赤芍总苷诱导肿瘤细胞凋亡机制的研究

目的：采用赤芍总苷（TGC,从赤芍中提取的中药单体）,作用于荷瘤小鼠,较系统对TGC诱导肿瘤细胞凋亡进行观察,为TGC的开发应用提供实验依据.方法：采用SABC免疫组化法检测bcl-2、p16及原位杂交法测定c-myc mRNA表达.结果：瘤鼠造模后,采用赤芍总苷作用,实验组与模型组bcl-2、c-myc阳性表达显著性差异,下调相关基因bcl-2蛋白和c-myc mRNA表达水平,上调相关基因p16蛋白表达水平.结论：赤芍总苷诱导肿瘤细胞凋亡,其机理可能与下调bcl-2和c-myc,上调p16基因蛋白mRNA表达水平密切相关.     

赤芍总苷对荷瘤鼠细胞因子分泌的调节及对bcl-2、p16表达的影响

[目的]通过观察赤芍总苷(TGC)对荷瘤小鼠免疫功能的调节及对肿瘤细胞凋亡的调控,研究TGC抗肿瘤的作用机制.[方法]采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定小鼠外周血白细胞介素-2(IL-2)和白细胞介素-10(IL-10)水平;用免疫组化SABC法检测瘤荷小鼠瘤组织bcl-2和p16的表达.[结果]TGC提高瘤荷小鼠外周血IL-2的分泌,TGC组与荷瘤对照组比较,差异有显著性(P＜0.01);与荷瘤对照组比较,TGC组IL-10分泌显著低于荷瘤对照组(P＜0.01),TGC降低IL-10分泌水平;TGC组与荷瘤对照组比较,bcl-2蛋白阳性细胞数表达均低于荷瘤对照组(P＜0.05),下调bel-2的表达水平,上调p16蛋白表达水平(P＜0.01).[结论]TGC通过调节荷瘤机体异常的免疫状态及诱导肿瘤细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用.     

赤芍总苷非受体依赖途径诱导K562肿瘤细胞凋亡及相关基因变化的实验研究

目的:研究赤芍总苷诱导K562肿瘤细胞凋亡的信号途径及相关基因变化。方法:通过MTT,流式细胞仪,实时定量PCR,Western-blot等方法研究caspase-3 mRNA,caspase-9 mRNA,caspase-8 mRNA,细胞色素C,Bcl-2,Bcl-Xl,Bax蛋白水平的表达。结果:MTT法显示赤芍总苷可抑制K562细胞生长,具有量效-时效关系,caspase-3 mRNA,caspase-9 mRNA增加,细胞色素C含量增加,caspase-8 mRNA无显著变化。调节基因蛋白表达也有所变化,Bcl-2,Bcl-Xl下调,Bax上调。结论:TGC主要通过线粒体途径,当细胞受到死亡信号刺激,与Bcl-2或Bcl-Xl蛋白相结合的Bax蛋白就会被置换出来,线粒体膜通透性增加,释放出一系列物质,导致K562肿瘤细胞凋亡。     

白附子混悬液对荷瘤小鼠p16、bcl-2的表达及端粒酶活性的相关性研究

[目的]探讨白附子混悬液(SGTR)对荷瘤小鼠端粒酶活性的调节及对p16、bcl-2的相关表达的研究。[方法]采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测小鼠血清中端粒酶浓度;用免疫组织化学方法测定H22肿瘤组织中p16和bcl-2蛋白的表达情况来推断SGTR对肿瘤细胞凋亡机制的作用。[结果]SGTR可上调p16蛋白表达水平,差异有统计学意义(P<0.01);下调bcl-2蛋白的表达水平(P<0.01),抑制H22荷瘤小鼠体内端粒酶活性(P<0.01)。[结论]SGTR通过抑制端粒酶活性、下调凋亡基因bcl-2的表达及上调抑癌基因p16的表达从而促进肿瘤细胞凋亡来达到抗肿瘤的作用。     

