铁离子螯合剂去铁胺上调巨噬细胞、泡沫细胞细胞外基质金属蛋白酶诱导因子表达的机制探讨

目的: 探讨铁负荷过低上调巨噬细胞、泡沫细胞细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)表达的机制。研究促分裂原活化的蛋白激酶(MAPK)信号通路、视黄醛x受体（RXR）及过氧化物酶体增殖剂活化受体γ（PPARγ）在此过程中的作用。方法: 将巨噬细胞和泡沫细胞给予MAPK（p38,ERK1/2）信号通路抑制剂及RXR的天然配体预处理,加入或不加入去铁胺继续培养24 h,用Western blot测定细胞中EMMPRIN蛋白的表达。于巨噬细胞和泡沫细胞中加入铁离子鳌合剂去铁胺刺激,用Western blot检测MAPK（p38,ERK1/2）的磷酸化及PPARγ的水平。结果: p38 MAPK通路抑制剂及RXR和配体在本身不影响EMMPRIN表达的同时,可抑制去铁胺对EMMPRIN表达的上调。去铁胺可促进p38 MAPK磷酸化,但不影响PPARγ蛋白表达。结论: p38 MAPK 参与了铁负荷过低上调巨噬细胞和泡沫细胞中EMMPRIN表达的过程;RXR可能参与了该过程。     

细胞外基质金属蛋白酶诱导因子在动脉粥样硬化发展进程中的相关研究进展

细胞外基质金属蛋白酶诱导因子在多种细胞表达并诱导基质金属蛋白酶产生,近期有较多研究表明,细胞外基质金属蛋白酶诱导因子在动脉粥样硬化相关细胞以及人类动脉粥样斑块内高表达,推测其在动脉粥样硬化的病理生理中可能起到重要的作用。     

血管紧张素Ⅱ对巨噬细胞的细胞外基质金属蛋白酶诱导因子表达的影响

目的:探讨血管紧张素(Ang)Ⅱ在诱导巨噬细胞表达细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)中的作用及机制.方法:以5 ng/ml佛波醇诱导人类单核细胞株细胞成巨噬细胞后,倒置相差显微镜观察诱导情况;四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法监测不同Ang Ⅱ刺激下的细胞活性;逆转录聚合酶链式反应及蛋白质印迹检测不同时间及不同浓度的Ang Ⅱ对EMMPRIN基因及蛋白表达的影响;进一步用Ang Ⅰ受体拮抗剂(10 μM)及Ang Ⅱ受体拮抗剂(10μM)探讨信号传导机制,检测Ang Ⅱ对EMMPRIN的诱导情况.结果:在5 ng/ml佛波醇诱导下可很好的建立巨噬细胞模型.四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法结果示Ang Ⅱ在0.01～10μM浓度下,细胞的活性不受影响(P>0.05),50 μM Ang Ⅱ刺激下细胞活性改变(P<0.05),差异有统计学意义.不同浓度Ang Ⅱ刺激下巨噬细胞内EMMPRIN基因及蛋白的表达成时间依赖性,6 h后开始增高(P<0.05),12 h后达峰值(P<0.01),24 h后开始下降(P<0.05),差异有统计学意义;Ang Ⅱ对EMMPRIN的刺激作用亦呈剂量依赖型,随着浓度(0 μM、0.01μM、0.1μM和1μM)的增加,EMMPRIN基因及蛋白的表达亦明显增加(P<0.05),差异有统计学意义;进一步的信号通路研究实验结果示Ang Ⅰ受体拮抗剂可抑制AngⅡ的诱导作用(P<0.05),AngⅡ受体拈抗剂则无影响.结论:在佛波醇诱导的人类单核细胞株细胞中,Ang Ⅱ通过Ang Ⅰ受体上调巨噬细胞中EMMPRIN的表达,氯沙坦可抑制其上调作用.     

细胞外基质金属蛋白酶诱导因子与急性冠脉综合征关系的研究进展

细胞外基质金属蛋白酶诱导因子是一种高糖基化的跨膜蛋白,广泛表达于人体的各种组织细胞,属于免疫球蛋白家族。细胞外基质金属蛋白酶诱导因子可通过刺激冠脉动脉粥样斑块内的基质金属蛋白酶的分泌来影响斑块的稳定性,在急性冠脉综合征的发生、发展方面起到了重要作用。现就细胞外基质金属蛋白酶诱导因子在急性冠脉综合征方面的作用作一综述。     

