N-乙酰半胱氨酸对非酒精性脂肪性肝炎模型小鼠肝细胞线粒体自噬的影响

目的在非酒精性脂肪性肝炎模型小鼠中探索N-乙酰半胱氨酸(NAC)对肝细胞线粒体自噬的影响。方法C57BL/J6小鼠分别给予16周的正常饮食、高脂高糖(HFCD)饮食和HFCD+NAC饮食。比较HE和Masson染色、ALT、AST、IL-1β、肝组织甘油三酯水平评价小鼠肝损伤。通过免疫荧光染色观察线粒体自噬。比较3组小鼠肝组织内线粒体自噬标志物在mRNA和蛋白水平的变化。结果HFCD组小鼠较对照组ALT[(24.9±2.12)比(176.7±44.32)U/L,P<0.05]、AST[(76.7±9.06)比(291.3±39.66)U/L,P<0.05]、IL-1β[(2.94±0.08)比(9.12±1.21),P<0.05]显著升高,HFCD+NAC组较HFCD组肝功能好转,IL-1β降低[(9.12±1.21)比(6.77±0.58)ng/L,P<0.05]。HFCD组小鼠肝组织内Parkin、PINK1表达降低,同时LC3B II/I比值降低,P62表达量增高。提示HFCD组小鼠肝细胞线粒体自噬水平降低。HFCD+NAC组较HFCD组线粒体自噬水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论NAC可能通过改善肝细胞线粒体自噬,进而减轻肝细胞炎症进展。     

脂肪肝细胞模型的建立及其生物学特性

目的:建立非酒精性脂肪肝和非酒精性脂肪性肝炎离体细胞模型.方法:以正常人肝细胞株HL-7702为实验对象,采用临床常用静脉营养药物脂肪乳剂加入细胞培养液培养肝细胞建立脂肪肝细胞模型,并在此基础上传代培养,建立非酒精性脂肪性肝炎模型.以细胞内脂滴数量、甘油三酯含量和细胞培养液细胞转氨酶泄漏量等指标,评价该离体细胞模型与实验动物模型的相似性及其买际应用意义.结果:用含20%脂肪乳剂1.0 mL/L的培养液培养肝细胞48 h即可使肝细胞产生明显甘油三酯堆积.传代培养两代发现肝细胞损伤.产生炎症性损伤.结论:利用脂肪乳剂可以在短时间内建立非酒精性脂肪肝和非酒精性脂肪性肝炎细胞模型.     

非酒精性脂肪性肝炎发病中抵抗素对肝细胞的致炎作用

目的 探讨抵抗素在非酒精性脂肪性肝炎(NASH)发病中对肝细胞的致炎作用及其分子机制. 方法制作NASH大鼠模型,分别应用荧光实时定量PCR和免疫组织化学染色的方法检测NASH大鼠肝组织抵抗素的表达.体外培养AML～12小鼠肝细胞株,用重组抵抗素或细菌脂多糖处理后48 h,检测细胞培养上清液中肿瘤坏死因子α,白细胞介素6含量的变化,用免疫荧光染色观察肝细胞核因子κB的核转位.采用Student-Newman-Keuls法进行组间比较.结果 NASH大鼠肝组织表现出明显脂肪变性、小叶内炎症和窦周纤维化,随造模时间的延长,抵抗素mRNA和蛋白表达逐渐增强,在造模12周及16周,抵抗索mRNA的表达分别为对照组的2.5倍和4.0倍,抵抗素蛋白的表达主要集中在肝组织中央静脉周围.用重组抵抗素处理AML-12细胞48 h后,细胞培养上清液中肿瘤坏死因子α,白细胞介素6的浓度分别为(1.856±0.049)pg/ml和(9.463±1.216)pg/ml,与脂多糖处理组[(1.791±0.046)pg/ml和(8.738±1.101)pg/ml]比较,差异无统计学意义,但二者均显著高于正常对照组[(1.310±0.038)pg/ml和(3.260±0.213)pg/ml],P＜0.01;用重组抵抗素或脂多糖处理AML-12细胞3 h观察到细胞核因子κB p65的核转位.结论 抵抗素是NASH发病中重要的致炎因子之一,其可以通过核因子κB途径诱导肝细胞产生肿瘤坏死因子α、白细胞介素6等炎性细胞因子,导致肝组织的炎症反应.     

