五子衍宗方对环磷酰胺致小鼠DNA损伤的影响

目的观察五子衍宗方对环磷酰胺(CTX)致小鼠DNA损伤的影响,并探讨其作用机制。方法将BalB/c小鼠随机分为正常组、模型组、五子衍宗方低剂量组、五子衍宗方高剂量组。五子衍宗方低、高剂量组预给药1周后,除正常组外,其余各组腹腔注射CTX 100 mg/kg造模,隔日1次,共3次,同时五子衍宗方低、高剂量组继续给药,末次给予CTX后12 h处死小鼠,分离血清,ELISA检测血清中8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的含量,应用单细胞凝胶电泳技术检测骨髓细胞DNA损伤。结果五子衍宗方低、高剂量组能够降低血清中8-OHdG的含量,使小鼠骨髓细胞彗星图像的Olive尾矩、尾距、尾长和尾部DNA含量降低。结论五子衍宗方对CTX致小鼠DNA损伤具有较好的保护作用。     

五子衍宗方对环磷酰胺致小鼠肝脏细胞DNA损伤的保护作用

目的研究五子衍宗方对环磷酰胺(CTX)诱导的小鼠肝脏细胞DNA损伤的保护作用。方法将BALB/c小鼠随机分为正常对照组,模型组,五子衍宗方低、高剂量组,每组10只。五子衍宗方组预给药一周之后,除正常对照组之外,其余各组注射CTX(100 mg/kg)隔天给药共3次,末次注射CTX 12 h后处死小鼠。检测小鼠的肝脏指数,血清中丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)活力。硫代巴比妥酸法检测肝脏中丙二醛(MDA)的量,ELISA检测肝脏中8-羟基脱氧鸟苷(8-OHd G)的量,单细胞凝胶电泳技术检测肝脏细胞的DNA损伤。结果五子衍宗方能够升高小鼠的肝脏指数,降低ALT、AST的活力,降低肝脏中的8-OHd G、MDA的量,五子衍宗方组均可以使小鼠Olive尾矩、尾长、尾距和尾部DNA%降低。结论五子衍宗方能拮抗CTX造成的小鼠肝脏细胞的DNA损伤,提高肝脏的抗氧化能力。     

五子衍宗方对环磷酰胺致小鼠睾丸细胞DNA损伤的影响

目的探讨五子衍宗方(枸杞子、菟丝子、覆盆子、车前子、五味子)对环磷酰胺致成年雄性小鼠睾丸细胞DNA损伤的影响。方法将50只成年雄性Balb/C小鼠中40只腹腔注射环磷酰胺后随机均分为模型对照组(生理盐水)以及五子衍宗方低、中、高剂量组(100、200、400 mg/kg),10只另设正常对照组(生理盐水),乙醚麻醉小鼠后颈椎脱臼处死。检测小鼠精子数量、精子活率及精子畸形率,酶联免疫吸附测定法(ELISA)法检测血清中8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的含有量,单细胞凝胶电泳技术检测睾丸细胞DNA损伤程度,Western blot检测睾丸组织中磷酸化的肿瘤抑制蛋白53(p-P53)、γ位磷酸化的组蛋白(γ-H2AX)蛋白表达。结果相较于模型对照组,五子衍宗方各组可显著升高小鼠精子数量、精子活率,显著降低精子畸形率、血清8-OHdG水平,显著降低睾丸组织中p-P53与γ-H2AX蛋白表达。结论五子衍宗方能通过下调p-P53、γ-H2AX蛋白表达来显著减轻环磷酰胺致小鼠睾丸细胞DNA损伤。     

五子衍宗方对实验性隐睾小鼠生精功能的保护作用

目的:研究五子衍宗方对实验性隐睾小鼠生精功能的保护作用。方法:取5～6周龄BALB/c小鼠,手术建立小鼠隐睾模型,分为假手术组,模型组,五子衍宗方低、高剂量(100,200 mg.kg-1)组,手术14 d后给药,用药14 d,于末次给药24h后检测小鼠的睾丸质量、精子密度、活率,光、电镜观察睾丸组织学结构的变化,检测小鼠睾丸内谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量的变化。结果:五子衍宗方能够显著增加模型小鼠的睾丸质量(P<0.01),明显增加精子密度(P<0.05),提高精子活率(P<0.01),改善隐睾小鼠睾丸组织的病理性变化,显著升高SOD和GSH-Px活性(P<0.05或P<0.01),显著降低MDA含量(P<0.01)。结论:五子衍宗方提高睾丸组织内抗氧化损伤能力,从而减轻隐睾对小鼠睾丸生殖功能的损害。     

