秋水仙碱对肝纤维化大鼠肝脏基质金属蛋白酶-1及其抑制因子-1表达的影响

目的 观察秋水仙碱对纤维化肝脏基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)表达的影响,从胶原降解的角度探讨秋水仙碱对肝纤维化有无逆转作用及可能存在的机制.方法 制备免疫性大鼠肝纤维化模型,并给予秋水仙碱治疗;通过RT-PCR检测MMP-1、TIMP-1的表达,并作Ⅰ、Ⅲ型胶原的免疫组化以及Masson胶原染色.结果 发现秋水仙碱对肝纤维化大鼠MMP-1的表达无明显影响(P>0.05),但可以抑制TIMP-1的表达(P<0.05),促进Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解(P<0.05);然而在病理形态学的观察中,未发现秋水仙碱治疗组与肝纤维化模型组之间存在的显著性差异(P>0.05).结论 秋水仙碱可以抑制纤维化肝脏TIMP-1的表达,从而增强间质胶原酶的活性,促进Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解,产生抗肝纤维化的作用,但其作用有限.     

“CKJ方”对大鼠肝纤维化的防治作用观察

目的观察中药“CKJ方”对大鼠肝纤维化的防治作用.方法分别采用CCl4或DMN诱导大鼠肝纤维化模型,两批实验均按体重梯度随机分为正常组6只、模型组,CKJ方组、扶正化瘀方组和秋水仙碱组各11只.在实验结束时,观察各组动物肝组织Hyp含量,血清ALT、AST、GGT、TBIL、Alb变化及肝组织病理学变化.结果在CCl4模型,CKJ组肝组织Hyp含量为293.0±99.1μg/g肝湿重,显著低于模型组（524.5±143.0μg/g肝湿重,P〈0.01）;CKJ改善肝功能的作用明显优于对照组;CKJ组肝组织病理学变化明显好于模型组（P〈0.01）;在DMN模型,试验结果类似于在CCl4模型见到的情形.结论 CKJ方能有效防治CCl4或DMN诱导的大鼠肝纤维化,其疗效与扶正化瘀方相当,优于秋水仙碱.     

扶正化瘀方对DMN诱导肝纤维化大鼠肝脏MMP-2活性的影响

探讨扶正化瘀方对二甲基亚硝胺 (ＤＭＮ)诱发的肝纤维化大鼠肝脏Ⅳ型胶原含量、Ⅳ型胶原酶 (ＭＭＰ 2 )活性及基质金属蛋白酶抑制物 2 (ＴＩＭＰ 2 )含量表达的影响。采用ＤＭＮ诱导的大鼠肝纤维化模型 ,设正常组、模型组和扶正化瘀方治疗组 ,分别用生化方法测定其肝组织Ｈｙｐ含量、血清ＡＬＴ活性和Ａｌｂ含量 ;Ｅｎｖｉｓｉｏｎ两步法 (免疫组化 )测定肝组织Ⅳ型胶原含量和ＴＩＭＰ 2含量 ;酶图法测定肝组织ＭＭＰ 2活性。结果表明 :①扶正化瘀方能显著降低模型大鼠肝组织Ｈｙｐ及血清ＡＬＴ ,显著升高血清Ａｌｂ ;②扶正化瘀方能够明显降低ＤＭＮ诱发的肝纤维化鼠肝脏的Ⅳ型胶原和ＴＩＭＰ 2 ,显著升高其ＭＭＰ 2活性。扶正化瘀方能够明显改善ＤＭＮ诱发的肝纤维化鼠的病理改变和生化指标 ;能够明显升高ＤＭＮ诱发的肝纤维化大鼠肝脏ＭＭＰ 2活性 ,并显著降低其ＴＩＭＰ 2的表达 ,促进过多的Ⅳ型胶原的分解 ,加速肝窦毛细血管化的恢复。扶正化瘀方对DMN诱导肝纤维化大鼠肝脏MMP-2活性的影响@徐光福!200032$上海中医药大学肝病研究所 @陆雄!200032$上海中医药大学肝病研究所 @刘成海!20003...     

