扶正化瘀方对大鼠肝贮脂细胞增殖的影响

采用灌胃给药、分离血清体外作用培养细胞的血清药物学方法，探讨扶正化瘀方对大鼠贮脂功能的影响。结果表明：该血清无明显细胞毒性，能抑制细胞增殖，其作用与体内给药剂量、药物血清浓度等有一定关系；该实验方法较为稳定可靠；扶正化瘀药物血清对贮脂细胞的增殖有抑制作用，可能是该方肝纤维化的作用机制之一。     

扶正化瘀方对二甲基亚硝胺大鼠纤维肝原代贮脂细胞形态…

制备二甲基亚硝胺大直纤维化模型，体内给予扶正化瘀方治疗后，分离培养纤维肝原代贮脂细胞，通过相关显微镜、「＾３Ｈ」ＴｄＲ掺入、「＾３Ｈ」Ｐｒｏｌｉｎｅ掺入及胶原酶消化法等观察方对纤维肝贮脂细胞形态及细胞增殖、活力与胶原生成率等功能的影响。结果表明，该方对纤维肝贮脂细胞形态及活动无明显影响，而显著抑制其细胞及胶原生成率。提示该方抗肝经的主要作用机理之一在于抑制贮脂细胞的病理学增生及其细胞外基质生成。     

扶正化瘀方对二甲基亚硝胺大鼠纤维肝原代贮脂细胞形态及功能的影响

制备二甲基亚硝胺大鼠肝纤维化模型，体内给予扶正化瘀方治疗后，分离培养纤维肝原代贮脂细胞，通过相差显微镜、［~3H］TdR掺入、［~3H］Proline掺入及胶原酶消化法等观察该方对纤维肝贮脂细胞形态及细胞增殖、活力与胶原生成率等功能的影响。结果表明：该方对纤维肝贮脂细胞形态及活动力无明显影响，而显著抑制其细胞增殖及胶原生成率。提示该方抗肝纤维化的主要作用机理之一在于抑制贮脂细胞的病理学增生及其细胞外基质生成。     

扶正化瘀方抑制大鼠肝贮脂细胞增殖及胶原生成的血清药理学研究

以传代培养的大鼠肝贮脂细胞(FSC)增殖为参数。观察扶正化瘀(FZHY)方灌胃给药后药物血清的生物学效应。FZHY 0．46g／kg体重(0．46g)剂量一次给药后2小时的药物血清可抑制FSC增殖，但不显著；一次给药2小时后以同剂量再次给药，其后1小时、2小时及3小时的药物血清均能显著抑制FSC的增殖。再次给药后1小时药物血清对FSC增殖的抑制效果随给药剂量及血清浓度的提高而增强；药物血清对细胞形态无明显影响，尚能提高细胞的活力。不同剂量再次给药后1小时药物血清对细胞内、外的胶原生成率均有抑制作用，0．46g药物血清的作用与秋水仙碱相近，其抑制效果同样随着药物血清浓度的提高而增强，提示抑制FSC增殖及其胶原生成可能是FZHY方抗肝纤维化的主要作用机制之一。     

扶正化瘀方对3T3细胞增殖和胶原生成的影响

目的:探讨扶正化瘀方抗肝纤维化的作用机制。方法:以体外培养的NIH/3T3细胞作为肝脏成纤维细胞的替代模型,用扶正化瘀方药物血清,以10％的浓度被添加到培养液中,通过[~3H]-TdR掺入法和免疫细胞化学,观察药物血清对3T3细胞[~3H]-TdR掺入量和胶原生成的影响。结果:药物血清组[~3H]-TdR掺入量明显少于正常大鼠血清组。药物血清组Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原量均明显低于正常大鼠血清组,其中Ⅰ、Ⅲ型胶原更为显著。结论:扶正化瘀方药物血清明显抑制了3T3细胞增殖和胶原的生成。这可能是该方抗肝纤维化的机制之一。     

