广藿香三种有效部位体外抗柯萨奇病毒B3作用的初步研究

目的:研究广藿香三种有效部位体外抗柯萨奇B组3型病毒(CVB3)作用,从而明确广藿香的抗病毒性能,为其进一步开发利用奠定基础.方法:通过CPE法和MTT法检测药物对Hela细胞的毒性及对CVB3引起的细胞病变抑制作用,判断药物毒性及药物抗病毒效应.结果:广藿香的醋酸乙酯提取物、甲醇提取物、水提取物对HeLa细胞的半数中毒浓度(TC50)分别为765.59、1140.56、2700.30 μg/mL.广藿香的醋酸乙酯提取物、甲醇提取物具有较好的抗CVB3作用,IC50分别为26.92、13.84 μg/mL,而其水提取物无抗CVB3的作用.结论:广藿香的醋酸乙酯提取物、甲醇提取物体外具有抗CVB3作用,但其具体的作用机理仍需进一步研究.     

广西苦丁茶提取物体外抗单纯疱疹病毒1型活性的实验研究

目的探讨不同苦丁茶提取物体外抗单纯疱疹病毒1型（HSV-1）的作用。方法采用细胞病变效应法（Cytopathogenic effect，CPE）和空斑减数实验（Plaque reduction assay）测定不同苦丁茶提取物抗HSV-1活性，计算药物对病变的抑制率和半数抑制浓度（50％ inhibiting concentration，IC50），并从药物对细胞的保护，对病毒增殖的影响及对病毒感染细胞的综合作用3个方面初步探索苦丁茶提取物抗HSV-1病毒活性的机理。结果苦丁茶水提物能明显抑制HSV-1的致病变作用，IC50为108．24μg／ml，药物对细胞的保护及对病毒感染细胞的综合作用中均表现出明显的活性。结论苦丁茶水提物具有显著的抗HSV-1活性，且初步推测其抗病毒活性是作用在病毒和受体结合，侵入Vero细胞阶段。     

清热抗感冲剂及其含药血清体外抑制腺病毒（ADV3）作用的实验研究

目的：通过清热抗感冲剂体外抑制腺病毒（ADV，）和呼吸道合胞病毒（aSV）的研究，探讨清热抗感冲荆体外抗病毒作用。方法：通过细胞培养，采用观察细胞病变（CPE）和活细胞染色计数法（MTT），观察清热抗感冲剂及其含药血清在Hep-2细胞中，抑制ADV，和RSV的作用。结果：清热抗感冲剂及其舍药血清具有抑制ADV3病毒复制作用。其，T℃50如分别为4760μg／mL、1／4．35稀释度；IC50为817μ9／mL、1／9．14稀释度；治疗指数（TI）分别为：5．8、2．03。清热抗感冲剂及其含药血清具有不同程度抑制RSV病毒复制作用，其TC50分别为4760μg／mL、1／4．35稀释度；IC50为178μg／mL、1／54稀释度；治疗指数（TI）分别为：26．7、12．3。结论：清热抗感冲剂及其舍药血清具有抑制ADV，和RSV在Hep-2细胞内的复制作用。     

槲皮素和穿心莲内酯的体外抗病毒作用

目的:研究槲皮素和穿心莲内酯的体外抗甲型流感病毒(H1N1)、登革病毒2型(DV2)、柯萨奇B病毒(CVB3)以及呼吸道合胞病毒(RSV-A)的作用。方法:用MTT法,检测槲皮素和穿心莲内酯抗H1N1、DV2、CVB3以及RSV-A病毒的最大无毒浓度、最小有效浓度和治疗指数。结果:槲皮素对16HBE、C6/36、HeLa、Hep-2细胞的最大无毒浓度分别为200、100、100、100μg/mL,对H1N1、DV2、CVB3、RSV-A的最小有效浓度分别为12.5、3.125、100、12.5μg/mL,治疗指数分别为16、32、1、8;穿心莲内酯对16HBE、C6/36、HeLa、Hep-2细胞的最大无毒浓度分别为50、100、100、50μg/mL,对H1N1、DV2、CVB3、RSV-A的最小有效浓度分别为25、6.25、100、6.25μg/mL,治疗指数分别为2、16、1、8。结论:槲皮素和穿心莲内酯对H1N1、DV2、CVB3以及RSV-A均有一定的抗病毒作用。     

