芹菜素延缓人脐静脉内皮细胞衰老的体外实验研究

目的：探究芹菜素对人脐静脉内皮细胞衰老的延缓作用及相关机制。方法：将人脐静脉内皮细胞培养至第12代（老年细胞）,且自第4代（幼年细胞）起,与芹菜素（1、3、10μmol·L^-1）共孵育。通过检测细胞β-半乳糖苷酶（sAβ-gal）阳性率,推断细胞衰老程度;通过检测胞内双氢罗丹明氧化产物Rh123的荧光强度,推断胞内活性氧簇（ROS）水平,即氧化应激水平;通过检测培养液中硝酸盐／亚硝酸盐含量,推断胞内一氧化氮（NO）水平。结果：与幼年细胞组相比,老年细胞对照组中内皮细胞SAβ-gal阳性率及ROS水平均明显提高（P〈0．05）,且其培养液中硝酸盐／亚硝酸盐含量明显降低（P〈0．05）;在老年细胞组中,与对照组相比,芹菜素组中内皮细胞sAβ-gal阳性率及ROS水平均明显呈芹菜素剂量依赖性降低（P〈0．05）,而其培养液中硝酸盐／亚硝酸盐含量也明显呈芹菜素剂量依赖性增加（P〈0．05）。结论：芹菜素可延缓人脐静脉内皮细胞的衰老,且该作用与胞内ROS生成减少及NO生成增加有关。     

去甲基雏菊叶龙胆酮对Ox-LDL诱导内皮细胞衰老的影响

目的研究[口山]酮化合物去甲基雏菊叶龙胆酮（DMB）对氧化型低密度脂蛋白（Ox-LDL）致内皮细胞衰老的影响。方法培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs），Ox-LDL（100μg·mL^-1）处理48h后，检测β-半乳糖苷酶活性（染色法）和端粒酶活性（TRAP-银染法）评价细胞衰老状态；使用荧光染料H2DCF检测细胞内氧自由基生成。结果Ox-LDL（100μg·mL^-1）处理48h后，β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数显著增加，而端粒酶活性显著降低。预先1h给予不同浓度的DMB（1、3和10μmol·L^-1）并孵育48h可显著抑制Ox-LDL诱导的内皮细胞β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数增加和端粒酶活性降低。Ox-LDL（100μg·mL^-1）孵育HUVECs 48h，可明显增强细胞内活性氧族（ROS）水平，其效果能被预处理DMB所逆转。结论DMB抑制Ox-LDL诱导的内皮细胞衰老，其作用可能与抑制氧化应激有关。     

苦参碱对U937细胞及人脐静脉血管内皮细胞增殖的影响

目的：观察苦参碱（Matrine，Mat）对U937细胞及人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）增殖的影响。方法：采用体外培养技术，通过细胞形态、MTT实验、细胞周期测定观察Mat对U937细胞及HUVECs增殖的影响。结果：Mat（0．2～0．5mg／mL）作用24h后对U937细胞均有增殖抑制作用（P〈0．05或P〈0．01），在该浓度范围内呈剂量和时间依赖性，其作用U937细胞48h的半数抑制浓度（IC50）约为0．4mg／mL，有效作用时间为1d；Mat（0．1～0．5mg／mL）作用24、48、72h后对HUVECs增殖无明显抑制作用，亦无剂量和时间依赖性（P〉0．05）；Mat（0．2～0．5mg／mL）作用U937细胞48h后，S期细胞比例增加，细胞发生S期阻滞（P〈0．05或P〈0．01）；Mat（0．1～0．5mg／mL）作用HUVECs 48h后，对细胞周期无明显影响（P〉0．05）。结论：一定浓度Mat对U937细胞具有增殖抑制作用，呈时间-剂量依赖关系。Mat在一定浓度和时间下不能抑制HUVECs增殖，对其细胞周期亦无明显影响。     