维甲酸类对贮脂细胞增殖及胶原合成的影响

位于肝窦周隙的贮脂细胞，（又称Ｉｔｏ细胞或ＶｉｔＡ贮备细胞）具有贮存，代谢ＶｉｔＡ的功能，给予大鼠一定量的ＶｉｔＡ可抑制或减轻ＣＣｌ４诱发的大鼠肝纤维的病变，用Ｍｅｔｒｉｚａｍｉｄｅ成功地分离大鼠贮脂细胞，用原代培养的贮脂细胞研究维甲酸类对同脂细胞增殖，胶原合成的影响，结果显示在全反式维甲酸（ＲＡ），视黄酸棕榈酯（ＲＰ）可抑制贮脂细胞增殖，胶原的合成，提示维持贮脂细胞ＶｉｔＡ含量可抑制贮脂细胞向肌     

扶正化瘀方对大鼠肝星状细胞,肝细胞,成纤维细胞胶原合成？…

以１０％的扶正化瘀方药物血清作用大鼠传代与纤维肝星状细胞，正常与纤维肝肝细胞、皮肤成纤维细胞，通过「＾３Ｈ－」－Ｐｒｏｐｌｉｎｅ掺入，观察药物血清对各组细胞胶原合成的影响，探讨扶正化瘀方抗肝纤维化的作用机制。结果发现，药物血清组纤维肝星状细胞与肝细胞细胞内胶原合成与细胞外胶原分泌均明显少于对照组；正常传代星状细胞与肝细胞细胞外胶原分泌也明显减少；成纤维细胞胶原的合成与分泌，以及正常传代星状细胞细胞     

扶正化瘀方对大鼠皮肤成纤维细胞增殖和胶原生成的抑制作用

目的：探讨扶正化瘀方抗肝纤维化的作用机制。方法：以10％的扶正化瘀方药物血清作用于大鼠皮肤成纤维细胞，通过[^3H]-TdR和[^3H]-Rroline掺入,观察药物血清对大鼠皮肤成纤维细胞增殖和胶原生成的影响。结果：药物血清组[^3H]-TdR掺入量明显少于正常大鼠血清组。药物血清组细胞内胶原的合成率和细胞外胶原的分泌率均低于正常大鼠血清组。结论：扶正化瘀方抑制了大鼠皮肤成纤维细胞的增殖和胶原的生成。     

血管活性肠肽对大鼠贮脂细胞I型胶原分泌的影响

我们研究发现在传代培养的大鼠贮脂细胞中，不同浓度的血管活性肠肽（Ｖａｓｏａｃｆｉｖｅｉｎｆｅｓｆｉｎａｌｐｅｔａｉｄｅ，ＶＩＰ）能显著抑制Ｉ型胶原分泌呈量效关系，ＶＩＰ受体拮抗剂能减弱ＶＩＰ这一作用，从而更加肯定ＶＩＰ抑制胶原分泌的作用，本研究提示，大鼠贮脂细胞膜上存在ＶＩＰ受体，ＶＩＰ在肝纤维化和肝硬化时浓度升高可能调节肝脏胶原代谢。     

扶正化瘀方对大鼠肝星状细胞、肝细胞、成纤维细胞胶原合成的影响

以10％的扶正化瘀方药物血清作用于大鼠正常传代与纤维肝星状细胞、正常与纤维肝肝细胞、皮肤成纤维细胞，通过[3H-]－Propline掺入，观察药物血清对各组细胞胶原合成的影响，探讨扶正化瘀方抗肝纤维化的作用机制。结果发现，药物血清组纤维肝星状细胞与肝细胞细胞内胶原合成与细胞外胶原分泌均明显少于对照组；正常传代星状细胞与肝细胞细胞外胶原分泌也明显减少；成纤维细胞胶原的合成与分泌、以及正常传代星状细胞细胞内胶原合成也有抑制趋势。提示扶正化瘀方抗肝纤维化作用机制，可能主要是抑制了肝脏内胶原的合成。     