冠心病患者临床类型与细胞外基质金属蛋白酶诱导因子表达水平的关系

目的：研究冠心病临床类型与细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（EMMPRIN）的关系。方法根据临床表现和冠状动脉造影结果,179例患者分成稳定型心绞痛（SAP）35例,不稳定型心绞痛（UAP）76例,急性心肌梗死（AMI）68例,健康对照组30例。流式细胞仪检测患者外周血单个核细胞（PBMCs）表面EMMPRIN的平均荧光强度（MFI）;免疫速率法检测血清高敏C反应蛋白（hs-CRP）浓度,分析冠心病组患者EMMPRIN水平与冠状动脉造影Gensini评分的相关性。结果 PBMCs表面EMMPRIN表达在冠心病临床分型中AMI组、UAP组、SAP组明显高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。病变血管累及支数越多,其表达增加越明显,三支病变＞双支病变＞单支病变＞对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。相关性分析显示,PBMCs表面EMMPRIN（MFI）与血清hs-CRP浓度及冠状动脉病变Gensini评分呈正相关。结论 EMMPRIN水平与冠心病临床分型相关。     

细胞外基质金属蛋白酶诱导因子RNAi慢病毒载体的构建

目的构建人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（EMMPRIN）RNA干扰（RNAi）慢病毒载体。方法参照文献设计RNAi靶点序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经AgeⅠ和EcoRⅠ酶切后的pGCSIL-GFP载体连接产生RNAi慢病毒载体pGC-LV。PCR鉴定阳性克隆并测序,将测序正确的pGC-LV、pHelper 1.0和pHelper 2.0质粒经脂质体2000共转染293T细胞,获得重组慢病毒,用逐孔稀释法测定病毒滴度。结果合成的含EMMPRIN vshRNA慢病毒载体寡核苷酸链插入正确;病毒包装后滴度为1×109 TU/ml。结论应用基因工程技术成功构建了可供感染的EMMPRIN基因RNAi慢病毒载体,此为进一步研究EMMPRIN在急性白血病中的作用奠定了实验基础。     

类风湿关节炎滑膜组织中细胞外基质金属蛋白酶诱导因子的研究

目的研究类风湿关节炎(RA)患者滑膜组织中细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMM-PRIN)的表达,探讨其在RA致病中的作用。方法对20例RA患者膝关节滑膜组织标本采用免疫组织化学染色和半定量反转录-聚合酶联反应(RT-PCR)法,观察RA滑膜组织中EMMPRIN的蛋白及mRNA表达。10例骨关节炎OA滑膜作为对照。结果RA滑膜内衬层的单核细胞、成纤维细胞中EMMPRIN阳性表达广泛,RA组EMMPRIN的免疫反应明显强于对照组(P<0.01)。14例RA、2例OA滑膜标本EMM-PRINmRNA表达阳性,EMMPRINmRNA表达水平RA也明显高于OA组。结论滑膜中过度表达的EMMPRIN通过上调MMPs促进关节软骨的破坏。因此选择性地抑制EMMPRIN生物活性,可能是治疗RA的新途径。     

血管紧张素Ⅱ对载脂蛋白E敲除小鼠主动脉粥样硬化斑块细胞外基质金属蛋白酶诱导因子表达影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ对载脂蛋白E敲除小鼠主动脉粥样硬化斑块细胞外基质金属蛋白酶诱导因子表达的影响。方法载脂蛋白E基因敲除小鼠经高脂饮食饲养建立动脉粥样硬化模型,用血管紧张素Ⅱ干预。用免疫组织化学法观察粥样硬化斑块内细胞外基质金属蛋白酶诱导因子表达,用RT-PCR及Western blotting检测主动脉内细胞外基质金属蛋白酶诱导因子表达。结果血管紧张素Ⅱ干预组细胞外基质金属蛋白酶诱导因子在动脉粥样硬化斑块内阳性表达较对照组明显增加;血管紧张素Ⅱ干预组主动脉内细胞外基质金属蛋白酶诱导因子mRNA及蛋白表达较对照组明显增加。结论血管紧张素Ⅱ能诱导主动脉粥样硬化斑块内细胞外基质金属蛋白酶诱导因子的表达。     

基质金属蛋白酶抑制剂对动脉粥样硬化形成的影响

基质金属蛋白酶是一种酶活性Zn2+依赖性肽链内切酶家族,它们能溶解结缔组织和细胞外基质的多种成分,并能使一些正常和病理性组织发生重构,从而导致了动脉粥样硬化的形成。基质金属蛋白酶抑制剂作为基质金属蛋白酶的特异抑制剂,能够抑制基质金属蛋白酶及其前体的活性。基质金属蛋白酶/基质金属蛋白酶抑制剂的平衡破坏对于动脉粥样硬化形成起了重要作用。     

基质金属蛋白酶与动脉粥样硬化

基质金属蛋白酶 (MMP)降解细胞外基质 (ECM ) ,参与动脉粥样硬化 (AS)的细胞外基质重构过程 ,与AS的形成、斑块破裂及再狭窄密切相关。适度调节金属蛋白酶的活性为防治AS提供了新的靶点。     