非酒精性脂肪性肝炎发病中抵抗素对肝细胞的致炎作用

Objective To investigate the role and molecular mechanism of resistin in inflammation of hepatocytes in nonalcoholic steatohepatitis.Methods Rat models of NASH were established successfully.The expression of resiStin mRNA and protein were examined by quantitative RT-PCR and immunohistolostaining.respectively.The murinc hepatocytes AML-12 were incubated with recombinant resistin or LPs for 48 hours,and the concentration of TNF α,IL-6 in supernatant of AML-12 cells were quantified by enzyme linked immunosorbent assay(ELISA),the nuclear translocation NF-κB were observed by immunofluorescence.Results The steatosis of hepatocytes.inflammation in the lobule and perisinusoidal fibrosis in livers were found,and the expression of resistin mRNA and protein were increased in livers of rat model of NASH.The expression of resistin mRNA was 2.5 and 4 time higher in 12 weeks and 16 weeks of rat models respectively than that in normal control.The positive staining of resistin protein can be found mainly around the central veins.The concentration of TNF α and IL-6 were(1.856±0.049)pg/ml and(9.463±1.216)pg/ml in supernatant of AML-12 cells 48 hours after recombinant resistin treatment.and (1.791±0.046)pg/ml,(8.738±1.101)pg/ml 48 hours after LPS treatment.There was no significant difference between them,but both were higher than that in normal control (P＜0.01).The NF-κB p65 nuclear translocation had been observed in AML-12 cells 3 hours after resistin or LPS treatment. Conclusions Resistin can induce the production of TNF α,IL-6 and other inflammatory factors by hepatocytes,and therefore is an important inflammatory factor in NASH.     

不同肥胖指标及内脏脂肪指数对非酒精性脂肪肝预测价值的比较

目的 探讨不同肥胖指标、内脏脂肪指数对10年后发生非酒精性脂肪肝(NAFLD)的预测价值及判断切点。方法 选取2 910名无NAFLD健康体检者,进行问卷调查、人体测量学、肝脏超声等检查,连续随访10年。按照随访期间是否发生NAFLD分为NAFLD组与对照组,并按基线水平体质量指数(BMI)分为正常、超重、肥胖组;分别按照腰围(WC)、腰围身高比(WtHR)分为正常和超标组;内脏脂肪指数(VAI)按四分位数法分为4组(VAI-Q1～VAI-Q4)。采用Logistic回归分析各组对新发NAFLD的相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析BMI、WC、WtHR、VAI对NAFLD预测价值。结果 NAFLD组在基线时及随访结束时,其BMI、WC、WtHR、VAI、血尿酸(SUA)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、丙氨酸氨基转肽酶(ALT)在基线时均明显高于对照组,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)明显低于对照组(P<0.05)。随访期间发生NAFLD患病率为29.41%。NAFLD发生风险BMI超重组和肥胖组分别是正常组的2.579倍和3.31...     

