β-淀粉样蛋白致大鼠行为学改变及对海马核因子-κB和一氧化氮合酶表达的影响

目的研究β-淀粉样蛋白(amyloid-beta protein,Aβ)对大鼠学习记忆功能及海马区内核因子kB(NF-kB)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达的影响及其相互关系。探讨NF-kB在阿尔茨海默病(AD)发病中的可能作用。方法采用大鼠侧脑室立体定向注射Aβ25-35的方法建立AD的动物模型,通过Morris水迷宫检测大鼠学习、记忆能力,通过免疫组化的方法观察Aβ25-35对大鼠海马区内NF-kB及iNOS蛋白表达的影响,并分析NF-kB与iNOS表达的关系。结果大鼠经侧脑室立体定向注射10μmol／L Aβ25-35 5μl后,(1)模型组大鼠Morris水迷宫检测逃避潜伏期(3 d分别为42．19±12．29,31．28±20．59,23．91±8．05)较对照组(3 d分别为27．35±14．96,13．17±6．79,13．01±6．38)明显延长(P<0．05或P<0．01);(2)模型组大鼠海马区内NF-kB蛋白表达(29．40±4．01)及iNOS蛋白表达(34．42±5．99)较空白对照组(分别为23．36±2．31和11．56±4．09)均有明显升高(P<0．01),(3)NF-kB与iNOS阳性细胞密度具有显著相关性(r=0．453,P< 0．05)。结论Aβ能够明显降低大鼠短期学习记忆能力,并诱导大鼠海马区内NF-kB和iNOS的蛋白表达增强,同时NF-kB与iNOS的表达呈正相关关系。提示NF-kB和iNOS均参与了由Aβ诱导的炎性反应过程,NF-kB可能是iNOS表达的介导因子之一。     

还原型谷胱甘肽降低糖尿病大鼠心肌NF-κB和诱导型一氧化氮合酶表达

以链脲佐菌素制备糖尿病大鼠模型，造模后以还原型谷胱甘肽（GSH）治疗12周，结果显示GSH治疗组较糖尿病组心肌组织病理学损害改善，NF—κB活性降低，诱导型一氧化氮合酶表达下降。     

辛伐他汀对脓毒症大鼠心肌细胞核因子-κB、诱导型一氧化氮合酶表达的影响及意义

目的 观察核因子(NF)-κB和诱导型一氧比氮合酶(iNOS)在脓毒症大鼠心肌细胞的表达,同时探讨辛伐他汀对其表达的影响,以及他汀类药物的心肌保护性作用.方法 雌性Wistar大鼠30只随机分为三组:正常组(N组),盲肠结扎穿孔术组(CLP组)和辛伐他汀组(S组),处理方法:①S组:喂养辛伐他汀20 mg/kg每天一次共2w.②2w后S组与CLP组大鼠行盲肠结扎穿孔术.③术后48 h取各组大鼠心肌组织制成石蜡切片,采用HE染色和免疫组织化学染色的方法检测心肌纤维iNOS和NF-κB的蛋白表达.结果 HE染色显示CLP组大鼠心肌纤维水肿,疏松,间质充血水肿,而S组心肌的组织病理学改变较CLP组轻.免疫组织化学染色显示CLP组大鼠心肌细胞iNOS与NF-κB蛋白表达于术后48 h较N组明显增加(P＜0.05),S组大鼠心肌细胞iNOS与NF-κB蛋白表达与CLP组相比明显减弱(P＜0.05),与N组相比无明显差异(P＞0.05).结论 辛伐他汀可以减弱脓毒症大鼠心肌细胞iNOS和NF-κB的蛋白表达,改善脓毒症时的心脏功能.     

IκB激酶β与糖尿病

细胞因子主要通过IκB激酶 β(IKK β)激活核因子 (NF) κB来调控诱导型一氧化氮 (NO)合酶和Fas等基因的表达 ,进而刺激NO和Fas的产生 ,最终造成 β细胞的损伤和葡萄糖刺激的胰岛素分泌功能的减退 ,所以控制此过程可以防止 1型糖尿病的发生 ;IKK β的活化可导致胰岛素抵抗 ,抑制该酶的活性可以预防和逆转胰岛素抵抗。     