血清标记物对早期异位妊娠的诊断价值

目的研究血清孕酮（P）、β-人绒毛膜促性腺激素（13-HCG）及血清激活素A（ACTA）联合检测对早期异位妊娠的诊断价值。方法回顾性分析住院及门诊就诊的83例患者,根据妊娠结局将研究对象分为宫内早孕组（45例）和异位妊娠组（38例）,通过电化学发光法检测所有患者血清P、β-HCG及ACTA,计算48h／0h β-HCG比值,ROC曲线下面积（AUC）,确定各检查指标的最佳工作点（OOP）,并评价单一或联合指标检测对异位妊娠诊断的准确性。结果异位妊娠组P（16．83±15．71）nmol／L、48h／0h β-HCG比值（1．02±0．77）和ACTA（0．26±0．15）μg/L均明显低于于正常早孕组[分别为（75．74±9．76）nmol／L,（2．53±0．34）,（0．49±0．43）μg/L]（P〈0．05）。ROC工作曲线显示,血48h／0h β-HCG比值的诊断准确度最高（AUC为0．94）,其次为P（AUC为0．91）,ACTA的诊断准确度最低（AUC为0．56）;通过ROC曲线确定各指标OOP：孕酮以31．30nmol／L,48h／0h β-HCG比值以1．25,ACTA以0．43μg/L为临界值时对诊断早期异位妊娠有较好准确度;P和β-HCG联合检测对异位妊娠诊断的敏感度（98．4％）和特异度（66．7％）均明显高于其它检测组（均P〈0．05）。结论联合检测P和48h／0hB．HCG比值可进一步提高异位妊娠诊断准确率,而ACTA对异位妊娠诊断意义不大。     

帕金森病患者尿白蛋白、α1-微球蛋白变化的临床研究

目的通过测定帕金森病患者尿白蛋白、尿a1．微球蛋白,了解是否存在肾功能的损害。方法收集病史资料,采用放射免疫分析方法,对32例帕金森患者和40例健康对照的尿白蛋白、尿α1-微球蛋白进行检测;同时比较发病1～5年、6—10年尿白蛋白、尿α1-微球蛋白结果。结果帕金森病患者与健康对照尿白蛋白分别为（483±437）μg,／h、（311±209）μg／h（P〈0．05）;帕金森患者与健康对照的尿仅1．微球蛋白结果分别为（400±242）μg／h、（286±203）μg／h（P〈0．05）;发病1-5年、6～10年帕金森患者尿白蛋白分别为（284±138）μg／h、（619±519）μg／h（P〈0．05）;发病1-5年、6～10年帕金森患者尿α1-微球蛋白分别为（396±249）μg／h、（447±266）μg／h（P〉0．05）。结论帕金森患者尿白蛋白、尿α1-微球蛋白增高,提示可能存在肾功能损害,并且损害程度可能与病程呈正相关。     

舒芬太尼在腹部手术术后自控静脉镇痛中的应用

目的探讨腹部手术后舒芬太尼静脉镇痛的合理剂量和效果。方法120例腹部外科手术后的患者随机均分为3组,A组（舒芬太尼31μg／h）,B组（舒芬太尼4μg／h）,c组（舒芬太尼5μg/h）。观察患者术后4、24、48h的疼痛、镇静、舒适评分,并记录有无恶心、呕吐、呼吸抑制,皮肤瘙痒等不良反应,记录按压次数。结果C组4h、24h、48h疼痛评分分别为（2．7±0．6）分、（2．2±0．4）分、（1．6±0．3）分,低于B组和A组（P〈0．05）,C组镇静和舒适评分高于B组和A组（P〈0．05）,c组PCA泵按压次数最少。结论腹部手术后舒芬太尼静脉自控镇痛最佳剂量为5μg／h。     

