孕哺期镧暴露对大鼠子代海马神经元细胞内钙稳态及超微结构影响

[目的]探讨孕哺期镧暴露所致仔代发育期的神经毒性机制.[方法]成年雌性Wister大鼠受孕后至仔鼠出生后21 d.用不同浓度氯化镧(LaCl3)水染毒,仔鼠断乳后处死.取海马检测海马神经元细胞内游离钙离子([Ca2 ]i)浓度.[结果]大鼠海马神经元细胞[Ca2 ]i浓度(nmol/L),2.5 g/L氯化镧水组为(234.566±19.596),5.0 g/L氯化镧水组为(327.294士34.547),10.0 g/L氯化镧水组为(446.258±29.325),蒸馏水对照组为(159.396士15.235),3个实验组均高于对照组,中剂量组高于低剂量组,高剂量组高于中剂量组.差异均有统计学意义(P相似文献   

海马内注射β淀粉样蛋白对大鼠皿清微量元素及脂肪酸含量的影响

目的：观察海马内注射β淀粉样蛋白后大鼠血清微量元素度脂肪酸含量的变化情况。方法：选用Sprague—Dawley大鼠27只，随机分为正常对照组、β淀粉样蛋白（Aβ）组和生理盐水组，每组9只。正常对照组不作任何处理，Aβ组双侧海马内注射Aβ（每侧10μg），生理盐水组海马内注射等体积生理盐水。海马内注射2周后，采用原子吸收分光光度法检测大鼠血清铁、铜、锌浓度，气相色谱法测定血清脂肪酸含量。结果：与正常对照组度生理盐水组比较，A口组大鼠血清铁含量显著下降（P〈0．05）；Aβ组大鼠血清C16：0，C16：1，C18：0，C20：4含量显著下降，血清C18：1,C18：2，C18：3含量则显著上升。结论：海马内注射Aβ可导致大鼠血清微量元素铁含量降低，而且大鼠血清脂肪酸组成比发生异常改变。     

海马内注射β淀粉样蛋白对大鼠血清微量元素及脂肪酸含量的影响

目的:观察海马内注射β淀粉样蛋白后大鼠血清微量元素及脂肪酸含量的变化情况。方法:选用Sprague-Dawley大鼠27只,随机分为正常对照组、β淀粉样蛋白(Aβ)组和生理盐水组,每组9只。正常对照组不作任何处理,Aβ组双侧海马内注射Aβ(每侧10μg),生理盐水组海马内注射等体积生理盐水。海马内注射2周后,采用原子吸收分光光度法检测大鼠血清铁、铜、锌浓度,气相色谱法测定血清脂肪酸含量。结果:与正常对照组及生理盐水组比较,Aβ组大鼠血清铁含量显著下降(P<0.05);Aβ组大鼠血清C16∶0,C16∶1,C18∶0,C20∶4含量显著下降,血清C18∶1,C18∶2,C18∶3含量则显著上升。结论:海马内注射Aβ可导致大鼠血清微量元素铁含量降低,而且大鼠血清脂肪酸组成比发生异常改变。     

A对大鼠海马细胞钙浓度和线粒体膜电位影响

目的 探讨β-淀粉样蛋白(Aβ_25~35)对原代培养大鼠脑海马细胞内游离钙离子浓度和线粒体膜电位影响。方法 原代培养8 d的SD大鼠脑海马神经细胞,利用老化的Aβ_25~35 1、10和20 μmol/L对其染毒,分别观察染毒后24、48和72 h时海马细胞形态改变、细胞内游离钙离子浓度和线粒体膜电位。结果 随着染毒剂量增加,海马神经细胞开始变形、萎缩、神经元胞体模糊,突起变细、变短、分支减少,边缘模糊,神经网络破裂中断;电镜结果显示,随着染毒剂量增加和染毒时间延长,海马细胞凋亡比例增加;20 μmol/L Aβ_25~35染毒24、48和72 h后,细胞内Ca²⁺浓度分别为(30.79±1.28)、(38.19±2.13)和(41.65±3.60),细胞内线粒体膜电位分别为(46.94±9.55)、(39.98±6.51)和(34.52±5.67),与对照组比较,Ca²⁺浓度均升高,膜电位均降低(P＜0.01)。结论 Aβ_25~35可以通过破坏细胞内钙稳态和线粒体膜电位而发挥神经毒性作用。     

