ERK介导姜黄素抑制人脑胶质瘤细胞U251侵袭性

目的 探讨姜黄素对人脑胶质瘤细胞U251侵袭性的影响及ERK/MAPK信号通路在此过程中的作用。方法 将人脑胶质瘤细胞U251分为对照组和药物组,对照组以含10％小牛血清的DMEM培养基常规培养,药物组用16 μmol·L^-1姜黄素（本实验先前的研究结果显示,姜黄素作用于U251细胞48 h的半数抑制剂量为16 μmol·L^-1）处理。 Transwell侵袭小室模型法检测细胞侵袭性的变化;免疫细胞化学法检测基质金属蛋白酶－9（MMP-9）蛋白表达变化;免疫印迹（Western blot）法检测细胞外调节蛋白激酶（ERK）和磷酸化细胞外调节蛋白激酶（pERK）表达变化。结果 Transwell侵袭小室模型法显示,在每个高倍镜视野下,对照组穿过微孔膜的细胞数平均值为160个,药物组为42个。免疫细胞化学法显示姜黄素作用后MMP-9蛋白阳性细胞百分率由76％降低至40％。Western blot法显示,16 μmol·L-1姜黄素分别作用于U251细胞0、24、48和96 h,ERK蛋白水平无明显改变,pERK水平与ERK水平比值(pERK/ERK) 分别为0.48、0.42、0.35和0.22。结论 姜黄素在体外可有效抑制胶质瘤U251细胞的侵袭性,其机制可能是通过抑制异常激活的ERK信号通路来实现的。     

ERK介导姜黄素抑制人脑胶质瘤细胞U251侵袭性

目的 探讨姜黄素对人脑胶质瘤细胞U251侵袭性的影响及ERK/MAPK信号通路在此过程中的作用。方法 将人脑胶质瘤细胞U251分为对照组和药物组,对照组以含10％小牛血清的DMEM培养基常规培养,药物组用16 μmol·L-1姜黄素（本实验先前的研究结果显示,姜黄素作用于U251细胞48 h的半数抑制剂量为16 μmol·L-1）处理。 Transwell侵袭小室模型法检测细胞侵袭性的变化;免疫细胞化学法检测基质金属蛋白酶－9（MMP-9）蛋白表达变化;免疫印迹（Western blot）法检测细胞外调节蛋白激酶（ERK）和磷酸化细胞外调节蛋白激酶（pERK）表达变化。结果 Transwell侵袭小室模型法显示,在每个高倍镜视野下,对照组穿过微孔膜的细胞数平均值为160个,药物组为42个。免疫细胞化学法显示姜黄素作用后MMP-9蛋白阳性细胞百分率由76％降低至40％。Western blot法显示,16 μmol·L-1姜黄素分别作用于U251细胞0、24、48和96 h,ERK蛋白水平无明显改变,pERK水平与ERK水平比值(pERK/ERK) 分别为0.48、0.42、0.35和0.22。结论 姜黄素在体外可有效抑制胶质瘤U251细胞的侵袭性,其机制可能是通过抑制异常激活的ERK信号通路来实现的。     

去甲斑蝥素抑制人脑胶质瘤细胞增殖的体内外研究

目的研究去甲斑蝥素(Norcantharidin,NCTD)体内外对人脑胶质瘤细胞的抑制作用。方法常规培养细胞,24 h后随机分为阳性对照组、空白对照组和去甲斑蝥素6个剂量组,MTT法检测NCTD对人脑胶质瘤细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡率;建立SHG-44细胞裸鼠异种移植瘤模型,将荷瘤裸鼠随机分为阴性对照组、顺铂阳性对照组以及NCTD 3个剂量组,腹腔注射给药12 d后,取血检测血常规及肝肾功能;处死裸鼠,剥瘤称重并计算抑瘤率。结果 NCTD 6个剂量组显著抑制SHG-44细胞的增殖,且呈时间和剂量依耐性;并提高SHG-44细胞的凋亡率;NCTD 3个剂量组可抑制SHG-44细胞裸鼠异种移植瘤的生长,对移植瘤裸鼠血常规及肝肾功能无明显影响。结论 NCTD体内外均可抑制SHG-44细胞生长,并诱导肿瘤细胞凋亡。     

