预变性周围神经移植和NGF治疗脊髓损伤的诱发电位学研究

目的:用诱发电位学方法评价联合应用预变性周围神经移植(PPNG)和神经生长因子(NGF)治疗脊髓损伤(SCI)的作用。方法:将50只S-D大鼠分为5组,A组为PPNG和NGF组;B组为PPNG组;C组为NGF组;D组为单纯损伤组;E组为正常对照组。各组动物分别在手术后即刻、术后第1、4、8周诱发电位学检查,测量并比较各组的N1波幅值及N1波潜伏期。结果:术后8周,N1波幅值:A、E组N1波波幅比B、C组大;N1波潜伏期:A组较B、C组短,有显著性差异。结论:诱发电位学观察结果表明联合应用PPNG及NGF可明显促进SCI后的再生。     

NGF对腰神经根慢性压迫性模型大鼠脊髓神经细胞凋亡的影响

目的 通过大鼠腰神经根慢性压迫性损伤模型,探讨神经生长因子（NGF）对腰神经根慢性压迫性损伤致脊髓神经细胞凋亡的影响.方法 将54只大鼠分为生理盐水（NS）对照组、NGF硬膜外隙给药组、NGF尾静脉给药组,术后每组动物分别存活1、2、4周,不同时段各组动物均为6只.手术经大鼠左侧L5椎间孔插入长4 mm、直径0.5～0.6 mm的中空钢管,对神经根形成稳定的压迫,同时中空钢管套接PE管引至项部皮下行硬膜外隙用药.造模术后压迫组与NGF硬膜外隙给药组分别经PE管于硬膜外隙注射NS与NGF,NGF尾静脉给药组经尾静脉注射NGF.术后进行行为学及大体观察,对L5神经根相连的脊髓节段切片进行组织学等染色,观察各组脊髓神经细胞的病理变化.结果 神经根压迫性损伤后,出现神经行为学改变,各时相点NGF给药组神经行为学特征恢复优于对照组（P＜0.05）;组织学染色证实受压神经根相连的脊髓节段出现神经细胞变性、凋亡,在各时相点NGF给药组与NS对照组比较,NGF给药组凋亡细胞数量减少（P＜0.05）;NGF给药组Bax蛋白的表达降低（P＜0.05）;NGF给药组bcl-2蛋白的表达上调（P＜0.05）,而NGF用药各组间在同一时相点差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 建立大鼠腰神经根慢性压迫性损伤后可致相应脊髓节段神经细胞的凋亡,分别经硬膜外隙或尾静脉给予NGF治疗后均可抑制脊髓神经细胞的凋亡.     

神经干细胞移植联合促红细胞生成素对大鼠脊髓损伤的修复作用

目的:观察神经干细胞(NSCs)联合促红细胞生成素(EPO)对横断性大鼠脊髓损伤的修复作用,为临床治疗脊髓损伤提供理论依据。方法:40只成年雌性Wistar大鼠建立大鼠T10全横断脊髓损伤模型,并随机分为对照组、NSCs组、EPO组和NSCs+EPO组,每组10只。术后8周采用NF-200免疫组织化学染色和免疫荧光染色对各组大鼠损伤区脊髓神经纤维再生情况进行形态学观察;应用BBB评分评估各组大鼠后肢运动功能恢复情况。结果:组织形态学观察,对照组大鼠横断处脊髓组织残端萎缩,脊髓白质和灰质间可见大量空洞形成,未见有明显的神经纤维再生;NSCs+EPO组大鼠横断处脊髓组织残端轻度萎缩,横断区可见大量呈杂乱、无序生长的神经纤维,可见有连续性神经纤维通过脊髓横断区,脊髓白质和灰质间可见少量空洞形成。NSCs+EPO组大鼠中,FITC共轭抗神经丝蛋白抗体NF-200标记的再生神经纤维在横断区头侧大量再生,呈无序状生长,并通过损伤区到达尾侧;NSCs组大鼠可见少量神经纤维再生,未通过损伤区到达尾侧。NSCs+EPO组大鼠后肢运动功能BBB评分,术后7 d内均高于其他各组(P<0.05);NSCs组大鼠后肢运动功能BBB评分术后7 d内均高于对照组和EPO组(P<0.05)。结论:NSCs移植联合腹腔注射EPO可有效促进大鼠损伤脊髓功能的恢复、轴突的存活和再生。     

