补肾活血中药含药血清对滑膜细胞分泌TNF-α、IL-1β水平的影响

目的:探讨补肾活血中药是否可以抑制兔滑膜细胞分泌TNF-α、IL-1β等炎性因子。方法:制作补肾活血方含药血清,体外分离并培养兔滑膜细胞,并鉴定、传代。实验分含空白血清对照组、含10%西乐葆血清组、含5%、10%、20%中药血清组等5组。以西乐葆含药血清作为对照,将不同浓度的中西药血清加入培养传代的第3代滑膜细胞,继续培养。观察药物对滑膜细胞分泌TNF-α、IL-1β水平的影响。结果:补肾活血方含药血清具有和西乐葆含药血清类似的抑制滑膜细胞分泌TNF-α、IL-1β的作用,其抑制TNF-α分泌的作用随药物浓度的增加作用增强。结论:补肾活血中药可抑制滑膜细胞分泌TNF-α、IL-1β等炎性因子。     

类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖及巨自噬的表达水平

目的:探讨体外原代培养的类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RA-FLS)中是否存在巨自噬现象以及在类风湿关节炎(RA)中的发病机制.方法:培养原代RA-FLS,以骨关节炎(OA)患者膝关节滑膜组织中培养的骨关节炎滑膜成纤维细胞(OA-FLS)作为对照组.采用MTT法检测细胞增殖活力;流式细胞仪检测细胞凋亡;采用实时荧光定量聚...     

强直性脊柱炎滑膜细胞培养上清液对韧带成纤维细胞成骨分化的影响

目的探讨强直性脊柱炎（AS）滑膜细胞培养上清液对韧带成纤维细胞成骨分化的影响。方法分别进行AS患者滑膜和韧带成纤维细胞原代培养,收集第1代的滑膜细胞培养液上清液,应用此上清液对韧带成纤维细胞进行诱导,分别于0、5、10、15、20d检测碱性磷酸酶和骨钙素表达水平,并于25d时进行钙结节染色。结果在应用AS滑膜细胞培养上清液对韧带成纤维细胞进行诱导的第10天,碱性磷酸酶（ALP）和骨钙素（OC）表达水平明显升高,并在第15天达到高峰。第25天时进行钙结节VonKossa染色,发现有钙结节形成。结论 AS滑膜细胞培养上清液对韧带成纤维细胞具有成骨诱导分化的能力。     

Decorin对人僵直膝关节滑膜囊成纤维样滑膜细胞增殖及蛋白合成的抑制作用

[目的]探讨重组核心蛋白多糖(decorin)对培养的人僵直膝关节滑膜成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)的增殖和Ⅰ型胶原蛋白及mRNA合成的影响,为Decorin治疗人膝关节僵直提供理论依据。[方法]分离培养人僵直膝关节滑膜FLS,分别加入不同质量浓度(10μg/ml,0.1μg/ml)的Decorin;培养24、48、72h后用二甲基噻唑二苯基四唑溴盐(MTT)法测定FLS的增殖速度;用流式细胞仪检测FLS的周期和凋亡;用RTPCR法检测FLS合成Ⅰ型前胶原蛋白(PcⅠ)mRNA的含量,westem Blot检测Ⅰ型胶原蛋白的合成量,并与对照组比较。[结果]10μg/ml的Decorin可有效抑制滑膜FLS的增殖(P0.05),明显增加FLS处于G0/G1期的百分比(P0.05),并通过下调PcⅠmRNA的表达,在转录水平上抑制PcⅠ的合成;实验组和对照组均未检测到终末期凋亡细胞。[结论]Decorin可抑制人僵直膝关节滑膜FLS的增殖及PcⅠmRNA的表达和Ⅰ型胶原蛋白合成,在防治膝关节僵直中起一定的作用。     

