17β-雌二醇对子宫内膜癌细胞磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号传导通路的活化

目的:探讨17β雌二醇(E2)对子宫内膜癌细胞系HEC1A磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/PKB)信号传导通路的激活作用以及PI3K抑制剂和雌激素受体(ER)拮抗剂对它的影响。方法:应用免疫印迹杂交技术检测1×106mol/LE2作用于HEC1A细胞不同时间和不同浓度E2作用细胞15min后PKB的活化情况,同法检测PI3K抑制剂LY294002和ER拮抗剂ICI182780对E2活化PKB的影响。结果:1×106mol/LE2作用于HEC1A细胞15min时,PKB活化最明显,Ser473位点磷酸化PKB和总PKB比值(pPKB/PKB)为0.7877±0.0346,而基础值为0.5198±0.0166(P<0.001),且持续至少达2h,随着E2浓度的增加,PKB活化逐渐增强;随着LY294002作用浓度增加,E2作用HEC1A细胞后PKB的活化水平逐渐下降,浓度为50μmol/L时已完全阻断了E2对HEC1A细胞PKB的活化;而随着ICI182780浓度的增加,E2作用HEC1A细胞后PKB的活化水平无明显改变。结论:E2可通过非转录效应,迅速激活HEC1A细胞的PI3K/PKB信号传导通路,而且是ER非依赖性的。     

雌、孕激素对子宫内膜癌细胞株Ishikawa体外生长的影响

目的探讨雌激素(17β-雌二醇,E2)、孕激素(P)及其不同配伍对子宫内膜癌Ishikawa细胞体外生长的影响,为临床子宫内膜癌患者术后激素补充治疗(HRT)提供理论依据。方法体外培养人子宫内膜癌Ishikawa细胞株。实验组分别加入不同浓度E2(E2组)、P(P组)及二者不同浓度配伍(E2+P组);对照组加入0.01%乙醇。观察细胞形态变化;测定细胞的增殖、凋亡和细胞周期变化。结果 Ishikawa细胞吸光度(A值)及增殖促进率均随E2浓度的增加呈逐渐上升趋势。E2浓度增至10-8～10-6mol/L,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。相反,P和E2+P两组均随P浓度的增加,对Ishikawa细胞增殖抑制率逐渐升高(P0.05,P0.01)。E2终浓度增至10-6mol/L,P终浓度10-5及0.5×10-4mol/L时,差异有统计学意义(P0.05)。对照组Ishikawa细胞大多处于G0/G1期。经E2、P作用后,细胞周期发生改变,E2组S期细胞比例上升,凋亡率下降(P0.01);P组和E2+P组G0/G1期细胞比例上升,S期比例下降,凋亡率上升。E2组Ishikawa细胞数量增多,核分裂相多见。P组和E2+P组则见Ishikawa细胞数目减少,细胞明显皱缩,体积变小,凋亡小体多见。结论 E2对Ishikawa细胞有促增殖、抗凋亡作用;P则抑制Ishikawa细胞增殖,并诱导其凋亡;E2+P是否具有抑制细胞增殖并诱导凋亡的作用与E2和P具体配伍浓度有关;合理的E2+P配伍不促进Ishikawa细胞的增殖。     

雌激素通过子宫内膜癌细胞膜受体激活丝裂原活化蛋白激酶通路快速效应的初步研究

目的 研究子宫内膜癌Ishikawa细胞中17β雌二醇通过细胞膜受体对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的快速激活效应.方法 17β雌二醇偶联牛血清白蛋白(E2-BSA)在不同的时间作用于Ishikawa细胞后,采用蛋白印迹法检测磷酸化细胞外信号调节激酶(ERK)1和ERK2(ERK1/2)的表达情况,并利用激光扫描共焦显微镜(激光共聚焦)技术观察雌激素是否可以与细胞膜受体结合,不穿过细胞膜而快速磷酸化ERK1/2.结果 蛋白印迹法检测发现,ERK1/2在1×10-7mol/L的E2-BSA作用5 min后被快速磷酸化,磷酸化ERK1/2蛋白的表达水平为0.52,60 min时达到高峰(表达水平为0.98),120 min时回落(表达水平为0.09).激光共聚焦技术显示,E2-BSA在作用5 min时与细胞膜上相应受体结合,未穿过细胞膜即增高磷酸化ERK1/2的表达.结论 雌激素可以通过细胞膜受体快速激活子宫内膜癌细胞的MAPK通路.     