Seropharmalogical effects of Fuzheng Huayu decoction on rat Ito cell morphology and function in culture

AIM: To investigate the mechanisms of anti-liver fibrosis actions of Fuzheng Huayu (FZHY) decoction, which acts to strengthen the body’s resistance and promote blood circulation.METHODS: Ito cells were isolated from rats and cultured. Serum samples were collected from healthy (normal) rats after administration of FZHY decoction and added to the subcultured cells. The effects of FZHY decoction on the Ito cells were investigated by contrast microscopy (to observe cell morphology), [³H]Pro incorporation assay (cell viability), [³H]TdR incorporation and MTT colorimetric assay (cell proliferation), and [³H]Pro incorporation and collagenase digestion (collagen synthesis rate).RESULTS: The rat sera samples from rats treated with FZHY decoction had no influence on Ito cell morphology, but improved cell viability and markedly inhibited cell proliferation and collagen synthesis. The magnitude of these effects showed dependence on treatment dosage and drug concentration in serum.CONCLUSION: The seropharmalogical method can be efficiently used to investigate the pharmacological mechanism of anti-fibrotic traditional Chinese herbs and formulae. Inhibition of Ito cell proliferation and collagen synthesis may be two of the major mechanisms underlying the anti-fibrosis actions of the FZHY decoction.     

扶正化瘀方对肝纤维化大鼠不同病理阶段肝组织蛋白质组变化的影响

目的探讨四氯化碳（CCl4）大鼠肝纤维化形成及消减不同时期肝组织蛋白质组的动态变化及扶正化瘀方的干预作用。方法40％CCl4-橄榄油溶液皮下注射法制备CCl4大鼠肝纤维化模型，治疗组给予扶正化瘀方灌胃，在第4、8、12和第16周末分批处死大鼠，观察各组大鼠肝组织病理学、羟脯氨酸（Hyp）含量变化，并提取肝组织蛋白质进行二维电泳，运用PDQUEST 2-DE软件对蛋白质图谱进行分析，以MALDI—TOF—MS鉴定差异表达的蛋白质。结果（1）二维电泳结果：模型大鼠特有蛋白质和表达量差异的蛋白质从第4周始出现，第12周达顶峰，（2）质谱鉴定的蛋白质多数在第4周出现，四个时间段均出现的有10个，其中有8个是正常组所没有的，（3）扶正化瘀方对表达差异的蛋白质调节表现在：第4、8周对上调的蛋白质降低作用显著，在第8、12、16周对下调的蛋白质的升高作用较显著，模型大鼠特有的蛋白质经扶正化瘀方干预后，通过降解、下调表达量等形式，趋向正常表达。结论（1）蛋白质表达改变是肝纤维化整体病变的物质基础。表达异常的蛋白质涉及机体的物质代谢、神经内分泌、细胞增殖凋亡等系统，（2）扶正化瘀方在抗细胞增生、促进正常蛋白质合成等方面有综合优势，通过对多个蛋白质、多途径的综合调节达到抗肝纤维化的效果。     

CCl4大鼠肝纤维化形成与消减过程中肝组织蛋白质组的动态变化及扶正化瘀方的干预作用

目的:通过大鼠纤维化肝组织高亲水性蛋白质分子差异展示及扶正化瘀方干预作用,寻找与扶正化瘀方治疗肝纤维化相关的蛋白质分子.方法:通过皮下注射大鼠CCl4,分别持续4、8、12周,对大鼠肝纤维化过程进行动态观察,并在不同时期进行扶正化瘀方干预,治疗从第12周始至16周止.采用蛋白质分步抽提方法,提取肝组织蛋白质,分别进行二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2-DE)分离、凝胶银染,显示各组蛋白质分子的差异表达的蛋白质分子.结果:在各组银染凝胶图谱上,可辨识的蛋白质斑点达1 000～1 400个左右,蛋白质表达中除有肝组织看家蛋白质,模型组也有特异蛋白质表达,且在不同时期蛋白质分子表达也有差异,特异表达蛋白质分子为100至300多个不等,在不同阶段表达是不相同的,经质谱鉴定确定了有几类功能不同的蛋白质分子.结论:扶正化瘀方抗肝纤维化作用机制是多方面的,其干预作用与多种蛋白质分子相关.     

