用非同位素原位杂交组化在光镜和电镜水平观察前阿黑皮素mRNA在…

用地高辛标记反意前阿黑皮素ｃＲＮＡ探针原位杂交组位杂交组化在光镜和电镜水平观察了ＰＯＭＣ ｍＲＮＡ在大鼠垂体的分布，并比较了碱性磷酸酶（ＡＫＰ）显色系统和辣根过氧化酶（ＨＲＰ）显色系统在光镜水平上的敏感性。结果：ＰＯＭＣ ｍＲＮＡ广泛地分布于的中间叶和前叶。中间叶全部细胞均为ＰＯＭＣ ｍＲＮＡ阳性。前叶中除前叶的腹侧缘和前叶与中间叶交界处阳性细胞较少外，都有较多的ＰＯＭＣ ｍＲＮＡ阳性细胞分布。Ａ     

大鼠下丘脑内前阿黑皮素原mRNA的老年变化

研究大鼠下丘脑内前阿黑皮素原（POMC）mRNA表达的老年变化，本实验采用SPraque－Dawley大鼠3月龄（青年组）和28～30月龄（老年组）各8只，利用地高辛标记POMC反义RNA探针进行原位杂交组织化学并行图象定量分析。结果：在青年组大鼠肉，OPMCmRNA阳性胞体主要分布于弓状核及其邻近区域；老年大鼠POMCmRNA胞体主要分布于弓状核的内侧，着色浅谈．与年轻大鼠相比，老年大鼠下丘脑内POMCmRNA神经元数量显著减少，（P＜0．01），胞体灰度值明显升高（P＜0．05），而胞体截面积略有增大，但差异无显著性（P＞0．05）。结果表明，大鼠下丘脑内POMCInRNA神经元有明显的老年变化，提示老年大鼠下丘脑POMC神经元胞体发生了衰老形态学改变，功能活动低下，细胞丢失，POMC的表达显著增加，生物合成功能紊乱。     

小鼠脑干交感运动前区前阿黑皮素能神经传入投射的实验研究

目的:研究脑干交感运动前区的前阿黑皮素能神经纤维的分布及其传入投射。方法:以免疫组化法检测前阿黑皮素能神经纤维在脑干交感运动前区的分布;将霍乱毒素B微量注入小鼠脑干交感运动前区进行逆行追踪。结果:α-MSH(α-melanocyte-stimulating hormone)能神经终末密集分布于交感运动前区内,同时则未见AgRP(agouti-related protein)能神经终末,显示交感运动前区仅接受前阿黑皮素(POMC)能神经的单向调节。逆行追踪实验显示脑干交感运动前区的POMC能纤维投射来自于下丘脑弓状核/视交叉后区,而非孤束核尾侧部;统计结果表明下丘脑弓状核/视交叉后区向脑干交感运动前区的神经投射中有近一半为POMC能投射。结论:小鼠下丘脑的POMC能神经元可直接投射到脑干交感运动前区,该神经通路在能量平衡的调节中可能发挥重要的作用。     

安君宁对吗啡依赖大鼠伏隔核内前阿黑皮素原表达的影响

目的:研究安君宁对吗啡依赖雄性SD大鼠伏隔核内前阿黑皮素原表达的影响。方法:30只体重180-220g的雄性SD大鼠,设对照并建立吗啡依赖模型后随机均衡分为5组:淀粉正常对照组,吗啡戒断并安君宁治疗12d、30d组,吗啡戒断并淀粉治疗12d、30d组。吗啡依赖模型的建立采用剂量递增10日法(5mg/kg/次￣50mg/kg/次,2次/日,腹腔注射)。安君宁干预方法:灌胃1g/kg/次,2次/日;对照组灌等量的淀粉。各组大鼠按预定时间麻醉、灌注、留取脑组织。采用原位杂交技术测定伏隔核(NAs)内前阿黑皮素原(POMC)mRNA水平。结果:安君宁干预组与干预对照组相比,NAs内POMC mRNA水平显著增高(P<0.05)(吗啡戒断12、30d时,安君宁干预组NAs内POMC mRNA水平分别为0.34±0.11、0.51±0.13,干预对照组分别为0.33±0.17、0.39±0.15。(xs±)×10-2)。结论:安君宁能促进吗啡依赖大鼠伏隔核内前阿黑皮素原表达的恢复。     

孤束核内生长抑素mRNA分布的原位杂交组化研究

用原位杂交法对孤束核尾侧部内生长抑素ｍＲＮＡ（ＳＯＭｍＲＶＡ）的分布进行了研究。ＳＯＭｍＲＮＡ位于不同平面孤束核内的神经元胞体和近端树突中，从ＳＯＭｍＲＮＡ阳性神经元一般为中小型细胞，呈圆形或椭圆形，分布于孤束核的内侧亚核、背侧亚核、背外侧亚核、连合亚核、中间亚核、腹侧亚枝和腹外侧亚核，其中以最后区上段及其吻侧平面的孤束核的内侧亚核、连合亚核、背侧亚核和背外侧亚核最为多见。结果提示ＳＯＭｍＲＮＡ阳性神经元在该核尾侧部各亚核内的广泛分布可能与该核参与对血压、心血管、呼吸、胃肠道等内脏活动的中枢控制有密切关系。生长抑素作为一种神经调制物可能在上述孤束核参与的植物性神经复杂整合功能中起着重要的作用。     

