LC-MS/MS法测定大鼠肝微粒体孵育液中靛玉红的含量

目的:建立测定大鼠肝微粒体孵育液中靛玉红含量的方法。方法:采用液相色谱-电喷雾串联质谱法。肝微粒体孵育液样品处理采用液-液提取,提取物以甲醇-10mmol·L-1乙酸铵溶液(氨水调pH值至7.40)=90:10为流动相进行分离,以选择性反应离子监测(SRM)方式进行定量分析,用于监测的离子为m/z262.9→219.0(靛玉红)和m/z531.0→82.1(酮康唑,内标)。结果:5min内完成靛玉红的检测,工作曲线线性范围为1～100ng·mL-1,日内、日间精密度分别<3.6%、<13.4%,平均回收率为94.0%～104.4%,检测限为0.5ng·mL-1。结论:本方法灵敏度高、特异性好,可以用于肝微粒体孵育液样品中靛玉红的检测。     

HPLC法测定大鼠血浆、微粒体中非那西丁与其代谢物含量及其应用

<正>细胞色素P450 1A2亚家族是近年来药物代谢研究领域的热点之一,与许多药物的相互作用有关[1]。非那西丁是CYP1A2酶的特异性底物,被广泛选择作为底物用于体内外测定酶活性[2]。本研究建立大鼠血浆、微粒体中非那西丁与其代谢物对乙酰氨基酚含量的HPLC测定方法,并对血浆样品进行方法学考察,为进一步确证药物及化学异物对CYP1A2酶活性的影响提供可靠的方法学基础。同时,应用所建立的方法以体内、体外方式评价了甘草水提液对     

HPLC法测定大鼠肝微粒体中洛伐他汀含量的方法学研究

目的:考察测定大鼠肝微粒体中洛伐他汀含量的方法学。方法:采用高效液相色谱法,内标为地西泮,色谱柱为Ulti-mateXB-C18,流动相为乙腈-水(70∶30),流速为1.0mL·min-1,检测波长为238nm,柱温为30℃,进样量为20μL。结果:大鼠肝微粒体中洛伐他汀检测浓度的线性范围为2.5～40μmol·L-1(r=0.9983),低、中、高浓度洛伐他汀溶液的日内RSD分别为5.44%、2.89%、2.83%,日间RSD分别为5.48%、1.84%、1.91%,方法回收率分别为(109.24±3.28)%、(104.82±5.92)%、(102.17±1.92)%,绝对回收率分别为(104.65±2.93)%、(113.72±6.25)%、(101.92±1.89)%。结论:方法学考察结果表明,本方法简单易行、灵敏度高,可用于肝微粒体中洛伐他汀的含量测定。     

用液相色谱-串联质谱法测定人血清和尿液中非那西丁及其代谢物浓度

目的:建立测定人体血清和尿液中非那西丁及其代谢产物的液相色谱-串联质谱法。方法:用乙酸乙酯萃取血清和尿液中非那西丁及其代谢产物。色谱柱为Restek Allure PFPP柱(100 mm×2.1 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液(30∶70,V/V),流速0.3 mL/min。以磺胺甲氧嘧啶为内标,非那西丁、对乙酰氨基酚和内标的多反应监测(MRM)离子对分别为m/z180→138、152→110和281→156。测定13名健康受试者口服非那西丁1.25 g后血清和尿液中非那西丁及其代谢产物的浓度。结果:非那西丁、对乙酰氨基酚和内标的保留时间分别为4.1、1.4和2.8 min。在0.2~50μg/mL范围内,非那西丁和对乙酰氨基酚的浓度与峰面积相关性良好(r>0.999 0)。非那西丁和对乙酰氨基酚的准确度分别为87.1%~101.5%和89.5%~107.3%,精密度分别为0.85%~7.83%和2.53%~8.74%,提取回收率为53.0%~76.0%,基质效应为92.0%~106.3%,均符合生物样本分析方法的有关要求。除万古霉素和甲泼尼龙外,其他临床常用药物对测定无干扰。13名健康受试者血清中非那西丁和总对乙酰氨基酚浓度为(5.94±4.79)和(8.81±2.91)μg/mL;尿液中非那西丁和总对乙酰氨基酚浓度为(3.25±1.10)和(570.45±187.13)μg/mL。结论:该方法简便、灵敏、特异性强,具有临床实用价值。     