扶正化瘀胶囊治疗日本血吸虫病肝纤维化的临床疗效观察

目的:探讨扶正化瘀胶囊治疗日本血吸虫病肝纤维化的疗效。方法:临床观察日本血吸虫病肝纤维化患者48例,随机分为试验组(基础护肝治疗联合扶正化瘀胶囊)和对照组(基础护肝治疗),每组24例,患者均在护肝及抗纤维化治疗前1个月给予吡喹酮驱虫治疗,治疗前后观察患者临床症状和体征的改善,肝功能、血清肝纤维化指标的复常以及影像学指标的改变。结果:治疗24周后,两组患者临床症状和体征与治疗前比较均有明显改善,尤其肝区不适症状的缓解,试验组优于对照组(P<0.05);两组患者治疗后血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBil)水平均有显著改善(P<0.05);试验组血清透明质酸(HA)﹑Ⅲ型前胶原(PCⅢ)水平在治疗12周、24周较治疗前均显著下降(P<0.05),下降幅度均显著优于对照组(P<0.05);治疗24周患者血清层粘连蛋白(LN)﹑Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)含量与治疗前比较两组均有显著改善(P<0.05),且试验组改善优于对照组(P<0.05);治疗24周患者肝门静脉主干内径、脾脏厚度的改变,试验组明显优于治疗前(P<0.05),且与对照组比较差异具有显著性意义(P<0.05)。结论:扶正化瘀胶囊治疗日本血吸虫病肝纤维化可明显改善患者临床症状和体征,促进肝脏功能恢复,有效地减轻肝脏纤维化。     

扶正化瘀方对大鼠CCl4损伤肝Kupffer细胞功能的影响

目的：探讨扶正化瘀方对大鼠急性ＣＣｌ４损伤肝Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞功能的影响。方法：体外分离培养大鼠急性ＣＣｌ４损伤肝Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞,制备扶正化瘀方药物血清对其进行干预,观察药物对其ＰＤＧＦ和ＴＧＦβ活性以及对Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞线粒体呼吸功能的影响。结果：药物组ＰＤＧＦ和ＴＧＦβ活性均显著降低（Ｐ〈０．０５）;药物组闰体呼吸功能明显降低（Ｐ〈０．０５）。结论：扶正化瘀方对大鼠急性ＣＣｌ４损伤肝Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞活化有抑制作用,可能抑制肝星状细胞旁分泌激活,是该方抗肝纤维化的作用机理之一。     

益气化瘀煎剂抗大鼠胃溃疡作用及其机制的探讨

目的：研究益气化瘀煎剂对大鼠实验性胃溃疡的防治作用,并对其机制进行探讨。方法：观察预先应用中药对应激、乙醇、消炎痛、幽门结扎所诱发的胃粘膜损伤的影响,并观察连续应用中药8、18和26d后,醋酸性胃粘膜损伤的愈合情况;检测胃壁结合粘液、胃组织DNA、胃粘膜超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）及前列腺素E2（PGE2）的含量。结果：益气化瘀煎剂显著抑制应激、乙醇及消炎痛性胃粘膜损伤（P＜0．05,＜0．01）,并具有剂量依赖关系;加速胃溃疡的愈合。其疗效与雷尼替丁接近。同时,增加胃粘膜组织DNA、SOD及PGE2的含量,减低MDA的生成。结论：益气化瘀煎剂具有较强防治胃溃疡的作用,其机制可能主要是增强胃粘膜细胞保护作用。     