辛伐他汀对脓毒症大鼠肺组织诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的:探讨辛伐他汀对脓毒症大鼠肺组织诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响.方法:90只健康SD大鼠随机分为对照组(生理盐水2 mL静脉滴注)、内毒素(LPS)组(LPS 5 mg/kg,用生理盐水稀释至2 mL静脉滴注)、LPS+辛伐他汀(Sta)组(LPS 5mg/kg,Sta 20mg/kg,生理盐水稀释至2 mL静脉滴注),每组30只.分别在用药后2、4、6、12、24 h处死大鼠,取右肺下叶用RT-PCR法检测肺组织iNOS mRNA表达.结果:光镜下对照组各时点肺泡结构正常;LPS组2h出现炎症损伤,以6h最为显著;LPS+ Sta组中性粒细胞浸润较LPS组减轻.LPS组iNOSmRNA表达较对照组和LPS+ Sta组明显增高(均P＜0.05),6h达高峰,12 h开始下降;LPS+ Sta组各时点iNOSmRNA表达趋势同LPS组,但接近对照组水平(P＞0.05).结论:辛伐他汀能改善脓毒症时肺组织的病理性炎症损伤,辛伐他汀能减低脓毒症时肺组织iNOS mRNA的表达.     

壳聚糖磷脂酰胆碱对痴呆大鼠学习能力和海马区白细胞介素-1β表达的影响

目的观察壳聚糖磷脂酰胆碱对治疗经海马内注射Aβ25~35的健康Wistar大鼠所诱导的阿尔茨海默病(AD)大鼠海马内白细胞介素(IL)-1β的表达数量以及该药物对AD大鼠学习记忆能力的干预疗效。方法对健康Wistar大鼠经两侧海马内注射Aβ25~35诱导建立AD大鼠炎性痴呆模型,Morris水迷宫以及免疫组织化学方法分别观察AD模型大鼠经药物治疗前后学习记忆能力以及海马内炎性表达因子IL-1β的表达状况。结果对照组和药物组大鼠的平均逃避潜伏期(AEL)比AD模型组显著缩短、2 min内跨越原平台次数和在靶象限时间比模型组明显延长(P0.05)。模型组大鼠海马区IL-1β阳性量高于对照组(P0.01),药物组IL-1β阳性表达较模型组显著下降(P0.05)。结论壳聚糖磷脂酰胆碱对改善AD大鼠学习记忆能力和注射Aβ25~35后诱导的炎性反应均有一定的治疗作用。     

阿霉素对大鼠心肌诱导型一氧化氮合酶mRNA表达的影响

目的研究阿霉素(ADM)对大鼠心肌诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达的影响。方法将雄性wistar大鼠24只,随机分为ADM组和对照组,每组12只,ADM组按每次给ADM 2 mg/kg腹腔注射,隔日一次共6次;对照组给等体积的生理盐水腹腔注射。于实验第30 天,应用生化方法测定心肌组织中的一氧化氮(NO)水平及iNOS的活性;用TUNEL法检测心肌细胞的凋亡指数;用RT—PCR方法检测心肌组织iNOS mRNA的表达。结果与对照组比较ADM组大鼠心肌组织NO、iNOS活性增加(P< 0.01),心肌细胞凋亡指数及iNOS mRNA的表达均显著增高(P< 0.01)。结论ADM能诱导大鼠心肌细胞iNOS mRNA表达增加,使NO合成增多,引起细胞凋亡而参与对心肌的损害。     

肝癌组织中诱导型一氧化氮合酶的表达

为了解诱导型一氧化氮合酶(induce nitricoxide synthase,iNOS)在肝癌发病中的作用,用免疫组织化学方法检测了肝癌组织中iNOS的表达。32例肝癌和10例正常肝组织进行HE染色、iNOS检测。10例正常肝组织内均未见iNOS阳性信号。肝癌组织iNOS表达高于正常对照肝组织(26/32vs 0/10,x2=31.328,P<0.01)。肝癌组织和癌旁肝组织均表达iNOS(23/32vs 25/32,x2=0.333,P=0.564)。iNOS通过多种途径参与肝癌的发病。     

暴发性肝功能衰竭大鼠肝组织核因子-κB和诱导型一氧化氮合酶的表达及其意义

目的 探讨核因子-κB(NF-κB)在暴发性肝功能衰竭肝细胞炎性反应中的作用机制.方法 Wistar大鼠腹腔注射D-氨基半乳糖(D-Gain)和脂多糖(LPS)制作暴发性肝功能衰竭模型.免疫组织化学技术分别观察注药后2、4、8、12和24 h大鼠肝组织中NF-κB和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达情况,分析NF-κB、iNOS与暴发性肝功能衰竭的关系.结果 模型组NF-κB p65蛋白表达阳性细胞主要为肝细胞、库普弗细胞.造模后4、8和12 h时,核阳性表达的细胞数逐渐增多,明显高于对照组.2 h组主要是非实质细胞的胞质着色;而4、8、12和24 h组以肝细胞胞核着色为主.对照组不同时间点NF-κB p65蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05),模型组则随肝细胞坏死程度的加重而增加(r=0.694,P＜0.01).随着肝细胞炎性反应、坏死程度的增高,模型组肝细胞质iNOS表达逐渐增多(r=0.867,P＜0.01),以肝细胞表达为主.对照组肝细胞质iNOS表达较弱(P＞0.05).肝组织中NF-κB活化与iNOS表达呈正相关(r=0.801,P＜0.01).结论 NF-κB可能是暴发性肝功能衰竭肝细胞炎性反应、坏死过程中的关键环节.     