Neuropilin-1在子宫内膜癌细胞系中的表达及17β雌二醇对其表达的调控及意义

目的:探讨神经纤毛蛋白(NRP-1)在子宫内膜癌细胞系中的表达及17β雌二醇(17β-E2)对其表达的调控。方法:采用RT-PCR法及Western blot法检测NRP-1在子宫内膜癌HEC-1A及Ishikawa细胞系中的表达;荧光定量PCR法检测17β-E2对HEC-1A及Ishikawa细胞系中NRP-1 mRNA表达的调控;Western blot法检测Ishikawa细胞中NRP-1表达的变化。结果:HEC-1A及Ishikawa细胞中NRP-1 mRNA及蛋白水平均为阳性表达。17β-E2对Ishikawa细胞系中NRP-1 mRNA表达的影响显著强于HEC-1A,且17β-E2浓度为2×10-7mol/L,作用时间48h时对NRP-1 mRNA表达的促进作用最明显。17β-E2对Ishikawa细胞中NRP-1蛋白表达呈时间依赖性。结论:NRP-1表达于高表达雌激素受体(ER)细胞系Ishikawa及低表达ER细胞系HEC-1A中,且2×10-7mol/l E2作用48h能明显促进Ishikawa细胞系中NRP-1的表达,提示NRP-1可能与子宫内膜癌的发生发展密切相关。     

17β-雌二醇对人子宫内膜癌细胞的增殖及P21ras和p-Erk表达的研究

目的:探讨17β-雌二醇(E2)对人子宫内膜腺癌雌激素受体(ER)阳性的Ishikawa和ER阴性的HEC-1A细胞增殖,细胞周期及其对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路相关蛋白P21ras和p-Erk表达的影响及意义。方法:用MTT法,流式细胞技术检测不同浓度E2作用Ishikawa和HEC-1A细胞不同时间的细胞吸光度值及细胞周期,用免疫细胞化学法检测上述细胞中P21ras和p-Erk的表达。结果:随E2浓度增加,Ishikawa细胞吸光度值上升并呈时间依赖性(P<0.01),G0～G1期比例下降(P<0.01),S期比例升高(P<0.01);HEC-1A细胞吸光度值及细胞周期无明显变化(P>0.05);10-6mol/LE2作用于Ishikawa细胞30min时,P21ras和p-Erk活化表达最强,作用于HEC-1A细胞15min时,P21ras和p-Erk即有明显表达而且达高峰,随着E2浓度增加两种细胞中P21ras和p-Erk表达均逐渐增加,呈浓度依赖性。结论:E2可促进子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖和周期进展,而且可以促进Ishikawa和HEC-1A中P21ras和p-Erk表达增加。     