大黄茶抗柯萨奇病毒B3(CVB3)的实验研究

目的:观察大黄茶抗CVB3的作用.方法:通过活细胞计数评价了大黄茶对Hep-2细胞的细胞毒作用;通过观察病毒感染后的细胞病变效应计算病毒抑制率,并且用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测药物作用后细胞冻融液中的病毒核酸(CVB3-RNA),评价了大黄茶在细胞培养中的抗CVB3作用.结果大黄茶对Hep-2细胞的半数细胞毒性浓度在0.4mg/ml以上,对CVB3的半数抑制浓度在90μg/ml以内.结论:大黄茶安全性较高并能有效的抑制柯萨奇病毒B3在Hep-2细胞中的增殖.     

中蒙医温病学王氏连朴饮加滑石、黄芩与菌达日-4味汤体外抗轮状病毒、抗腹泻实验

目的：明确王氏连朴饮加滑石、黄芩与菌达日一4味汤体外抗轮状病毒的机制及观察其抗番泻叶所致腹泻动物模型的效果,为临床应用提供科学依据。方法：实验-蒙药和中药对MA-104细胞（恒河猴胚胎肾细胞）的毒性作用,根据Takeuchi建立MTF（4,5二甲基噻唑-2,5-二苯基四唑溴化物）法检测药物的细胞毒性作用;药物对病毒感染的预防作用,用不同浓度的药物预先处理单层细胞2h后将100TCID。／0．1mL（TiSSHecu-tureinfectivedose,半数组织培养感染剂量）的病毒每孔加入0．1mL,吸附2h,弃病毒液,PBS（PhosphateBufferSa—line,磷酸盐缓冲液）洗涤2次,加细胞维持液培养,每天于倒置显微镜下观察细胞变化;药物对病毒的直接杀伤作用,将不同浓度的药物与100TCID50／0．1mL的病毒液等量混合作用2h,再将其感染单层细胞,吸附2h后,弃上清,加入细胞维持液继续培养,每天于倒置显微镜下观察细胞变化;药物对病毒穿入细胞后的抑制作用,先用100TCID50／0．1mL的病毒每孔0．1mL感染细胞,吸附2h后,吸去病毒,加入不同浓度的含药维持液,每天于倒置显微镜下观察细胞变化。实验二复制番泻叶所致泄泻的小鼠模型,比较蒙药、中药与阿托品对腹泻的影响,通过计数湿粪,观察药物对腹泻的抑制程度。结果：蒙药的TC50（半数细胞毒性浓度）为2．76mg／mL,中药的TC50为24．35mg／mL,蒙药对MA-104细胞毒性明显大于中药;中药抗轮状病毒的主要作用方式为抑制病毒生物合成,但在阻断病毒吸附以及直接杀伤方面效果较差;蒙药能明显抑制轮状病毒复制,表现在阻断病毒吸附、直接杀伤以及抑制病毒增殖方面都有较好的效果,但细胞毒性较大;中药低剂量组和蒙药高剂量组抗腹泻效果优于其他组。     

大黄茶抗柯萨奇病毒B3(CVB3)的实验研究

目的观察大黄茶抗CVB3的作用.方法通过活细胞计数评价了大黄茶对Hep-2细胞的细胞毒作用;通过观察病毒感染后的细胞病变效应计算病毒抑制率,并且用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测药物作用后细胞冻融液中的病毒核酸(CVB3-RNA),评价了大黄茶在细胞培养中的抗CVB3作用.结果大黄茶对Hep-2细胞的半数细胞毒性浓度在0.4mg/ml以上,对CVB3的半数抑制浓度在90μg/ml以内.结论大黄茶安全性较高并能有效的抑制柯萨奇病毒B3在Hep-2细胞中的增殖.     