核因子-κB介导非对称性二甲基精氨酸上调大鼠腹腔巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶的表达

目的:探讨非对称性二甲基精氨酸(ADMA)上调大鼠腹腔巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达是否受核因子-κB(NF-κB)调控。方法:分离培养原代Wistar大鼠腹腔巨噬细胞。分组:①正常对照组:以含10%胎牛血清(FBS)DMEM培养液与巨噬细胞共孵育;②氧化型LDL(oxLDL)组:在培养液中加oxLDL50mg/L;③A+O组:在培养液中加ADMA(15μmol/L)和oxLDL(50mg/L);④P+A+O组:在培养液中加NF-κB特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC,25μmol/L)、ADMA(15μmol/L)和oxLDL(50mg/L)。以实时荧光定量PCR和Westen blotting分别检测iNOSmRNA和蛋白表达,以电泳迁移率变动分析(EMSA)和增强化学发光法(ECL)检测NF-κB活性。结果:①与正常对照组相比,oxLDL组与A+O组iNOSmRNA和蛋白表达增强,以A+O组尤为明显,2组比较差异有统计学意义(P0.05);P+A+O组iNOSmRNA和蛋白表达降低,与A+O组比较差异有统计学意义(P0.05)。②与正常对照组相比,oxLDL组与A+O组NF-κB活性增强,以A+O组尤为明显,2组相比差异有统计学意义(P0.05);P+A+O组NF-κB活性降低,与A+O组相比差异有统计学意义(P0.05)。③相关分析:NF-κB活性与iNOSmRNA和蛋白表达量均呈正相关。结论:ADMA可能通过NF-κB途径增强iNOS表达而促进巨噬细胞转化为泡沫细胞、促进动脉粥样硬化的发生发展。     

粉防己碱抑制支气管哮喘小鼠肺组织核因子-κB和诱导型一氧化氮合酶的研究

目的：探讨粉防己碱对支气管哮喘(简称哮喘)小鼠肺组织核因子-κB(NF-κB)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达、气道炎症和气道高反应性的影响。方法将32只 SPF 级 BALB/c 小鼠随机分为正常组、哮喘组、地塞米松组(激素组)和粉防己碱组(Tet 组)。卵白蛋白(OVA)致敏和激发建立哮喘小鼠模型。末次激发24 h 后,肺功能仪测定小鼠气道阻力;HE 染色观察气道炎症细胞浸润;ELISA 检测血清总 IgE、OVA 特异性 IgE(OVA-sIgE)及 BALF 中 Th2细胞因子 IL-4和 IL-13水平;显微镜下计BALF 中细胞总数,瑞氏染色计嗜酸粒细胞分类计数;Western blot 检测肺组织 NF-κB 和 iNOS 蛋白表达水平。结果与正常组比较,哮喘组气道阻力、气道炎症浸润、BALF 炎症细胞总数和嗜酸粒细胞分类计数、血清总 IgE 和 OVA-sIgE、BALF 中 IL-4和 IL-13以及 NF-κB 和 iNOS 蛋白表达水平均显著增高(P <0.05);与哮喘组比较,激素和 Tet 干预组上述各项指标均显著降低(P <0.05)。结论粉防己碱可下调哮喘小鼠肺组织 NF-κB 和 iNOS 表达并抑制气道炎症和气道高反应性。     

Genistein对内皮细胞内皮型一氧化氮合酶和核因子κB表达的影响

目的探讨植物雌激素Genistein对氧化型低密度脂蛋白干预的内皮细胞内皮型一氧化氮合酶和核因子κB表达的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,在氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)干预内皮细胞的基础上,不同浓度的Genistein(10、50和100nmol/L)孵育,MTT法观察Genistein对细胞活力的影响,实时定量逆转录聚合酶链反应检测内皮型一氧化氮合酶mRNA的表达,Western blotting检测内皮型一氧化氮合酶和核因子κB蛋白的表达。结果与空白对照组相比,氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)明显抑制细胞活力,下调内皮型一氧化氮合酶mRNA和蛋白表达,上调核因子κB蛋白表达(P0.05);Genistein明显增高细胞活力,上调内皮型一氧化氮合酶mRNA和蛋白表达,抑制核因子κB蛋白表达(P0.05),且呈浓度依赖性(P0.05)。结论 Genistein能够促进内皮型一氧化氮合酶的表达,抑制核因子κB的表达。     