HPLC法测定大鼠肝微粒体中睾酮的含量

目的:建立以高效液相色谱法测定大鼠肝微粒体中细胞色素P4503A4(CYP3A4)探针底物睾酮含量的方法。方法:色谱柱为Ultimate-XB C18,流动相为水-乙腈(50∶50),内标为地西泮,流速为1.0mL·min-1,检测波长为245nm,柱温为30℃,进样量为20μL。结果:睾酮生物样品检测浓度的线性范围为10.0～200.0μmo·lL-1(r=0.9995);低、中、高浓度的平均方法回收率分别为86.15%、103.10%、97.48%,平均相对回收率为111.15%、107.24%、100.78%,日内RSD分别为3.92%、2.46%、2.82%,日间RSD分别为2.98%、1.34%、2.41%。结论:本方法简便快速、灵敏度高、重复性好,可用于大鼠肝微粒体中CYP3A4活性的测定及相关研究应用。     

HPLC-MS/MS法测定大鼠血浆中芬太尼浓度及其代谢机制研究

目的:建立以高效液相色谱-质谱(HPLC-MS/MS)法测定大鼠血浆中芬太尼浓度的方法,并研究肝脏对芬太尼代谢的影响。方法:以氨基比林为内标,采用正己烷提取处理血浆样品;色谱柱为InertsilODS-3,流动相为甲醇-0.5%甲酸溶液(90∶10);将大鼠分为正常对照组和无肝期组(夹闭肝门),静脉注射芬太尼20μg·kg-1,考察给药后1、2、3、5、10、15、20、30、45、60、75、90min芬太尼血药浓度的变化及其药动学情况。结果:芬太尼、氨基比林与血浆中内源性杂质分离良好;芬太尼检测浓度的线性范围为0.5～400ng·mL-1(r=0.9997),平均回收率为96.90%～102.32%,日内和日间RSD均小于10.56%。与正常对照组比较,无肝期组芬太尼浓度下降明显减慢,AUC0～(P<0.05)、t1、Cmax均增加。结论:肝脏是芬太尼的主要代谢器官,但也存在肝外代谢。t/2z所建立的方法可用于大鼠体内芬太尼的含量测定。     

人肝微粒体中尼莫地平及其脱氢代谢物的HPLC测定法及代谢动力学

目的：建立人肝微粒体中尼莫地平及其代谢物的HPLC测定法,并用本法研究尼莫地平在肝微粒体中代谢的动力学。方法：采用HPLC法,色谱柱为Hypersil C₁₈柱,流动相为乙腈—水(62∶38)检测波长UV 238 nm,样品用乙醚—正己烷(1∶1)提取。结果：本法的回收率为94.3%～98.5%,日内和日间RSD为1.45%～9.68%,尼莫地平和其脱氢代谢物的浓度分别在1.31～20.92 μg.mL^-1和122.7～4908.0 ng.mL^-1范围内与峰面积呈良好线性关系。在本实验条件下尼莫地平呈线性消除,而其脱氢代谢物呈线性增加。结论：尼莫地平在人肝微粒体内被迅速代谢,肝微粒体P450酶参与了尼莫地平的脱氢氧化。     

HPLC-MS/MS法测定人血浆中甲氨蝶呤的浓度

目的:建立高效液相色谱串联质谱法(HPLC-MS/MS)测定人血浆中甲氨蝶呤(MTX)的浓度,应用于急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿的治疗药物监测.方法:色谱柱为Agilent C18 SB-Aq(2.1 mm×100 mm,3.5μm);流动相为A相:(0.05%甲酸-7.5 mmol·L-1甲酸铵)水溶液,B相:甲醇,梯度洗脱;流速为0.4 mL·min-1,柱温为30℃.MTX和内标氨基蝶呤(IS)在ESI正离子模式下的定量离子对分别为455.2→308.1和441.2→294.0.结果:MTX在0.01~10μmol·L-1浓度范围内线性良好,日内、日间的精密度和准确度均在±15%以内,MTX在低、中、高浓度的回收率为96.9%~105.0%.结论:本研究建立的HPLC-MS/MS法测定MTX血浆浓度的方法快捷、准确,适用于MTX的临床ALL患儿血药浓度的监测.     