虫草菌丝对非酒精性脂肪肝病大鼠肝细胞凋亡的作用及其相关机制

目的（1）证实肝细胞凋亡的异常增多存在于非酒精性脂肪性肝病中。（2）观察虫草菌丝对肝细胞凋亡异常增多的影响，并探讨可能的分子机制。方法通过高脂饮食建立大鼠非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的模型，同时设立正常饮食对照组，病理对照组（NASH组），虫草菌丝干预组（CS组）。肝组织切片HE染色观察肝脏病理改变；检测肝组织超氧化物歧化酶（SOD）活性；TUNEL检测肝组织肝细胞凋亡情况；免疫组织化学染色观察肝组织Bax、Bcl-2、Caspase-3、NF-κB P65蛋白表达情况。结果（1）与正常对照组相比，病理对照组大鼠肝组织广泛弥漫肝细胞脂肪变性，炎性细胞浸润、坏死、局部有纤维组织增生；肝脏SOD活性显著降低（P〈0．01）；TUNEL法检测肝细胞凋亡显著增多（P〈0．01）；免疫组化染色显示Bax、Caspase-3蛋白表达增加（P〈0．01），而Bcl-2无显著变化（P〉0．05）；（2）与病理对照组相比，虫草菌丝组大鼠肝组织有广泛肝细胞脂肪变性，炎性细胞浸润，可见灶性及点状坏死，未见纤维组织增生；肝组织SOD活性高于病理对照组（P〈0．05）；TUNEL法检测凋亡的肝细胞显著减少（P〈0．01）；免疫组化染色显示Bax、Caspase-3蛋白表达也明显降低（分别为P〈0．05、P〈0．01），而Bcl-2、NF-κB P65蛋白表达增加（P〈0．01）。结论（1）NASH时肝细胞凋亡异常增多。（2）虫草菌丝可以通过增加超氧化物歧化酶（SOD）活性来减少活性氧含量，降低Bax表达，增加Bcl-2表达和活化NF-κB P65减轻NAFLD中肝细胞凋亡从而在一定程度上具有保护肝脏功能的作用，对延缓或阻止脂肪肝病变的进展起到一定的作用。     

C反应蛋白对单纯性脂肪肝与脂肪性肝炎鉴别诊断的作用

目的:观察血清C反应蛋白水平对单纯脂肪肝与脂肪性肝炎的鉴别作用。方法:对124例NAFLD患者按中华肝脏病学分会脂肪肝和酒精性肝病学组制定的"非酒精性脂肪肝诊断标准"分型,单纯脂肪肝组76例,脂肪性肝炎组48例。观察两组患者血清hs-CRP及AST、ALT、TG、TC、HDL-C和LDL-C生化指标水平的不同变化。结果:脂肪性肝炎组患者AST、ALT、TG、TC、HDL-C和LDL-C水平比单纯脂肪肝组高,但两者比较差异无显著性意义(P>0.05);脂肪性肝炎组患者hs-CRP比单纯脂肪肝组高,两者比较差异有非常显著性意义(P<0.001)。结论:血清hs-CRP水平对单纯脂肪肝、脂肪性肝炎具有鉴别诊断作用。     

D-木糖对酒精致肝细胞脂肪性变的保护作用

目的:研究D-木糖(D-xylose)对酒精诱导的肝细胞发生脂肪性变的保护作用.方法:用酒精诱导肝HepG2细胞株损伤,设立正常对照组、酒精损伤组和不同浓度的D-木糖保护组;形态学观察细胞凋亡以及生长情况,以MTT法检测细胞存活力,通过油红O染色对存活细胞脂变程度进行观察并量化比较,RT-PCR检测PPARγ水平的变化,综合评价酒精引起细胞脂肪性病变的机制.结果:肝HepG2细胞经酒精损伤后,可见细胞形态肿胀变形或萎缩,出现凋亡小体,细胞数量明显降低,脂肪变程度严重.经不同浓度D-木糖给药处理,各保护组的肝脏细胞存活率显著升高(88.5%、81.8%、75.4%vs44.0%,P<0.05);脂变程度明显减轻(0.63250±0.068172、0.60400±0.042798、0.95538±0.067853vs0.97313±0.063481,P<0.05);同时,酒精损伤组PPARγ的mRNA表达水平较正常对照组有明显提高,而D-木糖保护组中其表达量降低,以高浓度组最为显著.结论:D-木糖可降低酒精对肝细胞的损伤作用,降低细胞脂变程度,可能是通过降低脂肪生成的速度而实现的.     