阿托伐他汀对急性冠脉综合征患者白细胞介素6和肿瘤坏死因子的影响

目的 探讨阿托伐他汀对急性冠脉综合征（ACS）患者血清白细胞介素6（IL-6）及肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平变化的影响。方法将ACS患者48例随机分为阿托伐他汀组25例和常规治疗组23例,分别于治疗前及治疗4周后采用放射免疫分析方法行血清IL-6及TNF—α检测。结果ACS患者治疗前血清IL-6、TNF-α水平均明显高于对照组（均P〈0．01）。阿托伐他汀组治疗后血清IL-6（0．67±0．05）μg/L、TNF-μ（65．1±13．2）μg／L水平均明显低于治疗前,但仍高于对照组（均P〈0．05）。常规治疗组患者治疗后血清IL-6（0．74±0．08）μg／L、TNF—±（73．6±12．0）μg／L降低不明显（P〉0．05）。结论IL-6、TNF-α水平升高与ACS发病密切相关,阿托伐他汀可降低ACS患者血IL-6、TNF—α水平,具有减轻病变部位炎性反应和保护内皮细胞的作用。     

去甲斑蝥素对TGF—β1诱导的人近端肾小管细胞上皮细胞转分化及信号蛋白Smad2／3表达的影响

目的探讨去甲斑蝥素对体外人源性肾小管细胞株（HK－2）上皮细胞间质转分化（epithelial—mesenchymal transition,EMT）以及信号蛋白Smad2／3的影响。方法体外培养HK2细胞,分为对照组、TGF-β1组和去甲斑蝥素组（NCTD组）。对照组为无血清DMEM培养,TGG-β1组为TGF-β1 5ng·mL^-1诱导,NCTD组为不同浓度NCTD（0．5、1．0、2．5μg·mL^-1）与TGF-β1（5ng·mL^-1）共同作用,各组作用时间48h。使用半定量RT-PCR法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、上皮性钙黏附蛋白（Ecadherin）与Smad2、Smad3mRNA表达;采用Western blot检测α-SMA、E-cadherin、Smad2／3、p-Smad2／3蛋白质表达。结果与对照组相比,TGF-β1组α—SMAmRNA及其蛋白表达明显上调（Pd0．05）,E-cadherin mRNA及其蛋白表达显著下调（P〈0．05）;与TGF-β1组相比,NCTD干预组α—SMAmRNA及其蛋白表达明显下调（P〈0．05）,而E-cadherin mRNA及其蛋白表达显著上调（P〈0．05）,且均呈剂量依赖性。与对照组相比,TGF-β1组Smad2、Smad3rnRNA和Smad2／3、p-Smad2／3蛋白表达上调（P〈0．05）;与TGF-β1组比较,NCTD干预组Smad2、Smad3mRNA和Smad2／3、p-Smad2／3蛋白表达下调（P〈0．05）,具有剂量依赖关系。结论去甲斑蝥素具有抑制肾小管上皮细胞EMT的作用,该作用可能与其下调信号蛋白Smad2／3的表达有关。     

肝素对大鼠肝星状细胞中瘦素与转化生长因子β1水平的影响

目的：研究肝素与大鼠肝星状细胞（HSC）作用后瘦素与转化生长因子β1（TGFβ1）表达的变化和意义。方法：实验分组：肝素Ⅰ（10μg／mL）、Ⅱ（100μg／mL）、Ⅲ（1000μg／mL）组，加生理盐水为对照组，均培养48h。培养终止后吸取上清液-20℃冰冻保存，ELISA法检测其上清液瘦素与TGFβ1水平，MTT法观察细胞增殖情况。结果：肝素Ⅱ、Ⅲ组HSC培养上清液瘦素水平均显著低于对照组（P〈0.01）；肝素各组TGFβ1水平和平均吸光度均显著低于对照组（P〈0．01）。结论：大鼠HSC在肝素作用下瘦素与TGFβ11分泌均受到抑制，且星状细胞的增殖减少。     