神经干细胞移植联合腹腔注射促红细胞生成素对横断性脊髓损伤大鼠神经轴突的修复作用

目的: 探讨神经干细胞(NSCs)与促红细胞生成素(EPO)共同作用于横断性脊髓损伤大鼠后对损伤区轴突的修复作用,为临床治疗脊髓损伤提供理论依据。方法: 40只雌性成年Wistar大鼠,建立T10全横断大鼠脊髓损伤模型后,随机分为对照组、NSCs组、EPO组和联合治疗组,每组10只。术后8周采用BDA皮质脊髓束顺行追踪法和荧光金(FG)皮质脊髓束逆行追踪法评估损伤区脊髓神经轴突再生情况,同时分期采用实验性脊髓损伤运动功能BBB评分法评价大鼠后肢功能恢复情况。结果: BDA 免疫荧光染色和FG免疫荧光染色,联合治疗组可见大量被BDA-cy3红色荧光标记的再生轴突,其中部分再生轴突穿越损伤区到达远端;NSCs组仅见少量轴突再生,无神经轴突通过脊髓损伤区;EPO组偶见散在的神经纤维再生;对照组无明显的轴突再生。联合治疗组大脑皮质中可见少量被FG标记的椎体细胞及轴突发出金黄色荧光,其余3组大脑皮质中无FG标记细胞。大鼠后肢功能BBB评分,在术后1周及1周以后各时段,联合治疗组大鼠BBB评分均高于其他各组(P<0.05)。结论: 脊髓损伤后移植NSCs联合腹腔注射EPO可有效促进脊髓损伤区神经轴突的再生以及脊髓损伤大鼠后肢运动功能的恢复。     

褪黑素对急性脊髓损伤大鼠血清及脊髓内神经生长因子表达的影响

目的研究褪黑素（MT）对脊髓损伤大鼠血清及脊髓内神经生长因子（NGF）表达水平的影响。方法84只健康成年雄性SD大鼠随机分为模型对照组（n=36）、模型MT组（n=36）及假手术组（n=12）。建立脊髓损伤模型后,模型对照组给予无水乙醇,模型MT组给予MT,均为腹腔注射。对比术后12h、3、5d大鼠血清及脊髓组织中NGF的表达及Tarlov评分。结果术后12h模型对照组及模型MT组Tarlov评分显著低于假手术组（P〈0．05）。模型MT组TarlOV评分稍高于模型对照组,但差异无统计学意义（P〉0．05）。术后3、5d模型MT组Tarlov评分均显著高于模型对照组（P〈0．05或P〈0．01）。术后12h、3、5d模型对照组和模型MT组血清NGF水平、脊髓组织NGF蛋白及NGFmRNA水平均较假手术组显著上升,模型MT组则显著高于模型对照组（P〈0．05或P〈0．01）。结论MT通过调高脊髓损伤大鼠体内NGF的表达起到减轻神经细胞损伤、促进神经细胞再生和神经功能恢复作用。     

Human neural stem cells promote corticospinal axons regeneration and synapse reformation in injured spinal cord of rats

