siRNA沉默LKB1基因激活Hedgehog信号通路及对人乳腺癌裸鼠移植瘤模型生长的实验研究

目的探讨应用小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默抑癌基因LKB1对人乳腺癌细胞MDA-MB-231中Hedgehog信号通路相关因子的表达及人乳腺癌裸鼠移植瘤模型的肿瘤生长的影响。方法构建LKB1基因siRNA质粒LKB1-siRNA;建立LKB1表达抑制的MDA-MB-435细胞模型;裸鼠乳晕皮下接种,建立人乳腺癌裸鼠移植瘤动物模型;成瘤后,观察肿瘤体积变化、裸鼠生存时间;并用Western印迹法检测瘤组织中LKB1和Hedgehog信号通路中信号肽Shh、Sufu、膜受体Ptch、Smo、转录因子Gli1、Hip蛋白表达的变化。结果 LKB1-siRNA质粒组裸鼠的肿瘤体积明显增长(P<0.05);肿瘤内LKB1基因表达水平明显下降,而Hedgehog信号通路相关因子Shh、Gli1、Ptch、Smo的表达升高,Hedgehog信号通路抑制因子Sufu、Hip表达下降。结论 LKB1基因siRNA能够明显抑制人乳腺癌裸鼠移植模型的LKB1基因的表达,上调Hedgehog信号通路相关因子的表达,促进肿瘤生长。LKB1基因和Hedgehog信号通路在乳腺癌细胞中呈现负相关表达。     

Sonic Hedgehog信号通路与乳腺癌抑癌基因LKB1的相互影响

目的：研究环靶明（cyclopamine）抑制Sonic Hedgehog（SHH）信号通路后,转染LKB1基因的乳癌细胞的凋亡、周期及信号通路相关基因表达的改变。方法：抑癌基因LKB1转染人乳腺癌细胞MDA-MB-231,分MDA-MB-231组（231组）和转染LKB1基因的MDA-MB-231（LKB1组）两组,每组分别采用0,5×10-6mol/L,10×10-6mol/L,20×10-6mol/L 4种浓度的环靶明处理细胞,各小组细胞分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡和周期,用RT-PCR法和Western blot法检测Sonic Hedgehog信号通路相关基因Shh、Smo、Ptch、Sufu、Hip及LKB1的mRNA和蛋白表达水平。结果 ：在LKB1组和231组中,各小组细胞的凋亡率变化与Sonic Hedgehog相关基因Shh、Smo表达变化一致,随环靶明浓度增大凋亡率增加、基因表达受抑制,在环靶明浓度达10×10-6mol/L时变化最明显,且LKB1组较231组的变化更为明显。在231组中,各小组细胞周期变化与Sonic Hedgehog相关抑制基因Sufu、Hip表达变化一致。而在LKB1组中,各小组细胞周期与抑制基因Sufu、Hip表达变化均无明显差异。在231组中,各小组抑癌基因LKB1的表达随药物浓度增加渐增强。Ptch表达在两组均无明显变化。结论 ：抑癌基因LKB1可协同Sonic Hedgehog信号通路抑制剂环靶明促进乳腺癌细胞凋亡,调控细胞周期,推测其机制可能是通过如上信号通路相关基因表达变化而实现。信号通路抑制剂环靶明可提高乳腺癌细胞抑癌基因LKB1的表达,推测此也是信号通路抑制剂降低癌细胞活性机制之一。     

乳腺癌中Hedgehog信号通路的表达及其与LKB1基因相关性的研究

目的：探讨Hedgehog（Hh）信号通路主要蛋白在乳腺癌中的表达及其与LKB1基因的相关性,以及与临床病理特征、预后的关系。方法：采用免疫组化方法检测75例人乳腺癌标本中Hh信号通路主要蛋白（Shh、Smo、Sufu、Gli1、Ptch）及LKB1基因的表达,分析二者相关性,并分析Hh信号通路的表达与临床病理特征及预后的关系。结果：在75例乳腺癌样本中,阳性表达Shh、Gli1、Smo、Ptch、Sufu、LKB1分别为69（92.0%）、58（77.3%）、65（86.7%）、50（66.7%）、34（45.3%）、33（44.0%）,而在其相邻的正常乳腺上皮不表达或低表达。Hh信号通路与LKB1的表达呈负相关;Hh信号通路的表达情况与患者年龄、淋巴结转移情况、分子分型具有一定的相关性,且高表达的患者预后较差。结论：Hh信号通路在乳腺癌中过度激活,与临床病理特征及预后相关,并与LKB1基因的表达呈负相关,两者之间的相互作用对乳腺癌的诊治及预后可能有重要影响。     