丹参抗CCl4及DMN诱导的大鼠肝纤维化的研究

目的:探讨丹参防治肝纤维化的效果和机理。方法:分别采用四氯化碳(CCl_4)及二甲基亚硝胺(DMN)诱导的大鼠肝纤维化模型,以秋水仙碱作对照,观察肝组织病理学,Ⅰ、Ⅲ型胶原免疫组化,检测肝组织Hyp、MDA、SOD及血清肝功能。结果:丹参和秋水仙碱在两种模型实验中皆显示有良好的抗肝纤维化效果。其中丹参有显著的提高肝SOD活性,降低MDA含量的作用。结论:丹参抗脂质过氧化的作用是其抗肝纤维化的重要机理,对胶原代谢也有直接的作用。     

扶正化瘀方对3T3细胞增殖和胶原生成的影响

目的:探讨扶正化瘀方抗肝纤维化的作用机制。方法:以体外培养的NIH/3T3细胞作为肝脏成纤维细胞的替代模型,用扶正化瘀方药物血清,以10％的浓度被添加到培养液中,通过[~3H]-TdR掺入法和免疫细胞化学,观察药物血清对3T3细胞[~3H]-TdR掺入量和胶原生成的影响。结果:药物血清组[~3H]-TdR掺入量明显少于正常大鼠血清组。药物血清组Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原量均明显低于正常大鼠血清组,其中Ⅰ、Ⅲ型胶原更为显著。结论:扶正化瘀方药物血清明显抑制了3T3细胞增殖和胶原的生成。这可能是该方抗肝纤维化的机制之一。     

双草退黄冲剂3号对大鼠肝纤维化的影响

目的探讨双草退黄冲剂3号对大鼠实验性肝纤维化的疗效。方法将实验大鼠随机分为5组,即正常组、模型组、秋水仙碱组及双草退黄冲剂3号高、低剂量组,采用CCl4诱导大鼠肝纤维化模型,在造模同时给予双草退黄冲剂3号(相当于每日给予原生药10g/kg、5g/kg),给药6周末采血查谷丙转氨酶、Ⅲ型前胶原(PCⅢ),并取肝脏组织测定羟脯氨酸(Hyp)含量及作病理组织学检查,以秋水仙碱组作对照。结果与模型组比较,双草退黄冲剂3号组血清PCⅢ、肝Hyp含量较低(P＜0.05),肝功能损伤较轻,肝组织炎症及纤维增生均不明显;双草退黄冲剂3号高剂量组上述各指标接近或略优于秋水仙碱组。结论双草退黄冲剂3号有保护肝细胞、预防肝纤维化作用。     

扶正化瘀方对DMN肝硬化模型大鼠门静脉压力的影响

目的:研究扶正化瘀方对肝硬化门静脉高压的影响.方法:以5 g/L的二甲基亚硝胺(DMN)ip 4 wk 建立大鼠肝硬化的动物模型,中药治疗3 wk后,肠系膜上静脉插管测定门静脉压力,测定肝组织中羟脯氨酸(Hyp)和内皮素(ET-1)的含量,测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性和白蛋白(ALB)和总胆红素(TBIL)含量,观察肝组织病理形态的变化.结果:模型组大鼠门静脉压力显著升高,升高幅度为正常组的2.4倍:肝组织ET-1含量较正常大鼠增加明显(344.48±71.42 pg/mg vs 247.00±49.51 pg,mg,P<0.01);肝硬化大鼠此2项指标呈显著正相关(r=0.675,P<0.01).而经扶正化瘀方治疗的大鼠,门静脉压力较模型组下降约67%(P<0.01),ET-1含量为292.13±52.07 pg/mg(P<0.05).治疗组大鼠血清ALT、AST、TBIL水平及肝组织Hyp和ET-1含量与模型组比较也都有显著下降,病理观察显示治疗组大鼠肝脏结构基本恢复正常.结论:肝硬化时大鼠门静脉压力升高与肝组织ET-1含量的增高呈正相关.扶正化瘀方通过抗肝纤维化显著降低肝硬化模型大鼠升高的肝组织ET-1含量和门静脉压力.     