Background Axonal regeneration in lesioned mammalian central nervous system is abortive, and this causes permanent disabilities in individuals with spinal cord injuries. This paper studied the action of neural stem cell （NSC） in promoting corticospinal axons regeneration and synapse reformation in rats with injured spinal cord. Methods NSCs were isolated from the cortical tissue of spontaneous aborted human fetuses in accordance with the ethical request. The cells were discarded from the NSC culture to acquire NSC-conditioned medium. Sixty adult Wistar rats were randomly divided into four groups （n=15 in each）： NSC graft, NSC medium, graft control and medium control groups. Microsurgical transection of the spinal cord was performed in all the rats at the T11. The NSC graft group received stereotaxic injections of NSCs suspension into both the spinal cord stumps immediately after transection; graft control group received DMEM injection. In NSC medium group, NSC-conditioned medium was administered into the spinal cord every week; NSC culture medium was administered to the medium control group. Hindlimb motor function was assessed using the BBB Locomotor Rating Scale. Regeneration of biotin dextran amine （BDA） labeled corticospinal tract was assessed. Differentiation of NSCs and the expression of synaptophysin at the distal end of the injured spinal cord were observed under a confocal microscope. Group comparisons of behavioral data were analyzed with ANOVA. Results NSCs transplantation resulted in extensive growth of corticospinal axons and locomotor recovery in adult rats after complete spinal cord transection, the mean BBB scores reached 12.5 in NSC graft group and 2.5 in graft control group （P〈 0.05）. There was also significant difference in BBB score between the NSC medium （11.7） and medium control groups （3.7, P〈 0.05）. BDA traces regenerated fibers sprouted across the lesion site and entered the caudal part of the spinal cord. Synaptophysin expression colocalized with BDA positive axons and neurons distal to the injury site. Transplanted cells were found to migrate into the lesion, but not scatter along the route of axon grows. The cells differentiated into astrocytes or oligodendrocytes, but not into the neurons after transplantation. Furthermore, NSC medium administration did not limit the degree of axon sprouting and functional recovery of the injured rats compared to the NSC graft group. Conclusions Human embryonic neural stem cells can promote functional corticospinal axons regeneration and synapse reformation in the injured spinal cord of rats. The action is mainly through the nutritional effect of the stem cells on the spinal cord.     

CD44在大鼠脊髓半横断损伤后的表达变化

目的通过观察CD44在大鼠脊髓半横断损伤（hemisection of Spinal Cord Injury,hSCI）位点头尾段的表达,了解它与脊髓损伤的关系。方法免疫组化SP法检测大鼠脊髓半横断损伤后CD44的表达变化情况。制备大鼠脊髓损伤模型。SD大鼠随机分为假手术对照组和脊髓半横断损伤3天、7天和14天组。应用免疫组织化学和图像分析技术检测脊髓组织CD44的表达。结果CD44阳性产物主要定位于细胞外基质,神经元和神经胶质细胞的胞浆中也有分布。损伤后CD44的表达较对照组明显增多﹝P〈0.05﹞。结论脊髓半横断损伤后,表达增加的CD44参与损伤后轴突生长被抑制这一过程。     

眼镜蛇毒神经生长因子对去部分背根猫脊髓背角内GAP-43表达的影响

目的观察眼镜蛇毒分离纯化出的神经生长因子(NGF)对去部分背根猫脊髓背角内生长相关蛋白-43(GAP-43)表达的影响。方法对45只成年雄性家猫切除一侧L1-L5、L7-S2背根节,保留L6背根及背根节为备用背根,按给药剂量将动物分成小剂量NGF组(1μg/kg)、大剂量NGF组(2μg/kg)和生理盐水对照组,每组15只,术后分别存活3、6、12d,对L6节段脊髓作GAP-43免疫组织化学检测。结果术后术侧GAP-43阳性反应产物主要分布在脊髓、、板层的神经终末;中央管室管膜细胞呈阳性反应;脊髓前角神经毯呈阳性反应,整个脊髓板层未见阳性反应的神经元。术后3d,三组术侧、、板层即有GAP-43阳性神经纤维的表达;术后6d,三组GAP-43阳性神经纤维数量明显增多,至术后第12d,神经纤维数量增加达高峰,治疗组神经终末数量增加明显,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),不同时间段均以大剂量组的增多尤为显著。结论蛇毒NGF能有效诱导脊髓损伤修复过程中神经元GAP-43的合成而促进保留背根的侧支出芽,其密度与蛇毒神经生长因子的治疗剂量有关。     

