HPLC测定苍耳子中羧基苍术苷和苍术苷的含量

目的:用HPLC同时测定苍耳子中羧基苍术苷和苍术苷的含量。方法:采用HPLC,色谱柱为Agilent ZORBAXSB-phenyl色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.01 mol.L-1磷酸二氢钠溶液(pH 6)梯度洗脱,流速1.0 mL.min-1,检测波长203 nm,柱温35℃。结果:羧基苍术苷的进样量在0.097 2～1.944μg线性关系良好,平均回收率为100.3%,RSD 0.67%(n=6);苍术苷的进样量在0.103 0～2.060μg线性关系良好,平均回收率为102.5%,RSD 1.4%(n=6)。结论:该方法简便、可行,重现性好,为苍耳子的质量控制提供参考。     

苍耳子炮制前后饮片及标准汤剂的特征图谱和成分差异研究

目的：建立苍耳子与炒苍耳子饮片、标准汤剂的特征图谱和多成分定量方法,分析苍耳子炒制前后饮片与标准汤剂的质量差异。方法：采用ACQUITY UPLC HSS T3 C₁₈(150 mm×2.1 mm,1.8μm)色谱柱;流动相为乙腈-0.01 mol/L磷酸二氢钠溶液,梯度洗脱;流速为0.3 mL/min;检测波长为203、327 nm;柱温为27℃,进样量为1μL。分别建立苍耳子与炒苍耳子饮片、标准汤剂的特征图谱,通过多元统计分析筛选出代表性成分并进行定量分析。结果：苍耳子、炒苍耳子饮片特征图谱分别标定12、13个共有峰。相比于苍耳子饮片,炒苍耳子饮片特征图谱中新增了苍术苷,羧基苍术苷的峰面积平均值减少了73.51%,同时绿原酸、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸和4,5-O-二咖啡酰奎宁酸的总含量平均值减少。苍耳子与炒苍耳子标准汤剂均标定了15个共有峰,相比于苍耳子标准汤剂,炒苍耳子标准汤剂特征图谱中羧基苍术苷的峰面积平均值减少了57.62%,苍术苷的峰面积平均值增加了285.80%,出膏率平均值提高了23.53%,绿原酸、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸和4,5-O-二咖啡...     

HPLC-ELSD法测定苍耳子及其制剂中羧基苍术苷和苍术苷含量

目的:建立苍耳子及其制剂(辛芩片和辛芩颗粒)中毒性成分羧基苍术苷和苍术苷的高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)定量测定方法。方法:采用Kromasil 100-5C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈(A)-10 mmol/L乙酸铵溶液(B)为流动相,梯度洗脱(0~30 min,12%A→20%A;30~31 min,20%A→12%A;31~35 min,12%A),柱温35℃,体积流量1.0 m L/min,蒸发光散射检测器检测(漂移管温度95℃,N2载气流速1.6 L/min)。结果:羧基苍术苷在0.681~4.086μg线性关系良好,线性回归方程为Y=1.4973X+3.9461(r=0.9996),平均回收率96.4%(n=6,RSD=1.2%);苍术苷在0.731~4.383μg线性关系良好,线性回归方程为Y=1.4619X+4.0630(r=0.9991),平均回收率97.7%(n=6,RSD=0.9%)。结论:HPLC-ELSD法定量测定羧基苍术苷和苍术苷方法简便,重复性良好,可用于苍耳子及其制剂的质量控制。     

离子色谱法测定苍耳子中毒性成分羧基苍术苷和苍术苷含量

目的:建立反相离子对色谱测定苍耳子中2种苍术苷毒性成分的新方法,解决现有分析方法时间长、专属性不强的问题。方法:采用Agilent Eclipse XDB-C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5.0μm),流动相乙腈-0.15%磷酸二氢钠溶液(含0.12%四丁基氢氧化铵,磷酸调p H至3.5)(39∶61),流速1.0 m L·min~(- 1),柱温30℃,紫外检测波长203 nm。结果:在此色谱条件下,羟基苍术苷、苍术苷两种毒性成分20 min内即得到了良好分离,保留时间分别为11.8,17.8 min;实际进样量分别在0.15~3.7μg(r=0.999 9)和0.10~2.5μg(r=1.000)呈良好线性关系;平均回收率分别为101.4%(RSD 1.7%),101.6%(RSD 1.2%)。结论:该方法快速、准确、专属性强、耐用性好,更适合用于苍耳子药材及制剂的安全性检测。     

苍耳子中苍术苷的含量测定

目的:测定苍耳子中苍术苷的含量。方法:通过对不同产地苍耳子药材进行收集,分别对其种仁、种壳、刺、果壳进行分离处理,并测定其苍术苷含量。结果:苍耳子分离出的种仁、种壳、刺、果壳中,苍术苷标准曲线0.505~505ng/m L,具有较好内线性关系(r=0.9996);精密度实验、重复性实验与稳定性实验结果均满足要求;加样1.5倍、1倍和0.5倍回收率分别为(92.52±1.00)%、(94.03±1.34)%、(97.62±1.96)%。结论:通过对不同产地不同部位苍耳子中苍术苷含量的测定,我们发现炮制品苍耳子种仁中苍术苷含量较高,应加强了对苍耳子种仁的炮制,以减产少毒性。     