促性腺激素释放激素Ⅰ型激动剂和Ⅱ型对不同PTEN基因表达状态子宫内膜癌细胞的作用

目的 探讨促性腺激素释放激素Ⅰ型(GnRH-Ⅰ)激动剂--曲普瑞林和GnRH-Ⅱ对不同PTEN基因表达状态的子宫内膜癌细胞的作用.方法 不同浓度(10-11、10-9、10-7、10-5mol/L)的曲普瑞林和GnRH-Ⅱ分别作用于不同PTEN基因表达状态的3种子宫内膜癌细胞细胞系Ishikawa [PTEN基因表达阴性(-)]、Ishikawa-PTEN[PTEN基因表达阳性(+)]、Ishikawa-neo[PTEN(-)]细胞后,应用四甲基偶氮唑蓝比色法、碘化丙啶染色流式细胞计数法、膜联蛋白染色流式细胞术检测内膜癌细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的变化;蛋白印迹法检测内膜癌细胞中蛋白激酶B(Akt)及细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)的活化情况.在曲普瑞林和GnRH-Ⅱ作用的基础上,使用17β雌二醇(17β-E2,10-8mol/L)和雌激素受体拮抗剂--ICI182780(10-6mol/L)分别进行干预,再次检测上述指标的变化.结果 不同浓度(10-11、10-9、10-7、10-5mol/L)的曲普瑞林及GnRH-Ⅱ作用后,3种细胞的增殖明显受到抑制(P<0.01);细胞凋亡率明显增加(P<0.01或P<0.05);细胞生长减慢,G0/G1期细胞比例增多,G2/M期和S期细胞比例减少;上述作用均呈明显浓度依赖关系(P<0.01或P<0.05).曲普瑞林及GnRH-Ⅱ均可明显抑制Ishikawa、Ishikawa-neo细胞中Akt和ERK1/2的活化(P<0.01);而对Ishikawa-PTEN细胞中Akt和ERK1/2的活化无明显抑制作用(P<0.05).17β-E2可明显拮抗曲普瑞林和GnRH-Ⅱ的上述作用(P<0.01或P<0.05).结论 曲普瑞林和GnRH-Ⅱ可通过抑制Akt和ERK1/2的活化,促进子宫内膜癌细胞凋亡,并抑制细胞增殖,此作用呈明显浓度依赖关系,并与PTEN基因表达状态有关,且可被17β-E2拮抗.提示GnRH-Ⅰ激动剂可用于低雌激素表达子宫内膜癌患者的个体化内分泌治疗.     

GPER抑制剂PTX对雌激素作用下子宫内膜癌细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨G蛋白偶联雌激素受体(GPER)抑制剂百日咳毒素(PTX)对17β-雌二醇(E2)作用下子宫内膜癌系ER阳性的Ishikawa及ER低表达的HEC-1A的细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响,初步探讨阻断GPER介导的信号传导通路治疗子宫内膜癌的可行性。方法:选取对数生长的细胞随机分为空白对照组(不加任何试剂)、阴性对照组(加10-6mol/L E2)和实验组(10-6mol/L E2+PTX)。应用四甲基亚唑蓝(MTT)法、流式细胞术观察PTX对E2作用下的子宫内膜癌的细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。结果:(1)随着E2浓度的增加和作用时间的延长,子宫内膜癌Ishikawa细胞在490nm处光密度值增大。E2对Ishikawa细胞具有促增殖作用,且呈时间和浓度依赖性(P均<0.001),而对HEC-1A的细胞增殖作用不显著(P=0.393),各浓度之间差异均无统计学意义(P=0.137)。不同浓度E2作用48h后,Ishikawa细胞G0～G1期比例减少(P=0.001),S期比例增多(P=0.002),HEC-1A变化不显著。(2)随着PTX浓度增加及时间延长,两种细胞增殖能力逐渐下降并呈时间和浓度依赖性(P均<0.001);不同浓度PTX作用48h后,两种细胞的凋亡率、G0～G1比例均升高(P<0.001,P<0.05),S期比例在Ishikawa细胞无显著变化,在HEC-1A细胞降低,G2～M期比例在Ishikawa细胞降低,在HEC-1A细胞无显著变化。结论:PTX可以抑制E2对子宫内膜癌细胞的促增殖作用,促使其发生凋亡,抑制细胞周期进展。GPER介导的信号传导通路可能成为治疗子宫内膜癌的新靶点。     

17β-雌二醇对子宫内膜癌细胞上皮间质转化诱导作用的研究

目的:研究17β-雌二醇(17β-E2)对子宫内膜癌细胞发生上皮间质转化的诱导作用。方法:用17β-E2处理Ishikawa和HEC-1A细胞后,Western blot法检测两种细胞中E-cad、N-cad和Vimentin蛋白的表达。结果:经10-8mol/L E2作用后,Ishikawa细胞中的E-cad蛋白表达减少(P0.05),N-cad、Vimentin蛋白增加(P0.05);其他浓度作用前后,各蛋白表达无明显变化(P0.05)。经不同浓度E2作用后,HEC-1A细胞中E-cad、Ncad、Vimentin蛋白均无明显变化。结论:17β-E2仅在特定浓度下存在诱导ER阳性子宫内膜癌细胞Ishikawa发生上皮间质转化的作用。     