Increased O-GlcNAc transferase in pancreas of rats with streptozotocin-induced diabetes

Aims/hypothesis. Streptozotocin (STZ), a chemically reactive analogue of N-acetylglucosamine, induces necrosis of the beta cells, resulting in diabetes mellitus. Glucose-induced insulin resistance is mediated by increased activity of the hexosamine pathway. We aimed to examine the regulation of O-GlcNAc transferase expression and activity in the normal and streptozotocin diabetic pancreas.¶Methods. Rats were made diabetic by an injection of streptozotocin (65 mg/kg). The expression of O-GlcNAc transferase protein was examined by immunoblot analysis. Activity of O-GlcNAc transferase was assayed by the incorporation of [³H]GlcNAc into the synthetic peptide. Localization of O-GlcNAc transferase was done by immunohistochemistry. The change of O-GlcNAc modification of proteins was examined by immunoblot analysis.¶Results. In the STZ-induced diabetic pancreas, a severe loss of beta cells was observed, whereas alpha cells had increased in number. The diabetic pancreas showed an increase in the expression of O-GlcNAc transferase at the protein level and the O-GlcNAc transferase activity in it was increased significantly (p < 0.05). An increase in the immunostaining intensity in the cytoplasm of islet beta cells was also observed in the diabetic pancreas, whereas exocrine cells and islet cells other than beta cells showed little change in immunostaining intensity. The pancreas of STZ-diabetic rats showed a 3.1-fold increase in total cellular O-GlcNAc-modified proteins.¶Conclusion/interpretation. These findings indicate that O-GlcNAc transferase plays an important part in the modulation of O-GlcNAc concentrations in the pancreas and suggest that the increase in O-GlcNAc modification of the proteins correlates closely with diabetes. [Diabetologia (2000) 43: 1239–1247]     

抵抗素对脂肪变性肝细胞核因子κ B和肿瘤坏死因子α表达的影响

目的 探讨抵抗素(resistin)对脂肪变性肝细胞脂质代谢及核因子κB (NF-κ B)、肿瘤坏死因子(TNF)α表达的影响. 方法 选用软脂酸诱导L02细胞脂肪变性模拟非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)体外模型.分C组(正常对照组),P组(模型组:软脂酸20μg/ml)及分别加入重组人抵抗素50μg/L的CR组和PR组.各组给予相应处理72 h后,观察细胞的脂肪变并测定细胞培养上清液中甘油三酯(TG)、ALT、AST及γ谷氨酰转移酶(GGT)的浓度;采用半定量RT-PCR及Western blot法检测细胞胰岛素受体底物2(IRS-2)、NF-κB、TNFα的基因及蛋白表达水平.根据资料不同应用方差分析或t检验进行统计学分析,P＜ 0.05为差异具有统计学意义. 结果 P组、CR组及PR组细胞培养上清液中TG、ALT、AST、GGT的浓度明显高于C组.分别与C组比较,P组、CR组及PR组NF-κ B mRNA相对表达量0.54±0.04、0.60±0.04及1.00±0.06,与C组的0.10±0.01比较,t值分别为17.64,22.03,26.06;TNFαmRNA相对表达量0.58±0.04、0.61±0.06及1.05±0.09,与C组的0.33±0.06比较,t值分别为5.67,5.38,11.64,相对表达量明显升高,而IRS-2 mRNA (t值分别为8.19,9.23,20.93)明显降低,且P值均＜0.05,差异有统计学意义.P组与CR组间比较,t值分别为1.75,0.58,2.14,P值均＞0.05,差异无统计学意义.蛋白质表达变化趋势与mRNA变化趋势相一致.结论 抵抗素可能通过NF-κ B依赖途径对肝细胞脂肪变性胰岛素抵抗发挥促炎作用,从而促进NAFLD的发生与发展.     

酒精合并高脂饮食建立大鼠脂肪肝模型

目的 探讨建立大鼠脂肪肝动物模型的方法.方法 60只雄性SD大鼠随机分成3组:正常对照(NS)组每日灌胃生理盐水和普通饲料喂养,高剂量模型(HM)组和低剂量模型(LM)组每天按照5 g/kg体重对大鼠灌胃浓度为 60%(V/V)和30%(V/V)的乙醇和按照5 ml/kg灌胃脂肪乳剂的方法,连续3 w,分别在第2周末和第3周末随机选取各组大鼠10只,观察其肝脏病理改变及血液生化指标的变化.结果 造模2 w可见轻度的肝脂肪变.造模3 w后,模型组大鼠肝脏重量明显升高,与正常组比较有显著性差异;病理表现为广泛的脂肪变性,血清三酰甘油(TG)、丙氨酸氨基转移酶 (ALT)、天冬氨酸氨基转氨酶(AST)、总胆固醇(TC)升高,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)显著降低,与正常组比较差异有显著意义(P<0.05);血糖和透明质酸(HA)变化不大(P>0.05).结论 本造模方法与人类脂肪肝病变类似,方法简单易行,实验周期短,模型稳定可靠.     

