气道平滑肌细胞在哮喘气道重构中的作用机制

慢性哮喘患者的气道随着病程的发展会出现平滑肌细胞增生、胶原沉积、基膜增厚等重构现象,其中气道平滑肌细胞在长期慢性炎症刺激下其收缩功能及生长迁移能力均明显增强,同时还可以发生表型转化,胞内具有合成功能的细胞器(如高尔基体等)含量增加,进而分泌各种生物因子参与气道重构。该文就气道平滑肌细胞在哮喘气道重构中的作用机制的研究进展予以综述。     

滨蒿内酯对哮喘豚鼠气管平滑肌的作用

目的观察滨蒿内酯(scoparone,Sco)对哮喘豚鼠离体气管平滑肌(tracheal smooth     

Fca受体在人支气管平滑肌细胞的表达与功能研究

目的 探讨Fca受体在人支气管平滑肌细胞的表达特征及其功能.方法 采用RT-PCR和免疫荧光技术,从基因和蛋白水平检测Fca受体在人支气管平滑肌细胞的表达;以Fura-2/AM为细胞内钙离子荧光指示剂,观察IgA对人支气管平滑肌细胞内钙离子浓度的影响.结果 RT-PCR和免疫荧光染色方法、均检测到Fca受体在人支气管平滑肌细胞的表达.slgA与人支气管平滑肌细胞孵育90min后,细胞内Ca2 浓度明显增高,差异具有显著性(P＜0.05).mlgA与人支气管平滑肌细胞孵育90min后,细胞内Ca2 浓度无明显改变(P＞0.05).结论 Fca受体在人支气管平滑肌细胞存在表达,slgA使人支气管平滑肌细胞内钙离子浓度增高.     

纤维粘连蛋白在哮喘气道平滑肌细胞免疫功能调控中的作用

目的探讨细胞外基质(extracellular matrix,ECM)纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)在哮喘气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cell,ASMC)免疫功能调控机制中的作用,同时建立一种优化培养ASMC的方法。方法利用组织贴块法和消化酶法原代培养大鼠ASMC,并用细胞形态学和免疫组化SABC染色方法鉴定;将正常和哮喘大鼠ASMC种植在涂覆有FN的和空白(无FN涂覆)的玻片上,免疫组化方法检测爬片中粘着斑蛋白的表达;ELISA方法检测各组培养上清中调节激活正常T细胞表达和分泌细胞因子(regulated on activated normal T expressed and secreted,RANTES)蛋白水平。结果①原代培养的细胞呈典型的"谷峰状"生长,胞质内特异性的平滑肌肌动蛋白阳性表达,符合平滑肌细胞的形态学特征和生物学特性。②FN作用的哮喘大鼠ASMC粘着斑蛋白的表达明显增加,但未经FN作用的哮喘大鼠ASMC及经(或未经)FN作用的正常大鼠ASMC粘着斑蛋白表达均呈阴性表现。③FN处理组细胞培养上清中的RANTES蛋白水平较未经FN处理组显著增加(P<0.05),哮喘组培养上清中的RANTES蛋白水平较正常组明显增加(P<0.05)。结论 FN可能通过上调哮喘大鼠ASMC粘着斑蛋白的表达、促进RANTES的分泌而参与ASMC的免疫功能调控机制。     

射麻止喘液对哮喘大鼠气道平滑肌细胞作用研究

目的：探讨哮喘大鼠模型建立及其气道平滑肌细胞培养方法,了解其生长特性,通过研究射麻止喘液中药血清对气道平滑肌细胞增殖效应,为研究哮喘病预防及治疗提供理论及实验支持。方法：制作慢性哮喘大鼠模型,用酶联法培养哮喘大鼠气道平滑肌细胞,倒置相差显微镜观察其生长情况,MTT检测生长曲线。结果：以酶联法培养7天可见细胞贴壁,14天左右融合90%左右。传代后细胞＂谷峰＂生长明显。结论：本实验提供了一种常见简单的哮喘模型,培养的细胞为平滑肌细胞,射麻止喘液血清具有抑制哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖作用,低剂量药物血清组相对于中高剂量组抑制作用更强。     