IκB激酶-β与慢性肝病

IκB激酶-β(IKK-β)是核因子-κB活化所必需的催化亚单位,在受到脂多糖、炎症细胞因子等刺激时呈高表达,通过调节炎症相关基因和抗凋亡基因的表达在慢性肝病的发生发展中起重要作用,应用IKK-β特异抑制剂可能有助于减轻相应的肝脏病变。     

芪苈强心胶囊联合卡维地洛对心力衰竭患者核因子κB及诱导型一氧化氮合酶水平的影响

目的：观察芪苈强心胶囊联合卡维地洛对慢性心力衰竭患者核因子κB（NF κB）及诱导型一氧化氮合酶（iNOS）水平的影响。方法120例慢性心力衰竭患者随机分为常规组、卡维地洛组、芪苈强心胶囊联合卡维地洛组（联合组）,各40例。采用荧光定量PCR法和酶联免疫分析方法分别测定各组治疗前及治疗12周后血液 NF κB和 iNOS的水平,测定左室射血分数,并进行6 min 步行试验。结果治疗12周后,卡维地洛组、芪苈强心胶囊联合卡维地洛组血液NF κB和iNOS水平均较常规组明显下降（P〈0.01）,6 min步行距离显著增加（P〈0.05）,左室射血分数明显提高（P〈0.05）;卡维地洛组与联合组相比较,血液 NF κB和iNOS水平下降（P〈0.05）,而6 min步行距离、左室射血分数无统计学意义。结论芪苈强心胶囊联合卡维地洛治疗慢性心力衰竭可提高患者运动耐力,并改善心脏功能,推测芪苈强心胶囊联合卡维地洛可能通过抑患者炎性因子的表达而改善心功能。     

培哚普利和缬沙坦对兔动脉粥样硬化脑组织核转录因子-κB,诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的建立兔高胆固醇-动脉粥样硬化模型,观察脑组织核转录因子κB(NF-κB)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的阳性表达,探讨培哚普利、缬沙坦的干预效果及临床意义.方法30只雄性新西兰大白兔,随机分为4组:正常对照组(A组);高脂饮食组(B组);高脂饮食加培哚普利组(C组);高脂饮食加缬沙坦组(D组);喂饲8周后,取脑组织标本用免疫组化方法(SABC法)测定NF-κB的表达;分光光度法测定脑组织iNOS的活力.结果与对照组相比,高脂饮食组脑组织中NF-κB,iNOS水平明显升高(P<0.05);高脂饮食加培哚普利组及高脂饮食加缬沙坦组NF-κB,iNOS水平明显降低(P<0.05),但仍显著高于对照组(P<0.05).结论动脉粥样硬化致脑组织中NF-κB,iNOS表达发生的变化,与肾素-血管紧张素系统(RAS)的激活有关,培哚普利和缬沙坦从不同水平阻断RAS后,可减轻NF-κB,iNOS的表达,达到保护脑组织的作用.     

胆汁内外引流术对梗阻性黄疸大鼠肝脏诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的 探讨胆汁引流方法对梗阻性黄疸大鼠肝脏诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响.方法 将42只成年雄性SD大鼠随机分为四组,采用我们既往建立的二次手术方法分别建立梗阻性黄疸(OJ,n=12)、胆汁内引流术(ID,n=10)、胆汁外引流术(ED,n=10)及假手术(SH,n=10)模型.于第二次术后7 天留取肝脏标本.通过SABC免疫组化方法测定肝脏组织iNOS的表达情况.结果 假手术组大鼠肝组织几乎无iNOS表达.梗阻性黄疸时,大鼠肝组织iNOS表达增强,阳性面积增加(30.539±6.255),平均光密度升高(0.296±0.055).通过胆汁内引流术解除黄疸后,肝脏iNOS表达明显受到抑制,阳性表达面积减少(16.571±2.044)(P=0.017),平均光密度下降(0.204±0.029)(P<0.01).但通过胆汁外引流术后,肝组织iNOS表达阳性面积(38.186±7.495)及平均光密度(0.399±0.086)非但不减少,反而显著增加(P<0.01,P＝0.004).结论 梗阻性黄疸时,大鼠肝脏iNOS表达增强,胆汁内引流术可明显抑制肝脏iNOS表达,而胆汁外引流术却使其表达增强,提示在抑制诱导型一氧化氮合酶的表达方面胆汁内引流术优于外引流术.     