乳腺癌组织中Hedgehog相关蛋白的表达及其临床意义

目的 探讨Hedgehog相关蛋白在乳腺癌中的表达及其临床意义。方法 从334例乳腺癌 组织中制备组织块。免疫组织化学法检测六种Hedgehog信号蛋白（Shh、ptch、Smo、Gli-1、 Gli-2和Gli-3）的表达。结果 Hedgehog信号蛋白表达与一些预后因素显著相关,包括淋巴结转 移与Shh（P=0.001）、Gli-3 (P<0.001)、Ptch(P=0.025)的相关性、分期与Shh和Ptch表达（P分别 为0.007和0.037）的相关性,核分级与Smo(P=0.004)和Gli-3（P=0.026）的相关性,组织学分级与 Smo(P=0.007)的相关性。Shh、Ptch、Smo、Gli-1、Gli-2和Gli-3表达在表型之间差异有统计学意义 （P分别为<0.0001、<0.0001、0.004、0.039、0.031和0.003）。Gli-2表达与较差的整体生存结果相关 （P=0.012）。结论 Hedgehog通路表达激活与乳腺癌的侵袭性相关,可能是乳腺癌的一个有效的治 疗靶点。Gli-2可作为乳腺癌的一个预后指标。     

乳腺癌组织ER与Hedgehog信号通路分子相关性

目的 探讨乳腺浸润性导管癌中雌激素受体(estrogen receptor,ER)的表达与Hedgehog信号通路关键分子Gli1和Ptch之间的关系及临床意义.方法 收集2012-01-01-2013-01-30滨州医学院附属医院甲乳外科手术切除60例ER阳性和60例ER阴性乳腺浸润性导管癌标本,采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测Hedgehog信号通路关键分子Gli1和Ptch mRNA和蛋白的表达情况,分析其相关性及临床意义.结果 RT-PCR检测结果显示,ER阳性组Gli1 mRNA表达量为1.05±0.27,ER阴性组中为2.70±0.26,差异有统计学意义,t=20.751,P＜0.01;ER阳性组Ptch mRNA表达量为1.04±0.29,ER阴性组中为2.34±0.35,差异有统计学意义,t=18.413,P＜0.01;蛋白质印迹法检测结果显示,ER阳性组中Gli1蛋白表达量为0.43±0.007,ER阴性组中为0.71±0.011,差异有统计学意义,t＝11.086,P＜0.01;ER阳性组Ptch蛋白表达量为0.36±0.008,在ER阴性组中为0.58±0.012,差异有统计学意义,t=16.437,P＜0.01.Gli1和Ptch与ER阴性患者的年龄和肿瘤大小无关,P值均＞0.05;Gli1(x2＝16.33,P＜0.001)和Ptch(x2＝24.33,P＜0.001)与TNM分期存在相关性;Gli1(x2=6.50,P＜0.05)和Ptch(x2 =5.09,P＜0.05)与腋窝淋巴结转移存在相关性.结论 在ER阴性乳腺浸润性导管癌中,Hedgehog信号通路呈明显活化状态,可能与TNM分期与腋窝淋巴结的转移有关,阻断Hedgehog信号通路可能成为治疗ER阴性乳腺癌的新靶点.     

Hedgehog信号通路与肿瘤的研究新进展

Hedgehog（Hh）信号通路在果蝇中被首次发现。该信号通路能有效调控哺乳动物的胚胎发育过程,此外,在调控细胞的分化、增殖、血管形成及肿瘤形成方面起重要作用。Hh信号通路是一个Hh-Ptch-Smo-Gli的级联反应过程。该通路的配体包括:Hedgehog配体［Sonic Hh（SHh）、Indian Hh（IHh）和Desert Hh（DHh）］,Ptch受体（Ptch1、Ptch2）,Smoothened受体（Smo）,融合同源物（Sufu）的抑制因子,驱动蛋白Kif7,蛋白激酶A（PKA）和环腺苷一磷酸（cAMP）。该级联反应中的终末转录因子Gli调控的下游基因过度表达可能是导致肿瘤产生的关键因素。许多研究者已经发现,Hegehog信号通路与一系列人类实体瘤的形成关系密切。本文就近年来Hedgehog信号通路及其与肿瘤关系的研究进行综述。     