复方补肾活血颗粒含药血清通过Trb3调控hBMSCs成骨成脂分化

目的 研究复方补肾活血颗粒含药血清通过Trb3调节人骨髓间充质干细胞(human bone mesenchymal stem cells, hBMSCs)成骨/成脂分化。方法 不同浓度复方补肾活血颗粒含药血清干预hBMSCs,通过CCK8法检测细胞活力,ALP活性、茜素红染色观察hBMSCs成骨分化,油红O染色鉴定脂肪分化。Western blot检测成骨/成脂标志物蛋白表达。Western blot和qPCR检测Trb3蛋白和基因表达。Trb3 siRNA转染hBMSCs后通过Western blot观察成骨成脂相关因子蛋白表达情况。结果复方补肾活血颗粒含药血清以浓度依赖性促进hBMSCs增殖。复方补肾活血颗粒含药血清增强hBMSCs中ALP活性及矿化结节,上调Runx2、Osterix蛋白表达并抑制PPARγ、FABP4蛋白表达和脂质积累。机制研究发现,复方补肾活血颗粒含药血清促进Trb3表达,当内源性Trb3敲低时,逆转了复方补肾活血颗粒含药血清促进成骨分化抑制脂肪分化的作用。结论 复方补肾活血颗粒含药血清通过Trb3以牺牲脂肪分化为代价,促进hBMSCs成骨分化。     

不同表皮对成纤维细胞增殖及胶原含量的影响

目的 了解不同表皮对成纤维细胞（Fb）增殖的影响，并探寻其机制。方法 将10例增生期瘢痕患者自身的正常皮肤Fb＋正常表皮、瘢痕Fb＋瘢痕表皮进行非接触性共同培养，另培养不加表皮的瘢痕Fb，将这3个培养体系依次设为A、B、C组；另将10例成熟期瘢痕患者的皮肤同法培养，也建立3个培养体系依次为D、E、F组。检测各组Fb培养72h后的细胞数量、培养上清液中I型与Ⅲ型胶原含量及其比值的变化。结果 C组与A组、F组与D组比较，均表现为细胞数显著升高，培养上清液中I、Ⅲ型胶原含量上升，I型与Ⅲ型胶原比值下降（P〈0．05）；B组与C组比较，培养上清液中Ⅲ型胶原含量增高，I型与Ⅲ型胶原的比值下降（P〈0．05），细胞数和I型胶原含量两组相近；E组与F组比较，细胞数显著降低且上清液中I、Ⅲ型胶原含量下降（P〈0．05），两者比值无明显变化。B组与A组、E组与D组比较，细胞数及I、Ⅲ型胶原含量均显著增高（P〈0．05），I型与Ⅲ型胶原的比值均显著下降（A、B组为2．20±0．27、1．16±0．21，D、E组为2．18±0．14、1．93±0．26，P〈0．05）。结论 正常表皮可能通过产生某些活性物质调节Fb增殖及胶原合成，在防止瘢痕增生中发挥重要作用。     

纤维结合蛋白诱导下成纤维细胞增殖与成骨活性表达的研究

[背景]探讨纤维结合蛋白(fibronectin,FN)诱导下的成纤维细胞(fibroblast,FB)增殖与成骨活性,以及它们之间可能存在的剂量依赖关系.[方法]以组织块粘附法获得FB,经不同浓度FN(10,20,40,60,80μg/ml)诱导培养14 d.设立空白对照组(FN 0 μg/ml),以3H胸腺嘧啶脱氧核苷掺入试验、3H脯氨酸掺入试验分别检测细胞DNA、胶原合成含量,以四环素标记矿化结节,以123Ⅰ标记竞争免疫分析法检测细胞上清液中骨钙素合成量.[结果]FN诱导下,FB DNA与胶原合成含量显著增加,具有统计学意义(P＜0.05),其中以FN40μg/ml组最为明显(P＜0.05).与其他各组比较,FN 40 μg/ml组骨钙素含量显著增加,具有统计学意义(P＜0.05).经四环素标记,诱导培养的FB形成矿化结节,在荧光显微镜下呈现金黄色的小梁样结构.[结论]FN诱导下,FB具有显著的增殖与成骨活性,而且与FN剂量相关.FB可能具有原位多能干细胞潜能,有望成为组织工程学研究中的种子细胞.     