射麻止喘液对哮喘大鼠气道平滑肌细胞作用研究

目的:探讨哮喘大鼠模型建立及其气道平滑肌细胞培养方法,了解其生长特性,通过研究射麻止喘液中药血清对气道平滑肌细胞增殖效应,为研究哮喘病预防及治疗提供理论及实验支持。方法:制作慢性哮喘大鼠模型,用酶联法培养哮喘大鼠气道平滑肌细胞,倒置相差显微镜观察其生长情况,MTT检测生长曲线。结果:以酶联法培养7天可见细胞贴壁,14天左右融合90%左右。传代后细胞"谷峰"生长明显。结论:本实验提供了一种常见简单的哮喘模型,培养的细胞为平滑肌细胞,射麻止喘液血清具有抑制哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖作用,低剂量药物血清组相对于中高剂量组抑制作用更强。     

IL-19对哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨IL-19对哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖的作用。方法通过对大鼠进行雾化卵清蛋白,制备哮喘模型大鼠。提取哮喘大鼠ASMCs进行培养,分别以1μg/L、10μg/L、100μg/L IL-19干预ASMCs生长。采用流式细胞仪、MTT法检测ASMCs增殖情况,观察不同浓度IL-19对ASMCs增殖的影响。结果与正常鼠相比,慢性哮喘大鼠ASMCs增殖明显,处于S期的细胞比例明显增高。经10μg/L、100μg/L IL-19干预后,慢性哮喘大鼠ASMCs处于S期的细胞比例减少,增殖亦减弱。且两组间比较有明显差异。而经1μg/L IL-19干预后,慢性哮喘大鼠ASMCs处于S期的细胞比例及增殖均无明显变化。结论一定浓度的IL-19可能抑制慢性哮喘大鼠ASMCs的增殖。     

海洛因依赖与μ阿片受体基因多态性的关联研究

目的探讨海洛因依赖和μ阿片受体基因多态性的关系.方法应用聚合酶链反应技术检测313例海洛因依赖者和214名正常对照μ阿片受体基因.结果海洛因依赖者和对照组之间的上述的基因型和等位基因频率的差异无显著性(P>0.05).结论μ阿片受体基因多态性与海洛因依赖无关联.     

细胞外基质对哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞免疫调节作用

目的 研究在哮喘状态下,细胞外基质(extracellular matrix,ECM)对气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)的免疫调节作用.方法 健康雄性Wistar大鼠随机分为哮喘组(8只)及正常对照组(8只).大鼠哮喘模型使用卵清蛋白(OVA)致敏及激发的方法建立.分离培养得到的大鼠ASMCs分别置于包被有LA及COL-1的细胞瓶中进行培养.结果 Western blot法检测结果显示,eotaxin 、TGF-β1的表达,哮喘空白组高于正常对照空白组(P＜0.05),哮喘组内ECM的干预促进表达的增加(P＜0.05),正常对照组表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 ECM影响哮喘ASMCs的免疫功能.     

哮喘大鼠气道平滑肌细胞caveolae的变化及罗红霉素的调控作用

目的观察支气管哮喘（简称哮喘）大鼠气道平滑肌细胞微囊（caveolae）及微囊蛋白一1（caveolin一1）的表达变化,并探讨罗红霉素对其表达的影响。方法SPF级雄性SD大鼠24只,采用数学表法随机分为对照组（c组）、哮喘组（A组）、罗红霉素组（R组）,每组8只。以卵白蛋白致敏和激发的方法复制大鼠哮喘气道重塑模型,图像分析软件测定气道壁厚度（Wat／Pbm）及气道平滑肌层厚度（Wam／Pbm）;透射电镜观察eaveolae超微结构;Westernblot法测定caveolin—l的表达变化。结果（1）A组大鼠Wat／Pbm、Wam／Pbm大于C组（P〈0．01）;R组大鼠Wat／Pbm、Wam／Pbm小于A组（P〈0．01）,大于C组（P〈0．01）;（2）透射电镜显示c组ASMC胞膜及胞质eaveolae含量丰富、形态多样,A组caveolae含量少、结构单一,R组eaveolae含量明屁减少,但较A组多;（3）Westernblot法显示c组caveolin一1高表达,A组表达明显低于c组（P〈0．01）;R组caveolin-1表达显著高于A组（P〈0．01）,但较c组表达减少;（4）caveolin-1表达与Wam／Pbm呈负相关（r=-0．928,P〈0．01）。结论哮喘大鼠气道平滑肌细胞eaveolae结构明显减少,caveolin-1表达减少,提示caveolae缺乏与哮喘气道重塑有密切关系,罗红霉素可能通过caveolae的影响而抑制哮喘气道重塑。     