牛磺酸下调单核-巨噬细胞ACAT-1表达

目的:观察牛磺酸对THP-1及THP-1源性巨噬细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(ACAT-1)表达及活性的影响。方法:将THP-1细胞与PMA孵育48h使之分化为巨噬细胞,在有或无干扰素-γ(IFN-γ)的条件下,用不同浓度的牛磺酸与THP-1持续作用不同的时间,RTPCR检测ACAT-1mRNA水平,WesternBlot检测其蛋白表达,并测定其酶活性。结果:牛磺酸显著下调THP1及THP1源性巨噬细胞的ACAT1mRNA和蛋白表达水平以及ACAT-1活性(P<0.05～0.01,n=3);IFNγ促进ACAT1mRNA和蛋白表达、增强ACAT-1活性(P<0.05,n=3)的作用被牛磺酸部分抑制(P<0.05,n=3)。结论:牛磺酸不但能降低单核巨噬细胞ACAT-1的基础表达和活性,而且能抑制由IFN-γ诱导的ACAT-1表达和活性,这可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一。     

罗格列酮对THP-1源性泡沫细胞内胆固醇和氧化型低密度脂蛋白及丙二醛水平的影响

目的 观察罗格列酮干预THP-1源性泡沫细胞内胆固醇和氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)及丙二醛(MDA)水平的变化及其防治动脉粥样硬化的可能机制.方法 培养THP-1细胞,佛波脂(PAM)使之巨噬化,ox-LDL使巨噬细胞形成泡沫细胞,罗格列酮和泡沫细胞孵育48 h.用荧光分光光度法检测细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)的含量;ELISA法测定ox-LDL;TBARS法检量MDA.结果 THP-1细胞经PAM和ox-LDL孵育后,有大量泡沫细胞形成.细胞内TC、FC、CE、ox-LDL、MDA均增多(P＜0.05＝;罗格列酮干预后,细胞内TC、FC、CE、ox-LDLD、MDA均显著减少(P＜0.05＝.结论 罗格列酮可通过降低细胞内胆固醇的聚积和减轻细胞的氧化抗动脉粥样硬化.     

葡萄糖对THP-1源性巨噬细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1表达的影响

研究葡萄糖对人THP-1单核分化巨噬细胞酰基辅酶A：胆固醇酰基转移酶1（ACAT-1）表达的影响。发现高糖作用下，巨噬细胞ACAT-1的mRNA及蛋白表达增加，这可能是糖尿病血管病变机制之一。     

内脂素对人单核细胞株源性巨噬细胞ATP结合盒转运蛋白A1的调控

目的:观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)信号转导通路在内脂素调控人单核细胞株(THP-1)源性巨噬细胞ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)表达中的作用,探讨内脂素诱导泡沫细胞形成的机制和途径。方法:THP-1单核细胞诱导分化为巨噬细胞,随机分组,给予不同浓度和不同作用时间的内脂素进行干预,分别运用油红O染色观察细胞浆脂滴变化,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和蛋白免疫印迹(Westernblot)法检测各组细胞PPARγ及ABCA1mRNA和蛋白表达,酶荧光学法检测细胞内TC和游离胆固醇(FC)含量,TC与FC之差为胆固醇酯(CE)含量。结果:与对照组比较,内脂素干预组细胞浆脂滴明显增多,细胞内FC和CE含量增加(P<0.05),PPARγ及ABCA1mRNA和蛋白表达降低(P<0.05);相关分析显示,内脂素呈浓度和时间依赖性下调PPARγ及ABCA1mRNA和蛋白的表达。结论:内脂素可能通过PPARγ信号转导通路下调ABCA1表达,减少细胞内FC流出,使细胞内CE合成增加,从而诱导泡沫细胞形成。这可能为内脂素致动脉粥样硬化发病机制的研究提供了一个新的理论依据。     

肺炎衣原体通过上调酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1诱导人单核细胞株THP-1源性泡沫细胞形成的实验研究