类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞体外增殖活性的研究

目的研究类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)的体外增殖活性。方法收集行关节腔镜术或关节置换术的RA、骨关节炎(OA)、关节创伤患者的膝关节滑膜组织标本各3例,应用酶消化法进行FLS的分离培养,采用MTT法比较三种来源细胞的体外增殖活性。结果 RA-FLS在体外培养第3、4、5天时OD值较OA、关节创伤来源者增高(P值均小于0.05)。结论 RA-FLS细胞增殖程度较OA、关节创伤来源者增高。     

川芎嗪对成纤维细胞增殖及TGF-β1和bFGF表达的影响

目的:研究川芎嗪对体外培养大鼠成纤维细胞增殖及碱性成纤维细胞因子(Basic fibroblast growth factor,bFGF)、转化生长因子β1(Transforming growth factorβ1,TGF-β1)表达的影响,从而探讨川芎嗪抑制瘢痕形成的作用机制.方法:体外分离培养大鼠皮肤成纤维细胞,采...     

强脉冲光对成纤维细胞增殖与周期的影响

目的:研究强脉冲光对正常离体人皮肤成纤维细胞(fibroblast,FB)的生长活力、细胞增殖能力以及细胞周期变化的影响并探讨其可能的发生机制,为强脉冲光除皱提供可能的理论依据。方法:培养人皮肤成纤维细胞,应用MTT比色法、免疫组织化学的方法和流式细胞仪(FCN)分析技术,观察皮肤成纤维细胞经不同能量的强脉冲光照射后细胞的生长活力、细胞增殖能力以及细胞周期变化。结果:强脉冲光能促进体外培养人皮肤成纤维细胞增殖,FCN结果显示强脉冲光照射后,成纤维细胞G1期百分比降低,而S期百分比升高,增殖指数PrI值(S G2M)百分比增高。结论:强脉冲光可促进正常成纤维细胞增殖和DNA合成,从而为强脉冲光面部美容除皱供理论依据。     

正常皮肤提取物对成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的 探讨自体成纤维细胞注射移植后是否出现过度增殖和胶原异常分泌.方法 按照Engel-Catchpole程序制备正常皮肤提取物,在浓度分别为0.0625、0.1250、0.2500、0.5000、1.0000 mg/mlDMEM培养基下,观察对正常成纤维细胞增殖和胶原合成的影响.结果 正常皮肤提取物抑制正常皮肤成纤维细胞的增殖,细胞外胶原的分泌也受一定的影响,受抑制的程度与培养基中皮肤提取物的浓度呈正相关.结论 正常皮肤内存在成纤维细胞增殖和胶原分泌功能的负调节机制,有可能在进行自体成纤维细胞注射移植时发挥作用.     

MTT法检测国产PGA支架对人成纤维细胞增殖的影响

目的 检测国产PGA支架对瘢痕、皮肤和肌腱成纤维细胞增殖的影响.方法 体外培养人瘢痕、皮肤和肌腱成纤维细胞,取第二代细胞接种到96 孔板,以不同浓度的国产PGA支架浸提液培养,用MTT法检测成纤维细胞在国产PGA上的增殖情况.结果 不同浸提液培养的瘢痕、皮肤和肌腱成纤维细胞的生长曲线均无明显差异.结论 国产PGA支架对瘢痕、皮肤和肌腱成纤维细胞的增殖无明显影响,该材料可以用于以成纤维细胞为种子的组织构建.     

几丁聚糖和透明质酸钠对成纤维细胞增殖影响的实验研究

目的：比较几丁聚糖和透明质酸钠对成纤维细胞增殖的影响。方法：用含不同浓度的几丁聚糖和透明质酸钠的培养液培养成纤维细胞，以四唑盐比色法测细胞增殖，并用流式细胞仪测细胞周期。结果：几丁聚糖在≥0.1mg/ml时即对成纤维细胞的增殖有抑制作用，透明质酸钠的抑制浓度为1mg/ml，透明质酸钠和几丁聚糖都可使细胞周期中G1期比例增加。结论：几丁聚糖和透明质酸钠均抑制成纤维细胞的增殖，但几丁聚糖的抑制作用较强。     