Hedgehog信号通路相关蛋白在头颈鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨头颈鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)中Hedgehog信号通路成员Shh、Ptch1和Gli1蛋白表达的关系及其意义。方法:利用生物信息学方法分析Shh、Ptch1、Gli1在HNSCC和正常组织中的表达差异预测本研究可行性,采用免疫组化法检测84例头颈鳞状细胞癌及10例正常黏膜上皮组织中Shh、Ptch1和Gli1蛋白表达,分析Shh、Ptch1和Gli1蛋白表达水平与头颈鳞状细胞癌患者临床病理特征的关系。结果:头颈鳞状细胞癌组织中Shh、Ptch1和Gli1蛋白呈高表达（分别为65.5%、60.7%和63.1%）,均高于正常黏膜上皮组织（分别为20%、30%和30%）。Shh蛋白表达与头颈鳞状细胞癌患者临床分期和淋巴结转移有关(P<0.05),而与患者年龄、性别、肿瘤局部侵袭和远处转移均无关(P>0.05);Ptch1蛋白表达与头颈鳞状细胞癌患者临床病理特征均无关(P>0.05);Gli1蛋白表达仅与头颈鳞状细胞癌患者淋巴结转移有关(P<0.05)。Shh、Ptch1和Gli1蛋白的表达水平在鼻咽鳞癌和口咽鳞癌中没有差异。Shh与Ptch1、Gli1蛋白表达呈正相关。结论:Shh、Ptch1和Gli1蛋白在头颈鳞状细胞癌中高表达,与头颈鳞状细胞癌的发生、发展密切相关,是头颈鳞状细胞癌防治的一个重要靶标。     

乳腺癌中CXCR4的表达及其与Hedgehog信号通路的相关性

目的 检测乳腺癌组织中CXCR4及Smoothened (Smo)、Patched (Ptch)的表达,对CXCR4表达的临床意义进行分析,并评价CXCR4与Smo、Ptch之间的相关性.方法 以免疫组织化学染色法检测124例乳腺癌组织中CXCR4、Smo、Ptch的表达情况,并对其结果进行分析.结果 乳腺癌组织中CXCR4阳性表达率为66.9％,CXCR4与乳腺癌淋巴结转移呈正相关(r=0.181,P=0.044);Smo、Ptch阳性表达率分别为58.9％和64.5％,与CXCR4表达呈正相关(r=0.189,P=0.036;r=0.230,P=0.0l0).结论 CXCR4的表达与乳腺癌淋巴结转移有关,与Smo、Ptch表达呈正相关,当其与Hedgehog信号通路同时表达时或许与乳腺癌的复发风险增高相关.     

Hedgehog信号通路与LKB1基因在乳腺癌中的达及其相关性研究

Hedgehog信号通路在乳腺癌中过度激活,LKB1是抑癌基因,有抑制乳腺癌增殖的功能.LKB1过表达可调控Hedgehog信号通路的靶基因CyclinD1系列基因的表达,同时研究发现Hedgehog信号通路中PKA基因起重要作用,其激活与cAMP状态有关,而LKB1基因能影响cAMP的状态.因此,LKB1基因与Hed...     

Hedgehog信号通路异常对人结肠腺癌多药耐药性的影响

目的:探讨Hedgehog(Hh)信号通路与人结肠腺癌细胞多药耐药的关系。方法:以结肠腺癌敏感细胞株HCT-8和多药耐药细胞株HCT-8/VCR为研究对象,采用Hh信号通路激动剂SAG及抑制剂GANT61进行干预。实验分为4组:HCT-8组、HCT-8/VCR组、HCT-8+SAG组(3nmol/L SAG干预48h)以及HCT-8/VCR+GANT61组(5μmol/L GANT61干预48h)。采用CCK-8(cell counting kit-8)法检测细胞耐药性及存活率。实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别从基因和蛋白水平检测P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)及Hedgehog信号通路相关蛋白Smo和Gli1的表达。结果:HCT-8/VCR组Smo、Gli1和P-gp基因及蛋白表达高于HCT-8组(P<0.05);HCT-8+SAG组24和48h时的细胞存活率及Smo、Gli1、P-gp基因和蛋白表达水平均高于HCT-8组(P<0.05);HCT-8/VCR+GANT61组24和48h时的细胞存活率及Smo、Gli1、P-gp基因和蛋白表达均低于HCT-8/VCR(P<0.05)。结论:人结肠腺癌细胞多药耐药性与Hh信号通路异常激活有关。