猪链球菌BALB/c小鼠感染模型的初步建立

目的观察猪链球菌（Streptococcus suis）感染小鼠后的临床、病理变化,为将小鼠作为实验室研究猪链球菌的实验动物提供依据。方法用猪链球菌活菌经腹腔注射感染小白鼠,并做阴性对照,观察其临床症状,剖解病死小鼠,制作病理切片观察病理变化。并对病死小鼠做病原分离,通过培养特性鉴定、生化试验以及PCR鉴定确定其为猪链球菌。结果小鼠确由感染猪链球菌而致死,体内各组织、器官均产生典型的败血症病变。结论小鼠对猪链球菌易感,能够作为实验室研究猪链球菌良好的实验动物。     

幽门螺杆菌感染BALB/c小鼠模型的研究

目的　建立稳定的Hp感染BALB/c小鼠模型 ,用于Hp致病、免疫和防治的研究。 方法　选用临床分离株 ,应用外科手术法向小鼠胃内直接接种Hp菌液 0 2ml(10 9CFU/ml) ;接种后不同时间取小鼠胃粘膜组织进行细菌学和病理学检查。结果　接种后 2～ 8周 ,小鼠胃内均可分离到Hp ,Hp分离阳性率为 95 %。病理学检查显示鼠胃粘膜明显炎症。感染鼠用阿莫西林治疗后 ,鼠胃组织Hp培养均转阴性。结论　使用Hp鼠胃接种法 ,能建立稳定的Hp感染BALB/c小鼠模型     

猪链球菌2型BALB/c小鼠动物感染模型的建立

目的研究猪链球菌2型(SS2)中国高致病株05ZYH33株对BALB/c小鼠的致病性,探讨其作为SS2动物感染模型的可行性。方法用猪链球菌活菌经腹腔注射感染小白鼠,并做阴性对照。通过LD50测定、临床症状观察、病理剖检、病原分离鉴定、菌株在各脏器内定植分布检测、细胞因子测定,观察和分析小鼠感染SS2后机体的一系列改变。结果 BALB/c小鼠对05ZYH33株易感,其LD50为4×107 CFU/ml,并可区分强毒株和无毒株毒力差异;病原分离鉴定证实各脏器感染菌株均为SS2;涂板计数表明野生株05ZYH33在小鼠各脏器定植量显著高于无毒株Δcps2B;病死鼠的特征性组织病理学变化表现为典型的弥漫性血管内凝血和微血栓形成;野生株及无毒株均可引起炎症因子IL-6及趋化因子MCP-1的释放,但无毒株△cps2B诱导细胞因子水平显著低于野生株(P0.05)。结论 BALB/c小鼠可被SS2感染并引发炎症反应。适龄SPF BALB/c小鼠是中国SS2强致病株良好的动物感染模型。     

华支睾吸虫感染BALB/c小鼠肝胆管纤维化模型的建立

目的 建立华支睾吸虫感染BALB/c小鼠肝胆管纤维化模型。方法 将BALB/c小鼠随机分为4组,分别以50个、100个和150个囊蚴采用胃饲感染,同时设胃饲生理盐水组为对照。感染后20 d开始采用加藤卡茨法检测小鼠粪便;感染后8周,取小鼠肝脏右外叶组织进行HE和Masson染色,取小鼠肝脏左叶组织进行总蛋白提取,分析肝脏α-SMA的表达情况。结果 感染后31 d小鼠粪便开始检测到华支睾吸虫卵,39 d所有感染组小组均检测到感染。HE及Masson结果显示,与对照组相比,感染组小鼠汇管区出现明显的纤维化改变,且随着胃饲囊蚴数量的增加纤维化越明显,差异具有统计学意义(F=86,P<0.01)。蛋白质免疫印迹试验发现感染小鼠肝脏α-SMA蛋白表达明显高于对照组,且随着胃饲囊蚴数量增加而递增,差异有统计学意义(F=86.5,P<0.05)。结论 成功建立了华支睾吸虫感染BALB/c小鼠肝胆管纤维化模型,为后续研究华支睾吸虫致肝胆管纤维化机制奠定了基础。     