血竭素高氯酸盐对成纤维细胞增殖与成纤维细胞生长因子mRNA表达的影响

目的 观察血竭素高氯酸盐(Dp)对人皮肤成纤维细胞(Fb)生物学特性的影响,探讨其促进创而愈合的机制.方法 分离培养人正常Fb,将Dp以不同浓度(0.063、0.125、0.250、0.625、1.250、2.500 mg/L)分别加入培养液,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测Dp在不同浓度以及不同时间点对体外培养的Fb增殖作用的影响.通过流式细胞仪,实时荧光定量聚合酶链式反应( real-time PCR)分别检测最适浓度培养条件下Fb的细胞周期变化以及成纤维细胞生长因子(FGF) mRNA的合成表达.结果 Dp在0.625～1.250 mg/L浓度范围内,其吸光度值(0.237±0.012、0.243±0.017)均高于对照组(0.208±0.011)差异有统计学意义(t值分别为2.11、2.23,P＜0.05),此浓度范围可促进Fb增殖,且呈剂量依赖性,在浓度为1.250 mg/L时(A值0.243±0.017),促增殖作用最为显著(t =2.23,P＜0.01),流式细胞仪结果显示,在浓度为1.250 mg/L时,Dp可明显促进Fb通过G1/S及S/G2期限制点,S期及G2/M期细胞与对照组比较明显增多,G0/G1期细胞与对照组比较明显减少(t值分别为4.32、7.53、3.27,P＜0.05).细胞因子mRNA表达测定中,1.250 mg/L Dp组与对照组比较表达明显上调,差异亦有统计学意义(=1.48,p＜0.05).结论 Dp能显著促进Fb增殖,加快Fb周期进程,同时可促进FGF的mRNA表达,可能与血竭促进创面愈合的机制有关.     

血竭提取物对成纤维细胞增殖及合成透明质酸的影响

目的 研究血竭提取物对成纤维细胞生物学作用的影响.方法 将血竭经过氯仿、乙酸乙酯、乙醇依次回流提取分别得到3种血竭提取液,培养液稀释后行成纤维细胞培养.噻唑蓝法MTT检测浓度分别为0.002、0.02、0.2、2、20 mg/ml的血竭提取物,在0、12、24、36、48、60、72h7个检测点对体外培养成纤维细胞增殖的影响,并绘制最适浓度下细胞生长曲线.流式细胞术FCM分析最适浓度培养下成纤维细胞的细胞周期变化.应用放射免疫分析法检测0、12、24、36、48、60、72 h细胞培养上清液中透明质酸(hyaluronic acid,HA)含量.结果 血竭乙酸乙酯提取物在0.2～2 mg/ml浓度范围内,促进成纤维细胞增殖,且呈浓度依赖性,在2 mg/ml浓度值时促进作用最显著,处于S期的细胞[(25.80±3.10)％]较对照组[(7.50±0.70)％]显著增加(P＜0.01),在此条件下培养成纤维细胞,12～72 h实验组分泌量逐渐增加,但较对照组偏低,组间比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 血竭乙酸乙酯提取物具有显著促进成纤维细胞增殖作用,可能是血竭促进创面愈合的机制之一.     

自制中药提取物对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响

目的：探讨自制中药提取物对人瘢痕疙瘩成纤维细胞（KFB）增殖的影响。方法：在体外培养的人KFB、正常皮肤成纤维细胞（NFB）培养液中加入不同浓度的自制中药水提物、醇提物,采用倒置显微镜、CCK-8试剂盒及生化分析仪对成纤维细胞的形态、增殖活性、生长状况及乳酸脱氢酶（LDH）活性进行观察与测定。结果：在一定浓度中药提取物的作用下,KFB形态发生改变,增殖活性降低,LDH活性增高;其中醇提物抑制KFB增殖较水提物更有效,KFB对中药的抑制反应比NFB更敏感。结论：自制中药可能通过抑制KFB增殖、细胞毒性作用等而发挥治疗瘢痕疙瘩的作用。     