诱导型一氧化氮合酶基因的表达与调控

哺乳动物体内存在组成型与诱导型两种类型的一氧化氮合酶，前者在生理状态下恒定表达，由其催化产生的一氧化氮作为信使分子，在免疫、神经和心血管系统中发挥多种生理作用；后者只有在致炎细胞因子或脂多糖作用下才表达，其催化合成的一氧化氮参与脓毒性休克、高血压和动脉粥样硬化等多种疾病的病理生理过程。因此，揭示诱导型一氧化氮合酶基因的表达调控机制，具有重要的理论意义和潜在的临床应用价值。     

内皮细胞中血管紧张素Ⅱ对诱导型一氧化氮合酶表达影响及干预的实验研究

目的 探讨在内皮细胞中血管紧张素Ⅱ对诱导型一氧化氮合酶表达的影响以及血管紧张素Ⅱ一型受体（AT1）、血管紧张素Ⅱ二型受体（AT2）和核因子-kappaB在其中的作用。方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,用血管紧张素Ⅱ单独和与AT1、AT2、核因子-kappaB的抑制剂联合干预细胞后,用RT-PCR检测诱导型一氧化氮合酶mRNA表达,Western blot检测诱导型一氧化氮合酶蛋白表达,电泳迁移率变动分析（EMSA）检测核因子-kappaB的活性。结果 在血管紧张素Ⅱ干预2h后核因子-kappaB活性增强（P〈0．05）,5h后诱导型一氧化氮合酶的mRNA和蛋白表达增加（P〈0．05）,核因子-kappaB和AT1的抑制剂能抑制这种增加（P〈0．05）,AT2则无此作用。结论 在内皮细胞中血管紧张素Ⅱ与AT1结合后激活核因子-kappaB,后者的激活引起诱导型一氧化氮合酶表达的增强,从而增加了心血管系统的炎性反应。     

阿司匹林对内皮祖细胞功能及其诱导型一氧化氮合酶的影响

目的:观察阿司匹林对外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)数量和功能的影响. 方法:采用密度梯度离心法从外周血获得单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被的培养板上,培养7d后收集贴壁细胞,分别加入不同浓度阿司匹林(分别为1、2、5、10 mmol/L)培养3、6、12、24 h.激光共聚焦显微镜鉴定FITC-UEA-I和Dil-acLDL双染色阳性细胞为正在分化的EPCs,将其在倒置荧光显微镜下计数.然后分别采用MTT比色法、改良的Boyden小室、黏附能力测定实验和体外血管形成试剂盒来观察EPCs的增殖能力、迁移能力、黏附能力和体外血管形成能力,免疫印迹杂交法(Western blot)半定量测定诱导型一氧化氮合酶(iNOS)含量. 结果:阿司匹林能减少外周血EPCs数量,并且EPCs数量随阿司匹林浓度和作用时间增加而减少.EPCs的增殖能力、迁移能力、黏附能力、体外血管形成能力和iNOS含量亦随阿司匹林浓度和作用时间增加而降低. 结论:阿司匹林通过减少EPCs中iNOS含量,降低EPCs的增殖能力、迁移能力、黏附能力和体外血管形成能力,从而抑制内皮细胞的生成.     

蛋白-酪氨酸激酶在大鼠血管平滑肌细胞诱导型一氧化氮合酶基因表达中的作用

为了解蛋白－酪氨酸激酶及蛋白激酶Ｃ在血管平滑肌细胞诱导型一氧化氮合酶基因表达中的作用,应用蛋白－酪氨酸激酶抑制剂抑制细胞蛋白－酪氨酸激酶活性及应用伏波脂耗竭细胞蛋白激酶Ｃ。结果发现蛋白－酪氨酸激酶抑制剂显著抑制了白细胞介素－１β诱导的血管平滑肌细胞诱导型一氧化氮合酶ｍＲＮＡ表达（０．８３０±０．１８９对０．５１９±０．１８０,Ｐ＜０．０５）和一氧化氮的释放（培养基亚硝酸盐浓度为８．９４±０．８６μｍｏｌ／Ｌ对２．８３±０．４７μｍｏｌ／Ｌ,Ｐ＜０．０１）。而耗竭细胞蛋白激酶Ｃ不影响其诱导型一氧化氮合酶基因表达和一氧化氮合成,表明白细胞介素－１β诱导的大鼠血管平滑肌细胞诱导型一氧化氮合酶基因表达信号转导为蛋白－酪氨酸激酶依赖性的而非蛋白激酶Ｃ依赖性的转导。