乙酰肝素酶表达及其与喉鳞状细胞癌生物学行为关系

目的 探讨乙酰肝素酶(HPA)在喉鳞状细胞癌(喉癌)组织表达及其与喉癌临床分期、淋巴结转移和预后的关系.方法 采用免疫组化技术检测45例喉癌和癌旁组织组织中HPA的表达.结果 HPA在喉癌组织中表达阳性率为53.3%,癌旁组织为13.3%,二者比较差异有显著性(χ2=16.2,P<0.05);HPA表达阳性率与喉癌的临床分期、淋巴结转移及5年生存率明显相关(χ2=4.86～5.18,P<0.05),与喉癌的组织分化程度无关(χ2=2.13,P>0.05).结论 HPA在喉癌的侵袭和转移中可能起到重要作用,可作为判断喉癌生物学行为和预后的有用指标.     

乙酰肝素酶在膀胱移行细胞癌中的表达及与临床特征的关系

目的 探讨乙酰肝素酶（heparanase,HPA）在膀胱移行细胞癌中的表达及与肿瘤临床病理特征的关系。方法 应用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）及免疫组织化学方法检测68例膀胱移行细胞癌、24例癌旁组织中HPA mRNA的水平及蛋白表达定位,并结合患者临床病理指标及预后进行分析。结果 68例膀胱移行细胞癌组织中HPA mRNA检出阳性41例（60．3％）,24例癌旁组织中HPA mRNA检出阳性1例（4．2％）,两组间差异有统计学意义（P〈0．01）,HPA mRNA的表达在膀胱移行细胞癌不同病理分级、临床分期及淋巴结转移与否分组中显著不同（P〈0．01）。免疫组化结果显示,HPA定位于细胞质及细胞核,阳性率为77．9％（53例）,在膀胱移行细胞癌淋巴结转移与否分组中显著不同（P〈0．01）。结论 HPA在膀胱移行细胞癌的生长浸润、侵袭转移中可能发挥重要作用。     

乙酰肝素酶在胰腺癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨胰腺癌组织中乙酰肝素酶(HPSE)的表达及其临床意义.方法 应用免疫组化SABC法检测45例胰腺癌组织、20例癌旁组织、20例正常胰腺组织中HPSE的表达情况,并分析其与临床病理特征的关系.结果 胰腺癌组织中HPSE的阳性表达率明显高于癌旁及正常胰腺组织(χ2=22.35、29.79,P<0.05).淋巴结转移组HPSE蛋白阳性表达率高于无淋巴结转移组(χ2=4.60,P<0.05).Ⅲ+Ⅳ期组HPSE蛋白阳性表达率高于Ⅰ+Ⅱ期组(χ2=6.91,P<0.05).结论 在胰腺癌组织中HPSE高表达,且与肿瘤的浸润、转移有关.HPSE可以作为判断胰腺癌浸润、转移的参考指标之一.     

胃癌组织乙酰肝素酶蛋白表达及其临床意义

目的探讨胃癌组织中乙酰肝素酶蛋白表达状况及其临床意义.方法采用免疫组化技术(SP法)检测97例胃癌组织中乙酰肝素酶蛋白的表达情况,并分析其与临床病理特征和预后的关系.结果胃癌组织乙酰肝素酶蛋白表达阳性率为61.9%,其阳性表达与肿瘤大小、淋巴结转移、静脉侵犯、淋巴管侵犯、远处转移、浆膜面受累和TNM分期等密切相关(均P＜0.05);乙酰肝素酶阳性和阴性患者术后1、3、5年生存率分别为58.60%、35.83%、33.44%和88.80%、67.57%、59.82%,前者显著低于后者(均P＜0.05).结论乙酰肝素酶的表达与胃癌的侵袭转移及预后显著相关.     

宫颈癌组织中乙酰肝素酶表达的临床研究

目的通过对宫颈癌组织中乙酰肝素酶(HPA)的检测,探讨HPA在宫颈癌发生、发展、转移潜力中的作用。方法采用免疫组化染色检测56例宫颈癌组织中HPA的表达,并与13例正常宫颈组织和16例宫颈上皮内瘤样病变(CIN)组织作为对照,分析HPA表达在宫颈癌中的作用。结果56例宫颈癌患者中HPA表达阳性率高达76.8%,正常宫颈中HPA无表达,CIN组织中HPA表达阳性率为18.8%。宫颈癌的分化程度、临床分型浸润深度、淋巴结转移与宫颈癌组织中HPA表达相关(P值≤0.05);宫颈癌患者的年龄、病理类型与宫颈癌组织中HPA表达无相关性(P值>0.05)。结论HPA表达在宫颈癌组织中明显增高,与宫颈癌的进展和转移潜力有关,可能参与宫颈癌的进展与转移并做为宫颈癌的发生及发展的一个新的判断指标。     