Objective To investigate the expression changes of acyl-coenzyme A: cholesterol acyhransferase 1 (ACAT1) on Chlamydia pneumoniae (C. pn) induced foam cell formation. Methods Human monocytic cell line (THP-1) was induced into macrophages by 160 nmol/L phorbol myristate acetate (PMA)for 48 h, and were randomly allocated into four groups: negative control group (50 μg/ml LDL for 48 h) ; positive control group (50 μg/ml ox-LDL for48 h) ; C. pn infection group (50 μg/ml LDL plus 1× 105,4×105,5×105and 1×106 IFU C.pn for 48 h or 1×106 IFU C.pn for 0,24,48 and 72h); ACAT inhibitor 58-035 plus C. pn infection group (1, 5, 10 μg/ml ACAT inhibitor 58-035 pretreatment for 1 h,50 μg/ml LDL and 1 × 106 IFU C. pn for 48 h). The mRNA and protein expressions of ACATI were determined by RT-PCR and Western blot, respectively. Lipid droplets in cytoplasm were observed by oil red 0 staining. The contents of intracellular cholesteryl esters were detected by enzyme-fluorescence. Results The mRNA and protein expressions of ACATI were significantly up-regulated in positive control cells compared those in negative control cells and further upregulated by C. pn infection in a time-dependent and concentration-dependent manner (all P ＜ 0.05). There were significantly increases in the accumulation of lipid droplets and the ratio of cholesteryl ester to total cholesterol in positive control cells as compared with negative control cells and these were further aggravated by C. pn (at the concentrations of 5× 105 and 1×106IFU for 48 h) and C. pn infection induced increases in the accumulation of lipid droplets and the ratio of cholesteryl ester to total cholesterol could he significantly attenuated by ACAT inhibitor 58-035 (all P ＜ 0.05). Conclusion Chlamydia pneumoniae induces THP-1-derived foam cell formation by up-regulating the expression of ACATI.     

肺炎衣原体通过上调酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1诱导人单核细胞株THP-1源性泡沫细胞形成的实验研究

Objective To investigate the expression changes of acyl-coenzyme A: cholesterol acyhransferase 1 (ACAT1) on Chlamydia pneumoniae (C. pn) induced foam cell formation. Methods Human monocytic cell line (THP-1) was induced into macrophages by 160 nmol/L phorbol myristate acetate (PMA)for 48 h, and were randomly allocated into four groups: negative control group (50 μg/ml LDL for 48 h) ; positive control group (50 μg/ml ox-LDL for48 h) ; C. pn infection group (50 μg/ml LDL plus 1× 105,4×105,5×105and 1×106 IFU C.pn for 48 h or 1×106 IFU C.pn for 0,24,48 and 72h); ACAT inhibitor 58-035 plus C. pn infection group (1, 5, 10 μg/ml ACAT inhibitor 58-035 pretreatment for 1 h,50 μg/ml LDL and 1 × 106 IFU C. pn for 48 h). The mRNA and protein expressions of ACATI were determined by RT-PCR and Western blot, respectively. Lipid droplets in cytoplasm were observed by oil red 0 staining. The contents of intracellular cholesteryl esters were detected by enzyme-fluorescence. Results The mRNA and protein expressions of ACATI were significantly up-regulated in positive control cells compared those in negative control cells and further upregulated by C. pn infection in a time-dependent and concentration-dependent manner (all P ＜ 0.05). There were significantly increases in the accumulation of lipid droplets and the ratio of cholesteryl ester to total cholesterol in positive control cells as compared with negative control cells and these were further aggravated by C. pn (at the concentrations of 5× 105 and 1×106IFU for 48 h) and C. pn infection induced increases in the accumulation of lipid droplets and the ratio of cholesteryl ester to total cholesterol could he significantly attenuated by ACAT inhibitor 58-035 (all P ＜ 0.05). Conclusion Chlamydia pneumoniae induces THP-1-derived foam cell formation by up-regulating the expression of ACATI.     

肺炎衣原体通过上调酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1诱导人单核细胞株THP-1源性泡沫细胞形成的实验研究

目的 观察酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(ACAT1)在肺炎衣原体(C.pn)诱导泡沫细胞形成中的作用,初步探讨C.pn诱导泡沫细胞形成的机制.方法 人单核细胞株(THP-1)给予160 mmol/L佛波酯(PMA)孵育48 h,诱导分化为巨噬细胞后随机分为4组:阴性对照组、阳性对照组、C.pn感染组和ACAT抑制剂58-035+C.pn感染组.分别运用RT-PCR和Western blot检测各组ACAT1 mRNA和蛋白表达.运用油红O染色观察细胞浆内脂滴的变化,用酶荧光学法检测细胞内胆固醇酯含量的变化.结果 C.pn感染呈浓度和时间依赖性地上调ACAT1 mRNA和蛋白表达.高浓度的C.pn(5×105和1×106IFU)感染THP-1源性巨噬细胞48 h后,细胞浆内脂滴明显增多,胆固醇酯与总胆固醇的比值明显增加(＞50%).ACAT抑制剂58-035可以抑制C.pn诱导的细胞浆内脂滴的增多.随着58-035浓度的增加,逐渐抑制C.pn诱导的细胞内胆固醇酯含量的增加.结论 ACAT1表达上调是C.pn诱导泡沫细胞形成的机制之一,这可能为进一步阐明C.pn感染促进动脉粥样硬化发生发展提供一个新的理论依据.