广藿香醇体外抗呼吸道病毒作用研究

目的:观察广藿香醇体外抗流感病毒、腺病毒和柯萨奇病毒的效果,为抗病毒性感冒新药研发提供依据。方法:建立流感病毒感染MDCK细胞、腺病毒感染Hep-2细胞和柯萨奇病毒感染Hela细胞模型,以细胞病变效应(CPE)、噻唑蓝(MTT)法作为观察和检测指标,了解药物对细胞的毒性、药物体外抗病毒效果及作用机理。根据不同病毒的易感性,实验中分别以利巴韦林和阿昔洛韦作为对照药。结果:广藿香醇对MDCK、Hep-2和Hela细胞的TC50浓度均为125μg/ml,TC0浓度为31.25μg/ml。广藿香醇能抑制H1N1、CVB3和Ad-3所致的细胞病变,对H1N1的IC50为31.25μg/ml,治疗指数(TI)为4.00;对CVB3的IC50为62μg/ml,TI为2.00;对Ad-3的IC50为31.25μg/ml,TI为4.00。广藿香醇对3种病毒的直接作用效果都优于抗病毒吸附和抗病毒生物合成,同一浓度下广藿香醇对Ad-3的抑制率明显高于对H1N1和CVB3的抑制。结论:在体外抗病毒实验中,广藿香醇显示出抗柯萨奇病毒、抗腺病毒和抗甲型流感病毒的作用。     

大叶蛇葡萄乙醇提取物对2215细胞HBsAg、HBeAg表达抑制作用的实验研究

目的：研究大叶蛇葡萄乙醇提取物的抗乙肝病毒（HBV）作用。方法：将大叶蛇葡萄乙醇提取物作用于乙肝病毒DNA转染人肝癌细胞系2215细胞,以细胞病变（CPE）观察药物对2215细胞的毒性,用酶联免疫测定法（ELISA）检测药物对培养8天的2215细胞分泌的表面抗原（HBsAg）和e抗原（HBeAg）表达的抑制作用。结果：大叶蛇葡萄乙醇提取物的半数毒性浓度（TC50）为250μg/ml,最大无毒浓度（TC0）为125μg/ml;乙醇提取物对培养8天的2215细胞HBsAg、HBeAg表达抑制作用的半数有效浓度（IC50）分别为43.1μg/ml、54.8μg/ml,治疗指数（TI）值分别为5.8、4.7。结论：大叶蛇葡萄乙醇提取物具一定的体外抗乙肝病毒的作用,为有效物质部位。     

抗柯萨奇 B病毒性心肌炎胶囊复方新制剂对柯萨奇 B3病毒感染的人喉癌上皮细胞的影响

目的：观察不同浓度抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊（ K-CoxB-JN）复方新制剂对柯萨奇B3病毒（CVB3）感染人喉癌上皮（Hep-2）细胞的影响。方法首先测定K-CoxB-JN复方新制剂的最大无毒浓度（TC0）,再通过K-CoxB-JN复方新制剂不同的加药和加病毒方式,用溴化噻唑蓝四氮唑（MTT）法检测对CVB3感染Hep-2细胞的活性,观察K-CoxB-JN复方新制剂对CVB3感染Hep-2细胞的影响,并采用利巴韦林颗粒对照观察。结果测得K-CoxB-JN复方新制剂TC0为1．5625 mg/mL,利巴韦林颗粒TC0为6．25 mg/mL;当K-CoxB-JN复方新制剂浓度为0．78125 mg/mL、利巴韦林浓度为3．125 mg/mL时对CVB3感染Hep-2细胞保护作用最明显;当K-CoxB-JN复方新制剂浓度为1．5625 mg/mL、利巴韦林颗粒浓度为6．25 mg/mL时直接抗病毒和抑制病毒释放作用最明显,并且表现出良好的量效关系。结论不同浓度的K-CoxB-JN复方新制剂对CVB3感染的Hep-2细胞具有保护作用,能直接抗CVB3病毒,并且能抑制病毒的释放。     

苦丁茶水提物体外抗柯萨奇病毒B3活性的实验研究

目的:探讨苦丁茶水提物体外抗柯萨奇病毒B3(CVB3)的作用及机制的研究.方法:采用组织细胞培养法,通过观察细胞病变(CPE)以及四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活性、测定病毒抑制率,以确定苦丁茶水提物体外抗病毒活性,并采用预防、治疗和同时用药干预的方法初步探讨其抗病毒作用机制.结果:苦丁茶水提物有明显的体外抗CVB3活性,对HeLa细胞的半数中毒浓度(TC50)为45700.3μg/ml,半数抑制浓度(IC50)为119.18μg/ml,治疗指数(TI)为383.46.结论:苦丁茶水提物在体外具有明显的抑制CVB3作用.     