双酚A激活PI3K/AKT通路促进子宫内膜癌细胞增殖的研究

目的:研究双酚A(bisphenol A,BPA)活化磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)促子宫内膜癌细胞Ishikawa和RL952增殖的机制。方法:CCK8试剂盒检测Ishikawa和RL952细胞的增殖情况,蛋白质印迹(Western blotting)法检测p-AKT蛋白的表达。结果:在Ishikawa和RL952细胞中,BPA作用48 h时,细胞增殖呈浓度依赖性,1μmol/L的BPA促细胞生长效应最显著,Ishikawa和RL952细胞增殖率分别为0.758±0.023和0.692±0.042。BPA浓度超过1μmol/L后,促细胞增殖的作用下降。BPA作用24 h时促增殖效应不明显,BPA作用72 h时表现出细胞毒作用。1μmol/L BPA处理的Ishikawa和RL952细胞48 h后p-AKT蛋白的表达较对照组升高(P<0.05),加入PI3K抑制剂(LY294002),p-AKT的蛋白表达比对照组降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:BPA通过激活PI3K/AKT通路促进子宫内膜癌细胞增殖。     

双酚A激活PI3K/AKT通路促进子宫内膜癌细胞增殖的研究

目的:研究双酚A(bisphenol A,BPA)活化磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)促子宫内膜癌细胞Ishikawa和RL952增殖的机制。方法:CCK8试剂盒检测Ishikawa和RL952细胞的增殖情况,蛋白质印迹(Western blotting)法检测p-AKT蛋白的表达。结果:在Ishikawa和RL952细胞中,BPA作用48 h时,细胞增殖呈浓度依赖性,1μmol/L的BPA促细胞生长效应最显著,Ishikawa和RL952细胞增殖率分别为0.758±0.023和0.692±0.042。BPA浓度超过1μmol/L后,促细胞增殖的作用下降。BPA作用24 h时促增殖效应不明显,BPA作用72 h时表现出细胞毒作用。1μmol/L BPA处理的Ishikawa和RL952细胞48 h后p-AKT蛋白的表达较对照组升高(P0.05),加入PI3K抑制剂(LY294002),p-AKT的蛋白表达比对照组降低,但差异无统计学意义(P0.05)。结论:BPA通过激活PI3K/AKT通路促进子宫内膜癌细胞增殖。     

抑制PI3K/Akt信号通路拮抗胰岛素诱导的子宫内膜癌细胞增殖

目的:研究抑制磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/Akt信号通路对胰岛素诱导的子宫内膜癌细胞增殖的拮抗作用。方法:将无血清饥饿的子宫内膜癌Ishikawa3-H-12细胞分为空白对照组、10-6mol/L胰岛素单独刺激组以及不同剂量PI3K抑制剂-LY294002预处理后再用胰岛素刺激组。Western blot检测各组Akt磷酸化(p-Akt)水平,MTT试验观察细胞增殖情况。结果:胰岛素可引起内膜癌细胞Akt活化,刺激15min后p-Akt/Akt比值显著高于空白对照组(68.68%vs 26.21%,P<0.001)。LY294002以浓度依赖方式抑制胰岛素引起的Akt磷酸化。MTT试验显示,在药物处理24h,48h和72h 3个时间点,不同组别570nm吸光度值(OD570nm)均有显著差异(F=156.329,700.973,812.224,均P<0.001)。胰岛素组OD570nm值均高于同时间点的空白对照组(均P<0.001),胰岛素促内膜癌细胞增殖作用于48h时最为显著。LY294002可抑制胰岛素的增殖促进作用,此抑制作用具有浓度依赖性。不同剂量LY294002抑制作用的时间依赖性不同,48h时小剂量(0.1、1、10μmol/L)的抑制作用最为显著,72h时胰岛素重新呈现一定的促增殖作用;而50μmol/L LY294002可以持久抑制胰岛素的促增殖作用。结论:PI3K抑制剂LY294002可以通过抑制Akt磷酸化阻断胰岛素信号传导,拮抗后者促子宫内膜癌细胞增殖的作用。     