扶正化瘀方对骨髓细胞在纤维化肝脏中迁移与分化的干预作用

[目的]探究扶正化瘀方(Fuzheng Huayu recipe,FZHY)对骨髓细胞在肝纤维化形成中向肝脏迁移与分化的干预作用.[方法]以绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记的供体ICR小鼠的骨髓细胞移植入受体ICR小鼠,8周后进行受体外周血GFP鉴定,并分为移植后对照组与移植后模型组,移植后模型组予二甲基哑硝胺(Dimethylnitrosamine,DMN)诱导肝纤维化,4周后移植后模型组进一步分为移植+DMN组、移植+DMN+肝细胞生长因子(hepatocyte growth-promotting factors,pHGF)组与移植+DMN+ FZHY组,pHGF与FZHY分别给药8周后,免疫荧光检测肝组织的GFP、白蛋白(Albumin,Alb)、α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)及CD32的表达.[结果]移植8周末受体外周血涂片可见大量GFP;给药12周末,移植+DMN+ FZHY组纤维间隔与肝实质区均可见GFP,实质区可见Alb,未见GFP+/Alb+,纤维间隔内可见GFP+/α-SMA+,但与移植+ DMN组相比明显减少,窦状隙可见CD32+,可见明显GFP+/CD32+.[结论]在本实验建立的骨髓细胞移植后受体肝纤维化形成的体内微环境下,FZHY给药后,骨髓细胞有向肝实质区迁移的趋向,未能向肝细胞分化,可逆转其向肌成纤维细胞的分化失衡,可部分转分化为肝窦内皮细胞.     

恩替卡韦联合扶正化瘀胶囊对代偿期慢性乙型肝炎肝硬化患者炎性因子及纤维化指标的影响

目的观察恩替卡韦(ETV)联合扶正化瘀胶囊对代偿期慢性乙型肝炎肝硬化患者的疗效。方法收集2013年1月-2015年12月在青岛市第六人民医院就诊的代偿期慢性乙型肝炎肝硬化患者142例,随机分为治疗组(n=71)和对照组(n=71)。两组均给予保肝、对症等常规治疗,在此基础上,对照组接受恩替卡韦0.5 mg/d治疗,治疗组在对照组治疗基础上联合扶正化瘀胶囊1.5g,口服,2次/d,两组患者均治疗12个月。观察两组患者炎性因子及纤维化指标的变化情况。计量资料组间比较采用t检验,计数资料组间比较采用χ~2检验。结果治疗12个月后,治疗组与对照组血清HBV DNA阴转率分别为91.5%(65/71)和90.1%(64/71),两组之间差异无统计学意义(χ~2=0.005,P=0.771);治疗组治疗12个月后血清透明质酸、层黏连蛋白、Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原、AST、ALT、肝脏硬度值、TNFα、IL-6、IL-8和超敏C反应蛋白(hs-CRP)与对照组相比均明显下降(t值分别为16.187、5.343、13.697、17.121、7.409、27.371、7.973、5.471、7.885、9.057、8.171,P值均0.001)。结论 ETV联合扶正化瘀胶囊治疗相对于单独用ETV治疗代偿期慢性乙型肝炎肝硬化患者能更好的抗纤维化,抑制炎性因子TNF-α、IL-6、IL-8和hs-CRP的释放。     

Effects of Fuzheng Huayu 319 recipe on liver fibrosis in chronic hepatitis B

ＥｆｅｃｔｓｏｆＦｕｚｈｅｎｇＨｕａｙｕ３１９ｒｅｃｉｐｅｏｎｌｉｖｅｒｆｉｂｒｏｓｉｓｉｎｃｈｒｏｎｉｃｈｅｐａｔｉｔｉｓＢＬＩＵＰｉｎｇ１,ＬＩＵＣｈｅｎｇ１,ＸＵＬｉｅＭｉｎｇ１,ＨｕＹｉＹａａｎｇ１,ＸＵＥＨｕｉＭｉｎｇ１,ＬＩＵＣｈ...