组明显高于低氟组(P均<0.05).结论 血清BGP、Cath-K可作为慢性氟中毒骨病变的代谢指标.氟可导致大鼠骨组织中PI3K、Akt1蛋白和mRNA表达水平增高,PI3K/Akt 信号通路可能参与了氟引起的骨骼损伤机制.

Abstract：

Objective To observe the expression of phosphoinositide 3-kinase(PI3K) and protein kinase B1 (Akt1) in PI3K/Akt signaling pathway in rat bones with fluorosis, and to reveal the mechanisms of the skeletal fluorosis. Methods Thirty-six SD rats were randomly divided into 3 groups (control group, low-dose fluorosis group, high-dose fluorosis group) and 12 rats were in each group according to body weight. The rats were fed with different concentrations of fluoride (NaF) to establish fluorosis models. Controls were fed with tap water( < 0.5 mg/L), experimental animals in low- or high-dose groups were fed with water containing NaF 5.0,50.0 mg/L, respectively. Rats were sacrificed after 6 months of treating with fluoride and the serum was kept for testing the bone metabolic markers of none gla protein(BGP) and cathepsin K(Cath-K) by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA), the proteins and mRNA levels of PI3K and Akt1 in rat bones were detected by immunohistochemistry and real time PCR, respectively. Results Each group of serum BGP and Cath-k were compared, the difference was statistically significant(F = 73.45,39.36, all P < 0.05). The contents of BGP[(1.99 ± 0.62), (2.38 ± 0.16)μg/L] and Cath-K [(89.07 ± 19.66), (110.16 ± 9.81)pmol/L] in the low-and high-dose fluorosis groups were higher than those in the control group[(0.15 ± 0.03)μg/L,( 18.32 ± 2.27)pmol/L], and the high fluorosis group was obviously higher than the low fluorosis group (all P < 0.05). Each group of serum PI3K and Akt1 protein and mRNA were compared, the difference was statistically significant(F- 178.16,118.08,38.81,52.31, all P< 0.05). Compared to the control group (181.55 ± 4.24,188.46 ± 2.18,3.84 ± 1.69,4.33 ± 0.89), the protein and mRNA expressions of PI3K(171.66 ± 2.85,154.12 ± 4.15,11.31 ± 4.18,20.54 ± 6.68), Akt1(177.47 ± 3.16,156.42 ± 3.18,12.52 ± 3.13,19.43 ± 5.36) were higher in the low- and high-dose fluorosis groups (all P < 0.05), and the high fluorosis group was obviously higher than the low fluorosis group (all P < 0.05). Conclusions BGP and Cath-K contents could be used as bone metabolic indices in the endemic fluorosis disease. Fluoride can increase the expression of PI3K and Akt1 mRNA and protein in bone tissue of fluorosis rats, and PI3K/Akt1 signaling pathway may be involved in the pathogenesis of bone injury caused by fluoride.     

胃黏膜相关淋巴样组织淋巴瘤中p16蛋白和Ki-67抗原的表达及意义

目的 探讨p16蛋白和Ki-67抗原在胃黏膜相关淋巴样组织淋巴瘤(MALTL)发生、发展中的作用.方法 选择我院病理科1993年3月至2005年6月期间经病理诊断的胃MALTL手术标本,均经2位以上病理科医师会诊筛选,从中确定胃MALTL患者47例.应用免疫组织化学法检测p16蛋白和Ki-67抗原在20例正常胃黏膜组织和47例胃M?cLTL组织中的表达.结果 胃MALTL组织中p16蛋白表达阳性率21.3%(10/47)明显低于胃正常组织(90.0%).伴淋巴结转移的胃MALTL组织中p16蛋白阳性率低于无淋巴结转移组(P<0.05),Ki-67抗原表达的阳性率为87.2%(41/47),明显高于胃正常组织(P<0.05).p16蛋白表达与Ki-67分级呈明显负相关(P<0.05).结论 联合检测p16蛋白和Ki-67抗原有助于评估胃MALTL患者的预后及指导临床治疗.     

氟对大鼠骨组织Runx2 mRNA及其蛋白表达的影响

目的 观察氟对大鼠骨组织Runx2 mRNA和蛋白表达水平的影响.方法 14只SD大鼠按体质量随机分为对照组[饮用自来水,含氟(F-)＜0.06 mg/L]、染氟组(饮水含F-50 mg/L),饲养4个月后股动脉放血处死.采用蛋白质印迹法(Western blot)检测Runx2蛋白表达水平;采用RT-PCR法检测Runx2 mRNA的表达水平.结果 与对照组相比,染氟组大鼠骨组织Runx2 mRNA及蛋白表达水平(2.287±0.261、0.929±0.229)均高于对照组(0.995±0.123、0.317±0.068,t值分别为11.85、6.78,P均＜0.05).结论 氟可导致大鼠骨组织Runx2 mRNA及蛋白表达水平增高,Runx2可能参与了氟引起的骨骼损伤的发生机制.     

保健灸法对更年期大鼠抗氧化能力及脑组织中p53蛋白表达的影响

目的观察保健灸法对更年期大鼠抗氧化能力及脑组织中p53蛋白表达的影响,以探讨保健灸法抗氧化及细胞凋亡的作用。方法SD雌性大鼠42只,其中青年组14只,12月龄28只,随机分为对照组和保健灸组。实验两个月后采用分光光度法检测各组大鼠血清中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性;采用免疫组化法检测脑组织中p53蛋白的表达水平。结果与青年组比较,更年期对照组大鼠血清中丙二醛(MDA)含量增多,超氧化物歧化酶(SOD)活性下降,脑组织中p53蛋白表达水平明显升高。与更年期对照组比较,更年期保健灸组丙二醛(MDA)含量降低,而超氧化物歧化酶(SOD)活性升高(P<0.05)。脑组织p53蛋白表达水平明显的下降。结论保健灸法具有抗氧化的功能,并且可通过调控p53蛋白的表达,抑制细胞的凋亡,延缓衰老。