miR-199a-5p调控DDR1抑制人脑胶质瘤细胞增殖和迁移

目的初步探究miR-199a-5p对人脑胶质瘤细胞增殖和迁移的影响。方法选取U251细胞为实验对象,构建miR-199a-5p过表达U251细胞株。实验分组:对照组(无转染的U251细胞,Control)、阴性对照组(转染空载体质粒U251细胞,NC)以及实验组(转染miR-199a-5p成熟模拟物,mimics)。实时荧光定量PCR检测各组细胞miR-199a-5p表达;CCK-8检测转染miR-199a-5p后细胞增殖;细胞划痕实验与Transwell迁移实验检测各组U251迁移情况;Western blot检测DDR1表达;构建DDR1过表达U251细胞株,检测DDR1过表达对转染miR-199a-5p的U251细胞增殖和迁移的影响。结果mimics组细胞miR-199a-5p水平高于control组(P<0.01),细胞活力降低(P<0.01),增殖能力减弱(P<0.01)。转染miR-199a-5p组细胞DDR1表达水平降低(P<0.01)。与mimins组相比,转染pcDNA3.1-DDR1组能够上调DDR1(P<0.01),增加细胞活力,促进细胞增殖(P<0.05或P<0.01)。结论miR-199a-5p能够下调DDR1表达,抑制人脑胶质瘤细胞增殖和迁移。     

过表达亮氨酸拉链假定肿瘤抑制基因 1对胰腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移能力的影响

目的 探究过表达亮氨酸拉链假定肿瘤抑制基因1(LZTS1)对胰腺癌PANC-1细胞的增殖、凋亡、侵袭、迁移能力的影响.方法 将PANC-1细胞按照随机数字表法分为四组,对照组(常规培养)、NC组(转染阴性对照)、pcDNA-LZTS1-1组(转染pcDNA 3.0 LZTS1-1质粒)、pcDNA-LZTS1-2组(转染pcDNA 3.0 LZTS1-2质粒).蛋白质印迹法(Western blotting)检测转染效果;噻唑蓝(MTT)观察PANC-1细胞增殖,流式细胞术检测凋亡率,Transwell法检测细胞的侵袭、迁移.结果 与对照组相比,pcDNA-LZTS1-1组和pcDNA-LZTS1-2组PANC-1细胞中LZTS1蛋白水平[(2.835±0.301),(4.125±0.385)比(1.000±0.085)]显著增加,其中pcDNA-LZTS1-2组增加显著;过表达LZTS1抑制PANC-1细胞增殖、侵袭[(56.369±6.432)个比(117.258±12.152)个]、迁移[(120.145±14.210)个比(233.258±25.148)个],诱导其凋亡[(23.252±2.152)％比(6.589±0.645)％].结论 过表达LZTS1显著抑制PANC-1细胞增殖、侵袭、迁移,促进其凋亡.     

siRNA抑制IRE1α蛋白表达对巨噬细胞凋亡的影响

目的研究游离胆固醇诱导内质网应激状态下,抑制IRE1α蛋白表达后对巨噬细胞凋亡的影响。方法取自C57BL6/J小鼠腹腔的野生型巨噬细胞和用IRE1α特异性siRNA干扰的巨噬细胞分别在普通培养基及普通培养基加胆固醇乙酰转移酶抑制剂和乙酰低密度脂蛋白(促进游离胆固醇聚集条件下)中进行培养,分组孵育8h后Annexin-V和碘化丙锭双染色后流式细胞仪检测细胞凋亡。结果在FC-loaded状态下经8h孵育,野生型巨噬细胞组大量巨噬细胞凋亡,达到(21.83±2.47)%;siRNA干扰组巨噬细胞的凋亡明显减少。结论结果表明游离胆固醇聚集到内质网后引起内质网应激,而激活内质网跨膜蛋白IRE1α是诱导巨噬细胞凋亡的关键。     

氯丙咪嗪对人脑胶质瘤U251细胞增殖的影响

目的探讨氯丙咪嗪对人脑胶质瘤U251细胞体外增殖的影响。方法用甲基噻唑基四唑(MTT)比色法检测不同浓度的氯丙咪嗪对U251细胞增殖活性的影响。根据结果,选取二个不同浓度组检测细胞形态学的变化、台盼兰染色细胞死亡计数、细胞凋亡染色、流式细胞术检测等。结果依据MTT实验结果,选取氯丙咪嗪57μmol/L和28.5μmol/L两个浓度进行台盼兰染色、细胞形态学、细胞凋亡染色和流式细胞术检验。结果证实,氯丙咪嗪对U251细胞有明显的抑制作用。结论氯丙咪嗪具有明显的抑制胶质瘤U251细胞增殖的功能,促进其凋亡,可作为胶质瘤化疗的备选药物。     