HPLC测定大鼠肝微粒体P450活性方法学研究进展

近年来，越来越多的研究者意识到使用肝微粒体进行细胞色素P450活性测定的重要性。本文综述了应用高效液相色谱进行大鼠肝微粒体P450活性测定的方法学研究进展，内容包括肝微粒体的制备方法，细胞色素P450代谢酶系的特异性底物及其代谢产物和使用高效液相色谱进行细胞色素P450活性测定的应用条件。     

UPLC-MS/MS法测定中兽药中非法添加物金刚烷胺

目的建立检测中兽药中金刚烷胺残留的UPLC-MS/MS方法。方法样品经提取稀释后,采用ACQUITY UPLCTMBEH C18色谱柱为分离柱,质谱正离子扫描测定。结果金刚烷胺在5～100 ng·mL^-1与峰面积线性关系良好（r^2=0.999 2）;样品检出限为1μg·mL^-1,定量限为2μg·mL^-1。在40、50、60 mg·mL^-1回收率为85%～115%,批内批间变异系数均〈10%。结论本方法快速、灵敏、重现性好,适用于中兽药中非法添加金刚烷胺的检测。     

HPLC-MS/MS法测定大鼠血浆中长春花碱的浓度及药动学研究

摘 要 目的： 建立HPLC MS/MS法测定大鼠血浆中长春花碱的浓度。方法: 血浆样本加入适量内标,经乙腈直接沉淀蛋白后采用HPLC MS/MS进行分析。色谱柱采用Ultimate C18柱 (150 mm×2.1 mm,5.0 μm);流动相由乙腈 10 mmol·L^-1醋酸铵(含0.1%甲酸) (49:51)组成,柱温40℃;流速0.3 ml·min^-1;采用电喷雾离子源(ESI),以多反应监测方式(MRM)进行定量分析。长春花碱和内标长春新碱在正离子模式下定量分析离子对分别为m/z 811.4→m/z 224.2和m/z 825.4→m/z 807.4。结果: 长春花碱在0.475~ 950 ng·ml^-1内线性关系良好（r=0.997 1）,最低定量限为0.475 ng·ml^-1,提取回收率为89.15%~95.28%,日内、日间精密度RSD均不高于7.95%。药动学研究结果表明,长春花碱在大鼠体内的t1/2为（5.86 ±2.37）h,AUC(0-t)和AUC(0-∞)分别为（68.45±14.51）,（95.03±33.09）μg·L^-1·h。 结论:该方法分析速度快、灵敏、准确,为临床进一步研究长春花碱和药物转运体提供了基础。长春花碱在大鼠体内的浓度较低,半衰期较长。     

HPLC法测定外用对乙酰氨基酚凝胶中对乙酰氨基酚的含量

目的:建立外用对乙酰氨基酚凝胶中对乙酰氨基酚的HPLC含量测定方法.方法:选用YMC-C18(150×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-水-磷酸(22:78:0.1),检测波长为250nm,流速为1.0mL·min-1.结果: 对乙酰氨基酚的量在0.04μg～0.14μg内与峰面积呈良好线性关系,相关系数r=0.9996,平均回收率为99.72%,RSD为0.73%.结论:方法操作简便,准确,灵敏度高,为外用对乙酰氨基酚凝胶质量控制提供了定量依据.     

HPLC/MS/MS联用技术测定全血中的瑞芬太尼

目的:建立全血中瑞芬太尼的HPLC／MS／MS测定方法,并测定围麻醉期患者体内瑞芬太尼的血药浓度。方法:全血样品中加入枸橼酸芬太尼作内标,用1-氯丁烷进行提取。以乙腈与三氯甲烷(V乙腈:V三氧甲烷= 1:1)混合液加乙酸铵(2 mmol·L-1)为流动相,色谱柱为Intersil ODS-3(50 mm×2．1 mm,3μm),流速0．3 mL·min-1。三级四极杆质谱采用正离子模式,离子采集方式为多反应监测模式(MRM),离子源温度200℃,离子源电离电压为5 000 V,雾化气流速8 L·min-1。采集离子(母离子／子离子)为瑞芬太尼377／228,芬太尼337／188。结果:瑞芬太尼在0．5～50．0 ng·mL-1浓度范围内呈良好的线性(r=0．9994)。日内、日间精密度均在15％以内,提取回收率大于67．3％,方法回收率在95．0％～97．6％。结论:本方法灵敏、准确,适合瑞芬太尼的体内分析。     

HPLC荧光和质谱两种检测器测定大鼠血浆及组织中的表阿霉素

目的 建立测定大鼠血浆及组织中表阿霉素浓度的方法.方法 采用RP-HPLC荧光和质谱两种检测器,Lima C18(2)分析柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.01 mol·L-1乙酸铵-乙腈(60:40,甲酸调pH3.5),流速0.6 ml·min-1,样品在碱性条件下,用乙酸乙酯漩涡混合提取浓集后进样,λEx=450 am,λEm=530 nm,质谱以MRM模式测定,内标法定量.结果 荧光检测标准曲线在2.44～2.50×103μg·L-1有良好线性,定量限2.44μg·L-1,日内RSD小于5.0%,日间RSD小于8.6%,方法回收率99%～113%,萃取回收率86.8%～89.7%;质谱检测标准曲线在0.49～2.00×103μg·L-1有良好线性,定量限0.49μg·L-1,日内RSD小于6.5%,日间RSD小于8.7%,方法回收率98～5%.结论 所建方法快速简便、灵敏准确,适用于血浆及组织中表阿霉素的测定及药物动力学研究.     