大鼠脊髓慢性受压后脊髓组织神经生长因子及其受体的表达

目的:观察大鼠脊髓慢性受压后脊髓组织中神经生长因子(NGF)及其受体(TrkA)表达的变化。方法:采用大鼠后路渐进性压迫的方法制作大鼠轻、中、重度脊髓压迫损伤动物模型,用免疫组化检测脊髓组织中NGF及其受体的表达的变化。结果:正常大鼠脊髓组织中的脊髓神经元和灰、白质中的胶质细胞NGF和TrkA表达较弱;脊髓受压后NGF和TrkA表达增强(P<0.05)。受压程度越重,其表达越明显,免疫反应强度与脊髓受压程度呈正相关。结论:大鼠脊髓慢性受压后,NGF及其受体表达增多,这可能对脊髓神经元的存活和保留具有重要作用。     

神经生长因子对大鼠脊髓损伤后N-甲基-D-天门冬氨酸受体1和神经元一氧化氮生成的影响

目的 :探讨神经生长因子 (NGF)对脊髓损伤保护作用的机制 ,为其临床应用提供理论依据。方法 :采用Allen s法以 1 0g× 2 5cm力致伤大鼠T8脊髓 ,插蛛网膜下腔导管于术后 2h、4h、8h、1 2h、2 4h注入NGF溶液 (60 μg/ 2 0 μl)或生理盐水组。采用原位杂交法检测N 甲基 D 天门冬氨酸受体 1 (NMDAR1 )和神经元型一氧化氮合成酶 (nNOS)在脊髓中的表达。结果 :与正常组比较 ,大鼠伤后脊髓前角运动神经元出现NMDAR1和nNOSmRNA的异常表达 ,NGF组与生理盐水组相比较 ,NMDAR1和nNOSmRNA异常表达减少 (P <0 0 1 )。结论 :NGF能通过抑制脊髓损伤后NMDAR1和一氧化氮 (NO)的产生 ,从而保护了损伤的神经组织。     

神经生长因子对脊髓神经元损伤后c-fos mRNA表达的影响

目的：探讨神经生长因子(NGF)对脊髓神经元保护作用的机制。方法：采用Allen‘s法制成大鼠TB脊髓损伤模型，用原位杂交方法检测神经元c—fos mRNA的表达。结果：脊髓损伤后神经元c—fos mRNA表达较正常对照未损伤神经元显著增加，表达高峰出现在损伤后1h；NGF能显著抑制损伤后神经元c—fos mRNA的异常表达。结论：NGF对损伤后神经元保护作用机制，可能是其抑制了c—fos基因异常表达，保护了神经元。     

骨髓基质干细胞移植对大鼠脊髓损伤区NGF与BDNF表达的影响

目的研究骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stem cells,BMSCs）移植对大鼠脊髓损伤（SCI）后神经生长因子（NGF）与脑源性神经营养因子（BDNF）表达的影响。方法大鼠SCI后10minBMSCs移植入损伤区,应用west-ern blot观察BMSCs移植后,大鼠脊髓损伤区NGF和BDNF蛋白表达的变化。结果各时间点上NGF、BDNF蛋白在BMSCs移植组较对照组表达明显增强。NGF表达水平在3d达高峰后开始下降,BDNF3d达高峰后到14d仍然维持在较高水平。结论脊髓损伤后BMSCs移植可上调脊髓损伤区NGF、BDNF的表达,是修复脊髓损伤的机制之一。     

Effects of Co-grafts Mesenchymal Stem Cells and Nerve Growth Factor Suspension in the Repair of Spinal Cord Injury

Endogenous repair ability of mammalsisli mit-ed after the damage of central nervous system.It isdifficult to produce the new neurons for the dam-aged adult central nervous system,and neither canthe damaged systemstart the functional axonal re-generation. At present ,a good many methods arebelieve to be able toi mprove the damagedlocal mi-croenvironment , such as cell transplantation andprovision of exogenous neurotrophic factors ,whichare ai med at promoting the regeneration of thedamaged spin…     