人结肠平滑肌毒蕈碱受体亚型的研究

应用离休收缩功能实验方法检定人结肠平滑肌毒蕈碱受体亚型，发现人结肠纵、环肌对乙酰胆碱反应的ｐＤ＿２和对阿托品反应的ｐＡ＿２有极显著性差异（Ｐ＜０．０１）。提示：人结肠平滑肌上存在两种高低不同亲和性的毒蕈碱受体亚型，分别支配人结肠纵、环肌的收缩。     

射麻止喘汤对哮喘大鼠支气管平滑肌细胞增殖的影响

【目的】观察射麻止喘汤对支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)增殖的影响。【方法】选用SPF级SD大鼠分为哮喘组和正常对照组,哮喘组采用卵清蛋白(OVA)致敏并激发方法复制哮喘模型,造模成功后分别取各组支气管平滑肌进行细胞培养,倒置显微镜观察形态并经免疫荧光染色鉴定;给予大鼠灌胃高、中、低剂量的射麻止喘汤(剂量分别为64、32、6.4 g.kg-1.d-1)制备含药血清;取2～5代ASMC分别给予射麻止喘汤高、中、低剂量含药血清,蛋白激酶C(PKC)激活剂佛波醇-12-肉豆蔻酰-13-乙酸佛波酯(PMA,10 nmol/L),PKC抑制剂马来酰亚胺甲磺酸盐(Ro-31-8220,5μmol/L)干预;另设空白组(不给予任何药物血清干预)。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组ASMC增殖(D值)。【结果】免疫荧光染色鉴定结果显示所培养的细胞为平滑肌细胞。正常大鼠PMA组ASMC的D值较空白组显著增高(P0.05),Ro-31-8220组、射麻止喘汤各剂量组D值与空白组比较差异均无显著性意义(P0.05)。哮喘模型大鼠PMA组ASMC的D值较空白组显著增加(P0.05),Ro-31-8220组、射麻止喘汤各剂量组D值均较空白组显著降低(P0.05),但射麻止喘汤各剂量组与Ro-31-8220组比较差异无显著性意义(P0.05)。【结论】射麻止喘汤治疗支气管哮喘的作用可能与其能抑制ASMC增殖,影响哮喘的气道重塑过程有关。     

核因子κB在支气管哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用

目的探讨核因子κB(NFκ-B)在支气管哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖中的作用。方法采用卵清蛋白(OVA)致敏OVA激发的方法制备大鼠哮喘模型。将18只Wistar大鼠分为:①哮喘组;②吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)组:OVA激发前腹腔注射NFκ-B的特异性抑制剂PDTC(100 mg/kg);③对照组:注射及吸入等量生理盐水。采用流式细胞术、MTT法及增殖细胞核抗原(PCNA)免疫荧光技术等方法观察ASMCs增殖;免疫荧光技术及电泳迁移率改变分析(EMSA)检测NFκ-B活性;Western blot检测NFκ-B的抑制蛋白I-κBα表达。结果①PDTC组ASMCs S期比例、A值、PCNA阳性表达率分别为(11.77±3.37)%、(0.283±0.034)、(27.9±6.7)%,与哮喘组[(22.17±3.64)%、(0.469±0.050)、(77.3±8.4)%]比较均显著降低(均P<0.05),与对照组[(12.08±2.86)%、(0.302±0.059)、(25.3±3.8)%]比较差异均无显著性意义(均P>0.05)。②PDTC组ASMCs NFκ-B活性与哮喘组比较显著降低(P<0.05),与对照组比较差异无显著性意义。结论NF-κB参与哮喘大鼠ASMCs增殖,抑制NF-κB活性能降低哮喘大鼠ASMCs增殖。     