氯吡格雷在人血浆浓度的液质联用测定法

目的建立测定人血浆中氯吡格雷(抗心肌及抗脑梗死药)血药浓度的HPLC/MS/MS法。方法血浆样品用叔丁基甲醚提取,内标为噻氯匹定;色谱柱用X-Terra MS C_(18)(2.1 mm×50 mm,5μm),柱温30℃,流动相:乙腈-水(含10 mmol·L~(-1)醋酸铵,调pH为4.0)为70:30,流量为0.3 mL·min~(-1);质谱用ESI离子源,定量分析的离子反应分别为m/z 322→z 212 (氯吡格雷),m/z 264→m/z 154(内标噻氯匹定)。结果氯吡格雷的线性范围为10×10~4～1.2×10~4pg·mL~(-1)(γ=0.9993),日内、日间RSD均小于10%,提取回收率约为80%。结论该方法快速、准确、灵敏度高,可用于氯吡格雷血药浓度测定。     

HPLC法测定复方氨酚烷胺胶囊中对乙酰氨基酚和咖啡因的含量

目的：采用高效液相法同时测定复方氨酚烷胺胶囊中对乙酰氨基酚和咖啡因的含量。方法：以C18化学键合硅胶为固定相,以甲醇：水（40：60）为流动相,检测波长216nm进行测定。结果：平均加样回收率对乙酰氨基酚为99．4％,RSD=0．49（n=9）,咖啡因为99．1％,RSD=1．88％（n=9）。对乙酰氨基酚在2．20—27．48μg范围内,咖啡因在126．4～1580μg范围内,进样量与峰面积值呈良好的线性关系。结论：方法简便、快速,结果准确。     

HPLC法测定感冒灵颗粒中对乙酰氨基酚含量方法的改进

目的：建立一种简便快速的高效液相色谱法测定感冒灵颗粒中对乙酰氨基酚含量的方法。方法：采用Venusil MP—C18色谱柱,流动相为甲醇-水（25：75）,流速1．0mL·min^-1,检测波长249nm,柱温20℃。结果：对乙酰氨基酚在0．3998—3．5982μg范围内呈良好的线性关系,r=0．9999,平均回收率99．1％（RSD=1．2％）。结论：该方法操作简便,重现性好,结果准确可靠,可更好地控制本品的质量。     

HPLC法测定氨酚比林注射液中对乙酰氨基酚和氨基比林的含量

目的:建立氨酚比林注射液中对乙酰氨基酚、氨基比林含量的高效液相色谱方法。方法:选用AgilentSBC18(150 mm ×4．6mm,5μm),乙腈-0．1％磷酸溶液-三乙胺(12:87:1)为流动相,检测波长为240 nm,流速为1．0 ml·min-1。结果:对乙酰氨基酚的线性范围为0．35-1．74μg(r=0．999 9),平均回收率为101．4％,RSD=0．5％;氨基比林的线性范围为0．48～2．42 μg,r=0．999 9,平均回收率为100．3％,RSD=0．4％。结论:本方法快速、准确,样品处理简便易行。     

HPLC法测定感冒安片中对乙酰氨基酚的含量

目的建立HPLC法测定感冒安片中对乙酰氨基酚含量的方法。方法采用HypersilODS C18色谱柱(4.6mm×250.0mm,5μm),由甲醇-4%甲酸溶液为流动相,流速为0.9mL.m in-1,检测波长为249nm。对乙酰氨基酚线性范围为0.20175~1.2105μg,平均回收率=99.21%,RSD=0.53%。结论该方法简便、可靠、准确,可用于该制剂的质量控制。     

高效液相色谱／质谱联用测定胶囊中奥利司他含量

目的:建立高效液相色谱一紫外一电喷雾质谱(HPLC-UV-ESI/MS)联用测定药物中奥利司他的方法;方法:以含有甲酸的乙腈和水溶液做流动相,在反相 C_8柱上分离,以质谱定性,紫外定量进行检测,检测波长为203 nm;结果:在0.3～12 mg·mL~(-1)范围内峰面积和浓度呈良好的线性关系,样品平均回收率为95.4%～97.7%;结论:本法可以快速、准确地测定赛尼可胶囊中的奥利司他,且抗干扰能力强。