大鼠延髓内含前-原脑啡肽mRNA、甲硫氨酸-脑啡肽和亮氨酸-脑啡肽神经元的分布

应用原位杂交和免疫组织化学方法,对成年大鼠延髓内含前-原脑啡肽(PPE)mRNA和甲硫氨酸-脑啡肽(M-ENK)与亮氨酸-脑啡肽(L-ENK)免疫反应神经元进行观察。结果表明:含PPEmRNA的神经元胞体,多数分布在孤束核、腹外侧区以及两者之间的网状结构等形成的一条从背内侧到腹外侧区的弧形带内。M-ENK与L-ENK样免疫反应阳性结构(神经元胞体、纤维和终末)也主要密集分布在该带内。本结果对ENK(M-ENK和L-ENK)参与延髓内脏功能活动的调控过程,提供了进一步的形态学证据。     

原位杂交组织化学与免疫组织化学结合法的研究

介绍一种用原位杂交组织化学与免疫组织化学结合法在同一切片中显示生长抑素ｍＲＮＡ和相对应的生长抑素。同时还比较了六种不同固定液对原位杂交组织化学和原位杂交组织化学与免疫组织化学结合法的影响。结果表明Ｚａｍｂｏｎｉ氏固定液用于原位杂交组织化学与免疫组织化学结合法最佳，而４％多聚甲醛磷酸缓冲液用单纯原位杂交最佳。原位杂交组织化学与免疫组织化学结合法显示的下丘脑室周核生长抑素免疫反应阳性神经元均含有相应生     

生长抑素在大鼠脑室管膜中定位分布的免疫组织化学和原位杂交的研究

采用免疫组织化学ＡＢＣ法和地高辛－碱性磷酸酶标记原位杂交组织化学方法观察生长抑素（ＳＳ）在大鼠脑室管膜中的定位分布。首次证实含ＳＳ的室管膜伸长细胞存在于下丘脑视前区第三脑室腹侧壁上，含ＳＳｍＲＮＡ的室管膜细胞在下丘脑视前区和视上区分布，为研究室管膜在脑－脑脊液神经体液回路中的作用，及ＳＳ在中枢神经系统中的生理功能提供了化学神经解剖学和分子生物学依据     

Peroxiredoxin II mRNA在小鼠卵泡发育中定位的研究

目的　观察PeroxiredoxinIImRNA在小鼠卵巢各级卵泡和MII卵中的分布 ,为了解PeroxiredoxinII在卵母细胞发育及成熟过程中的功能意义提供形态学依据。　方法　原位杂交方法。　结果　在小鼠卵巢内 ,原始卵泡的初级卵母细胞未检到PeroxiredoxinIImRNA的杂交信号 ,初级卵泡的初级卵母细胞可检到杂交信号 ,次级卵泡和近成熟卵泡中卵母细胞的信号明显增强。离开卵巢的GV卵也能检到较强的杂交信号 ,排到输卵管的次级卵母细胞 (MII卵 )杂交信号与GV卵相比明显减弱。从原始卵泡到近成熟卵泡周围的卵泡细胞均可检到杂交信号 ,其信号强度在卵泡发育成熟过程中未见有明显变化。卵母细胞和卵泡细胞的PeroxiredoxinIImRNA杂交信号均分布在胞质。　结论　提示PeroxiredoxinII可能参与了卵母细胞生长发育和卵母细胞成熟过程的调节。     

Mel-1a,Mel-1b褪黑素受体在大鼠海马分布的原位杂交研究

Mel-1a,Mel-1b为分别从人大脑和视网膜克隆的两种褪黑素膜受体。随着褪黑素的各种重要生理作用的不断发现 ,对其受体的研究也日益广泛和深入。本文采用原位杂交技术研究了 Mel-1a,Mel-1b两种褪黑素膜受体 m RNA在海马中的表达和分布 ,结果表明此两种受体 m RNA在成年大鼠海马各区神经元中均有表达。由于褪黑素是通过细胞膜上与 G蛋白耦联的 Mel-1a,Mel-1b受体而发挥作用的 ,而海马又是与老化密切相关的脑区 ,提示褪黑素对海马的老化有调节作用     

ASSESSMENT OF THE DISTRIBUTION OF MITOCHONDRIAL RIBOSOMAL RNA IN MELAS AND IN THROMBOTIC CEREBRAL INFARCTS BY IN SITU HYBRIDIZATION