加味五子衍宗方对记忆障碍小鼠空间学习记忆成绩的影响

[目的]初步探讨加味五子衍宗方改善学习记忆障碍的物质基础及其作用机制。[方法]以东莨菪碱建立小鼠记忆获得障碍模型,以Morris水迷宫系统检测模型小鼠空间辨别性学习记忆成绩。[结果]模型组小鼠定位航行实验搜索策略、空间探索实验穿越目标区域次数成绩较空白对照组明显减退(P<0.05),而加味五子衍宗方及其总黄酮、总多糖组分处理的动物上述成绩显著优于模型组(P<0.05),其中总多糖组分的作用有优于原复方的趋势。[结论]提示加味五子衍宗方及其总黄酮、总多糖组分对中枢胆碱能系统损伤的学习记忆障碍有保护作用。该复方总黄酮、总多糖组分是其促智的有效组分,其中总多糖组分的作用更为突出。     

五子衍宗方的临床运用及现代研究

目的：综述近年来五子衍宗方的临床运用、药理、质控等研究概况。方法：对10余年来该方的临床运用和药理研究文献进行了回顾和总结。结果：该方现代临床用于治疗生殖泌尿、内科及抗衰老、轻度认知障碍等多种疾病;药理研究表明具有提高生殖器官重量、增加雄性激素分泌,降低血糖,提高机体免疫功能,抗衰老及增强学习记忆能力等作用,长期毒性研究证实安全无毒;初步建立五子衍宗丸质量控制标准。结论：五子衍宗方具有多种临床用途,其中促进学习记忆的作用机制仍需进一步研究。     

五子衍宗汤对环磷酰胺致免疫低下小鼠的免疫调节作用

目的:研究五子衍宗汤对环磷酰胺致免疫低下小鼠的免疫调节作用。方法:将实验用Balb/C小鼠32只,雌雄各半,随机分为空白组、模型组、五子衍宗汤低、高剂量组,每组8只。空白组ip生理盐水,其余各组小鼠ip环磷酰胺50mg.kg-1.d-1建立免疫低下模型。空白组和模型组灌胃生理盐水,五子衍宗汤低、高剂量组分别按照2,4 g.kg-1剂量灌胃五子衍宗汤。给药35 d后,观察五子衍宗汤对模型小鼠外周血象、体重、脾脏指数、骨髓有核细胞数量和脾脏淋巴细胞数量的影响,流式细胞术检测脾脏中CD3+,CD4+,CD8+,CD19+,NK细胞的绝对数量。结果:造模结束后,模型组小鼠外周血白细胞数、脾细胞绝对数量、相对数量、骨髓有核细胞数量及脾脏中CD3+,CD4+,CD8+,CD19+,NK细胞的数量低于空白组,差异有统计学意义(P﹤0.01或P﹤0.05)。五子衍宗汤能显著增加模型小鼠体重、脾重、外周血白细胞数、骨髓有核细胞数及脾脏中CD3+,CD4+,CD8+,CD19+,NK细胞的数量,差异有统计学意义(P﹤0.01或P﹤0.05)。结论:五子衍宗汤可显著增强环磷酰胺所致免疫低下小鼠的免疫功能。     

芪灵胶囊对荷瘤小鼠化疗减毒增效作用的研究

目的：观察芪灵胶囊对荷瘤小鼠化疗的减毒增效作用。方法：测定各组S180荷瘤小鼠外周血白细胞数量、骨髓有核细胞计数、脾及胸腺指数及瘤重，观察芪灵胶囊的作用。结果：芪灵胶囊对S180荷瘤小鼠经环磷酰胺化疗所引起的白细胞降低及骨髓有核细胞减少有明显的升高作用，对化疗所引起的脾脏及胸腺指数下降有显著的改善作用，与环磷酰胺合用能显著升高其抑瘤率。结论：芪灵胶囊对环磷酰胺抑制小鼠肉瘤S180有明显的减毒增效作用。     