κ阿片受体在抑郁中的作用及机制研究进展

抑郁症是一种严重的精神障碍疾病,发病率高,社会危害大。目前单胺重摄取抑制剂是临床治疗抑郁症的一线药物,但是普遍存在起效延迟,副作用多,并且治愈率低的问题。以阿片受体为靶点的抗抑郁药物研发显示出非常有希望的前景,临床研究发现,κ阿片受体拮抗剂丁丙诺啡在难治型抑郁症中发挥良好的治疗效果。该文将对κ阿片受体在抑郁发生发展过程中的作用及其机制进行综述,总结强啡肽 /κ阿片受体在不同脑区中的作用。并介绍强啡肽 /κ阿片受体系统和促肾上腺皮质激素释放因子（corticotrophin releasing factor,CRF）系统是如何发挥相互作用调控行为,就参与介导抑郁样行为的κ阿片受体上游和下游分子的研究现状予以介绍,以期为将来的研究提供参考。     

The Role of Serotonin 2C Receptor in Pulmonary Arterial Smooth Muscle Cells Proliferation and Contraction in Rats

Objective To examine the role of 5-HTEc receptor in pulmonary arterial smooth muscle cells （PASMCs） proliferation and contraction induced by 5-HT. Methods Small interfering RNA （siRNA） was used to knock down the expression of 5-HTEcR. We used MTT assay and cell cycle analysis to demonstrate the proliferation of PASMCs. The length of PASMCs was measured to show the cells contractile function. Results Administrated of 5-HTEcR-specific siRNA, 5-HTEc receptor expression in PASMCs was significantly suppressed. MTT assay and cell cycle analysis showed that 5-HT-induced cell growth in PASMCs was attenuated. Contraction of PASMCs induced by 5-HT was also obviously reduced. Conclusion 5-HTEc receptor mediates the proliferation and contraction of PASMCs induced by 5-HT.     

N-甲基-D-天冬氨酸受体:治疗椎管内阿片类药物所致瘙痒的新方向

椎管内阿片类药物是常用的麻醉镇痛方式之一,但瘙痒是该镇痛方式给患者带来的极大困扰,目前的治疗手段存在一定的局限性。本文通过综述椎管内阿片类药物所致瘙痒的治疗现状、基础研究进展(包括神经递质学、阿片受体学和信号通路学),结合本课题组关于N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体与椎管内阿片类药物所致瘙痒的相关研究,为治疗椎管内阿片类药物所致瘙痒提供新思路。NMDA受体在椎管内阿片类药物所致瘙痒中可能发挥重要作用,NMDA受体拮抗剂在治疗椎管内阿片类药物所致瘙痒中具有一定的优势。     

P27KiP-1蛋白对支气管哮喘大鼠气道平滑肌增生的影响

目的 探讨P27Kip-1对哮喘大鼠气道平滑肌细胞增生及气道重塑的影响.方法 清洁级雄性SD大鼠30只,随机分成对照组(C)、哮喘4周组(A1)、哮喘6周组(A2)每组10只.用卵白蛋白(OVA)致敏与激发建立大鼠哮喘模型,末次激发后24h内测气道反应性和观察气道壁炎性细胞的浸润情况,图像分析软件测定支气管壁厚度、支气管平滑肌厚度;免疫组化法检测增生细胞核抗原(PCNA)及P27Kip-1表达.结果 哮喘4周和6周组P27Kip-1蛋白表达显著低于对照组(P＜0.05),且6周组低于4周组(P＜0.05);哮喘4周和6周组PCNA表达、支气管壁厚度、支气管平滑肌厚度和气道反应性均显著高于对照组(P＜0.01),且6周组高于4周组(P＜0.01).结论 P27Kip-1可抑制气道平滑肌细胞增生进而影响气道重构与气道高反应性.     

