产OXA-23型碳青霉烯水解酶鲍曼不动杆菌基因研究

目的　了解临床分离 12株耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌的耐药情况、耐药株来源以及产碳青霉烯酶的类型。方法　收集本院对碳青霉烯类药中介或耐药的鲍曼不动杆菌 12株 ,用琼脂稀释法测定最低抑菌浓度(MIC) ,脉冲场凝胶电泳 (PFGE)分析其同源性 ,并用聚合酶链反应 (PCR)检测分析其耐药基因。结果　 12株细菌均为多重耐药株 ,有 9株对亚胺培南耐药 ,6株对美罗培南耐药。对青霉素类、头孢菌素类、复方磺胺甲唑均耐药 ,对氟喹诺酮类和酶抑制剂复合物耐药率最低。 12株PFGE图谱分为A、B(B1、B2 ) 2型 ,以A型为主要流行株 (9株 ) ,主要集中在重症监护病房 (ICU)。PCR检出 12株菌株均携带OXA 2 3基因 ,未能检出OXA 2 4基因。结论　本院碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌流行主要为医院感染所致 ,该流行株呈多重耐药 ,12株菌株均产OXA 2 3型碳青霉烯酶。     

亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶基因型研究

目的 对临床分离亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌耐药性及碳青霉烯酶基因型进行研究,以指导临床合理应用抗生素.方法 用琼脂稀释法检测最低抑菌浓度(MIC),聚合酶链反应(PCR)检测OXA-23、OXA-24、OXA-58、IMP和VIM碳青霉烯酶基因,并对PCR产物进行测序.结果 鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药率为36.9%,且亚胺培南耐药组菌株对12种抗菌药物耐药率与敏感组比较,差异有统计学意义(P<0.05);在24株亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌中21株PCR扩增出OXA-23基因,2株扩增出VIM基因,检出率分别为87.5%和8.3%,OXA-24、OXA-58、IMP基因均未检出;PCR产物测序表明与Genbank相关基因同源性为100%.结论 该院亚胺培南耐药鲍不动杆菌耐药现象严重;OXA-23碳青霉烯酶基因的产生是鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类药物耐药的重要机制之一.     

碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌流行病学及碳青霉烯酶类型的研究

目的 了解碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌的耐药性、同源性及碳青霉烯酶类型。方法 收集本院碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌45株，浓度梯度法(Etest)测定最低抑菌浓度(MIC)；采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析同源性；通过等电点聚焦电泳(IEF)、三维试验、2-巯基丙酸抑制试验、聚合酶链反应(PCR)、克隆测序等方法分析碳青霉烯酶类型。结果 45株细菌均为多重耐药株，仅对头孢哌酮/舒巴坦、氨苄西林/舒巴坦耐药率较低分别为2．2％和6．5％，敏感率分别为63．0％和43．5％。45株菌株PFGE图谱分为A、B两型，A型是主要流行株(44株)，主要集中在重症监护病房(ICU)。B型1株来自血液科病房。45株菌中有43株产碳青霉烯酶，其中16号株(PFGE为B型)等电点有6．6、7．2两个条带，pI6．6为OXA-23，其余42株(A1～A4亚型)pIs均有6．4、7．0两个条带，均不被克拉维酸、氯唑西林及2-巯基丙酸抑制，PCR方法也未能检出OXA-23、OXA-24系列的基因。结论 本院碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌流行主要为医院感染所致，该流行株呈多重耐药，未发现金属酶，仅1株产OXA型碳青霉烯酶，为OXA-23。     