加味五子衍宗方的神经保护作用机制研究现状

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种以进行性记忆认知障碍、行为异常、人格改变为主要特征的神经退行性疾病,目前全球对AD的治疗效果不佳,其原因主要在于AD发病因素复杂,干预过晚,越来越多的学者提出治疗AD应及早着手,多靶点干预。本课题组在中医"补肾益精促智"和"未病先防"原则的指导下,采用现代生物医学技术,对补肾益精促智方"加味五子衍宗方"防治阿尔茨海默病前期——轻度认知功能障碍(mild cognitive impairment,MCI)的作用及机制进行了深入研究。临床研究证实该方可改善MCI患者的临床症状,延缓MCI患者向AD发展。高效液相色谱-光电二极管阵列检测器-串联质谱分析方法共检出58种复方主要成分,并对其饮片来源进行了归属。鉴定或推测了其中51种成分的结构,建立了加味五子衍宗方的HPLC指纹图谱。整体及离体药理研究证实加味五子衍宗方及其有效组分可有效改善AD大鼠的行为学症状,并可从多条通路、多个靶点发挥调节中枢胆碱能系统,拮抗Aβ神经毒性、氧化应激损伤及炎症损伤等AD致病因素的作用,这为该方的科学应用及开发提供了实验室依据。     

扶正消瘤方对H_(22)荷瘤小鼠抑癌及其化疗减毒作用

目的考察扶正消瘤方(人参、黄芪、猪苓等)抗肝癌作用及其减轻环磷酰胺引起的毒性。方法 ICR小鼠采用右前肢皮下接种造H_(22)荷瘤模型,灌胃给予扶正消瘤方后,检测生命延长率、瘤重、抑瘤率、T淋巴细胞增殖率、血清超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平。H_(22)荷瘤小鼠腹腔注射环磷酰胺(50 mg/kg),测定扶正消瘤方给药后血液学指标、血清溶血素水平及抗体形成细胞数。结果扶正消瘤方可明显抑制肿瘤生长,升高血清SOD活性,减少MDA水平,促进T淋巴细胞增殖。而且,它还能拮抗环磷酰胺引起的白细胞及血小板数量下降,并升高抗体形成细胞数。结论扶正消瘤方具有良好的抗肝癌作用,并能减轻化疗所致的毒性,可能与增强机体抗氧化和免疫能力有关。     

基于内质网应激研究五子衍宗方对自然衰老大鼠睾丸生殖细胞凋亡的保护作用

基于内质网应激(ERS)研究五子衍宗方对自然衰老大鼠睾丸生殖细胞凋亡的保护作用。将16月龄SPF级SD雄性大鼠随机分为3组,自然衰老组(Ageing),五子衍宗方低剂量组(WZ,1 g·kg^-1)和五子衍宗方高剂量组(WZ,4 g·kg^-1),另购买2月龄SD雄性大鼠作为青年对照组(Adult),每组10只。给予普通饲料或含药饲料喂养4个月后,处死大鼠,取出睾丸组织备用。苏木素-伊红(HE)染色观察睾丸组织形态;Western blot法检测睾丸组织中内质网应激相关蛋白GRP78,p-PERK,p-eif2α,ATF4,p-IRE1,XBP1,ATF6及其介导的凋亡相关蛋白CHOP,caspase 12,p-JNK的表达水平。HE结果显示,五子衍宗方能明显改善自然衰老所致的睾丸组织形态变化。Western blot结果显示,与自然衰老组相比,五子衍宗方能显著升高自然衰老大鼠睾丸组织内质网应激相关蛋白GRP78,p-PERK,p-eif2α,ATF4,p-IRE1,XBP1,ATF6的表达水平;显著降低内质网应激介导的凋亡相关蛋白CHOP,caspase 12,p-JNK的表达水平。综上所述,五子衍宗方可通过调节内质网应激减轻自然衰老大鼠睾丸生殖细胞凋亡。     

美洲大蠊提取物联合环磷酰胺对H22荷瘤小鼠的作用

目的:观察美洲大蠊提取物(extract from Periplaneta americana,EPA)与环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)联合应用对小鼠H22肿瘤生长的影响并探讨其可能的作用机制。方法:采用KM小鼠皮下接种H22肝癌细胞形成实体瘤模型,分别给予高、中、低剂量(50,100,200 mg·kg-1)EPA,阳性药CTX(30 mg·kg-1)及二者联合治疗10 d后,测定各组小鼠瘤重,肝脏、脾脏指数,通过测定肝脏组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平检测药物的抗氧化活性,检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素2(interleukin 2,IL-2)的含量,并计数联合用药组小鼠血浆中白细胞的数量,以此评价EPA与CTX合用的增效减毒作用。结果:与模型组比较,各给药组均能明显抑制H22荷瘤小鼠肿瘤的生长(P0.05),尤以50 mg·kg-1EPA与CTX联合用药作用最为显著,其抑瘤率达到了61.96%;单用EPA以及EPA与CTX联合应用均能提高肝组织中SOD水平并降低其中的MDA含量,明显增加血清中TNF-α和IL-2的含量(P0.05,P0.01);各剂量EPA均能提高荷瘤小鼠的脾脏指数和胸腺指数,而联合用药各组对荷瘤小鼠脏器指数无明显影响,但是可以提高荷瘤小鼠外周血中白细胞(white blood cells,WBC)的数量。结论:EPA与CTX联合应用对H22肝癌小鼠有明显抑瘤作用,其作用的发挥可能与增强免疫、抗氧化作用有关。     