Effects of Nerve Growth Factor on\= Excitatory Amino Acid Content in\= Spinal Cord Neuron after Spinal Cord Injury

ＩｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎＷｅｅｖａｌｕａｔｅｄｔｈｅｅｆｅｃｔｏｆＮＧＦｆｏｌｏｗｉｎｇｓｐｉｎａｌｃｏｒｄｉｎｊｕｒｙ（ＳＣＩ）ｂｙｄｅｔｅｃｔｉｎｇｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｅｘｃｉｔａｔｏｒｙａｍｉｎｏａｃｉｄｓ（ＥＡＡ）,ａｎｄｔｏｅｘｐｌｏｒ...     

SD大鼠脊髓全横断损伤后神经细胞凋亡的研究

目的检测SD大鼠脊髓全横断损伤后神经细胞凋亡的形态及数量变化.方法建立SD大鼠脊髓全横断损伤模型,采用原位细胞凋亡TUNEL法检测术后3、7、14d和21d损伤断面头、尾侧脊髓中凋亡神经细胞的形态及数量变化.结果损伤后不同时点脊髓灰、白质均有凋亡细胞分布,细胞核呈紫色及黄褐色双重染色,形态不一;损伤后3d,脊髓损伤断面头、尾端腹角即出现大量神经细胞凋亡,并持续至21d;各时点头、尾侧与假手术组比较,脊髓腹角神经细胞凋亡数均增加（P〈0.05）;凋亡的胶质细胞数在21d较14d减少（P〈0.05）.结论脊髓损伤后广泛存在神经细胞凋亡,是继发性损伤的主要形式.     

抗LINGO-1抗体可促进小鼠脊髓损伤后运动纤维再生及抑制感觉纤维萎缩

目的:观察抗LINGO-1抗体对小鼠脊髓损伤后下行运动与上行感觉纤维的保护作用?方法:采用LISA脊髓损伤造模仪制作小鼠第9胸髓背侧切割伤模型(深度1.1 mm),术后腹腔注射抗LINGO-1抗体,运用免疫组化与免疫荧光观察在脊髓损伤后,生物素化葡聚糖胺(BDA)标记的下行皮质脊髓束(CST)轴突和霍乱毒素B亚单位(CTB)标记的上行感觉纤维的变化?结果:抗LINGO-1抗体注射组动物,可见少量BDA阳性纤维长入或越过损伤部位,且在尾侧白质内前行,最远可达损伤部位尾侧端1.5 mm;同时,在切口尾侧缘可见较对照组更多的CTB阳性纤维,但未见CTB阳性纤维长入或越过损伤切口?接受IgG注射的对照组动物,未发现任何BDA或CTB阳性纤维长入或越过损伤部位?结论:系统注射抗LINGO-1抗体可促进小鼠脊髓损伤后CST轴突再生,同时能抑制CTB标记的上行感觉纤维萎缩?提示抗LINGO-1抗体可作为一种新的药物用于脊髓损伤后促进轴突再生的治疗学研究?     

刺五加皂苷对急性脊髓损伤后脊髓内BDNF和NGF表达的影响

［摘要］ 目的 研究刺五加皂苷对脊髓损伤后组织内脑源性神经营养因子（BDNF）和脊髓内神经生长因子（NGF）两种蛋白表达的影响,探讨刺五加皂苷对脊髓损伤后的保护作用。方法 将45只雄性大鼠随机分为3组：假手术组、模型组和刺五加皂苷干预组,每组15只。将实验动物用10%水合氯醛麻醉后运用改良Allen’s法进行急性脊髓损伤模型造模。造模后假手术组予正常饲养,模型组造模后进行连续7 d生理盐水腹腔注射,刺五加皂苷干预组造模后进行连续7天相应剂量的刺五加皂苷持续腹腔注射。ELISA法检测血清中丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）,通过病理切片分析大鼠脊髓组织病理变化,蛋白印迹法检测大鼠脊髓内BDNF和NGF表达。结果 与假手术组比较,模型组和刺五加皂苷干预组大鼠血清中MDA的含量增加（P﹤0.05）,SOD的含量降低（P﹤0.05）,脊髓有明显损伤,大鼠脊髓组织中的BDNF和NGF蛋白表达量上升（P﹤0.05）;与模型组相比,刺五加皂苷组大鼠后肢功能具有明显改善,血清中中MDA含量降低（P﹤0.05）,SOD的含量升高（P﹤0.05）,大鼠脊髓组织中的BDNF和NGF蛋白表达量上升（P﹤0.05）。结论 刺五加皂苷促进脊髓组织中神经元细胞内BDNF和NGF表达,利于损伤神经元的修复,对大鼠急性脊髓损伤具有保护作用。     