紫河车对阿尔茨海默病模型大鼠脑组织内β淀粉样蛋白及β淀粉样前体蛋白mRNA表达的影响

目的观察用紫河车干预后的阿尔茨海默病（AD）模型大鼠的脑组织内β样淀粉蛋白（Aβ）、β类淀粉前体蛋白信使核糖核酸（βAPPmRNA）表达改变,探讨紫河车改善阿尔茨海默病模型大鼠症状的部分机制。方法用Okadaic acid（OA）注于实验大鼠脑内杏仁核建立AD动物模型,用避暗法和穿梭箱法测试实验大鼠的学习记忆能力,用免疫组织化学方法显示实验大鼠脑组织内Aβ表达的变化,用原位杂交方法显示实验大鼠脑组织内βAPPmRNA表达的变化。结果用紫河车治疗和预防一段时间后的AD模型大鼠,其学习记忆能力的测试成绩明显优于同时间点模型组大鼠的成绩（P〈0.05）,其脑组织内Aβ、βAPPmRNA表达数量也明显少于同时间点模型组大鼠脑组织内的Aβ、βAPPmRNA表达数量（P〈0.05）。结论经紫河车干预后,AD模型大鼠的行为异常得到改善,同时其脑组织内Aβ、βAPPmRNA表达也受到抑制。     

氧化应激损伤对内耳毛细胞内游离钙离子和钙调蛋白表达的影响

目的通过分析氧化应激损伤的内耳毛细胞内游离Ca~(2+)浓度和钙调蛋白(CaM)表达水平,探讨感音性耳聋的氧化应激损伤机制。方法采用不同浓度(50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)双氧水染毒培养内耳毛细胞,24 h后检测细胞过氧化氢酶(CAT)活性,Fluo-3 AM荧光探针定量检测细胞内Ca~(2+)浓度,免疫荧光法分析CaM表达水平。结果氧化损伤的毛细胞CAT活性明显下降,随着染毒浓度的增加下降更明显(F=689.9,P0.01);氧化损伤毛细胞游离Ca~(2+)浓度随着染毒浓度的增加而增加(F=716.107,P0.01);氧化损伤的毛细胞CaM表达水平明显增加,50μmol/L和100μmol/L H_2O_2染毒组随浓度增加表达增强,但200μmol/L H_2O_2染毒组表达水平有所回落(F=732.727,P0.01)。结论氧化应激损伤导致毛细胞内游离Ca~(2+)浓度和CaM表达增加诱发细胞凋亡是多类型感音性耳聋的重要发病机制,严重的氧化应激损伤可抑制细胞CaM表达。     

锰对神经元细胞内钙稳态影响的研究

目的研究锰对神经细胞内钙稳态的影响,重点观察神经元细胞钙离子浓度、Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性的改变。方法选用原代培养神经元为模型,待细胞生长至最佳状态时,予以分组处理:锰处理组为含不同浓度氯化锰(0,25,100,400μmol/L)的培养液,培养神经细胞12h后,通过倒置相差显微镜观察细胞形态的改变,并检测神经元细胞内钙离子浓度、Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性的变化。结果随着染Mn剂量的加大,神经元形态出现异常,细胞内钙离子浓度逐渐升高;细胞Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性也逐渐下降。结论锰通过影响与维持钙稳态相关的酶(Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase)活性,干扰神经元细胞内钙稳态,进而造成神经元细胞损伤。     

