补肾活血汤提取物促进大鼠骨髓间充质干细胞增殖的研究

【目的】筛选出补肾活血汤促进骨髓间充质干细胞增殖的有效部位。【方法】补肾活血汤（全方组）及其拆方（补肾组、活血组）分别用溶剂极性递增法提取得石油醚、乙酸乙酯、无水乙醇以及水4个部位。骨髓间充质干细胞采用全骨髓贴壁法培养,传至第3代采用表面抗原鉴定,成骨、成脂分化鉴定。将上述补肾活血汤提取物按浓度梯度处理细胞24 h,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活性,筛选出最有效部位及其最佳浓度。用补肾活血汤最有效部位处理细胞, MTT法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞周期。【结果】与空白对照组比较,补肾活血汤及其拆方均具有不同程度维持细胞活性的作用。其中以补肾组乙酸乙酯部位、全方组乙酸乙酯部位及活血组乙酸乙酯部位最为有效,且呈一定的药物浓度依赖性,100μg/mL为最佳药物浓度,并未出现细胞毒性反应。细胞生长曲线显示：补肾活血汤有效部位处理细胞后,细胞增殖速度与数量较对照组更为明显,以补肾组最有效,全方组次之。流式细胞仪检测细胞周期结果显示：补肾活血汤有效部位处理细胞后,处于增殖期细胞数量明显多于空白对照组,以补肾组最有效,全方组次之。【结论】补肾活血汤促进骨髓间充质干细胞增殖的有效部位在补肾组乙酸乙酯部位,可使骨髓间充质干细胞处于增殖期细胞数目增多。     

孤啡肽对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的 观察孤啡肽(OFQ)对大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)增殖的影响.方法 Percoll法分离大鼠骨髓间充质干细胞,传2代后分别在含有浓度为0、10-13、10-12、10-11、10-10、10-9、10-8和10-7 mol/L的OFQ培养基中继续培养,MTT法测定细胞活性.结果 当OFQ浓度小于10-11 mol/L时,OD值随着浓度的增大而增大,而当OFQ浓度大于10-11mol/L时,OD值随着浓度的增大而减小.结论 适当浓度的孤啡肽可促进大鼠骨髓间充质干细胞的增殖.     

骨髓间充质干细胞对HepG2肝癌细胞增殖的影响

目的:观察大鼠骨髓间充质干细胞对HepG2肝癌细胞增殖的影响,并初步探讨其机制?方法:全骨髓贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,流式细胞术鉴定其分子表面标志,体外扩增培养并收集培养上清?MTT法?平板克隆实验及软琼脂克隆实验检测大鼠间充质干细胞对人肝癌细胞株HepG2增殖的影响,流式细胞术检测肝癌细胞周期的改变,Western blot法检测细胞周期相关蛋白Cyclin D1表达情况?结果:骨髓间充质干细胞CD105和CD90表达阳性,CD34和CD45表达阴性?在骨髓间充质干细胞培养上清作用下,MTT法显示实验组肝癌细胞光密度值增加(P < 0.05),平板克隆法显示实验组肝癌细胞克隆形成率比对照组明显升高(P < 0.05),软琼脂克隆法显示实验组肝癌细胞空间克隆形成率比对照组明显升高(P < 0.05),流式细胞术显示实验组细胞周期G1期比例降低,S期?G2期比例增加?Western blot显示实验组细胞Cyclin D1表达量增加(P < 0.05)?结论:骨髓间充质干细胞可促进HepG2肝癌细胞的增殖及空间克隆形成能力,其促进肝癌细胞体外增殖可能与Cyclin D1表达上调有关?     

脉冲电磁场对大鼠骨髓间充质干细胞的影响

目的 探讨不同场强、频率的脉冲电磁场对大鼠骨髓间充质干细胞影响。方法 用全骨髓贴壁法分离大鼠骨髓间充质干细胞，对生长良好的第三代细胞进行不同场强、不同步率的脉冲电磁场刺激，MTT法则定细胞增殖水平，流式细胞仪法测定细胞周期变化。结果 大鼠骨髓间充质干细胞经脉冲电磁场刺激5d（1次／1d，每次3h）后，各实验组细胞增殖水平和（S＋G2／M）期细胞数量均有不同程度提高，差异有显著性意义（p〈0．05）。结论 大鼠骨髓间充质干细胞经脉冲电磁场刺激后，能促进体外培养该细胞的增殖水平，磁场参数对实验结果有影响。     

依地福新抑制Jurkat细胞生长机制的研究

目的 观察依地福新对体外培养的Jurkat细胞的生长抑制作用,并进一步探讨其作用机制.方法 应用MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞仪检测细胞周期分布;Annexin V-FITC染色法检测细胞凋亡率.结果 不同浓度依地福新处理Jurkat细胞24-96 h后,细胞增殖显著受到抑制,并呈现浓度及时间依赖性;1.0 μmol/L、5.0 μmol/L、10.0μmol/L依地福新处理72 h后,Jurkat细胞G0/G1期细胞数量显著增加,S期细胞数量显著降低(P<0.01);各浓度组细胞凋亡率均显著增加(P<0.01).结论 依地福新对Jurkat细胞具有生长抑制作用,其机制与阻滞细胞周期及诱导凋亡有关.     