吡格列酮对大鼠非酒精性脂肪性肝病的预防作用

非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）是临床常见肝病之一，随着生活方式及膳食结构的改变，NAFLD的发病率明显增高。其发病机制目前尚不明确，有研究认为胰岛素抵抗（IR）是导致NAFLD的重要病因之一。吡格列酮作为过氧化物酶体增殖物激活受体γ的高亲和力激动剂，能明显增强组织对胰岛素的敏感性。我们通过高脂饮食建立NAFLD的动物模型，用吡格列酮进行干预，探讨IR与NAFLD的关系，评估吡格列酮对NAFLD的预防作用。     

川芎嗪对体外诱导的酒精性脂肪肝细胞的影响

近年来,酒精性脂肪肝的发病率越来越高.而与其他类型的脂肪肝相比,酒精性脂肪肝发生肝纤维化和肝硬化的进程相对较快,并可能进展为肝癌.因此,酒精性脂肪肝也越来越受到人们的重视[1].本研究用川芎嗪(LTH)处理乙醇诱导的酒精性脂肪肝离体细胞,模拟酒精性脂肪肝的发病过程,比较处理前后细胞周期的改变情况,ALT、AST以及Y-谷氨酰转肽酶(GGT)的泄漏量,以初步探讨其对酒精性脂肪肝的影响.     

肝细胞色素P450 2E1在大鼠非酒精性脂肪肝形成中的作用

目的 研究肝细胞色素P450 2E1在大鼠非酒精性脂肪肝形成中的作用。方法 Wistar大鼠40只，随机分为正常对照组和高脂饲料2、4、8和12周组(其中每组各8只)：HE染色光镜观察肝脏组织病理改变；硫代巴比妥酸法测定肝脏组织丙二醛(MDA)的含量变化：免疫组织化学和Westemblot方法研究高脂饲料诱导的大鼠脂肪肝形成中肝细胞色素P450 2E1表达变化。结果 高脂饲料组大鼠肝脏内MDA含量明显高于对照组，随时间延长，逐渐增加：随着脂肪肝程度的加重，MDA含量逐渐增强，肝细胞色素P450 2E1蛋白表达亦明显增强。结论 非酒精性脂肪肝大鼠肝细胞色素P450 2E1表达变化与脂肪肝引起的脂质过氧化损伤程度密切相关。     

脂联素及其在非酒精性脂肪性肝病中的作用研究进展

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)已成为危害人类健康的主要消化道疾病之一,及早发现和治疗NAFLD已引起广泛的关注。对于NAFLD的发病机制至今仍存在争议,但与代谢综合征(中心性肥胖、高甘油三酯血症、低高密度脂蛋白胆固醇血症、口服葡萄糖耐量试验异常和高血压等)具有一定的相关性,而脂联素在代谢综合征的发生、发展过程中起着重要的     