丹酚酸A对实验性大鼠肝纤维化Ⅰ型胶原及其基因表达的影响(摘要)

目的:研究丹酚酸A(SA-A)的抗肝损伤、抗肝纤维化作用及其对Ⅰ型胶原基因表达的影响。方法:采用CCl_4诱导大鼠肝损伤及肝纤维化,期间予SA-A灌胃治疗,另设秋水仙碱组、丹参组作对照,6周后进行肝组织病理学和Ⅰ型胶原免疫组化观察,肝组织羟脯氨酸(Hyp)、血清ALT、AST和白蛋白含量测定,并以RT-PCR法检测肝组织Ⅰ型胶     

蕲艾提取液对免疫性肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原及基质金属蛋白酶抑制因子-1表达的影响

目的:研究蕲艾提取液对免疫性肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原及TIMP-1表达的影响.方法:Wistar大鼠60只随机分为正常对照组、模型组和高、中、低剂量蕲艾提取液治疗组,采用异种血清腹腔内注射构建肝纤维化大鼠模型,肝组织切片HE染色后,光镜下观察大鼠肝组织纤维化程度;SABC型免疫组化染色法观察肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原及TIMP-1含量变化.结果:蕲艾提取液各治疗组与模型组相比,肝纤维化程度显著减轻;肝纤维化模型组及蕲艾提取液治疗组Ⅰ、Ⅲ型胶原含量及TIMP-1水平显著高于正常对照组;蕲艾提取液治疗组Ⅰ、Ⅲ型胶原及TIMP-1水平又显著低于肝纤维化模型组.结论:蕲艾提取液能够显著降低免疫性肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原及TIMP-1表达.     

复方益气活血化瘀中药对大鼠肝纤维化组织中胶原和转化生长因子β1表达的影响

目的应用二甲基亚硝胺（DMN）建立肝纤维化大鼠模型,研究以黄芪、丹参、三七为主的益气活血化瘀复方中药抗肝纤维化的作用机制。方法将Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、中药干预组。采用DMN腹腔内注射的方法建立肝纤维化大鼠模型;根据病理学检查评价各组动物肝纤维化程度;应用RT-PCR检测各组肝组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原和TGF-β1mRNA水平;应用免疫组化检测各组肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原和TGF-β1的表达。结果中药干预组大鼠肝纤维化程度、肝组织中Ⅰ型与Ⅲ型胶原和TGF-β1mRNA水平,以及肝组织中Ⅰ型与Ⅲ型胶原和TGF-β1的阳性表达均分别较模型组显著减轻与下降。结论益气活血化瘀复方中药能明显减轻肝组织病理改变和肝纤维化程度,抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原和TGF-β1表达是其抗肝纤维化的部分机制。     

化纤方对肝纤维化大鼠肝功能及肝纤维化指标的影响

目的:观察化纤方对肝纤维化大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸转移酶(AST)、总胆汁酸(TBA)及层粘蛋白(LN)、透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原氨端肽(PⅢNP)含量的影响。方法:采用复合因素法复制肝纤维化大鼠模型,实验各组大鼠分别以生理盐水、秋水仙碱悬液、低剂量化纤方悬液、高剂量化纤方悬液进行干预,测定各组大鼠血清中ALT、AST、TBA以及LN、HA、PⅢNP的含量。结果:模型组大鼠ALT、AST、TBA以及LN、HA、PⅢNP的含量均显著升高(P<0.01);秋水仙碱组、化纤方低、高剂量组大鼠血清中ALT、AST、TBA以及LN、HA、PⅢNP的含量均较模型组显著降低(P<0.05或P<0.01);化纤方低剂量组大鼠血清中LN的含量降低更为显著,各治疗组其余各项指标间比较,差异均无显著性意义(P>0.05)。结论:化纤方有一定程度的保肝降酶及减轻肝纤维化程度的作用,对肝纤维化具有一定的防治作用。     

排钱草总生物碱对肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响

目的:探讨排钱草总生物碱对肝纤维化大鼠肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响。方法:采用逆转录定量PCR方法测定不同剂量排钱草总生物碱对大鼠肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的相对表达值。结果:高、中剂量组大鼠肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达显著低于模型组,P<0.05。与正常对照组相比差异无显著性意义。结论:排钱草总生物碱能显著降低猪血清所致免疫性肝纤维化大鼠肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达。     