急性心肌梗死溶栓疗法对血浆凝血活性影响

目的 探讨溶栓疗法对血浆凝血活性的影响。方法连续监测35例急性心肌梗死患者,于确诊后定期从外周静脉采血,酶联免疫双抗体夹心法测定血浆凝血酶修饰抗凝血酶Ⅲ（antithrombin Ⅲ modified,ATM）和D-二聚体（D—D）的动态变化。结果溶栓开始2h后,血浆ATM显著内性增加（87．80μg／L±25．19μg／L,比24．48μg／L±11．62μg／L,P〈0．05）,4h达峰值（120．87μg／L±31．54μg／L）,持续3d以上;血浆D—D于2h即达到峰值（7．76mg／L±2．58mg／L,比2．7mg／L±1．36mg／L,P〈0．05）,维护8h以上,24h以后恢复正常。在溶栓组患者,不同采血时刻血浆ATM和D—D的平均值呈明显正相关。未溶栓组患者血浆ATM和D—D浓度未见显著性变。结论溶栓疗法激活凝血系统,与血栓溶解的标志物（D—D）呈明显正相关。早期应用有效抗血栓药物可能抑制凝血系统的激活,减少血栓再闭塞的发生。     

地榆正丁醇萃取层对人肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响及其机制

目的：利用正丁醇溶剂提取地榆中的鞣质（15.36％）,研究其萃取层对人肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响及其机制。方法用不同浓度的正丁醇萃取层作用于人肝癌HepG2细胞,通过MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡率和细胞内活性氧（ROS）的含量。结果 HepG2细胞经不同浓度（100,150,200,250,300μg·mL-1）的地榆正丁醇萃取层作用48 h,细胞增殖明显受到抑制,其IC50为222.87μg·mL-1。不同浓度（200,400,600μg·mL-1）的地榆正丁醇萃取层作用于HepG2细胞48 h后,细胞的凋亡率和细胞内ROS的含量均明显高于空白组（P〈0.05）,且随着地榆正丁醇萃取层浓度的增加,HepG2细胞的凋亡率和细胞内ROS的含量也逐渐升高。结论地榆正丁醇萃取层可以浓度依赖性方式抑制人肝癌细胞株HepG2的增殖并促进其凋亡,这可能与其促进细胞内ROS的产生有关。     

熊果酸抑制HepG2中C-反应蛋白的异常表达及其对HUVECs的损伤

目的:研究不同剂量的熊果酸(UA)对IL-6诱导的HepG2细胞中C-反应蛋白(CRP)异常表达的抑制作用以及对CRP所致人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用.方法:IL-6(30 ng/mL)、UA(6.5、12.5、25μmol/L)与IL-6(30 ng/mL)共同作用于HepG2细胞48 h,分别用MTT法、Western blot法及RT-PCR法检测各组细胞活力、CRP蛋白及mRNA表达情况.CRP(25 μg/mL)、UA(5,10,20 μmol/L)与CRP(25 μg/mL)共同作用于HUVECs 24 h,分别用MTT法、Western blot法及RT-PCR法检测各组细胞增殖、VCAM-1和LOX-1的蛋白及mRNA表达.结果:UA能显著抑制IL-6诱导的HUVECs细胞活力下降及细胞中CRP蛋白与mRNA的表达升高;UA显著抑制CRP引起的内皮细胞增殖,并且在mRNA及蛋白水平均能显著抑制CRP诱导的HUVECs异常高表达VCAM-1及LOX-1.结论:UA可通过抑制肝脏合成炎症因子CRP而降低血液中CRP浓度,并降低CRP等炎症因子对内皮细胞的损伤等途径从而发挥抗心肌缺血及动脉粥样硬化等心血管疾病的作用.     

人参皂苷Rd对高糖所致HMC表达TGF-β1的影响

目的 考察人参皂苷Rd对高糖条件下人肾小球系膜细胞（human mesangial cells,HMC）增殖及对HMC分泌的转化生长因子β1（TGF-β1）表达的影响。方法 将人肾小球系膜细胞分为正常血糖组、高糖对照组、高糖＋药物组（5组,人参皂苷Rd浓度分别为6.25,12.5,25,50,100μg.mL 1）,分别于24,48,72 h用MTT法检测细胞增殖情况;实时定量荧光PCR检测TGF-β1的mRNA的表达;ELISA试剂盒检测HMC分泌TGF-β1的量。结果 高糖对HMC的增殖无明显影响,但能显著促进HMC分泌TGF-β1的功能,并上调TGF-β1 mRNA的表达,与正常血糖组比较具有统计学意义;而不同浓度的人参皂苷Rd对高糖所致HMC合成、分泌TGF-β1的功能均有不同程度的抑制作用,其中,浓度为12.5,25,50,100μg.mL 1的人参皂苷Rd效果显著,具有显著性差异（P〈0.05）,且能下调TGF-β1 mRNA的表达。结论 人参皂苷Rd可以减少高糖状态下HMC合成和分泌的TGF-β1蛋白的量以及下调TGF-β1 mRNA的表达。     