乙酰肝素酶在卵巢癌组织中的表达及其临床意义

目的：探讨乙酰肝素酶（Hpa）蛋白在卵巢癌组织中的表达及其与临床病理的相关性。方法：应用免疫组织化学方法检测50例卵巢癌患者,20例卵巢良性肿瘤患者,20例正常卵巢组织中Hpa蛋白的表达,并分析其与卵巢癌临床病理的相关性。结果：①卵巢癌组织中Hpa蛋白表达阳性率为80％（40／50）,卵巢良性肿瘤组织Hpa蛋白表达阳性率为30％（6／20）,正常组织为20％（4／20）;②低分化肿瘤组织中Hpa蛋白阳性表达率显著高于中、高分化者（P〈0．05）;淋巴结转移的癌组织Hpa表达高于无淋巴结转移组（P〈0．05）;术后残余灶〉2cm的癌组织Hpa表达高于术后残余灶〉2cm组（P〈0．05）。结论：卵巢癌中Hpa蛋白阳性表达率明显增高,并与卵巢癌病情进展有关,可作为卵巢癌预测转移和预后的一个重要指标。     

乙酰肝素酶蛋白在皮肤恶性黑素瘤中的表达

目的探讨乙酰肝素酶蛋白在皮肤恶性黑素瘤中的表达及其意义。方法应用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶(streptavidin-peroxidase,S-P)法检测乙酰肝素酶蛋白在30例皮肤恶性黑素瘤、30例交界痣及15例正常皮肤组织中的表达。结果皮肤恶性黑素瘤中乙酰肝素酶蛋白的阳性表达率明显高于交界痣患者和正常皮肤(P均<0.05),交界痣患者与正常皮肤相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论乙酰肝素酶蛋白的高表达可能与皮肤恶性黑素瘤的发生发展有关,有望作为治疗黑素瘤的靶点。     

乙酰肝素酶表达与子宫内膜癌临床病理学特征的关系

目的探讨乙酰肝素酶(Hpa)在子宫内膜癌中的表达及其与肿瘤临床病理学特征的关系。方法采用免疫组化PV6000法检测60例子宫内膜癌组织中Hpa的表达。结果Hpa在子宫内膜癌组织中的阳性表达率为65.0%(39/60),其表达与子宫内膜癌的组织学病理分级、临床手术分期、肌层浸润深度和淋巴结转移有关(χ2=4.40~7.33,P<0.05)。结论Hpa在子宫内膜癌的进展中起重要作用,可作为判断子宫内膜癌生物学行为的有用指标。     

乙酰肝素酶在乳腺浸润性导管癌中的表达及其意义

目的:探讨乙酰肝素酶(Hpa)在乳腺浸润性导管癌发展过程中的作用及其临床意义。方法:采用免疫组织化学法检测Hpa在14例乳腺纤维腺瘤和81例乳腺浸润性导管癌中的表达,分析其与乳腺浸润性导管癌临床病理参数的关系。结果:在乳腺浸润性导管癌组中Hpa的阳性表达率为72.96%,显著高于在乳腺纤维腺瘤组中的表达(P<0.005);Hpa表达与肿瘤的组织学分级、肿瘤最大径、PTNM分期、淋巴结转移均有一定关系(P<0.005),而与患者的年龄、月经状况均无明显关系(P>0.05)。结论:Hpa可能促进乳腺浸润性导管癌的生长、浸润和转移,并在一定程度上标志着肿瘤的生物学特征。     

乙酰肝素酶在原发性肝细胞肝癌中的表达及临床意义

目的 研究乙酰肝素酶在原发性肝细胞肝癌中的表达及临床意义.方法 免疫组织化学S-P法.结果 原发性肝癌45例中乙酰肝素酶表达阳性26例(57.8%);在高分化(6/17)、无肝内转移(12/28)和无淋巴结转移(14/31)的肝癌中乙酰肝素酶阳性表达率明显低于低分化(20/28)、肝内转移(14/17)和淋巴结转移(12/14)的肝癌(P＜0.05).结论 乙酰肝素酶可能是原发性肝细胞肝癌的生物学行为和预后的重要标记物,阳性表达者可能恶性程度高和预后不良.     