衰老与海马神经元细胞内钙离子水平升高和钙稳态改变的相关性

衰老与神经退行性疾病如帕金森综合征和阿尔茨海默征引起的神经易损性增高及中风和癫痫引起的神经元丧失相关联.一些研究揭示,细胞内钙离子浓度([Ca2 ]I)升高引起神经元丧失与衰老相关疾病的发生有关.然而,以幼年和中年动物海马神经元为标本,直接进行[Ca2 ]I和Ca2 稳态机制的比较研究尚未见报道.该研究应用Fura-2检测了幼年(4～5月)和中年(12～16月)SD大鼠快速分离的CA1区海马神经元[Ca2 ]I.结果发现,中年大鼠神经元基础[Ca2 ]I的水平明显高于幼年大鼠.用谷氨酸盐诱导胞内Ca2 超载,中年大鼠神经元转运多余Ca2 所需的时间比幼年大鼠长,这些研究结果为动物出现Ca2 稳态改变的年龄明显早于以往认为的老年阶段(≥24月)提供了直接的证据.Ca2 动力学的改变使衰老神经元对中风、癫痫或头部损伤相对于引起的神经元死亡更为敏感.阐明钙稳态机制不仅有助于理解衰老引起神经元丧失增多,而且也有助于开发靶向降低[Ca2 ]I,进而维持衰老神经元正常钙稳态的临床药物.     

β淀粉样蛋白对人神经母细胞瘤细胞内质网应激的影响

目的研究β淀粉样蛋白(Aβ_(25~35))对人神经母细胞瘤细胞(SHSY5Y)凋亡过程中内质网应激的影响,探讨在内质网应激过程中未折叠蛋白质反应途径(UPR pathway)在凋亡中的作用。方法将处于对数生长期的细胞分别暴露于含0(对照)、5、10、20、30、40μmol/L Aβ_(25~35)的培养基染毒48 h,采用CCK8法检测细胞活性。将对数生长期的细胞分别暴露于含0(对照)、5、10、15μmol/L Aβ_(25~35)的培养基染毒24、48和72 h。采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用Western blotting法检测内质网应激分子伴侣葡萄糖调节蛋白GRP78以及跨膜蛋白活化转录因子-6(ATF-6)、蛋白激酶-1(IRE1α)和RNA-激活蛋白激酶样内质网激酶(PERK)蛋白的表达水平。结果与对照组比较,各浓度Aβ_(25~35)染毒组SHSY-5Y细胞的存活率均较低,差异均有统计学意义(P0.05);且随着Aβ_(25~35)染毒浓度的升高,SHSY-5Y细胞的存活率呈下降趋势。与对照组比较,各浓度Aβ_(25~35)染毒组SHSY-5Y细胞的凋亡率均较高,除5μmol/L Aβ_(25~35)染毒24 h外,差异均有统计学意义(P0.05);且随着Aβ_(25~35)染毒浓度的升高和染毒时间的延长,SHSY-5Y细胞的凋亡率均呈上升趋势。与对照组相比,各剂量、时间点Aβ_(25~35)染毒组SHSY5Y细胞内质网ATF-6蛋白的表达水平较高;15μmol/L Aβ_(25~35)染毒24、48 h和各剂量Aβ_(25~35)染毒72 h后SHSY5Y细胞内质网GRP78蛋白的表达水平较高;10、15μmol/L Aβ_(25~35)染毒24 h和15μmol/L Aβ_(25~35)染毒48 h及各剂量Aβ_(25~35)染毒72 h后SHSY5Y细胞内质网IRE-1α蛋白的表达水平较高;15μmol/L Aβ_(25~35)染毒24 h和10、15μmol/L Aβ_(25~35)染毒72 h后SHSY5Y细胞质网PERK蛋白的表达水平较高,差异均有统计学意义(P0.05)。随着Aβ_(25~35)染毒浓度的升高和染毒时间的延长,细胞内GRP78、ATF-6、IRE1α和PERK蛋白的表达水平均呈上升趋势。结论 Aβ_(25~35)可以诱导SHSY5Y神经细胞内质网应激,导致SHSY5Y细胞发生凋亡。     