苦参碱对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响

目的：探讨苦参碱（Matrine,简称Mat）的药理活性,研究苦参碱对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的抑制作用,为皮肤损伤后出现的增生性瘢痕的治疗提供理论支持及实验依据。方法：将不同浓度梯度Mat作用于体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞,测MTT反应的A。值及LDH值,利用通过流式细胞仪检测其细胞周期、DNA相对含量,用免疫组织化学检测Mat用药前后的细胞核内增殖性抗原（pr01iferatingcell nuclear antigen,PCNA）的表达。结果：增生性瘢痕成纤维细胞在一定范围内呈剂量依赖性增殖抑制,但LDH值无明显改变;DNA相对含量无明显变化,PCNA表达逐渐减弱。结论：Mat在体外能明显抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖而不引起细胞坏死性改变,但对DNA含量无明显影响。     

赛来昔布对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及β-catenin和C-myc表达的影响

目的 探讨赛来昔布对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及β-catenin和C-myc表达的影响.方法 用不同浓度(0、25、50、100、125μmol/L)及不同作用时间(24、48、72h)的赛来昔布作用于人瘢痕疙瘩成纤维细胞,CCK-8(Cell Counting Kit-8)法检测人瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖活性,QRT-PCR、Western-blot检测体外培养的人正常皮肤及瘢痕疙瘩成纤维细胞中β-catenin和C-myc 的mRNA及蛋白表达.结果 CCK-8法显示,赛来昔布可显著抑制体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖(P ＜0.05),呈剂量和时间依赖性;QRT-PCR和Western-blot显示:①与体外培养的人正常皮肤成纤维细胞相比,体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞中,C-myc 及β-catenin蛋白的表达明显上调(P ＜0.05),而β-catenin mRNA表达未见明显增加;②不同浓度(0、25、50、100、125μmol/L)赛来昔布作用的体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞中,随着赛来昔布浓度增高,β-catenin和C-myc的表达逐渐降低,各组之间差别明显(P ＜0.05).结论 人瘢痕疙瘩的发生与Wnt信号通路异常密切相关;赛来昔布能通过Wnt信号通路抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖,有望用于瘢痕疙瘩的临床治疗.     

AcSDKP对人真皮成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的：探讨N-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸（AcSDKP）对人真皮成纤维细胞增殖及胶原合成的影响。方法：人真皮成纤维细胞的原代培养及鉴定后,给予不同浓度AcSDKP（10-7,10-8,10-9,10-10,10-11mol/L）的干预,设立空白对照组。WST-8法检测人真皮成纤维细胞增殖;RT-PCR技术检测人真皮成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达。结果：与空白对照组相比,10-10mol/LAcSDKP抑制人真皮成纤维细胞增殖作用最强;10-8mol/L和10-9mol/LAcSDKP对Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的抑制作用最显著。结论：本实验发现AcSDKP能够抑制人真皮成纤维细胞增殖及Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成,有望为病理性瘢痕的防治提供新方法。     

黄芪甲苷对人皮肤成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨黄芪甲苷对体外培养的有皱纹、无皱纹中老年人皮肤成纤维细胞生物学特性的影响.为黄芪甲苷用于延缓皮肤衰老和皱纹形成提供细胞水平的客观依据,为进一步探讨皮肤衰老机制和开发抗衰老护肤品提供新思路.方法体外培养中年人眼角皱纹与眼角无皱纹皮肤深处成纤维细胞;老年人面颊皮肤成纤维细胞.加入不同浓度的黄芪甲苷,干预24、72、120 h后,检测黄芪甲苷对这3例皮肤成纤维细胞系增殖活性、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白、弹性蛋白合成和凋亡率的影响.结果黄芪甲苷在较低浓度（5～20μg/ml）时可促进皱纹和无皱纹皮肤成纤维细胞增殖,促进皱纹、无皱纹和老年皮肤成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白合成,降低皱纹和无皱纹皮肤成纤维细胞凋亡率（P＜0.01）.结论黄芪甲苷在较低浓度时具有改善皱纹和非皱纹皮肤成纤维细胞生物学特性的作用.