促红细胞生成素对大鼠骨髓间充质干细胞增殖和细胞周期的影响

目的:观察促红细胞生成素(eryrthropoietin,EP)对大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)增殖和细胞周期的影响.方法:无血清条件下,不同剂量(0,0.25,0.5,1,2,10 U/ml)EP与MSCs共培养24 h,MTT方法检测MSC增殖情况;10 U/ml EP与MSCs共培养72 h后,流式细胞仪检测细胞周期情况.结果:MTT结果表明,EP呈剂量依赖性促进MSCs增殖,除0.25 U/ml剂量外,其余各组都与对照组有显著性差异,以10 U/ml EP促MSCs增殖作用最明显.流式细胞检测表明,EP组能降低G0/G1期比例,增加S期和G2/M期细胞比例,与对照组相比,差异均有显著性意义(P＜0.05).结论:EP可以促进骨髓间充质干细胞增殖,并且这种影响呈剂量依赖性.     

维甲酸对间充质干细胞粘附功能的影响

目的：探讨体外维甲酸对入骨髓间充质干细胞枯附功能的影响。方法：用流式细胞术方法检测0．01、0．1、1．0和10．0μmol／L维甲酸处理后入骨髓间充质干细胞粘附分子CD54的表达,采用MTT法测量细胞生长曲线。结果：0．01、0．1、1．0和10．0μmol/l的维甲酸能增加入骨髓间充质干细胞上CD54的表达。结论：维甲酸对入骨髓间充质干细胞的上调CD54作用有浓度和时间效应。     

黄芪多糖对人骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的探讨黄芪多糖(APS)对人骨髓间充质干细胞(MSC)增殖的影响。方法采用密度梯度离心法分离人MSC,分别采用四氮唑兰盐(MTT)法、细胞流式术检测不同浓度APS对MSC的细胞增殖、细胞周期的影响,RT-Real Time PCR测定不同浓度APS对MSC表达干细胞生长因子(SCF)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)mRNA水平的影响。结果成功分离得到MSC,不同质量浓度APS可促进MSC增殖(P<0.05),其中1 mg/mL APS的作用最为明显。对照组MSC基本都处于静止期,不同质量浓度APS处理的MSC处于S期及G2/M期细胞比例较对照组明显增高(P<0.05),且APS可显著上调MSC对SCF,VEGF mRNA的表达(P<0.05或P<0.01)。结论黄芪多糖可促进人骨髓间充质干细胞增殖,并显著上调SCF,VEGFmRNA的表达。     

SIS镁合金可吸收胆管支架治疗恶性梗阻性黄疸疗效分析

【摘要】目的 探讨骨化三醇对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)诱导的大鼠心肌间质成纤维细胞增殖及其机制。方法 体外培养大鼠心肌间质成纤维细胞,分别以终浓度为10.6mol/L AngII和（或）终浓度为10.6mol/L、10.7mol/L、10.8 mol/L的骨化三醇进行干扰（骨化三醇组），对照组则在心肌间质成纤维细胞培养液中不加入干扰因素。WST1法检测心肌间质成纤维细胞数目；流式细胞仪检测细胞周期。结果 骨化三醇能抑制基础和AngII刺激状态下的大鼠心肌间质成纤维细胞增殖，经不同浓度的骨化三醇（10.6mol/L、10.7mol/L、10.8mol/L）作用48小时后，细胞G1期细胞较AngII组明显增加，分别为22.%、13%、11%（P均<0.05），并在10.6 mol/L、10.7mol/L、10.8 mol/L范围内呈浓度依赖性显著降低。结论 骨化三醇通过使大鼠心肌间质成纤维细胞停滞在G1期而达到抑制细胞的活化及增殖具有抗心肌间质成纤维细胞转分化的潜在作用。     

二烯丙基二硫对人胃癌SGC7901细胞增殖及周期的影响

目的探讨二烯丙基二硫(DADS)对人胃癌SGC7901细胞增殖及周期分布的影响。方法体外培养SGC7901细胞,采用MTT比色实验、细胞计数法和流式细胞术分析DADS对SGC7901细胞增殖的抑制作用与对细胞周期分布的影响。结果MTT法显示,不同浓度DADS(50、100、150、200、250μmol/L)处理SGC7901细胞96 h后,生长抑制率分别为21.07%、49.96%、59.73%、67.64%、70.49%,DADS抑制作用随浓度增加逐渐增强(P<0.05)。细胞计数法表明:常规培养的SGC7901细胞群体倍增时间分别为24.35 h,当DADS浓度由50μmol/L增加到200μmol/L时,其细胞群体倍增时间由27.28 h增加到71.98 h(P<0.05)。流式细胞仪分析发现,50、100和200μmol/L DADS呈浓度依赖性将SGC7901细胞阻滞在G2/M期。结论DADS具有抑制人胃癌SGC7901细胞增殖的作用,且其抑制增殖作用与G2/M期阻滞有关。