去甲斑蝥素联合环磷酰胺对H22荷瘤小鼠免疫功能的影响

恶性肿瘤是危害人类生命和健康最严重的疾病之一。中药可作用于肿瘤发生、发展的多个环节,具有多靶点、多环节、多效应的特点,其在抑制、杀伤肿瘤细胞、改善症状与体征,以及减轻放化疗不良反应、延长患者生存期等方面发挥重要作用;同时其具有不良反应低,能提高机体免疫力,不易产生耐药性等特点;其抗肿瘤活性已得到国际公认,为近年来研究的热点。     

加味五子衍宗方含药脑脊液对β淀粉样蛋白诱导海马神经元损伤的保护作用

目的研究加味五子衍宗方及其总多糖、总黄酮含药脑脊液对β淀粉样蛋白诱导的原代大鼠海马神经元损伤的保护作用。方法体外原代培养大鼠胎鼠海马神经元,并将加味五子衍宗方的提取物(总方、总多糖、总黄酮)对大鼠进行灌胃给药,然后抽取含药脑脊液,将含药脑脊液与20μmol/L的Aβ25-35共同作用海马神经元24h后,分别检测正常对照组、Aβ25-35损伤组、空白脑脊液保护组、加味五子衍宗方含药脑脊液(总方、总多糖、总黄酮)保护组的海马神经元活力、凋亡率以及凋亡相关蛋白(caspase-3,PARP,Bcl-2,Bcl-XL,JNK1/2,p38MAPK)的变化情况。结果加味五子衍宗方不同提取物(总方、总多糖、总黄酮)的含药脑脊液对Aβ25-35所诱导的海马神经元毒性均有保护作用,且总黄酮、总多糖含药脑脊液的保护作用明显高于总方含药脑脊液(P0.05或P0.01),但是加味五子衍宗方不同组分(总方、总多糖、总黄酮)的含药脑脊液对凋亡相关蛋白的调控机制并不一致。结论加味五子衍宗方中的部分黄酮类和多糖类成分可以透过血脑屏障并进入脑脊液,同时这些成分对β淀粉样蛋白所致的神经损伤有一定的保护作用。     

加味五子衍宗方及其有效部位对 H2O2损伤PC12细胞的保护作用

目的:比较加味五子衍宗方及其有效部位总黄酮和总多糖对H₂O₂诱导的PC12细胞损伤的影响。方法:噻唑蓝(MTT)法和乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞存活率和细胞毒性,酶标仪测定丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD),过氧化氢酶(CAT)的活性,流式细胞仪检测细胞凋亡,激光共聚焦显微镜检测细胞内Ca²⁺的浓度。结果:预先给予500μg·mL^-1加味五子衍宗方,总黄酮和总多糖处理细胞2h,可显著提高细胞存活率及SOD和CAT活性,降低LDH,MDA水平;加味五子衍宗方及总黄酮还可有效抑制凋亡的发生,并可明显降低细胞内Ca²⁺浓度,总黄酮的效果强于五子衍宗方及总多糖。结论:加味五子衍宗方能显著抑制H₂O₂诱导的PC12细胞氧化应激状态及凋亡发生,其主要活性成分是总黄酮,其神经细胞保护作用可能与其降低细胞脂质过氧化水平,提高抗氧化酶活力和抑制细胞内Ca²⁺浓度升高有关。     