实验性肝纤维化时MMP—1,TIMP—1的表达与Ⅰ,Ⅲ型胶原含量？…

为了观察实验性肝纤维化时ＭＭＰ－１、ＴＩＭＰ－１的表达与Ⅰ、Ⅲ型胶原含量变化之间的关系，本文制备了免疫性大鼠肝纤维化模型，运用定量ＲＴ－ＰＣＲ检测肝脏内ＭＭＰ－１、ＴＩＭＰ－１的表达，通过免疫组化检测肝组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量。运用相关理论作统计学分析。结果发现在肝纤维化发生时，Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原含量的变化有显著相关性；ＭＭＰ－１的表达在肝纤维化组与正常对照组之间未见显著差异，与Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量     

血府逐瘀汤抗大鼠肝纤维化作用的研究

目的:研究血府逐瘀汤的抗肝纤维化作用。方法:以SD大鼠为实验材料,运用四氯化碳诱导大鼠肝硬化模型,试验第13周处死动物进行肝组织学检验,以VC染色观察各组动物肝组织胶原总量,免疫组织化学法及薄层色谱扫描检定Ⅰ、Ⅱ型胶原。结果:血府逐瘀汤组大鼠肝表面光整,其腹水形成率明显优于肝硬化模型组和秋水仙碱组(P<0.01)而与正常对照组相近(P>0.05).血府逐瘀汤组胶原总量平均为245.21,而阳性对照的秋水仙碱组和阴性对照的生理盐水组分别为364.97和570.37,血府逐瘀汤组Ⅰ、Ⅱ型胶原含量亦显著低于秋水仙碱组和生理盐水组,而与正常组相似。结论:血府逐瘀汤对Ⅰ、Ⅱ型胶原具有明显抑制作用。     

清肝化瘀口服液对大鼠肝纤维化的治疗作用

应用清肝化瘀口服液治疗小剂量CCl_4诱导的肝纤维化大鼠，并与正常对照组、CCl_4模型组、自然恢复组、秋水仙碱治疗组对照。对各组肝脏Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型胶原及结蛋白进行免疫组化染色和计算机图像分析，并用电镜观察肝脏超微结构的变化。结果发现，清肝化瘀口服液可抑制肝细胞变性坏死，减轻炎症反应，改善微循环，抑制Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型胶原及结蛋白在肝内的沉积，并可使已形成的胶原重新溶解和吸收，使肝纤维化逆转，效果优于秋水仙碱（P＜0．01）；同时，CCl_4诱导的大鼠肝纤维化可有一定程度的自然恢复。表明清肝化瘀口服液对大鼠肝纤维化有显著的治疗作用。     

益肝煎剂对实验性肝纤维化大鼠I,Ⅲ型胶原蛋白表达的影响

目的探讨益肝煎剂对实验性肝纤维化大鼠肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响.方法采用400mL@L-1四氯化碳(CCl4)sc制备大鼠实验性肝纤维化模型,将80只(雌雄各半)Wistar大鼠随机分成正常对照组(A组)、模型对照组(B组)、秋水仙碱组(C组)和益肝煎剂组(D组)各20只.后两组于造模的同时开始给药,观察10 wk.采用苦味酸-天狼星红(Picric acid-Sirius red)染色显示Ⅰ,Ⅲ型胶原.偏振光显微镜下区分Ⅰ,Ⅲ型胶原.用半定量评分方法判断细胞变性程度和纤维化程度.结果益肝煎剂组大鼠肝组织的脂肪变性程度较模型组明显减轻,脂肪变性积分分别为2.00±1.36和3.17±0.75(P＜0.01);Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白含量明显少于模型组,纤维化程度积分分别为1.32±0.57和2.33±0.82(P＜0.01).结论益肝煎剂对大鼠实验性肝纤维化的形成有明显抑制作用.     

扶正化瘀方及其拆方对肝星状细胞活化的影响

目的:观察扶正化瘀方抗肝纤维化的不同药物配伍的药效作用。方法:分离培养大鼠肝星状细胞,将扶正化瘀方拆方为扶正、化瘀、丹参、虫草、丹参 虫草等组,制备其大鼠药物血清,温育星状细胞。~3H-TdR掺入法测定细胞增殖,ELISA法测定细胞上清Ⅰ型胶原含量,并测定细胞层总蛋白含量以校正胶原含量。RT-PCR法观察前胶原α_2(1)mRNA的表达。结果:全方组及各拆方组对星状细胞的增殖、胶原蛋白分泌及α_2(Ⅰ)前胶原mRNA表达均有不同程度的抑制作用。化瘀组对细胞增殖抑制作用最强,扶正组对胶原生成及基因表达抑制作用最强,而全方组介于两者之间。结论:扶正化瘀方及各拆方对星状细胞的活化功能有不同的作用影响,全方组有整体优势,其抗肝纤维化的主要作用机理可能在于抑制星状细胞的活化。     