塞来昔布对人舌鳞癌Tca-8113细胞表达乙酰肝素酶的影响

目的探讨塞来昔布(celecoxib)对人舌鳞癌Tca-8113细胞表达乙酰肝素酶(heparanase,Hpa)的影响。方法用0(对照),10,20,40,80μmol/L五个浓度的塞来昔布干扰Tca-8113细胞24 h后,应用免疫细胞化学方法观察细胞胞质中Hpa的合成情况。结果与对照组相比,实验组中Hpa的表达都明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),用20-80μmol/L塞来昔布干预时Hpa降低水平显著。结论塞来昔布有抑制人舌鳞癌Tca-8113细胞表达Hpa的作用。     

乙酰肝素酶稳定表达细胞株的建立

目的:在真核细胞中表达人乙酰肝素酶(HPA)并建立该酶的稳定表达细胞株。方法:构建包含人乙酰肝素酶全长编码序列的真核表达载体pcDNA-hpaFL,转染CHO-K1细胞,G418筛选稳定表达细胞株。通过RT-PCR,Western-blot分析与鉴定蛋白的表达;用荧光HPLC法检测蛋白的活性。结果:在CHO-K1细胞中成功地表达出有活性的人乙酰肝素酶,并获得该酶的稳定表达细胞株。结论:成功地建立了人乙酰肝素酶稳定表达细胞株,为其抑制剂的筛选及其功能的研究奠定了基础。     

乙酰肝素酶在卵巢癌中的表达及其与肿瘤血管生成的关系

目的探讨乙酰肝素酶mRNA及蛋白在卵巢癌组织中的表达及其与肿瘤血管形成的关系。方法采用原位杂交及免疫组化S-P法检测41例卵巢癌组织中乙酰肝素酶mRNA及蛋白的表达,并用免疫组化法对全部标本用CD34抗体进行肿瘤血管内皮染色,计数肿瘤微血管密度（MVD）,结合卵巢癌组织分化程度、组织学类型、临床分期及年龄,探讨乙酰肝素酶与肿瘤血管形成的关系。结果（1）乙酰肝素酶在卵巢癌组织中表达增高．且其mRNA及蛋白的表达具有一致性。（2）临床晚期标本（Ⅲ～Ⅳ期）中的乙酰肝素酶蛋白表达及MVD值高于临床早期（Ⅰ～Ⅱ期）（P〈0．05）;（3）高一中分化癌组与低分化癌组相比较,乙酰肝素酶蛋白表达及MVD值差异有统计学意义（P％0．05）;（4）而组织学类型、年龄对乙酰肝素酶蛋白表达及MVD值无影响（P〉0．05）。（5）临床晚期（Ⅲ～Ⅳ期）组中乙酰肝素酶蛋白的表达与MVD值成正相关（r=0．356,P〈0．05）。结论乙酰肝素酶在卵巢癌中表达增高,且与临床病理分期密切相关,乙酰肝素酶具有促进卵巢癌血管生成的作用。     

乙酰肝素酶在卵巢癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨乙酰肝素酶在卵巢癌组织中的表达及其与患者年龄、临床病理特征及预后的关系.方法 采用免疫组化S-P法检测41例卵巢癌组织及10例正常卵巢组织中乙酰肝素酶蛋白的表达,并结合卵巢癌的组织类型、分化程度、临床分期及预后进行分析.结果 ①乙酰肝素酶蛋白在卵巢癌组织中的阳性表达率为80.48%,在正常卵巢组织中为10.00%(P＜0.05).②临床Ⅲ～Ⅳ期卵巢癌中乙酰肝素酶蛋白的表达高于Ⅰ～Ⅱ期(P＜0.01);低分化程度的卵巢癌中乙酰肝素酶蛋白的表达高于高-中分化者(P＜0.05).③各组织类型卵巢癌中乙酰肝素酶蛋白的表达无显著性差异(P＞0.05).结论 乙酰肝素酶在卵巢癌发展过程中起重要作用,检测乙酰肝素酶蛋白的表达有望成为判断卵巢癌预后的标志.     

人Heparanase基因真核和原核表达载体的构建及融合蛋白的表达

目的：构建人Heparanase基因的真核、原核表达载体，大肠杆菌表达其融合蛋白．方法：采用反转录．聚合酶链反应从人肝癌细胞株HepG2cDNA中，分别扩增出Heparanase编码基因，用限制性内切酶BamHI消化后，插入真核表达载体pcDNA3．1中，经酶切鉴定与测序证实后，连接成包括完整的人Heparanase基因ORF区的真核表达载体，以亚克隆法构建于原核表达载体pRSET的相应酶切位点，转化大肠杆菌BL21菌株，异丙基β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导产生融合蛋白．结果：构建的人Heparanase基因表达载体经序列测定证实，与GenBank登录结果完全一致；双酶切鉴定证实，克隆基因正确插入载体pcDNA3．1及pRSET；SDS-PAGE证实融合蛋白表达成功．结论：成功构建了人Heparanase基因真核、原核表达载体，成功正确表达了6His／Heparanase融合蛋白     