山酮类化合物抑制人脑胶质瘤细胞增殖活性及作用机制探讨

目的检测3种山酮类化合物对人脑肿瘤细胞(T-98、U251SP和KT)增殖的抑制作用,并进一步探讨其可能的作用机制。方法研究从3种微生物次生代谢产物中纯化的山酮类化合物对人脑肿瘤细胞增殖的抑制作用。MTT比色法检测细胞增殖抑制率;利用双荧光素酶报告基因检测系统检测p53和Bax报告基因的表达;采用Western blot分析与凋亡相关的蛋白表达变化。结果 Austocystin H对KT细胞的增殖显示极强的抑制活性,呈剂量依赖性,IC50仅为0.69μmol.L-1;Austocystin H可诱导KT细胞内Bax报告基因表达(P<0.01);Western blot分析结果显示由Austocystin H处理的KT细胞中的p53和Bax的表达与对照组相比增加(P<0.05)。结论 Austocystin H具有极强的抑制人脑肿瘤细胞增殖作用,其作用机制可能与其诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

外源性干扰 PVT1表达对结直肠癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响

目的：外源性干扰PVT1表达对结直肠癌（CRC）细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法体外转染小干扰RNA（siRNA）干扰RKO和HCT116细胞PVT1表达（si‐PVT1组）;另设阴性对照siRNA（si‐NC）组。MTT实验和克隆形成实验检测 RKO和 HCT116细胞增殖力,Transwell实验检测RKO和HCT116细胞侵袭力,qRT‐PCR及Western blot检测相关抑癌基因SMAD4的表达。结果与si‐NC组相比,si‐PVT1组RKO和HCT116细胞增殖力抑制（P＜0．05或P＜0．01）,细胞克隆数减少（P＜0．01）,细胞侵袭数目减少（P＜0．05或P＜0．01）,且SMAD4 mRNA和蛋白表达水平均升高（P＜0．05）。结论 PVT1能促进CRC细胞增殖和侵袭,抑制CRC细胞凋亡。     

榄香烯抑制人脑胶质瘤U251细胞增殖和PCNA基因表达的研究

目的研究榄香烯(elemene)抑制人脑胶质瘤U251细胞增殖和抑制增殖细胞核抗原(PCNA)基因表达作用。方法应用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)测定不同浓度榄香烯对人脑胶质瘤U251细胞的抑制作用,同时观察时间—效应关系,并求出半数致死浓度(IC50);免疫组化法检测IC50浓度榄香烯作用0、24和48h的U251细胞中PCNA蛋白表达差异;RT-PCR检测不同浓度或不同作用时间的榄香烯抑制PCNA基因的表达。结果榄香烯对U251细胞株增殖具有抑制作用,呈剂量和作用时间的依赖性,IC50为0.062g·L-1。榄香烯对U251细胞内PCNA蛋白表达有明显的抑制作用;RT-PCR分别证实榄香烯抑制PCNA基因的表达,其PCNA基因mRNA表达值随药物浓度增加或作用时间延长增加而不断下降,呈剂量和作用时间的依赖性。结论榄香烯能有效下调PCNA基因表达,从而抑制人脑胶质瘤U251细胞增殖,对抗人脑胶质瘤具有广阔的前景。     

CIB1下调表达对U87胶质瘤细胞增殖和细胞周期的影响

目的 探讨钙整合素结合蛋白1(CIB1)下调表达对U87胶质瘤细胞增殖和周期调节的作用.方法 体外培养U87胶质瘤细胞,通过感染携带siCIB的pGV-siCIB1慢病毒获得CIB1下调表达的U87胶质瘤细胞,将细胞分为pGV-siCIB感染组、对照慢病毒感染组和对照组,采用甲基噻唑基四唑检测细胞增殖情况,流式细胞术检测各组细胞凋亡和细胞周期的改变,定量反转录聚合酶链反应、蛋白免疫印迹法检测U87胶质瘤细胞相关基因和蛋白表达情况.结果pGV-siCIB1感染U87细胞的最适感染复数值为5.siCIB1感染组CIB1 mRNA和蛋白表达低于对照慢病毒感染组和对照组(P<0.05).pGV-siCIB1感染组FOXO1、MDM2 mRNA及CyclinD1、Bcl-2 mRNA和蛋白、p-AKT蛋白表达水平低于对照慢病毒感染组,而Bax、p53、Caspase3 mRNA和蛋白表达水平高于对照慢病毒感染组(P<0.05,P<0.01).pGV-siCIB1感染组U87胶质瘤细胞抑制率、凋亡率与对照慢病毒感染组相比显著增加,与对照组和对照慢病毒感染组相比,G0/G1期细胞增加,S期细胞减少(P<0.05).结论 CIB1下调表达抑制胶质母细胞瘤的生长,促进细胞凋亡. AKT信号通路可能是CIB1发挥作用的途径之一,提示CIB1有可能作为胶质瘤靶向治疗的靶点.     