实验性肝纤维化时MMP-1、TIMP-1的表达与Ⅰ、Ⅲ型胶原含量变化的关系

为了观察实验性肝纤维化时MMP-1、TIMP-1的表达与Ⅰ、Ⅲ型胶原含量变化之间的关系,本文制备了免疫性大鼠肝纤维化模型,运用定量RT-PCR检测肝脏内MMP-1、TIMP-1的表达,通过免疫组化检测肝组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量.运用相关理论作统计学分析.结果发现在肝纤维化发生时,Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原含量的变化有显著相关性;MMP-1的表达在肝纤维化组与正常对照组之间未见显著差异,与Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量变化之间也未见有相关性;TIMP-1的表达在肝纤维化发生时显著增高,与Ⅰ、Ⅲ型胶原的变化也有显著相关性.结果表明肝纤维化发生时MMP-1的表达未见明显改变,而TIMP-1的表达显著增高,且与Ⅰ、Ⅲ型胶原含量的增高呈显著相关,提示TIMP-1的表达增高在肝纤维化的发生、发展中具有重要作用.     

冬虫夏草与秋水仙碱抗肝纤维化的对照研究

目的:以秋水仙碱为对照,观察冬虫夏草对实验性肝纤维化的治疗效果,并探讨其机理。方法:用CCl_4诱导大鼠肝纤维化,分别以生理盐水、秋水仙碱、冬虫夏草各24只进行治疗。实验第4,8,12,14周分批处死动物,测量血清Ⅲ型前胶原含量,取肝组织进行病理观察,并用免疫组化技术观察肝组织Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ型胶原,结蛋白阳性细胞的动态变化。结果:两种药物均能明显降低血清Ⅲ型前胶原含量,并减轻肝组织Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ型胶原的沉积,最终防止肝假小叶及肝硬化形成。动物经药物治疗后肝组织内结蛋白阳性细胞数均明显低于生理盐水组。结论:冬虫夏草与秋水仙碱均有良好的抗肝纤维化作用,它们能抑制肝内储脂细胞(结蛋白阳性细胞)的增殖和转化,从而减少胶原合成及在肝窦周沉积。冬虫夏草无毒副作用,可能是一种有前途的抗肝纤维化药物。     

肝纤维化过程中整合素α5β1动态变化与扶正化瘀方干预作用

目的 探讨肝纤维化形成过程中整合素α5β1蛋白的变化特点,及其扶正化瘀方影响该蛋白表达的抗肝纤维化作用机制。方法 四氯化碳(CCl4)皮下注射与高脂低蛋白饲料复合建立大鼠肝纤维化模型。135只大鼠分为正常组、模型组与扶正化瘀方药物干预组。模型组又分为2d、1、2、3、4、5、6周共7个动态观察点。药物组自造模之日起以扶正化瘀方稀释液灌胃,共用药6周。其余大鼠灌以等量生理盐水。天狼猩红染色观察肝组织胶原沉积,盐酸水解法测定肝组织羟脯氨酸含量,Western印迹法分析肝组织纤维连接蛋白(FN)、α5β1与α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达量,并分析其相关性。结果 随肝纤维化形成,模型组大鼠肝组织FN、α5β1与α-SMA蛋白表达量逐渐上升,早期以FN升高明显,而后以α5β1及α-SMA增加较为显著,三者之间呈明显正相关。与模型组比较,扶正化瘀方预防组大鼠肝脏胶原沉积减轻,肝羟脯氨酸含量下降。FN、α5β1与α-SMA蛋白表达减少。结论 CCl4大鼠肝纤维化形成中肝脏整合素α5β1表达逐渐增加,肝损伤早期FN显著上升,并可通过α5β1促进肝星状细胞活化与肝纤维化。扶正化瘀方抑制肝纤维化大鼠肝脏FN与整合素α5β1表达,该作用为扶正化瘀方抗肝纤维化机制之一。