59例乳腺癌的临床与病理分析

目的研究59倒乳腺癌的临床特征、痛理与乳腺癌中ER、PR、p53、CerbB-2等的表达情况。方法时59例患者的临床资料、病理类型厦免疫组化结果进行回顾性分析。结果乳腺癌中ER、PR、p53、CerbB-2表达阳性率为27．1％、54．2％、47.5％、55.9％。p53表达阳性与乳腺癌组织学分级差异有统计学意义（P＜0．05）．与淋巴结转移差异有统计学意义（P＜0．01）。结论乳腺癌中,p53表达与CerbB-2表达相关,p53表达阳性不仅与细胞癌变有关,而且与癌细胞的浸润和转移有关。     

人乙酰肝素酶基因启动子驱动的真核细胞表达载体构建、鉴定及功能分析

目的构建人乙酰肝素酶（HPSE）基因启动子驱动的肿瘤细胞特异性表达载体,并分析其活性。方法PCR扩增人类基因组DNAHPSE启动子核心片段,并测序鉴定和分析转录因子结合位点（TFBS）。双酶切插入pEGFP-1的多克隆位点,构建肿瘤细胞表达载体pEGFP-Hp。将经酶切和测序鉴定的重组质粒pEGFP—Hp及质粒pEGFP-1（阴性对照）和pEGFP—N1（阳性对照）分别转染正常人脐静脉内皮细胞（ECV）和不同的肿瘤细胞（肝癌细胞HepG2、喉癌上皮细胞Hep2和慢性白血病K562细胞）。荧光显微镜观察和流式细胞术分析其促转录活性。结果扩增的HPSE启动子核心片段长度为561bp,序列分析与GenBank收录一致,含有3个SPI、4个Ets相关元件、2个早期生长反应基因-1及E47、N—mye和NGFI—p300等TFBS各1个。重组质粒pEGFP—Hp经酶切和测序鉴定与预期结果一致。荧光显微镜观察显示,转染pEGFP-1细胞中均无荧光表达;转染pEGFP—N1细胞均有强荧光表达;转染pEGFP—Hp质粒的ECV几乎无荧光表达,HepG2和Hep2细胞有较强荧光,K562细胞仅有较弱荧光。流式细胞术检测表明,pEGFP—Hp在ECV、HepG2、Hep2和K562细胞的平均转染率分别为3．9％、21．3％、10．8％和6．5％,pEGFP-N1转染率分别为17．1％、24．0％、14．0％和11．0％,二者比值均小于1。结论成功构建了由HPSE核心启动子驱动的真核细胞表达载体,该载体可在肿瘤细胞特异性表达,但其活性需进一步加强。     

乙酰肝素酶、组织蛋白酶D在宫颈癌的表达

目的探讨乙酰肝素酶（Hps）和组织蛋白酶D（CathD）与宫颈癌的发生、发展及预后的关系。方法取我院宫颈癌住院手术患者组织标本89例;宫颈上皮内瘤变（CIN）41例,正常宫颈组织35例。采用免疫组化SP法对乙酰肝素酶和组织蛋白酶D的表达进行检测。结果宫颈癌组织中乙酰肝素酶和组织蛋白酶D的免疫积分明显高于宫颈CIN组织及正常宫颈组织。而在CIN和正常宫颈组织间比较无统计学差异。乙酰肝素酶和组织蛋白酶D的表达与宫颈癌的临床分期、血管浸润和淋巴结转移有关。结论乙酰肝素酶和组织蛋白酶D可能在宫颈癌的发生、发展及预后中起着重要作用。     

人乙酰肝素酶的体外表达及诱导表达条件的优化

目的构建人乙酰肝素酶重组表达质粒,以期获得足够的乙酰肝素酶蛋白,用于其功能研究。方法将人全长乙酰肝素酶cDNA克隆至原核表达载体pET28a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3)进行体外表达,并探索C-端带一个His标签及C-端、N-端各带一个His标签对乙酰肝素酶表达量的影响。结果重组原核表达质粒能在大肠杆菌中高效表达人乙酰肝素酶蛋白。结论成功构建了人乙酰肝素酶原核表达系统,C-端、N-端均带His标签的表达载体表达的乙酰肝素酶蛋白量明显高于仅在C-端带His标签的表达载体表达的乙酰肝素酶蛋白量。