幽门螺杆菌BALB/c小鼠适应性菌株的驯化及模型建立

目的:通过体内连续传代获得幽门螺杆菌(Hpylori)的BALB/c小鼠适应性定植菌株并建立稳定的感染模型.方法:以H pylori蒙古沙鼠适应株GS_(10)连续传代感染BALB/c小鼠,每次感染20只,感染后4 wk进行微生物学检查(分离培养、直接涂片染色镜检、快速尿素酶试验、PCR鉴定),观察H pylori的定植情况,计算每批动物的感染率,直至感染率稳定在80%以上,然后对已稳定感染的小鼠胃黏膜组织进行H pylori定量培养及病理学检查.结果:随着H pylori菌株GS_(10)在BALB/c小鼠内的连续传代,感染率逐渐升高.GS_(10)株初次感染率仅为11.1%,传代至第6代(BS_6株)以后,感染率稳定在80%以上;BALB/c小鼠适应株BS_8感染小鼠后4 wk在胃窦、胃体和胃底的定植密度(CFU/g组织)的常数对数均值分别为5.32±0.88,4.14±1.05和1.05±2.25,与SS1的定植密度相比,相差不显著(P>0.05).感染鼠病理学检查在胃窦黏膜上皮细胞间及固有层中发现大量炎症细胞浸润;在胃窦及幽门部上皮细胞表层黏液、胃腺窝中见到大量H pylori存在.结论:经过连续传代感染,驯化出一株高定植力和感染率的Hpylori BALB/c小鼠适应株,并成功建立稳定的H pylori小鼠感染模型.     

免疫抑制小鼠肺白念珠菌感染模型的建立

目的建立免疫抑制小鼠肺部白念珠菌感染模型,为相关的感染研究提供科学依据。方法 ICR小鼠一次性腹腔注射环磷酰胺200 mg/kg,尾静脉采血计数白细胞。鼻滴组小鼠每天经双侧鼻孔滴入浓度为2×109 cfu/ml的白念珠菌悬液40μl;雾化组小鼠每天吸入浓度为2×109 cfu/ml的白念珠菌悬液20 ml,连续感染8 d后处死小鼠,行组织培养和病理学检查。结果环磷酰胺注射后,小鼠白细胞数明显下降。鼻滴组肺组织培养可见乳白色光滑菌落生成,病理切片可见大量炎细胞浸润,肺泡结构紊乱,肺泡腔内可见弥散的红细胞。雾化组培养未见菌落生成,病理表现为炎症反应。结论降低小鼠免疫力,应用鼻滴的方法可以建立小鼠肺部白念珠菌感染模型。     

幽门螺杆菌感染BALB/c无菌小鼠的免疫应答

目的 探讨幽门螺杆菌感染步鼠的免疫就应答状况。方法 建立ＨＰ经口感染无菌小鼠的动物模型,设立感染免疫组、感染对照组与免疫对照组３组,分别进行试验。结果 感染免疫组抗ＨＰ的特异性ＩｇＧ有显著增高,且该组小鼠胃中的ＨＰ菌数大量减少。结论此种免疫应答以体液免疫为主,细胞免疫所占比例很少,不能彻底清除小鼠胃中的ＨＰ。     

鼠巨细胞病毒感染BALB/c小鼠心肌炎模型的建立

目的:建立鼠巨细胞病毒(MCMV)感染心肌炎动物模型。方法:用巨细胞病毒经腹腔注射感染BALB/c小鼠。结果:MCMV感染小鼠心肌炎发病率为69.4%,死亡高峰在感染后7～14d,死亡率为11.11%;44.5%的感染鼠出现心外膜炎。MCMV感染的第7天,心肌细胞出现肿胀、变性,血管周围有大量炎症细胞灶性浸润;第14天,可见单个心肌细胞核固缩、溶解,心肌细胞小灶性坏死、崩解,周围见单核细胞、淋巴细胞浸润;病变于感染后7～14d达高峰,第14天后开始减轻。MCMV感染小鼠全部心肌病变积分均≤2分,属轻度心肌炎改变;心电图的改变率达50%。结论:该心肌炎动物模型为探讨病毒性心肌炎的发病机制、转归及抗病毒药物的筛选提供了有力的工具。     

BALB/c裸小鼠繁育的实验观察

在自制的隔离器内观察温度、昼夜明暗时间和相对湿度的变化对BALB／c裸小鼠繁育的影响,经过14个月的实验观察得出如下结论：在隔离器内,温度为25－27℃、昼夜明暗交替时间为10：14h、相对湿度为40％－45％时,BALB／c裸小鼠的妊娠率为95％、仔鼠离乳率其中纯合子（nu/nu)为98％,杂合子（nu/ )为100％、成年鼠死亡率为0、出生仔鼠中纯合子与杂合子比率分别为56％和44％;在实验变化范围内,温度、昼夜明暗交替时间和相对湿度的变化对成年鼠（雄性纯合子、雌性杂合子）的死亡率和出生的仔鼠中纯合子与杂合子比率无影响。     