CD44v6、Syndecan-1在人脑胶质瘤中的表达

目的通过研究黏附分子CD44v6、syndecan-1在胶质瘤中的表达,探讨其与胶质瘤浸润发展的关系。方法用免疫组织化学SP法,CD44v6选用石蜡切片,syndecan1采用冰冻切片进行分析研究。结果CD44v6在正常脑组织的阳性表达率50%(4/8),而在胶质瘤中基本不表达8.2%(5/61);syndecan1在胶质瘤中表达为22%(9/41),明显低于对照组阳性表达率75%(6/8)(P<0.05)。但两者的表达在胶质瘤Ⅰ～Ⅱ级组与Ⅲ～Ⅳ级组中相比均无统计学差异(P>0.05)。结论CD44v6的表达缺失可能是胶质瘤不发生颅外转移的原因之一,syndecan-1与胶质瘤的浸润发展有一定的相关性。     

木犀草素上调miR-384对胶质瘤细胞增殖、侵袭和凋亡的影响

目的 研究木犀草素(luteolin)对胶质瘤细胞增殖、侵袭和凋亡的作用及机制。方法 以质量浓度2.5、25和50μmol·L^-1Luteolin1处理U251和U87细胞。分别以克隆形成实验、流式细胞术、Transwell实验检测细胞克隆形成、凋亡和侵袭。采用Lipofectamine 2000将antagomir-NC、miR-384 antagomir转染胶质瘤细胞U251。以RT-qPCR检测胶质瘤细胞中miR-384的表达水平。转染miR-384 antagomir后用质量浓度50μmol·L^-1的luteolin处理,以蛋白免疫印迹法(western blot)检测各组细胞中Ki67、p21、VEGF、Bax、Bcl-2和N-cadherin蛋白相对表达水平。结果 结果表明CCK-8浓度>25μmol·L^-1时luteolin可显著降低U251和U87细胞活力;与对照组相比,以质量浓度25和50μmol·L^-1 luteolin处理可明显降低细胞克隆形成率和侵袭率、提升细胞凋亡率。...     

过表达miR-411对宫颈癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响

目的 探讨过表达miR-411对宫颈癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及机制.方法 以正常宫颈上皮永生化细胞End1/E6E7为对照细胞,qRT-PCR检测宫颈癌Caski、SiHa和C-33A细胞miR-411表达.MTT法、Transwell小室及流式细胞术检测转染miR-411 mimics 48 h的SiHa细胞增殖...     

甘草查尔酮A对人脑胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨甘草查尔酮A对人脑胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响。方法 将体外培养的人脑胶质瘤U251细胞分为四组（n=20）,对照组予以等量0.9%NaCl处理,甘草查尔酮A低剂量组予以15μmol/L甘草查尔酮A处理,甘草查尔酮A中剂量组予以30μmol/L甘草查尔酮A处理,甘草查尔酮A高剂量组予以45μmol/L甘草查尔酮A处理,均干预48 h。通过噻唑蓝比色法检测四组的细胞增殖水平;采用实时荧光定量法检测四组的Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin、Cyclin D1mRNA的表达水平;采用蛋白印迹法检测四组的增殖细胞核抗原Ki-67(Ki-67)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达水平。结果 甘草查尔酮A低剂量组、甘草查尔酮A中剂量组和甘草查尔酮A高剂量组的细胞增殖水平、β-catenin mRNA、Cyclin D1mRNA相对表达量、Ki-67和Bcl-2蛋白相对表达量均低于对照组,差异均有统计学意义（P<0.01）;甘草查尔酮A中剂量组和甘草查尔酮A高剂量组的细胞增殖水平、β-catenin mRNA、Cyclin D1mRNA相对表达量、...     

秦艽多糖通过调控STMN1表达影响肺癌细胞增殖、迁移及侵袭

目的:探讨秦艽多糖是否可通过调控微管不稳定性蛋白1(STMN1)表达而抑制肺癌细胞增殖、迁移及侵袭.方法:体外培养肺癌细胞A549,随机分为对照组、秦艽多糖低、中、高浓度组(25,50,100μg·ml-1);采用甲基噻唑基四唑(MTT)与平板克隆形成实验检测细胞增殖能力;Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭;...