蒲葵籽提取物体外抗HIV-1活性及机制的初步研究

目的研究蒲葵籽提取物的体外抗HIV-1活性,对有活性粗提物进行初步机制研究。方法采用细胞毒性、合胞体抑制、HIV-1感染细胞保护实验和HIV-1 p24抗原测定等实验对蒲葵籽提取物体外抗HIV-1活性进行筛选和确认;采用重组HIV-1逆转录酶和蛋白酶活性抑制实验,融合阻断实验初步探讨活性粗提物的作用机制。结果蒲葵籽的醋酸乙酯(P3)提取物具有较强的体外抗HIV-1活性,P3抑制HIV-1诱导C8166细胞形成合胞体的EC50为5.64μg/mL,对C8166细胞的毒性较小,CC50大于200μg/mL,治疗指数(TI)大于35.46;P3抑制HIV-1急性感染中p24抗原表达的EC50为23.04μg/mL,抑制正常C8166细胞与慢性感染细胞H9/HIV-1 B融合的EC50为8.00μg/mL;P3在质量浓度为200μg/mL时,对HIV-1逆转录酶的抑制率为28.86%;P3抑制重组HIV-1蛋白酶活性的EC50为1.77μg/mL。结论蒲葵籽的醋酸乙酯提取物(P3)具有较强的体外抗HIV-1活性,其作用机制可能主要为阻断病毒进入和抑制HIV-1蛋白酶活性。     

獐牙菜中(口山)酮类提取物抗HBV体外实验研究

目的：通过体外实验，探讨獐牙菜属植物抗HBV作用物质基础。方法：将贵州獐牙菜口山酮类提取物4、6分别作用于HBV DNA转染人肝癌细胞系2215细胞，通过检测第8d的细胞培养液中HBsAg、HBeAg的变化来评价其抗HBV效果。结果：提取物4多数浓度对HBsAg、HBeAg表达有显著抑制作用（P〈0．05-0.01），测得对HB-sAg、HBeAg的IC50分别为18．4μg／ml、22．8μg／ml；TI值分别大于6．8、5．5；提取物6多数浓度对HBsAg、HBeAg表达有极显著抑制作用（P〈0．01），测得对HBsAg、HBeAg的IC50分别为16．1μg／ml、32．7μg／ml，TI值分别大于15．5、7．6。结论：（口山）酮类提取物4、6为体外杭HBV的活性成分。     

透骨草提取物对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及凋亡相关因子的影响

[目的]观察透骨草提取物对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响,探讨透骨草提取物诱导SMMC-7721细胞凋亡的分子机制。[方法]流式细胞术检测透骨草提取物诱导SMMC-7721细胞凋亡的影响;免疫组化法检测透骨草提取物对SMMC-7721细胞caspase-9、-3、-7和x连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）表达的影响。[结果]40．91μg／mL透骨草提取物处理的SMMC-7721细胞凋亡率为（26．84±1．23）％,明显高于对照组（P〈0．05）。40．9μg／mL透骨草提取物处理的SMMC-7721细胞Caspase-9、-3、-7蛋白表达明显低于与对照组（P〈0．05）,而XIAP蛋白表达明显高于对照组（P〈0．05）。瞄论]透骨草提取物能通过XIAP／Caspase信号通路抑制SMMC-7721细胞凋亡。关键词：透骨草提取物;SMMC-7721细胞;凋亡;Caspase-9中图分类号：R285．5文献标识码：A文章编号：1672—1519（2013）10—0612—03     

中草药提取物体外抑制HBV的筛选试验

目的：以乙型肝炎病毒（HBV）DNA转染的细胞株2．2．15细胞为靶细胞，给药后通过检测细胞培养液中HBsAg和HBeAg滴度，对四种中药抗HBV效果进行评价。方法：在2．2．15细胞培养基中分别加入不同浓度的药物，培养数天后检测上清液中HbsAg和HBeAg滴度，计算药物对DNA表达的抑制率（ID50）；用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色分析法检测药物对细胞的毒性，计算出半数中毒计量（LD50）,用治疗指数（TI）判断药物的抗HBV病毒作用。结果：槲寄生和甘草的水提物有较好的抗HBV作用；芫花提取物则有较大的细胞毒性。白薇提取物的抗HBV病毒作用不显。结论：本实验方法作为快速体外筛选模型简便易行，对于槲寄生和甘草的抗HBV作用有进一步研究的价值。     