五子衍宗方通过调节miR-let-7-Imp轴对老龄大鼠精原干细胞增殖的影响

目的:通过miR-let-7-Imp轴探讨五子衍宗方(WZ)对老龄大鼠精原干细胞增殖的作用及其机制。方法:将40只18月龄SPF级SD雄性大鼠随机分为老龄模型组,WZ低、中、高剂量组,每组10只,另以10只2月龄大鼠作为青年组。WZ低、中、高剂量组分别灌胃给药0. 4,0. 8,1. 6 g·kg~(-1),青年组、老龄模型组分别灌胃给予生理盐水,每周停药2 d,持续给药4个月。末次给药后麻醉处死大鼠,快速取出睾丸组织。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测miR-let-7,Imp mRNA表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)和免疫荧光检测睾丸精原干细胞增殖相关信号通路磷酸化(p)-两面神激酶2(JAK2)/JAK2,p-信号传导及转录激活因子3(STAT3)/STAT3蛋白的表达与定位,免疫荧光检测精原干细胞数量及增殖相关蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,苏木素-伊红(HE)染色观察睾丸组织形态学变化。结果:Real-time PCR结果显示,与青年组比较,老龄模型组miR-let-7 mRNA表达水平显著升高(P 0. 01),Imp mRNA表达水平显著降低(P 0. 01),而给予WZ干预后,miR-let-7 mRNA水平明显降低(P 0. 05,P 0. 01),Imp mRNA表达水平明显升高(P 0. 05); Western blot和免疫荧光结果显示,精原干细胞增殖相关信号通路蛋白p-JAK2,p-STAT3表达降低(P 0. 01),WZ处理后,p-JAK2,p-STAT3表达明显增多(P 0. 05,P 0. 01);免疫荧光结果显示,与青年组比较,老龄模型组中精原干细胞数量减少,PCNA表达下降,WZ处理后,精原干细胞数量增多,PCNA表达上调; HE结果也显示,WZ能够明显改善自然衰老所致的睾丸组织形态结构变化。结论:WZ能够促进老龄大鼠精原干细胞的增殖,其作用机制可能与调节睾丸内miR-let-7-Imp轴有关。     

五子衍宗方对衰老大鼠睾丸支持细胞紧密连接损伤的保护作用及机制

目的 探究五子衍宗方对衰老大鼠睾丸支持细胞紧密连接损伤的保护作用及其分子机制.方法 将30只16月龄SD雄性大鼠随机分为衰老模型组、五子衍宗方低剂量组(1g/kg)和五子衍宗方高剂量组(4 g/kg),另取2月龄SD雄性大鼠作为青年对照组,每组10只.给予含药饲料或普通维持饲料喂养4个月后,麻醉处死大鼠,取睾丸组织,H...     

加味五子衍宗方总黄酮对大鼠海马锥体细胞VGCC通道的影响

目的:探讨加味五子衍宗方总黄酮成分对Aβ_(25-35)作用后的大鼠海马CA1区锥体神经元电压门控钙通道电流的作用.方法:应用全细胞膜片钳技术记录海马神经元I_(Ca)电流,采用内向电流的幅度作为观察指标,观察模型药物及干预药物对其的作用.采用出生7 d的乳鼠取海马后制成脑片,选取立体感强、状态好的锥体细胞形成全细胞膜片钳记录,从-50 mV到+50 mV范围(步进为5 mV)一系列去极化电压脉冲刺激(脉冲宽度500 ms),以激发出电压依赖性的内向钙离子电流.记录电流后加入Aβ_(25-35)后,再加入总黄酮进行干预.结果:Aβ_(25-35)淀粉蛋白可以通过增强I_(Ca)可引起胞内钙超载,正常幅度平均为-(157.1±19.9)pA,Aβ_(25-35)作用后增大为-(323.2±23.4)pA,125,250,500 mg·L~(-1)的总黄酮作用之后,分别下降为-(257.9±31.6),-(196.4±29.8),-(169.3±34.0)pA.结论:引起胞内钙离子超载可能是Aβ_(25-35)产生神经毒性作用的机制之一,加味五子衍宗方总黄酮成分可通过抑制钙离子内流对神经元起一定保护作用.     

百合地黄汤对肝癌H22荷瘤小鼠抑瘤作用的实验研究

1材料和方法1·1实验动物昆明种小鼠,体重(20±2)g。雌雄各半,浙江中医学院实验动物中心提供。1·2瘤株H22瘤株,浙江中医学院实验动物中心提供。1·3实验药品百合地黄汤方药组成:百合24g、生地18g,原料药均购自浙江中医学院门诊部中药房;中药汤剂由本院制剂室制备,浓缩至含生药1g/ml,分装灭菌,备用。药物浓度分为高、中、低3个剂量组,剂量分别为16·80、8·40、4·20g/kg·d-1(分别相当于成人剂量的24、12、6倍)。5-氟脲嘧啶(5-Fu):用生理盐水配制成浓度为2·5mg/ml,按25mg/kg给药。1·4实验方法将接种7天生长良好的H22瘤株,无菌条件下剥…