革兰阴性杆菌碳青霉烯酶产生与细菌耐药性关系的研究

目的 研究耐亚胺培南革兰阴性杆菌碳青霉烯酶产生及流行情况.方法 采用琼脂稀释法测定亚胺培南和美罗培南对199株革兰阴性杆菌的MIC,采用乙二胺四乙酸(EDTA)协同实验筛选金属β内酰胺酶表型.PCR扩增耐药菌株碳青霉烯酶基因,并测序分析.脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析产酶菌株同源性.结果 141株耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌对亚胺培南和美罗培南药敏试验结果显示具有3种模式,以亚胺培南和美罗培南同时耐药为主94株(66.7%)、亚胺培南耐药和美罗培南敏感46株(32.6%)、亚胺培南敏感和美罗培南耐药仅1株(0.7%).但其他耐碳青霉烯类的鲍曼小动杆菌、洛菲不动杆菌、弗劳地柠檬酸杆菌、肺炎克雷伯菌和黏质沙雷菌均对亚胺培南和美罗培南同时耐药.EDTA协同试验结果显示,仅4株耐亚胺培南铜绿假单胞菌为EDTA协同试验阳性(2.8%),其余菌株均为EDTA协同试验阴性.PCR扩增碳青霉烯酶基因结果显示,4株EDTA协同试验阳性的铜绿假单胞菌产VIM-2型金属酶;34株鲍曼不动杆菌菌株中30株(88.2%)产OXA型碳青霉烯酶,其中OXA23型27株(79.4%),OXA24型13株(38.2%),OXA66型23株(67.6%).并且22株(64.7%)细菌同时产生一种以上的OXA型碳青霉烯酶.7株洛菲不动杆菌全部产OXA-23型碳青霉烯酶;11株弗劳地柠檬酸杆菌、5株肺炎克雷伯菌和1株黏质沙雷菌均产KPC-2型碳青霉烯酶,其中6株弗劳地柠檬酸杆菌同时具有IMP-8新亚型金属酶.PFGE结果显示,34株鲍曼不动杆菌中PFGE谱型共有15种,其中有14株属于A型,7株属于B型;7株洛菲不动杆菌不属于同一克隆;4株产VIM-2型金属酶铜绿假单胞菌不属于同一PFGE谱型;11株柠檬酸杆菌属于同一PFGE谱型;5株肺炎克雷伯菌属于同一PFGE谱型.结论 耐碳青霉烯类革兰阴性杆菌对12种抗生素的耐药率均高于碳青霉烯类敏感革兰阴性杆菌的耐药率,而且产生多种碳青霉烯酶,并在弗劳地柠檬酸杆菌、鲍曼不动杆菌和肺炎克雷伯菌中有产酶克隆株的流行.     

耐碳青霉烯类抗生素不动杆菌的β内酰胺酶研究

目的了解不动杆菌属细菌对碳青霉烯类药物的耐药机制,耐药菌株的基因同源性和传播机制。方法采用改良Hodge试验和乙二胺四乙酸(EDTA)协同试验筛选耐亚胺培南不动杆菌碳青霉烯酶,等电聚焦电泳(IEF)测定产β内酰胺酶等电点,blaTEM,blaSHV,blaCTX-M-Ga-Gc,blaPER-1,blaOXA-23,blaMBL等,引物的PCR进行β内酰胺酶的基因分型,并对PCR产物进行测序;Southern印迹进行苯唑西林酶OXA-23的基因定位脉冲场电泳(PFGE)研究耐亚胺培南不动杆菌同源性。结果6株耐碳青霉烯类不动杆菌均产OXA-23型酶,其中5株同时产PER-1型ESBLs。6株菌blaOXA-23均定位于染色体。3株琼氏不动杆菌属于同一PFGE分型,3株鲍曼不动杆菌分别属于2种PFGE分型。结论产OXA-23型碳青霉烯酶是导致不动杆菌对碳青霉烯类药物耐药的重要原因,同时存在blaOXA-23的克隆传播。     

多重耐药鲍曼不动杆菌携带碳青霉烯类水解酶基因情况的研究

目的 研究浙江省瑞安市人民医院多重耐药鲍曼不动杆菌中金属-内酰胺酶(IMP、VIM)、 KPC酶、 OXA-23型水解酶基因的携带情况,探讨各种碳青霉烯类水解酶在多重耐药鲍曼不动杆菌中的作用。 方法 采用Whonet 5.4 软件分析多重耐药鲍曼不动杆菌的标本类型和病区分布,以及药敏资料;设计特异性引物,用PCR方法扩增IMP、VIM、KPC和OXA-23特异基因,并用琼脂糖电泳分析其产物。 结果 70株多重耐药鲍曼不动杆菌均未检测到IMP、VIM及KPC基因,其中58株亚胺培南耐药菌株均携带OXA-23基因,阳性率为82.86%。 结论 OXA-23型水解酶是造成瑞安市人民医院鲍曼不动杆菌对临床常用碳青霉烯类抗生素耐药的主要原因。     

应用碳青霉烯酶失活法检测产碳青霉烯酶鲍曼不动杆菌

目的评估碳青霉烯酶失活法(carbapenem inactivation method,CIM)试验检测耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌产生碳青霉烯酶的能力。方法收集121株鲍曼不动杆菌,应用全自动细菌鉴定仪进行菌株鉴定和药敏试验,CIM检测鲍曼不动杆菌所含碳青霉烯酶,应用PCR方法检测OXA-23型碳青霉烯酶基因。结果 121株鲍曼不动杆菌中68株对亚胺培南和美罗培南耐药,其中65株菌PCR显示携带OXA-23基因,66株菌CIM试验为阳性。52株鲍曼不动杆菌对亚胺培南和美罗培南均敏感,其中49株菌OXA-23阴性,52株菌CIM试验全为阴性。1株菌对亚胺培南耐药、对美罗培南敏感,CIM试验阴性,OXA-23阳性。CIM试验的敏感性和特异性分别为94.2%和98.1%。结论与PCR方法相比较CIM试验操作简便,成本小,结果易读,易于在实验室开展。应用CIM试验可以检测鲍曼不动杆菌OXA-23型碳青霉烯酶,     

耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌耐药机制研究

目的了解碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌的耐药性、同源性及其耐药机制。方法收集碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌20株,用E试验行药敏测定;脉冲场凝胶电泳(PFGE)行同源性分析;通过等电点聚热电泳(IEF)、三维试验及抑制试验、PCR、克隆测序、十二烷基硫酸钠-聚丙酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)等方法分析碳青霉烯酶型及外膜蛋白(OMP)。结果20株碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌对多黏菌素B仍保持良好的敏感性(90%),莫西沙星对约40%菌株的MIC在0.125mg/L以下;根据PFGE图谱将其分为5型,A1型是主要流行株(9株),主要集中在我校附属二院ICU和附属一院呼吸科;所有菌株均产等电点6.7的碳青霉烯酶,PCR方法及测序证实为OXA-23型碳青霉烯酶,未发现金属酶,且都含有Ⅰ类整合子,但未发现质粒;OMP分析发现部分克隆有31ku的条带丢失。结论亚胺培南耐药不动杆菌存在医院间克隆传播,值得关注;我校鲍曼不动杆菌主要产生OXA-23型碳青霉烯酶;OMP31ku的条带丢失是耐药机制之一;我校耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌耐药机制可能是产酶和OMP丢失共同作用。     

儿科临床分离多重耐药鲍曼不动杆菌耐药性和产OXA酶的研究

目的研究儿科临床分离多重耐药鲍曼不动杆菌耐药性和OXA酶基因存在情况。方法收集2010年1—12月北京儿童医院住院患儿中分离多重耐药鲍曼不动杆菌42株。用美国BD公司Phoenix100微生物分析仪,进行菌株鉴定和13种抗菌药物的药敏试验,按照CLSI 2010年推荐标准判断结果。用多重PCR方法检测OXA酶OXA-23、OXA-24、OXA-51和OXA-58 4组基因。PCR产物测序结果通过GenBank进行比对分析,确定其基因型别。结果多重耐药鲍曼不动杆菌42株对亚胺培南和美罗培南耐药率分别为76.2%和78.6%。未发现对多黏菌素耐药的菌株。42株菌中41株(97.6%)扩增出特异性条带,为OXA基因阳性。其中,OXA-51组基因阳性38株(90.4%);OXA-23组基因阳性28株(66.7%);OXA-58组基因阳性2株(4.8%)。未扩增出OXA-24组基因。有27株(64.2%)OXA-51和OXA-23组基因同时阳性。携带OXA-23基因鲍曼不动杆菌均为对碳青霉烯类抗生素耐药的菌株。结论儿科临床分离多重耐药鲍曼不动杆菌的耐药情况严重。以同时产OXA-51和OXA-23型OXA酶为主。OXA-23基因是导致鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要原因。     

攀枝花地区耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌OXA基因型及分子流行病学分析

目的通过研究攀枝花地区临床分离的耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的耐药性及碳青霉烯酶OXA类型,了解该地区耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的耐药机制及分子流行病学特征。方法收集2014年1月至2015年5月攀枝花地区两所三甲医院临床分离的127株鲍曼不动杆菌;采用KB法检测21种抗菌药物敏感性,比较碳青霉烯类鲍曼不动杆菌耐药组和敏感组的耐药率;采用聚合酶链反应(PCR)检测OXA基因;最后采用肠杆菌基因间一致重复序列聚合酶链反应(ERIC-PCR)进行分子分型及同源性分析。结果 66株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌对多黏菌素B、米诺环素、头孢哌酮/舒巴坦的耐药率最低,分别为15.2%、22.7%、24.2%,对其余18种抗菌药物耐药率均高于80.0%,耐药率明显高于敏感组菌株;OXA-23和OXA-51基因的检出率分别为92.4%、98.5%,OXA-24和OXA-58基因未检出;ERIC-PCR分子分型主要可分为A、B、C、D 4个型,以B型为主。结论攀枝花地区耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌耐药非常严重,OXA-23、OXA-51基因为该地区耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌重要基因型,B型为主要流行株。