桑寄生乙醇提取物抗柯萨奇病毒B3的实验研究

目的：为研制抗柯萨奇病毒B3(CVB3)新药,观察了桑寄生乙醇提取物不同部分抗CVB3药效。方法：以病毒唑为阳性对照,用空斑减数实验检测了抗CVB3药效。结果：在HEp-2细胞系统中,乙酸乙酯萃取部分(B)对CVB3直接杀灭、感染阻断、增殖抑制的ED50为2.32,0.24,1.91 μg．ml-1。正丁醇萃取部分(C)的相应数值分别为1.44,2.06,3.70 μg．ml-1。病毒唑对CVB3增殖抑制的ED50为7.55 μg．ml-1。结论：桑寄生B部分对CVB3直接杀灭、感染阻断、增殖抑制的治疗指数(TI)为22.6,219,27.5,C部分的相应TI为115,165,21.6。病毒唑对CVB3增殖抑制的TI为38,数值相近。桑寄生B,C部分抗CVB3作用值得开发。     

余甘子提取物体外抗单纯疱疹病毒1型和2型的初步研究

目的 从余甘子的醋酸乙酯提取物、甲醇提取物和水提物3种提取物体外筛选抗单纯疱疹病毒1型和2型的活性成分.方法 通过观察药物毒性、病毒引起的细胞病变效应、空斑减数法,判断药物的毒性及其抗病毒效应.结果 余甘子的醋酸乙酯提取物、甲醇提取物和水提物对于单纯疱疹病毒1型的半数抑制浓度分别为25.28,66.17,100.94 μg/ml;余甘子的3种提取物对于单纯疱疹病毒2型的半数抑制浓度分别为31.70,180.3,112.1 μg/ml.结论 余甘子3种提取物在体外对单纯疱疹病毒1型和2型均有一定的抑制作用.     

KGTR颗粒体外抗流感病毒作用

目的：观察KGTR颗粒体外抗流感病毒作用，为开发中药新药提供实验基础。方法：以5μg／mL病毒唑作为阳性对照药物，体外抗甲型和乙型流感病毒作用，观察药物及药物血清对流感病毒致细胞病变效应的抑制作用。结果：KGTR颗粒的最大无细胞毒性浓度为10mg／mL，抗甲型流感病毒的有效浓度为0．5mg／mL，抗乙型流感病毒的有效浓度为2mg/mL，可以抑制流感病毒在细胞中的增殖；药物血清显示良好的抗甲型流感病毒作用，而抗乙型流感病毒作用较弱。结论：KGTR颗粒具有明显的体外抗流感病毒作用，而且抗甲型流感病毒较抗乙型流感病毒效果更好。     

五倍子水提取物对人牙周膜细胞保护作用的实验研究

目的：观察五倍子水提取物对内毒素（LPS）所致人牙周膜细胞（PDLC）活性降低、超微结构损伤、在牙骨质片表面附着减少、以及碱性磷酸酶（ALP）活性降低的影响,探讨五倍子水提取物对PDLC的保护作用.方法：采用细胞培养技术、3H-TdR掺入法、细胞计数法、透射与扫描电子显微镜技术、酶联免疫技术观察五倍子水提取物对PDLC的保护作用.结果：培养液中加入100μg/mL LPS时,PDLC活性和ALP活性受到明显抑制,超微结构损伤,细胞在牙骨质片表面附着减少.加入五倍子水提取物溶液后,对LPS抑制PDLC活性和ALP活性,以及超微结构损伤、牙骨质片表面附着减少有拮抗作用,该作用随五倍子水提取物浓度增加而增加,到10μg/mL时,达到峰值.结论：五倍子水提取物对PDLC具有保护作用,有望成为防治牙周病的药物.     

地不容粗提物体外抗柯萨奇B3病毒活性作用的实验研究

目的:研究地不容粗提物体外抗柯萨奇B3病毒活性.方法:采用细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)法、MTT法对样品的细胞毒作用、抗病毒活性进行测定.结果:地不客粗提物能明显抑制CVB3对Hela细胞的致病变作用,使细胞存活率升高,其中S1(舍千金藤素)的EDso为1637.16μg/mL,S2(不舍千金藤素)的ED50为2964.86μg/mL.结论:地不容多糖能显著抑制CVB3病毒所致的细胞病变,具有成为一种有效抗病毒药物的开发潜力.