植物雌激素染料木素抗去卵巢大鼠海马血管内β-淀粉样蛋白沉积研究

目的观察雌激素缺乏大鼠海马血管内β-淀粉样蛋白(beta-amyloid protein,Aβ)沉积的变化,并比较研究植物雌激素染料木素干预对Aβ沉积的影响。方法本研究采用双侧卵巢切除术建立SD雌鼠的去势模型,将50只大鼠随机分为五组:正常对照基线组(Baseline组)、假手术组(Sham组)、去卵巢组(Ovx组)、染料木素干预组(Gen组)和小剂量17β-雌二醇干预组(Est组)。所有大鼠均在术后15周处死,取海马结构切片进行免疫组织化学技术观察Aβ沉积。通过Aβ阳性细胞计数和染色图像灰度分析法观察Aβ沉积的变化。结果Ovx组大鼠海马血管内Aβ阳性细胞计数和Aβ沉积的免疫组化图像灰度校正数据显著高于Baseline组、Sham组、Est组和Gen组(P<0.01);而Est组、Gen组、Sham组和Baseline组的细胞计数和图像灰度校正数据之间无显著差异(P>0.05)。结论长期内源性雌激素的缺乏可以导致脑内毛细血管内Aβ的沉积增加;染料木素或17β-雌二醇补充治疗均可以拮抗这一过程,且二者之间的效果相似。     

铅暴露对仔鼠海马中β淀粉样蛋白40表达影响

目的 探讨母体铅染毒对子一代小鼠海马组织中β-淀粉样蛋白40(Aβ₄₀)表达影响。方法 雌性小鼠自妊娠第1 d开始经饮水染铅(0.3、1.0、3.0 g/L,对照组饮蒸馏水)至仔鼠出生后21 d,随机抽取各组21日龄仔鼠,分别测其血液和海马组织中铅含量,并采用western blot方法测定海马组织中Aβ₄₀表达水平。结果 孕哺期不同剂量铅暴露21 d后,仔鼠血铅、海马铅水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);western blot结果显示,中、高剂量铅暴露组仔鼠海马组织中Aβ₄₀表达明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);相关分析显示,Aβ₄₀蛋白表达与血铅、海马铅呈明显正相关(r=0.524、0.613,P=0.001)。结论 母体铅暴露使铅在仔鼠体内蓄积,增强了仔鼠海马组织中Aβ₄₀聚集。     

牛磺酸对β淀粉样肽海马注射大鼠学习记忆能力和细胞因子的影响

目的:观察牛磺酸对β-淀粉样肽1-40海马注射致痴呆大鼠的学习记忆能力与炎性细胞因子的影响,为牛磺酸应用于防治Alzheimer病提供依据。方法:SD大鼠,随机分为正常对照组、Aβ注射模型组、牛磺酸0.3g/kg·d、0.6g/kg·d剂量组。灌胃给予牛磺酸7d后,除对照组外,其它组均双侧海马注射10μg Aβ1-40,2w后进行Morris水迷宫测试,取海马组织,用放射免疫法进行IL-6、TNF-α测定。结果:与模型组大鼠比较,牛磺酸大剂量组逃脱潜伏期与游泳距离显著缩短;撤去站台后,在目标象限搜索距离比延长;海马组织IL-6、TNF-α含量显著减少。结论:牛磺酸可显著地改善Aβ海马注射致记忆障碍大鼠的学习记忆能力,其原因可能与其抗炎症细胞因子作用有关。     

原儿茶酸对β-淀粉样蛋白诱导神经细胞损伤的保护作用研究

目的 通过β-淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)处理SH-SY5Y细胞或原代海马神经元建立AD细胞模型,探讨原儿茶酸(protocatechuic acid,PCA)对Aβ损伤后的神经细胞的保护效应及其可能机制。方法 应用MTT法筛选Aβ_25-35损伤SH-SY5Y细胞的浓度,并筛选PCA作用于Aβ_25-35损伤的SH-SY5Y细胞的适宜浓度。通过DCFH-DA染色和JC-1染色探究PCA对Aβ_25-35损伤的细胞内ROS水平和线粒体膜电位的影响。结果 Aβ_25-35损伤SH-SY5Y细胞适宜的造模条件为10μmol/L处理24 h;800μmol/L的PCA对Aβ_25-35损伤的SH-SY5Y细胞保护效果最佳(P<0.001)。Aβ_25-35处理导致原代海马神经元细胞内ROS水平升高(P<0.001)而线粒体膜电位有降低趋势(P=0.287);PCA干预后,原代海马神经元的细胞内ROS水平显著降低(P<0.01),线...     