牡荆苷对人食管癌EC-109细胞生长及凋亡的影响

目的观察金莲花中提取的牡荆苷体外对人食管癌EC-109细胞生长及诱导EC-109细胞凋亡的作用,探讨p53及bcl-2蛋白表达在牡荆苷抗肿瘤细胞机制中的作用。方法用不同浓度牡荆苷作用于对数生长期的EC-109细胞,通过CCK-8法检测其对EC-109细胞体外生长、增殖的抑制作用;Hoechst33258荧光染色观察细胞形态的变化;琼脂糖凝胶电泳检测DNA条带;AnnexinV-FITC/PI双标法流式细胞术观察牡荆苷对EC-109细胞凋亡的诱导作用;流式细胞术检测EC-109细胞中抑癌基因p53和促癌基因bcl-2蛋白的表达。结果牡荆苷对EC-109细胞生长、增殖具有明显的抑制作用,能够诱导EC-109细胞凋亡,且作用与牡荆苷浓度、作用时间呈正相关,可上调p53蛋白表达,下调bcl-2蛋白表达。结论牡荆苷可能通过上调p53蛋白和下调bcl-2蛋白的表达,促进EC-109细胞凋亡,抑制EC-109细胞生长。     

山核桃树枝水煎剂对S_(180)荷瘤小鼠IL-2、IL-17及bcl-2、c-myc表达的影响

目的:探讨山核桃树枝水煎剂(DJM)对荷瘤小鼠免疫功能的调节及对肿瘤细胞凋亡的调控,研究DJM抗肿瘤的作用机制。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)的方法检测荷瘤小鼠血清IL-2和IL-17的水平,应用免疫组化方法测定肿瘤组织中bcl-2、c-myc基因蛋白相关性表达。结果:DJM能够提高荷瘤小鼠血清IL-2水平,降低IL-17水平;下调肿瘤组织中bcl-2、c-myc蛋白表达。结论:DJM通过调节荷瘤机体异常的免疫状态及诱导肿瘤细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用。     

益气健脾中药对血管平滑肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的：探讨益气健脾中药血清体外诱导血管平滑肌细胞凋亡的作用及其分子机制。方法：采用缺口末端标记（terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nicked labeling,TUNEL)分析、透射电镜、流式细胞仪分析、DNA电泳分析检测细胞凋亡；应用Northern印迹检测bcl-2、c-myc和p53基因表达活性。结果：经中药血清处理的血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell,VSMC)，可出现典型的凋亡特征，DNA电泳呈梯状图谱；流式细胞仪分析显示G0／G1期细胞阻滞现象，亚二倍体凋亡细胞增多，出现典型的凋亡峰，细胞凋亡率与中药血清浓度具有量效关系。杂交结果提示，30％中药血清可抑制抗凋亡基因bcl-2的表达，上调促凋亡基因c-myc和p3 mRNA水平。结论：益气健脾中药通过影响凋亡相关基因bcl-2、c-myc和p53的表达活性而诱导VSMC凋亡。     

牛蒡子苷元对体外C6胶质瘤细胞的抑制效果和凋亡机制

目的:探讨牛蒡子苷元对体外C6胶质瘤细胞的抑制效果和凋亡机制。方法:将牛蒡子苷元作用于C6胶质瘤细胞,采用CCK-8法测定各组细胞的生长抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡情况;酶联免疫吸附试验检测TNF-α、IL-2的水平;Western blot检测Bax、Bcl-2、NF-кB蛋白表达水平。结果:与空白组比较,牛蒡子苷元组(2.5～40μmol/L)显著抑制C6胶质瘤细胞生长,诱导肿瘤细胞凋亡,其诱导效应具有浓度依赖性;牛蒡子苷元处理后,细胞中TNF-α、IL-2水平增加;牛蒡子苷元可以显著上调Bax蛋白表达,下调Bcl-2、NF-кb蛋白表达。结论:牛蒡子苷元可以促进C6胶质瘤细胞凋亡,可能是通过增强TNF-α、IL-2水平及上调Bax蛋白、下调Bcl-2、NF-кB蛋白水平而诱导肿瘤细胞凋亡。     