Effect of Brazilian propolis on human umbilical vein endothelial cell apoptosis

Brazilian propolis has been widely studied in recent years. Considering the lack of data concerning the effects of Brazilian propolis on human umbilical vein endothelial cells (HUVECs), we examined the effects of ethanol-extracted Brazilian propolis (EEBP) at 12.5, 25 and 50 μg/ml on apoptosis of HUVECs deprived of basic fibroblast growth factor (FGF-2) and serum. A high concentration of the extract induced HUVEC apoptosis at 24 h. Furthermore, we investigated the molecular mechanisms of HUVEC apoptosis induced by EEBP by testing the levels of integrin β4, p53, reactive oxygen species (ROS) and mitochondrial membrane potential. A low concentration of EEBP (12.5 μg/ml) could decrease the expression of integrin β4, p53 and ROS levels, whereas high concentrations (25 and 50 μg/ml) could increase the levels of integrin β4, p53 and ROS at 24 h and depress mitochondrial membrane potential level at all times. Considering the doses and the results obtained in this study, Brazilian propolis at high concentrations may be an apoptosis-inducing agent associated with the signal pathway mediated by integrin β4, p53, ROS and mitochondrial membrane potential, thus, propolis should be used in safer levels for human health.     

二甲双胍激活Sirt3信号抑制高糖诱导内皮细胞衰老的实验研究

目的: 研究二甲双胍抑制高糖诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)衰老的作用与机制。方法: 传代培养HUVECs,高糖刺激HUVECs 48 h建立血管内皮细胞衰老模型,采用噻唑蓝法(MTT)检测HUVECs活力,2',7'-二氢二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)为荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平,硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)含量,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养上清液中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的分泌量,β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老水平。使用Sirt3抑制剂3-TYP作用HUVECs后,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测p53、PAI-1及Sirt3的蛋白表达水平。结果: 与正常对照组相比,高糖组中HUVECs的活力降低,细胞内ROS的水平和MDA含量增加,IL-6、TNF-α的分泌量增加,衰老阳性细胞的百分比增加,二甲双胍干预后能明显改善高糖诱导HUVECs的上述变化。3-TYP能显著逆转二甲双胍对p53、PAI-1、Sirt3蛋白表达的调控作用。结论: 二甲双胍对高糖诱导的HUVECs衰老具有明显改善作用,其作用机制与激活Sirt3密切相关。     

Rb1 protects endothelial cells from hydrogen peroxide-induced cell senescence by modulating redox status

Senescence of endothelial cells has been proposed to play an important role in endothelial dysfunction and atherogenesis. In the present study we aimed to investigate whether ginsenoside Rb1, a major constituent of ginseng, protects endothelial cells from H(2)O(2)-induced endothelial senescence. While H(2)O(2) induced premature senescent-like phenotype of human umbilical vein endothelial cells (HUVECs), as judged by increased senescence-associated β-galactosidase (SA-β-gal) activity, enlarged, flattened cell morphology and sustained growth arrest, our results demonstrated that Rb1 protected endothelial cells from oxidative stress induced senescence. Mechanistically, we found that Rb1 could markedly increase intracellular superoxide dismutase (Cu/Zn SOD/SOD1) activity and decrease the malondialdehyde (MDA) level in H(2)O(2)-treated HUVECs, and suppress the generation of intracellular reactive oxygen species (ROS). Consistent with these findings, Rb1 could effectively restore the protein expression of Cu/Zn SOD, which was down-regulated in H(2)O(2) treated cells. Taken together, our data demonstrate that Rb1 exhibits antioxidant effects and antagonizes H(2)O(2)-induced cellular senescence.     