内质网应激在脂肪酸致肝细胞损伤中的作用

目的 通过建立不同的肝细胞脂肪变模型探讨脂肪酸对肝细胞内质网应激的作用,同时检测牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)对脂肪变肝细胞内质网应激相关基因表达的影响.方法 以正常成人肝细胞株HL-7702为研究对象,以软脂酸或混合脂肪酸建立肝细胞脂肪变模型,以细胞计数试剂盒细胞增殖法测定和计算细胞活力,观察细胞形态和脂肪变情况,用三酰甘油试剂盒测定细胞内三酰甘油含量.予TUDCA干预,实时PCR方法检测肝细胞内质网应激前后葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的mRNA相对表达量.结果 混合脂肪酸浓度达0.5 mmol/L或软脂酸浓度达0.125 mmol/L即可影响肝细胞活力.单纯软脂酸对肝细胞的损伤作用较混合脂肪酸更强.混合脂肪酸组肝细胞内三酰甘油含量逐渐升高,软脂酸组肝细胞内三酰甘油含量仅于作用12 h时显著增加,其后则无显著改变.混合脂肪酸组不同浓度、不同作用时间下GRP78 mRNA和CHOP mRNA相对表达量与对照组相比差异均无统计学意义(P值均＞0.05).0.5 mmol/L软脂酸作用后肝细胞内CH()P mRNA相对表达量显著升高,但其对GRP78mRNA相对表达量无明显影响.1.0 mmol/L软脂酸作用后肝细胞内GRP78 mRNA和CHOP mRNA相对表达量均显著升高.TUDCA干预低剂量软脂酸组肝细胞内质网应激前后GRP78mRNA和CHOP mRNA相对表达量差异无统计学意义(P值均＞0.05).TUDCA干预高剂量软脂酸组肝细胞内质网应激前后CHOP mRNA表达量差异有统计学意义(12h时为8.6400比5.1032,24 h时为13.7948比6.4928,P值分别=0.042和0.017),但GRP78 mRNA表达量差异无统计学意义(P值均＞0.05).结论 相同的脂肪酸浓度下,软脂酸的比例越高对肝细胞的损伤作用越大.软脂酸呈时间剂量依赖性地调控肝细胞内质网应激.TUDCA可在一定程度上改善软脂酸引起的内质网应激.     

二甲双胍干预高脂饲养所致大鼠脂肪肝的研究

目的 探讨二甲双胍对实验性脂肪肝的治疗作用。方法 通过12周高脂饲料喂养制备大鼠实验性脂肪肝模型；肝脏病理切片证实造模成功后，取24只造模大鼠随机分为3组并给予相应处理：二甲双胍组给予二甲双胍l56mg／kg灌胃，1次／d；饮食治疗组及模型对照组等容积蒸馏水灌胃；除模型对照组外，其余各组均进食普通饲料。4周后分别检测各组动物的肝功能、血脂、血糖、肝脂质、肝指数胰岛素抵抗指数及肝组织学改变。结果二甲双胍能显著降低血脂、肝脂，改善肝功能；而饮食治疗使肝组织学有一定改善，但肝酶活性、血清甘油三酯和胆固醇增高持续存在。结论 二甲双胍可有效地用于实验性脂肪肝的治疗。     

Characteristics of peripheral blood Gamma-glutamyl transferase in different liver diseases

Gamma-glutamyl transferase (GGT) is a marker of oxidative stress and cholestasis. Because of its low specificity, clinicians usually ignore its diagnostic value.To compare and analyze the clinical features of GGT in primary biliary cholangitis (PBC), drug-induced liver injury (DILI), alcoholic liver disease (ALD), and non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) from the perspective of different causes instead of the severity of the disease.We observed the distribution characteristics and the rate of abnormality of GGT in the above 4 diseases. The relationship between GGT and alanine aminotransferase (ALT), aspartate transaminase (AST), alkaline phosphatase (ALP), total serum bilirubin, triglyceride (TG), total cholesterol (TC), low-density lipoprotein cholesterol, high-density lipoprotein cholesterol was analyzed using Spearman correlation.The highest level of GGT was up to 1000.00 to 2000.00 U/L in PBC and DILI, and the highest level of GGT was more than 2000.00 U/L in ALD, yet the difference was not statistically significant (P > .05). The highest level of GGT was only about 200.00 U/L in NAFLD and was the lowest in 4 liver diseases. Also, GGT was positively correlated with ALP, TC in PBC and DILI. Also, in ALD, GGT was positively correlated with ALT, AST, ALP, TG, and TC. In NAFLD, GGT was positively correlated with ALT, AST, and TG.The abnormal GGT in PBC and cholestasis DILI was associated with cholestasis; in ALD, it was associated with oxidative stress and cholestasis, and in NAFLD, it was associated with oxidative stress. GGT levels had different characteristics in different liver diseases, which were closely related to the pathogenesis of liver diseases.