赤芍总苷对HepA肝癌小鼠肿瘤细胞凋亡的影响

目的探讨赤芍总苷对HepA肝癌小鼠肿瘤生长及肿瘤细胞凋亡的影响及其机制。方法60只健康昆明小鼠,随机分5组,分别为模型组,环磷酰胺(100mg/kg)组,赤芍总苷(240、120mg/kg)组,环磷酰胺(100mg/kg) 赤芍总苷(240mg/kg)组。复制小鼠HepA肝癌皮下移植模型后,第2天ig给药,连续给药7d,第8天处死,取肿瘤组织,计算抑瘤率,流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡率和分析细胞周期,以及免疫组化法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。结果赤芍总苷高、低剂量明显抑制HepA肝癌小鼠肿瘤的生长;肿瘤细胞凋亡指数增加;抑制肿瘤细胞G0/G1期比例,向S期细胞转化,凋亡率增高;下调肿瘤细胞中Bcl-2蛋白的表达,同时明显提高肿瘤细胞中Bax蛋白的表达。结论赤芍总苷对HepA肝癌小鼠肿瘤生长有明显抑制作用,并诱导肿瘤细胞凋亡,其主要机制与调节Bcl-2和Bax蛋白表达有关。     

芒果苷诱导白血病K562细胞凋亡机制的研究

目的研究芒果苷诱导慢粒白血病细胞系K562细胞凋亡的机制。方法采用RT-PCR检测芒果苷(25~200μmol/L)处理(24、48、72、96h)后K562细胞中bcl-2 mRNA、bax mRNA、survivin mRNA基因表达变化;采用Western blotting方法检测K562细胞BCR/ABL融合蛋白质P210水平。结果芒果苷作用K562细胞后,P210蛋白质水平下调,并呈时间及剂量依赖性,bax基因表达显著上调,bcl-2基因表达轻度下调,survivin mRNA基因表达下调。结论芒果苷诱导K562细胞凋亡的机制可能是通过下调BCR/ABL融合蛋白质P210、bcl-2和sur-vivin mRNA基因表达及上调bax基因表达来实现的。     

龟鹿二仙胶抵抗化疗小鼠脾T淋巴细胞凋亡的实验研究

目的 探讨龟鹿二仙胶对化疗小鼠的抗凋亡作用及作用机理。方法 将荷瘤昆明种小鼠72只随机分为环磷酰胺（CTX）加龟鹿二仙胶高、中、低3个剂量组,CTX组,单纯中药组,生理盐水组6组。给药9天后处死小鼠取脾组织,采用流式细胞仪检测T淋巴细胞凋亡;RT PCR法检测bcl 2、Caspase 3 mRNA的表达。结果 CTX组荧光素标记的膜联蛋白阳性（FITC+Annexin V）/碘化丙啶(PI)染色阴性比例（FITC+/ PI－）T细胞较生理盐水组增高,差异有统计学意义（P<0.05）;CTX加用龟鹿二仙胶的3个剂量组FITC+/ PI－T细胞比例较CTX组明显降低（P<0.05）。CTX组bcl 2 mRNA表达量较生理盐水组减少（P<0.05）;CTX加用龟鹿二仙胶的3个剂量组其表达量较CTX组明显升高（P<0.05）。Caspase-3 mRNA表达量CTX组升高（P<0.05）;CTX加用龟鹿二仙胶的3个剂量组表达量较CTX组明显减少。结论 龟鹿二仙胶能有效抑制化疗小鼠淋巴细胞凋亡。上调bcl-2 mRNA表达、下调Caspase-3mRNA表达可能是其作用机理之一。     

心脑宁诱导增生VSMC凋亡及对相关基因表达的影响

目的 :探讨活血化瘀中药血清体外诱导增生血管平滑肌细胞凋亡的作用及其分子机制。方法 :采用流式细胞仪分析 ,DNA电泳分析检测细胞凋亡 ;应用Northen印迹检测bcl- 2、c-myc基因表达活性。结果 :经中药血清处理的血管平滑肌细胞 (vascularsmoothmuclecell,VSMC) ,可出现典型的凋亡特征 ,DNA电泳呈梯状图谱 ;流式细胞仪分析显示G0 /G1期细胞阻滞现象 ,亚二倍体凋亡细胞增多 ,出现典型的凋亡峰 ,细胞凋亡率与中药血清浓度具有量效关系。杂交结果提示 ,2 0 %中药血清可抑制抗凋亡基因bcl- 2的表达 ,上调促凋亡基因c -myc的mR NA水平。结论 :活血化瘀中药可通过影响凋亡相关基因bcl- 2、c -myc的表达活性而诱导VSMC凋亡。     