P27kip-1蛋白对支气管哮喘大鼠模型气道平滑肌细胞凋亡的影响

目的探讨P27^kip-1对哮喘大鼠模型气道平滑肌细胞凋亡的影响。方法清洁级（SPF）雄性SD大鼠30只,随机分成对照组、哮喘4周组、哮喘6周组,每组10只。用卵清蛋白（OVA）致敏与激发建立大鼠哮喘模型,HE染色观察和测量气道形态学变化;末端转移酶介导的dUTP切口末端标记法（TUNEL）检测ASMCs凋亡并计算凋亡指数（AI）;免疫组化法检测P27^kip-1蛋白表达。结果哮喘4周和6周组支气管壁厚度、支气管平滑肌厚度均显著高于对照组（P〈0．01）,且6周组高于4周组（P〈0．01）;哮喘4周和6周组凋亡指数均显著低于对照组（P〈0．01）,且6周组低于4周组（P〈0．01）;哮喘4周和6周组P27^kip-1蛋白表达显著低于对照组（P〈0．05）。结论哮喘大鼠模型气道平滑肌细胞凋亡减少,可能与P27^kip-1蛋白表达减少有关。     

μ型阿片受体参与CFA大鼠慢性炎性痛的外周调控

目的观察大鼠慢性炎性痛时背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)μ型阿片受体(mu opioid receptor,MOR)表达的变化及炎症局部注射MOR激动剂和拮抗剂对痛阈的干预作用,探讨MOR在慢性炎性疼痛中的作用。方法足底注射弗氏完全佐剂(complete freund’s adjuvant,CFA)制备大鼠慢性炎性痛模型,采用免疫组化法检测DRG MOR阳性细胞的表达;经大鼠足跖背部分别注射MOR激动剂、拮抗剂,采用辐射热法检测给药前后大鼠痛阈的变化。结果足底注射CFA诱导出大鼠慢性炎性痛,在造模后第18天,痛阈依然低于正常对照组;免疫组化结果表明,与正常对照组相比,CFA大鼠DRG MOR阳性细胞表达增多(P<0.01);足跖背部注射MOR激动剂减轻CFA大鼠的疼痛,对正常大鼠痛阈无影响;足跖背部注射MOR拮抗剂加重CFA大鼠的疼痛,对正常大鼠痛阈无影响。结论 DRG神经元MOR在慢性炎性痛时表达上调,参与慢性炎性痛的外周调控,可能有助于防止慢性痛的进一步加重。     

线粒体ATP敏感钾通道对哮喘大鼠气道平滑肌细胞表型转化的影响

目的 研究线粒体ATP敏感钾通道(mitoKATP)对哮喘气道平滑肌细胞(ASMCs)表型转化的影响.方法 腹腔注射和雾化吸人制备哮喘大鼠模型.取哮喘及正常大鼠ASMCs,分为以下6组进行干预:正常对照组;正常+mi-toKATP开放剂diazoxide组;正常+mitoKATP阻断剂5-HD组;哮喘对照组;哮喘+diazoxide组;哮喘+5-HD组.激光共聚焦显微镜检测各组ASMCs R-123荧光强度以反映线粒体膜电位(△ψm),Western blot法检测各组细胞α一肌动蛋白(ractin)表达量.结果 ①与正常对照组比较.哮喘对照组R-123荧光强度明显增强,α-actin表达明显下调(均P<0.05).②diazoxide干预ASMCs 24 h后.正常及哮喘ASMCs R-123荧光强度均明显增强(均P<0.05);正常ASMCs α-actin表达量无明显变化(P>0.05).但哮喘ASMCs α-actin表达量明显增加(P<0.05).结论 diazoxide引起mitoKATP开放,并逆转哮喘ASMCs由收缩型向合成型发生的表型转化.