苍术炒焦前后苍术苷A的含量比较研究

目的 建立苍术饮片中苍术苷A的含量测定方法,对苍术炒焦前后苍术苷A含量进行比较研究。方法 采用高效液相色谱法(HPLC-ELSD)对苍术炒焦前后的色谱图进行比较,经与对照品比对,确定苍术苷A色谱峰位置,并测定苍术炒焦前后苍术苷A含量;色谱条件为Agilent C_(18)(5μm,4.6 mm×250 mm)色谱柱,流动相(乙腈-水)梯度洗脱;柱温30℃,ELSD检测器,漂移管温度80℃,雾化气体为氮气,压力3.0×105 Pa;流速1.6 mL·min~(-1)。结果 苍术苷A进样量在0.1012～2.0240μg范围内线性关系良好(r=0.9991),加样回收率在98.1%～98.9%区间;苍术炒焦后苍术苷A含量增幅在58.44%～87.00%。结论 焦苍术中苍术苷A含量明显增加,为苍术炒焦后的主要增量成分之一,可能是导致苍术炒焦药效改变的主要物质基础。     

4种含苍耳子的复方颗粒中毒性成分苍术苷的含量测定

目的 建立苍耳子复方颗粒剂中毒性成分苍术苷的快速高分离度液相色谱-串联质谱(RRLC-MS/MS)含量快速检测方法。方法 将处理后的样品中加入内标氯霉素,运用超高效液相-质谱联用仪,采用多反应离子监测(MRM)在负离子检测模式下测定苍术苷的含量。结果 苍术苷在0.505～505 ng·mL-1浓度范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系(r =0.9993);平均回收率为95.38 %,RSD=6.265 %(n=6)。结论 本研究所建立的含量测定方法快速、准确、稳定,可为苍耳子复方制剂中毒性成分苍术苷的检测提供快速准确的定量分析方法。     

基于Microtox技术快速检测苍耳子药材及其饮片、成方制剂毒性变化规律

目的:探讨有毒中药苍耳子及其饮片、代表性成方制剂(鼻渊舒口服液)毒性效应变化规律。方法:高效液相色谱法测定苍耳子药材、饮片、成方制剂中苍术苷类毒性成分含量;应用小鼠急性毒性试验(in vivo)和Microtox微毒测试技术(in vitro),得出其相应的毒性参数及发光细菌半数抑制浓度(IC50)。结果:1.苍耳子药材、饮片、成方制剂毒性成分含量(苍术苷类)分别为:0.722、1.165、0.147mg/g。2.苍耳子药材、饮片半数致死量(LD50)分别为367.8g/kg,182.3g/kg;成方制剂最大给药量17.44g/kg(按苍耳子计)。3.苍耳子药材、饮片、成方制剂发光细菌半数抑制浓度(IC50)分别为27.0892、11.2826、1.0236mg/ml。结论:苍耳子药材、饮片及含苍耳子的代表性成方制剂(鼻渊舒口服液)苍术苷类毒性成分测定结果显示:饮片药材成方制剂;小鼠急性毒性试验结果表明毒性大小为:饮片药材;Microtox微毒测试技术显示:成方制剂饮片药材。小鼠急性毒性试验与Microtox微毒测试技术均提示:饮片毒性大于药材毒性,与二者苍术苷类毒性成分含量趋势一致。     

苍术苷体外对大鼠精子线粒体膜电位及凋亡的影响

目的:观察中药苍耳子的毒性成分苍术苷(Atractylodesin,ATR)体外对大鼠精子线粒体膜电位、超微结构及凋亡的影响,分析苍耳子可能存在的生殖毒性。方法:取雄性SD大鼠,麻醉、分离附睾精子,分别与不同浓度苍术苷(1.51、3.02、6.04、12.08 mmol/L)共同孵育。观察精子线粒体通透性开放情况,经流式细胞仪检测精子线粒体膜电位(MMP)和凋亡,并在电子显微镜下观察精子线粒体超微结构的改变。结果:与空白对照组比较,苍术苷(3.02 mmol/L～12.08 mmol/L)组大鼠精子线粒体膜电位明显下降,精子早期凋亡率和总凋亡率显著增加。电镜观察可见,与苍术苷共同孵育后,大鼠精子线粒体出现肿胀、融合,基质缺失,外膜破裂等现象,并呈现明显剂量依赖性。结论:苍术苷(3.02 mmol/L～12.08 mmol/L)体外能明显促进大鼠精子凋亡和降低线粒体膜电位,改变精子线粒体超微结构,促进线粒体通透性转换孔(mPTP)开放。说明苍耳子可能存在一定的生殖毒性,苍术苷为其生殖毒性的物质基础。     

苍耳子及苍术苷对大鼠原代肝细胞的毒性作用研究

目的:研究苍耳子水提物及苍术苷对大鼠原代肝细胞的毒性效应,探讨其可能的毒性机制。方法:制备大鼠原代肝细胞,观察苍耳子水提物及苍术苷在不同时间点对肝细胞形态的影响,并测定不同时间点培养液中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)、白蛋白(ALB)及尿素氮(BUN)的含量。结果:药物作用24h后,各给药组肝细胞均出现不同程度的形态改变及死亡,并随时间的增加细胞死亡数量亦增加,48h时,苍术苷和水提物低浓度组仍可见少量活细胞,而水提物高浓度组肝细胞几乎已全部死亡。ALT和LDH在给药2h或24h出现升高,含量呈时间依赖性增加,ALB和BUN在给药2h出现降低,在所试时间内一直处于较低水平。结论:苍耳子水提物0.18、0.018 g原生药/ml及苍术苷44μg/ml对大鼠原代肝细胞有明显的毒性。