老年BALB/c小鼠多脏器非酶糖基化水平的变化

目的　检测老年和幼年BALB/c小鼠脑、肺、肝、肾组织糖基化蛋白质含量及蛋白质相、脂相荧光物质含量。方法　采用亲和层析法测定糖基化蛋白质的相对含量 ;采用荧光分光光度法测定各组织脂相和蛋白质相的荧光值。结果　老年BALB/c小鼠脑、肺、肝、肾组织糖基化蛋白质含量较幼年鼠显著升高 (P <0 0 1 ) ,脂相和蛋白质相的荧光值亦较幼年鼠显著升高 (P <0 0 1 )。结论　老年BALB/c小鼠上述各组织中非酶促糖基化的水平升高 ,这可能是引起小鼠衰老的原因之一     

高压水动力法建立表面抗原表达缺失的乙型肝炎转染小鼠模型及初步评估

目的探讨HBsAg在小鼠体内模型中对宿主免疫应答调节及病毒感染慢性化中的作用。方法在已有高压水动力法转染pAAV-HBV1.2质粒建立乙肝小鼠模型的基础上,通过点突变技术引入终止密码子至pAAV-HBV1.2质粒上的HBsAg读码框,构建HBsAg无法转录的突变质粒,再利用该质粒构建HBsAg表达缺失的乙肝小鼠模型。通过比较原始质粒建立的乙肝模型小鼠,检测分析外周血中HBV抗原与DNA等病毒感染指标,比较肝脏病变和免疫细胞浸润情况。结果成功构建了HBsAg缺失的乙肝模型小鼠:在乙肝模型小鼠和HBsAg缺失突变的模型小鼠外周血中均能检测到4 COI/mL水平的HBeAg,两组小鼠没有差异,但只有乙肝小鼠体内能检测到102 COI/mL以上的HBsAg和103至106拷贝/mL的HBV DNA,HBsAg缺失的小鼠中无法检测到HBsAg和HBV DNA;动态监测显示HBeAg在乙肝和HBsAg缺失突变的两组小鼠中的阳性率均逐步降低,在HBsAg缺失突变组中降低的更明显,第8周时仅有20%的小鼠为HBeAg阳性,而此时未突变乙肝组的阳性率为60%;免疫组织化学结果显示:在阴性对照小鼠的肝脏结构较完整,未见聚集的浸润免疫细胞,而乙肝和HBsAg缺失的乙肝小鼠肝小叶结构均松散,乙肝小鼠肝脏中有聚集的浸润性免疫细胞,HBsAg缺失的小鼠肝脏缺少免疫细胞的聚集,却存在严重的肝细胞毛玻璃样变性。结论成功构建了HBsAg缺失的乙肝转染小鼠模型;并发现HBsAg在HBV完整病毒颗粒包装和出胞,以及肝脏病变和免疫细胞浸润过程中发挥了重要的作用。     

不同种小鼠乙型肝炎模型的建立及其感染状况研究

目的 探讨建立急性或慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染小鼠模型的方法。方法 采用高压尾静脉注射pAAV/HBV1.2表达质粒,建立急性或慢性HBV感染小鼠模型,采用ELISA法检测HBV抗原,采用RT-PCR法检测免疫相关分子基因,使用FACS检测肝内淋巴细胞活化情况,采用酶联免疫斑点实验（ELISPOT）法检测脾脏相关免疫细胞特征。结果 成功建立急性和慢性高压尾静脉注射HBV感染小鼠模型;在急性BALB/c小鼠模型,血清HBsAg持续时间分别为（3.25±1.04） w,显著短于慢性C57BL/6小鼠组【（10.0±3.74）w,P<0.05）】;在BALB/c小鼠模型,注射2.5 μg病毒质粒小鼠血清HBsAg持续时间为（3.67±1.03） w,显著长于注射50 μg组【（2.33±0.52） w,（P<0.05）】;在高压尾静脉注射后第10 d,BALB/c小鼠脾脏出现了HBcAg特异性T淋巴细胞。结论 成功建立高压尾静脉注射HBV感染小鼠模型,发现宿主遗传背景、免疫应答状态和病毒剂量影响HBV感染小鼠模型的建立。     