齐墩果酸对氧化损伤模型人脐静脉内皮细胞的保护作用

目的:研究齐墩果酸对氧化损伤模型人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用。方法:分别以含10%胎牛血清DMEM高糖培养液[含氧化低密度脂蛋白(ox-LDL,质量浓度分别为0、25、50、100、200、400μg/ml)]培养HUVECs,CCK-8法检测细胞活性以筛选复制模型最适质量浓度。以0、10、20、40、60、80、100μmol/L齐墩果酸培养HUVECs,CCK-8法检测细胞活性以考察齐墩果酸试验最适浓度。以5、10、20、40μmol/L齐墩果酸作用于氧化损伤模型HUVECs(100μg/ml ox-LDL诱导),CCK-8法检测细胞活性,测定一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)水平。结果:复制模型ox-LDL最适质量浓度为100μg/ml;齐墩果酸试验最适浓度范围为0⁴0μmol/L;5、10、20、40μmol/L齐墩果酸可增加氧化损伤模型HUVECs存活率,增强CAT、GSH-PX、NOS活性,增加NO含量。结论:齐墩果酸能够保护ox-LDL氧化损伤的HUVECs,其保护机制与增强CAT、GSH-PX、NOS抗氧化酶活性有关。     

红景天苷对力达霉素诱导人二倍体成纤维细胞衰老的干预作用

目的:研究红景天苷对力达霉素导致DNA损伤后所诱导的细胞衰老的调节作用。方法:采用MTT法测定药物对人胚肺二倍体成纤维细胞2BS活力的影响;衰老相关的β-半乳糖苷酶染色法观察细胞衰老形态变化;流式细胞术检测细胞周期分布以及γ-H2AX蛋白表达变化;蛋白免疫印迹技术观察p53和p21蛋白表达水平变化。结果:较低浓度(低于0.1 nmol.L-1)力达霉素能够抑制2BS细胞增殖,诱导β-半乳糖苷酶染色率显著升高和G2/M期阻滞,并使DNA损伤相关的γ-H2AX蛋白以及p53和p21蛋白表达升高。红景天苷能够显著干预力达霉素诱导的上述细胞衰老样表型及相关分子信号变化。结论:红景天苷能够抑制基因毒药物所致DNA损伤及其诱导的细胞衰老。     

3D TECA hydrogel reduces cellular senescence and enhances fibroblasts migration in wound healing

This study was designed to investigate the effect of 3D TECA hydrogel on the inflammatory-induced senescence marker, and to assess the influence of the gel on the periodontal ligament fibroblasts (PDLFs) migration in wound healing in vitro. PDLFs were cultured with 20 ng/ml TNF-α to induce inflammation in the presence and absence of 50 µM 3D TECA gel for 14 d. The gel effect on the senescence maker secretory associated-β-galactosidase (SA-β-gal) activity was measured by a histochemical staining. Chromatin condensation and DNA synthesis of the cells were assessed by 4′,6-diamidino-2-phenylindole and 5-ethynyl-2′-deoxyuridine fluorescent staining respectively. For evaluating fibroblasts migration, scratch wound healing assay and Pro-Plus Imaging software were used. The activity of senescence marker, SA-β-gal, was positive in the samples with TNF-α-induced inflammation. SA-β-gal percentage is suppressed (>65%, P < 0.05) in the treated cells with TECA gel as compared to the non-treated cells. Chromatin foci were obvious in the non-treated samples. DNA synthesis was markedly recognized by the fluorescent staining in the treated compared to non-treated cultures. Scratch wound test indicated that the cells migration rate was significantly higher (14.9 µm²/h, P < 0.05) in the treated versus (11 µm²/h) for control PDLFs. The new formula of 3D TECA suppresses the inflammatory-mediated cellular senescence and enhanced fibroblasts proliferation and migration. Therefore, 3D TECA may be used as an adjunct to accelerate repair and healing of periodontal tissues.