鹅膏蕈氨酸对大鼠海马神经元的毒性作用

目的观察鹅膏蕈氨酸对大鼠海马神经元的毒性作用，探讨鹅膏蕈氨酸的毒理学机制。方法成年Wistar雄性大鼠，侧脑室1次性注射鹅膏蕈氨酸（Ibotenic acid，IBO）（每侧注射5μl）。10d后，利用苏木素-伊红（hematoxylin and eosin，HE）染色、电镜技术、原位杂交、免疫组化染色等方法，观察大鼠海马神经元、淀粉样前体蛋白（β-amyloid protein precursor，APP）基因表达水平及β-淀粉样蛋白（β-amyloid protein，Ap）含量的变化。结果侧脑室注射鹅膏蕈氨酸，能导致大鼠海马神经元变性、缺失；APP基因表达水平明显升高，Aβ生成增多。结论上调APP基因表达水平，使Aβ生成增多．可能是鹅膏常氨酸导致大鼠海马神经元损害的毒理学机制之一。     

1,6-二磷酸果糖对脑白质损害新生大鼠脑内β淀粉样前体蛋白表达的影响

【目的】　探讨 1,6 二磷酸果糖 (fructose 1,6 diphosphate ,FDP)对脑白质损害 (whitematterdamage ,WMD)大鼠脑内 β淀粉样前体蛋白 (β amyloidprecursorprotein ,β APP)表达的影响。 　【方法】　 2日龄新生大鼠随机分为 :正常对照组、WMD组、FDP干预组及盐水干预组 ,后三组在建立新生大鼠脑白质损害模型后 ,应用相应干预方法进行干预。采用HE染色及免疫组织化学方法 ,观察损伤 2 4h后脑组织病理学结构和 β淀粉样前体蛋白表达的情况。　【结果】　实验各组HE染色未见明显差异 ,仅FDP干预组水肿稍减轻。WMD组及盐水干预组结扎侧β APP免疫反应较正常对照组明显增强 (P <0 .0 1) ,并且两组之间差异无显著性 (P >0 .0 5 )。FDP干预组结扎侧β APP免疫反应较WMD组盐水干预组明显减轻 (P <0 .0 5 )。 　【结论】　β APP是未成熟脑白质损伤的敏感指标。FDP可减少 β APP的表达水平 ,从而减轻缺血性脑损伤 ,对脑白质具有保护性作用。     

同型半胱氨酸对大鼠学习记忆及海马APP代谢影响

目的 探讨高同型半胱氨酸血症(HHcy)对大鼠学习记忆能力和海马β-淀粉样前体蛋白(APP)代谢影响及叶酸干预作用。方法 将40只Wistar大鼠随机分为对照组、HHcy组和叶酸干预组,每组10只,在大鼠饮水中添加蛋氨酸(1.0 g/kg)制作HHcy模型,叶酸低、高剂量干预组大鼠同时分别给予叶酸0.7和3.4 mg/kg灌胃,持续8周。在实验前后测定各组血浆同型半胱氨酸(Hcy)、叶酸浓度,采用Morris水迷宫试验检查大鼠学习记忆能力,观察大鼠海马区APP表达水平。结果 与对照组比较,HHcy组逃避潜伏期[(29.34±4.69)s]延长,穿过平台次数[(1.36±0.98)次]减少,停留时间[(1.36±0.98)s]缩短,差异均有统计学意义(P<0.05);与HHcy组比较,高剂量叶酸组学习记忆能力明显改善;与对照组比较,HHcy组γ-分泌酶PS1基因的在mRNA表达水平(1.43±0.10)明显升高(P<0.01),与HHcy组比较,叶酸干预组明显降低;与对照组比较,HHcy组皮质和海马Aβ水平明显升高,与HHcy组比较,叶酸干预组皮质和海马Aβ水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Hh-cy可导致大鼠学习记忆能力下降,大鼠海马APP蛋白代谢改变和Aβ产生增多,叶酸对HHcy具有拮抗作用。     