Helicobacter suis感染小鼠模型的建立及其意义

目的 建立Helicobacter suis(H. suis)感染小鼠模型并探究其意义。方法 将40只雌性C57BL/6小鼠随机分为模型组和对照组,模型组给予0.5 mL猪胃黏膜匀浆液(经PCR检测确定存在H. suis)灌胃,对照组给予0.5 mL PBS溶液灌胃。灌胃1个月及3个月后,各处死两组中半数小鼠,取其胃黏膜组织,分别行PCR、HE染色检测H. suis在小鼠胃内的定植与胃黏膜淋巴滤泡形成情况。结果 灌胃所用猪胃黏膜匀浆液中存在H. suis;H. suis可以在小鼠胃内定植,并且3个月后仍存在;感染H. suis 1个月及3个月后的小鼠胃黏膜均有淋巴滤泡的形成,并且后者的淋巴滤泡较前者明显增大。结论 成功建立了H. suis感染C57BL/6小鼠模型,H. suis可以诱导胃黏膜淋巴滤泡的形成,可能在胃黏膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤的发生过程中发挥重要作用。     

CXCR3基因敲除小鼠慢性乙型肝炎病毒复制模型的建立

目的建立CXCR3基因敲除小鼠慢性乙型肝炎病毒复制模型。方法繁育CXCR3基因敲除小鼠,并抽提组织DNA进行聚合酶链反应及凝胶电泳鉴定基因型。CXCR3基因敲除小鼠纯合子9只与野生型C57BL/6小鼠9只同时高压水注射pAAV/HBV1.2质粒,按既定时间点采血检测HBsAg、HBeAg、HBV DNA,以及取肝组织行免疫组织化学检测HBcAg表达。结果本实验室繁殖的CXCR3基因敲除小鼠均为纯合子基因型。在pAAV/HBV1.2质粒转染后第1天,CXCR3基因敲除小鼠与野生型C57BL/6小鼠血清HBsAg水平分别为1134.69±244.42和1759.63±881.20(P=0.096);第4天分别为5305.29±1395.06和7493.29±658.63(P=0.003);第15天分别为1615.04±1187.16和1536.19±1046.02(P=0.905);第40天为229.45±79.27和228.19±295.02(P=0.996);第1天血清HBeAg水平分别为6.65±1.50和20.61±4.03(P=0.000);第4天为6.33±1.61和9.79±2.31(P=0.007);第15天为3.52±1.97和2.85±0.74(P=0.425);第40天为1.28±0.06和1.90±1.01(P=0.431);第10天血清HBVDNA水平分别为4.38±0.22 lgcopies/ml和6.56±0.16lgcopies/ml(P=0.008);第15天为4.41±0.88lgcopies/ml和5.69±0.04lgcopies/m(l P=0.177);第25天为4.48±0.04lgcopies/ml和6.44±0.16lgcopies/ml(P=0.004);第40天为3.66±0.45lgcopies/ml和5.20±0.28lgcopies/ml(P=0.055);两组血清HBV DNA持续存在,在转染后第40天仍为阳性。肝组织HBcAg持续阳性,在转染后第4天、15天和40天均呈高表达,但CXCR3基因敲除小鼠肝组织HBcAg表达较低。结论我们成功建立了CXCR3基因敲除小鼠慢性HBV复制模型,可用于进一步研究CXCR3基因及其配体与HBV感染的关系。     

Critical role of myeloperoxidase and nicotinamide adenine dinucleotide phosphate-oxidase in high-burden systemic infection of mice with Candida albicans

Oxygen metabolites generated by myeloperoxidase (MPO) and nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH)-oxidase contribute to microbial killing by phagocytes. To compare the importance of the 2 enzymes for host defense, MPO-deficient (MPO(-/-)) mice and NADPH-oxidase-deficient mice with chronic granulomatous disease (CGD mice) were intraperitoneally infected with 3 different doses of Candida albicans, and their infection severity was analyzed. CGD mice had increased mortality and exhibited increased tissue fungal burden in a dose-dependent manner, whereas normal mice showed no symptoms. Of interest, at the highest dose, the mortality of MPO(-/-) mice was comparable to that of CGD mice, but at the lowest dose, it was the same as that of normal mice. At the middle dose, the number of fungi disseminated into various organs of the MPO(-/-) mice was comparable to that of the CGD mice at day 6 of infection, but it was significantly lower at day 14. These results suggest that MPO and NADPH-oxidase are equally important for early host defense against a large inoculum of Candida.     