In situ hybridization to mitochondrial ribosomal RNA (rRNA) has been used to study the distribution of mitochondria in paraffin-embedded autopsy brain tissue from two patients with MELAS (mitochondrial myopathy, encephalopathy, lactic acidosis, and stroke-like episodes) and other organs from one of the patients. Comparison of in situ hybridization and electron microscopic findings in an antemortem biopsy specimen of pylorus from the latter patient showed a close correspondence between the distribution of hybridization signal on light microscopy and of mitochondria in ultrathin sections. Strong hybridization signal was present over smooth muscle fibres of the muscularis externa, which contained abnormal accumulations of mitochondria on electron microscopy. Hybridization to sections of skeletal muscle confirmed previous reports of ‘ragged-red’ fibres in this disorder and of mitochondrial accumulations in the walls of intramuscular blood vessels. To try to elucidate the role of vessel wall accumulation of mitochondria in the genesis of the stroke-like lesions, the distribution of mitochondrial rRNA was assessed in sections of brain from both of the cases of MELAS and several cases of atherothrombotic cerebrovascular disease. Blood vessels in and adjacent to the cerebral lesions of MELAS showed strong hybridization signal with the mitochondrial probes, as was also seen in infarcts of various ages in the control brains. Only weak signal was present in the walls of blood vessels distant from the lesions, in both MELAS and control brains. These findings suggest that mitochondria accumulate in vascular endothelium and tunica media as a normal response to cerebral infarction or ischaemia. The accumulation of mitochondria in the cerebral lesions of MELAS may, at least in part, be a reaction to the destructive effects of the underlying metabolic dysfunction.     

应用半定量原位杂交组化和免疫组化观察老年大鼠下丘脑室周核生长抑素神经元

应用半定量原位杂交组化和免疫组化观察了老年大鼠下丘脑室周核生长抑素神经元的变化.结果表明:老年大鼠下丘脑室周核生长抑素mRNA阳性神经元明显减少(P<0.001).每一神经元的mRNA的相对含量变化不显著;生长抑素免疫反应阳性神经元数目也明显下降(P<0.05).正中隆起处生长抑素免疫反应阳性神经纤维变化不明显.提示老年大鼠下丘脑室周核生长抑素神经元功能活动低下,细胞丢失,合成分泌生长抑素的功能紊乱.     

一种快速敏感检测特异性mRNA的原位杂交技术的研究

:本文介绍一种快速敏感的原位杂交方法。用光敏生物素标记管蛋白cDNA探针,经DNase I酶切成组织渗透性强适合原位杂交的短片段,作快速的原位杂交,再用胶体金标链亲和素系统检测杂交结果。整个过程操作方便,迅速,能保存较多的杂交信号,杂交结果清晰。     

大鼠实验性胃溃疡自愈期间胰岛素原mRNA原位杂交的形态与计量研究

为了探讨胰岛素水平与消化道溃疡的关系，将成年雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠制成胃溃疡动物模型，用地高辛标记的ｐｒｏ－ＩｎｓｃＲＮＡ探针原位杂交方法，观察大鼠实验性胃溃疡自愈期间胰岛Ｂ细胞内ｐｒｏ－ＩｎｓｍＲＮＡ的变化，并对其杂交信号进行定量分析。结果显示，在胃溃疡模型术后第６和第１０ｄ，胰岛Ｂ细胞内的杂交信号增强，表明在溃疡愈合早期ｐｒｏ－ＩｎｓｍＲＮＡ的表达量增加。结合本室以往的研究结果，初步讨论了胰岛素参与胃溃疡自愈的调节过程及其意义     

猫视皮层ERK mRNA表达的研究

丝裂原激活的蛋白激酶又称细胞外信号调节激酶,具有神经元信号传导功能,参与多种发育过程。它由细胞外特殊信号激活,将酪氨酸磷酸化过程转化为丝氨酸／苏氨酸磷酸化过程,后者进一步调节下游的蛋白激酶。因此,细胞外信号调节激酶在磷酸化的连锁反应过程中起着枢纽作用。本文应用地高辛标记寡核苷酸探针的原位杂交技术,研究了细胞外信号调节激酶的２ 种亚型 ＥＲＫ１ 和ＥＲＫ２ ｍ ＲＮＡ 在生后４ 周龄的幼猫视皮层各层的分布。结果表明,ＥＲＫ１ ｍ ＲＮＡ 在视皮层的表达层次明确,以第Ⅴ层和第Ⅲ层的表达为最强,Ⅱ层呈中等表达,Ⅳ层较弱,Ⅵ层最弱,即在视皮层的表达强度为Ⅴ、Ⅲ＞ Ⅱ＞ Ⅳ＞ Ⅵ。与ＥＲＫ１相比,ＥＲＫ２ 的表达普遍较强,但层次欠清晰,其表达强度为Ⅴ、Ⅱ＞ Ⅲ、Ⅳ＞ Ⅵ。ＥＲＫ 的２ 种亚型在视皮层的Ⅰ层即分子层均不表达。ＥＲＫ１ 和ＥＲＫ２ ｍ ＲＮＡ 在视皮层的这种特征性分布提示,在幼猫的视皮层发育过程中,ＥＲＫ 可能具有独特的信号传递作用。