调心方有效部位对类AD大鼠脑组织凋亡信号转导分子Caspase-3及凋亡相关基因bcl-2、bax mRNA表达的影响

目的研究调心方有效部位（TX0201）对Aβ25-35所致类AD模型大鼠脑组织凋亡相关基因调节作用机制的异同。方法采用双侧杏仁核注射Aβ25-35造成类AD大鼠模型,观察大鼠Morris水迷宫空间记忆能力,并分别通过RTPCR和免疫组化方法研究类AD大鼠神经元细胞凋亡相关基因bax、bcl-2 mRNA,特异的凋亡信号转导分子Caspase-3和A8阳性神经元变化以及TX0201的影响。结果类AD模型大鼠Morris水迷宫测试出现空间记忆能力下降,App695 mRNA表达提高,Caspase-3和bax／bcl-2上升。TX0201能有效控制以上病理变化。结论TX0201提高模型大鼠定向学习记忆能力,可能通过降低bax／bcl-2、下调Caspase-3而减轻神经细胞凋亡而发挥作用。提示通过有效调节神经元凋亡相关基因是TX0201的重要作用机制之一。     

清热祛湿益气方对肝损伤细胞凋亡相关蛋白表达的影响

目的 观察清热祛湿益气方对刀豆蛋白A(ConA)诱导的急性肝损伤模型小鼠肝细胞凋亡相关蛋白表达的影响.方法 Balb/c雄性小鼠50只,随机分为空白组,模型组,清热祛湿益气方低、中、高剂量组,每组10只,连续灌胃7天.采用Con A诱导复制小鼠急性肝损伤病理模型,观察不同剂量清热祛湿益气方(7.5g/kg、10.0g/kg、12.5g/kg)对肝细胞Bax、Bcl一2以及Caspase-3 mRNA表达的影响.结果 与模型组比较,清热祛湿益气方不同剂量可下调模型小鼠肝组织Bax、Caspase-3 mRNA的表达,并可上调Bcl-2的表达(P＜0.05),随剂量增大,Bcl-2阳性率分别为17.56%、18.28%、26.36%.结论 清热祛湿益气方可抑制肝细胞凋亡,对Con A诱导的急性肝损伤具有治疗作用.     

黄芪甲甙保护阿霉素心肌损伤大鼠抗凋亡作用的机制研究

目的 探讨黄芪甲甙（简称黄芪）抗阿霉素所致心肌细胞凋亡的可能机制。方法 取SD大鼠随机分为空白组、模型组、黄芪3个剂量（低、中、高）组。空白组腹腔注射生理盐水,余4组分别给予阿霉素造模（15mg／kg,隔日腹腔注射1次,共6次）。黄芪3个剂量组同时用不同剂量黄芪甲甙灌胃治疗,空白组和模型组同时给予羧甲基纤维素钠。采用原位缺口末端标记法（TUNEL）检测心肌细胞凋亡。细胞免疫组织化学检测bcl-2、bax蛋白的表达;逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测bcl-2、bax基因的表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠心肌细胞凋亡发生率增高（P〈0．01）,抑制凋亡因子bcl-2基因及蛋白表达下降（P〈0．01）,而促进凋亡因子bax基因及蛋白表达增强（P〈0．01）,bcl-2／baxmRNA比值降低（P〈0．05）。与模型组比较,黄芪高剂量组大鼠心肌细胞的凋亡率显著下降（P〈0．05）,bcl-2基因及蛋白水平表达增强（P〈0．05）,bax基因及蛋白水平表达下降（P〈0．05）,bcl-2／baxmRNA比值明显上升（P〈0．05）。结论 高剂量黄芪甲甙治疗可以抑制阿霉素所致大鼠心肌细胞凋亡,其作用机制可能与凋亡基因bcl-2表达有关。     

仙人掌对辐射小鼠bcl-2和p53基因表达影响

目的测定仙人掌对辐射小鼠bcl-2与p53基因表达影响。方法以UVB辐照制备损伤模型,预先给予仙人掌,以RT-PCR测定仙人掌对辐射小鼠bcl-2与p53基因表达量的影响。结果仙人掌对辐射小鼠bcl-2的基因表达降低有保护作用,使辐射后p53基因表达降低。结论仙人掌具有一定的防辐射作用。其抗辐射作用与其调控细胞bc1-2与p53基因有关。