Establishment of cytomegaloviral infection in mice: role of a macrophage-enriched subpopulation

The role of a macrophage-enriched subpopulation in acute intraperitoneal infection of mice with cytomegalovirus was investigated. Virus was not detectable in extracellular fluid after the first day, but it could be isolated from peritoneal exudate cells for at least three weeks after infection. The virus was found in adherent and nonadherent cells after plastic-adherence separation. Infection of recipient mice was achieved by adoptive transfer of either subpopulation two or 21 days after infection. Further study of the macrophage-enriched adherent subpopulation revealed no evidence of significant viral replication. Pretreatment of mice to activate macrophages did not impair dissemination of the virus. Thus, cytomegalovirus can infect a subpopulation of cells enriched in macrophages, and although little replication occurs, such infection facilitates the establishment of persistent infection.     

Site-specific integrase-mediated transgenesis in mice via pronuclear injection

Microinjection of recombinant DNA into zygotic pronuclei has been widely used for producing transgenic mice. However, with this method, the insertion site, integrity, and copy number of the transgene cannot be controlled. Here, we present an integrase-based approach to produce transgenic mice via pronuclear injection, whereby an intact single-copy transgene can be inserted into predetermined chromosomal loci with high efficiency (up to 40%), and faithfully transmitted through generations. We show that neighboring transgenic elements and bacterial DNA within the transgene cause profound silencing and expression variability of the transgenic marker. Removal of these undesirable elements leads to global high-level marker expression from transgenes driven by a ubiquitous promoter. We also obtained faithful marker expression from a tissue-specific promoter. The technique presented here will greatly facilitate murine transgenesis and precise structure/function dissection of mammalian gene function and regulation in vivo.     

经口感染弓形虫诱导小鼠黏膜免疫动物模型的建立

目的建立经口感染弓形虫速殖子诱导黏膜免疫的动物模型。方法BALB/c小鼠分别灌胃接种5×103、5×104、5×105、5×106个RH株速殖子,观察小鼠的体况、病理变化;检测肠道分泌型IgA(SIgA)和Peyer’spatches(PP)淋巴细胞及小肠上皮内淋巴细胞(IEL)T细胞亚群的变化。结果经口接种5×104个弓形虫RH株速殖子可使小鼠出现临床症状和病理改变;SIgA水平升高;黏膜诱导部位的CD4 T亚群及效应部位的CD8 T亚群水平升高。结论5×104个弓形虫RH株速殖子灌胃接种小鼠可以诱导机体黏膜免疫应答。     

Establishment of a human acute promyelocytic leukemia-ascites model in SCID mice

Acute promyelocytic leukemia (APL) is an interesting model for cancer research because of the presence of the specific PML-RARalpha fusion gene associated with the clinical response to retinoic acid differentiation therapy. To better understand and improve differentiation induction with retinoic acid, we have established a human APL-ascites model in SCID mice using the NB4 human APL cell line. NB4 (1 x 10(6) cells) were transplanted into the peritoneum (IP) of SCID mice for 1 month. NB4 ascites cells (A-NB4) appeared, which were then engrafted in SCID mice periodically for 18 passages at an interval of 3 to 4 weeks with a 100% success rate of tumor induction. The mean survival times of SCID mice transplanted with 1 x 10(6) A-NB4 cells was 21.6 +/- 2.3 days. Analysis of the biologic characteristics of ninth passage NB4 ascitic cells was performed and they were found to have the morphologic, immunologic, cytogenetic, and molecular features of cultured NB4 cells. Furthermore, A-NB4 cells were capable of differentiating when treated with all-trans retinoic acid (ATRA), as manifested by enhanced NBT reduction and CD11b expression. In vivo treatment with ATRA in SCID mice for 4 days also increased NBT reduction by A-NB4 cells. ATRA treatment significantly prolonged survival time in the group after transplantation (28.1 +/- 6.8 to 29.1 +/- 8.4 days) compared with the control (P < .001). Furthermore, treatment with adriamycin, an effective chemotherapeutic drug in APL, had a strong growth suppressive effect on A-NB4 cells. These results demonstrate that this SCID-APL (NB4 ascites cells) model is a useful preclinical system for evaluating new or known drugs in the treatment of APL.