挤压伤后脊髓腹角运动神经元NGF,BDNF表达的变化

为探讨脊髓挤压伤后早期不同时间腹角运动神经元NGF和BDNF的表达变化，建立脊髓挤压伤模型，取挤压伤位点尾侧段T13节段脊髓制作冰冻切片，运用NGF，BDNF兔抗血清以免疫组化ABC法染片，观察并计数腹角NGF和BNDF的阳性神经元数。结果：NGF主要分布于正常大鼠脊髓腹角运动神经元的胞核及胞浆，损伤后21d，NGF的阳性神经元数较对照、损伤1d及7d组均明显增多（P＜0．01），与NGF比较，对照组脊髓腹角亦见BDNF免疫阳性神经元，胞浆染色、胞核不着色，损伤后24h，BDNF阳性神经元数已较正常者有显著增加（P＜0．05），此后维持该水平至21d，结论：脊髓挤压伤后腹角神经元NGF和BDNF的表达明显增加，提示NGF和BDNF可能在脊髓损伤修复的早期反应中发挥作用。     

银杏酮酯对大鼠坐骨神经损伤后神经生长因子蛋白表达的影响

目的研究银杏酮酯对大鼠坐骨神经损伤后神经生长因子（nerve growth factor,NGF）蛋白表达的影响。方法SD大鼠78只,随机分成正常组、损伤对照组与实验组,后两组切断右侧坐骨神经并缝合。实验组给予银杏酮酯每日200mg／kg溶于1mL生理盐水中灌胃,损伤对照组给予生理盐水1mL灌胃,正常组不做处理。分别于术后1、3、7、14、21及28d取吻合口远段的神经、相应节段的脊神经节及脊髓,应用免疫组织化学和图像分析的方法研究所取组织中NGF的表达并进行定量分析。结果实验组坐骨神经、脊神经节及脊髓中NGF蛋白免疫阳性区域面积和平均灰度值在术后7、14、21和28d明显高于对照组（P〈0．05,P〈0．01）。结论大鼠坐骨神经损伤后用银杏酮酯治疗,在早期可促使坐骨神经及相应节段脊神经节和脊髓组织中的NGF蛋白表达增加。     

大鼠脊髓损伤BDNF基因修饰神经干细胞移植后HRP逆行示踪

目的：检测大鼠脊髓损伤脑源性神经营养因子（Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)基因修饰神经干细胞移植后，神经纤维的再通及后肢功能恢复情况。方法：大鼠L4脊髓全横断后，在横断处立即移植BDNF基因修饰神经干细胞，分四个时相点（1周，1、2、3个月）进行辣根过氧化物酶（HRP）逆行示踪，并观察损伤移植处的形态学变化及大鼠后肢运动功能恢复情况。结果：损伤移植处脊髓的形态学明显好转；损伤移植处上段脊髓中，移植1个月组有HRP阳性细胞，以后两组逐渐增多；移植组大鼠后肢运动功能明显恢复。结论：大鼠脊髓损伤BDNF基因修饰神经干细胞移植后，在损伤移植处有HRP阳性神经元和神经纤维，大鼠后肢运动功能明显恢复，提示BDNF基因修饰神经干细胞有修复大鼠脊髓损伤的作用。