穿心莲内酯对阿尔茨海默病大鼠血小板活化因子及β淀粉样蛋白的影响

目的研究穿心莲内酯(ANDRO)对阿尔茨海默病(AD)大鼠血小板活化因子(PAF)及β淀粉样蛋白的影响。方法将30只SD大鼠随机分为治疗组(10只)、模型组(10只)、假手术组(10只)。采用侧脑室注射链脲霉素(STZ)制做AD大鼠模型。治疗组大鼠给予以ANDRO(200mg/kg)治疗。用Morris’s水迷宫评估大鼠认知功能,采用酶免法测定大鼠血浆PAF含量,免疫组化法检测大鼠海马Aβ表达。结果治疗组大鼠水迷宫潜伏期短于模型组但长于假手术组(P0.05)。模型组、治疗组、假手术组穿过平台次数分别为(1.90+1.10)、(5.60+1.65),(3.70+1.56),(F=16.10,P0.05)。模型组、治疗组、假手术组大鼠血浆PAF含量分别为(210.30±15.18)pg/ml、(182.90±12.08)pg/ml、(167.50+10.31)pg/ml,两两比较差异均有统计学意义(F=29.21,P0.05)。模型组、治疗组、假手术组海马Aβ灰度值分别为(131.71±8.83)、(144.93±9.71)、(164.21±9.05),两两比较差异均有统计学意义(F=31.52,P0.05)。结论 ANDRO可能通过下调AD大鼠血浆PAF及海马β淀粉样蛋白的表达进而改善认知功能。     

β淀粉样蛋白处理大鼠认知和微量营养素状况的变化

目的观察认知功能损伤大鼠体内几种主要维生素和微量元素含量的改变。方法30只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、β淀粉样蛋白(Aβ)组和生理盐水组,每组10只。正常对照组不作任何处理,Aβ组双侧海马内注射Aβ(每侧10μg),生理盐水组海马内注射等体积生理盐水。实验周期两周。通过水迷宫试验、避暗试验检测大鼠认知功能;采用原子吸收分光光度法、微量荧光法等方法检测动物血清维生素A、维生素E、维生素C、维生素B2、维生素B6、叶酸及微量元素铜、锌、铁的含量。结果海马内注射Aβ使大鼠认知功能有下降趋势;与正常对照组及生理盐水组比较,Aβ组大鼠水迷宫试验及避暗试验潜伏期均延长,且血清维生素C及铁含量明显下降(P<0.05);各组大鼠其余指标差异均无显著性。结论海马内注射Aβ可导致大鼠认知功能损伤以及血清维生素C、铁含量降低。     

铅对细胞内钙离子及钙调蛋白影响的研究进展

本综述了近年来铅对细胞内钙离子及钙调蛋白影响的研究进展，现有资料表明，铅可通过多种途径进入细胞内，从而改变细胞内钙离子浓度；进入细胞内的铅离子可以与钙离子竞争钙调蛋白上的钙离子结合位点，激活钙调蛋白，影响细胞代谢，合成，分泌等过程。     

补阳还五汤对AD大鼠海马区β-APP蛋白表达的影响

目的探讨补阳还五汤对老年性痴呆大鼠海马区β-淀粉样蛋白前体蛋白(APP)表达的影响。方法采用免疫组织化学方法,在高倍显微镜下随机选取大鼠海马区连续5个视野,并计数5个视野中APP免疫阳性细胞平均个数。结果补阳还五汤能明显减少Aβ1-40所致老年性痴呆大鼠海马区APP阳性细胞数量。结论补阳还五汤对Aβ1-40所致老年性痴呆大鼠海马区APP的表达有明显抑制作用。