磷脂酰肌醇3激酶在卵巢上皮性癌组织中的表达及其抑制剂对卵巢上皮性癌细胞生长抑制作用的研究

目的 探讨细胞信号转导信使磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)在卵巢上皮性癌(卵巢癌)组织中的表达及其意义;并探讨PI3K抑制剂LY294002联合顺铂对卵巢癌细胞株的生长抑制作用.方法 应用蛋白印迹法和RT-PCR技术检测正常卵巢组织(正常组,20份)、卵巢良性上皮性肿瘤组织(良性组,6份)、卵巢交界性上皮性肿瘤组织(交界性组,6份)和卵巢癌组织(卵巢癌组,39份)中PI3K p85亚单位蛋白和mRNA的表达.将SKOV3细胞分为对照组(只加培养液)、LY294002组(加1、10、30、50、100 μmol/L LY294002)、顺铂组(加0.33、1.25、2.5、5、10 μmol/L顺铂)和联合组(加50 μmol/L LY294002+10 μmol/L顺铂),四甲基偶氮唑蓝还原法测定不同浓度的LY294002及顺铂对SKOV3细胞的生长抑制作用.结果 (1)PI3K p85亚单位蛋白的表达阳性率:正常组和良性组均为0,交界性组为2/6,卵巢癌组为85%(33/39),正常组、良性组、交界性组分别与卵巢癌组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).(2)PI3K p85亚单位mRNA的表达水平:正常组为0.178±0.102,良性组为0.643±0.112,交界性组为0.847±0.058,卵巢癌组为1.689±0.423,正常组、良性组、交界性组分别与卵巢癌组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).卵巢癌组织中,PI3K p85亚单位蛋白表达阳性率及mRNA的表达水平,不同年龄、病理类型间比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);而不同病理分化程度、手术病理分期间比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).(3)LY294002及顺铂呈剂量依赖性地抑制SKOV3细胞的生长.LY294002组(50 μmol/L)、顺铂组(10 μmol/L)、联合组SKOV3细胞的抑制率分别为(46.0±2.0)%、(44.4±3.2)%、(57.1±4.1)%,联合组SKOV3细胞的抑制率高于LY294002组及顺铂组(P＜0.01).结论 PI3K p85亚单位在卵巢癌组织中呈高表达,与病理分化程度、手术病理分期有关.LY294002与顺铂联合用药对卵巢癌细胞生长的抑制具有协同效应.     

瘦素、胰岛素及IGF-2影响滋养层细胞中PKB和P70S6K蛋白表达的机制

目的:探讨瘦素、胰岛素及IGF-2对滋养层细胞中PKB和P70S6K蛋白表达的影响是否与PI3K/PKB/mTOR信号途径存在联系。方法:应用Western blot检测瘦素、胰岛素及IGF-2作用后滋养层细胞中PKB和P70S6K蛋白的表达,以及分别加入PI3K的特异性抑制剂LY294002和mTOR的特异性抑制剂雷帕霉素后对PKB和P70S6K蛋白表达的影响。结果:瘦素、胰岛素及IGF-2刺激组滋养层细胞中PKB和P70S6K蛋白表达与对照组相比明显增加(P0.05)。瘦素、胰岛素及IGF-2刺激组分别加入LY294002和雷帕霉素,PKB和P70S6K蛋白表达均明显降低(P0.05)。结论:瘦素、胰岛素及IGF-2可能通过PI3K/PKB/mTOR信号通路促进滋养层细胞中PKB和P70S6K蛋白表达。     

胰岛素对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨胰岛素对子宫内膜癌细胞系Ishikawa3-H-12细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法 应用免疫细胞化学方法和RT-PCR技术检测Ishikawa3-H-12细胞胰岛素受体（INSR）蛋白和mRNA的表达。以不同浓度胰岛素作用Ishikawa3-H-12细胞不同时间,采用四甲基偶氮唑蓝比色法、流式细胞仪检测细胞增殖、凋亡和细胞周期。结果 （1）Ishikawa3-H-12细胞INSR蛋白呈棕黄色阳性表达,并可见INSR基因的表达。（2）胰岛素以浓度和时间依赖的方式促进子宫内膜癌细胞增殖,1×10^-4mol／L胰岛素作用48h时促增殖作用最显著,增殖率为（340．2±15．9）％,与对照细胞（以胰岛素浓度为0作为对照,为100％）比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。（3）胰岛素以浓度和时间依赖的方式使Ishikawa3-H-12细胞中G0／G1期细胞比例减少,S期细胞比例增加,1×10^-4mol／L胰岛素作用72h时最显著,G0／G1期细胞比例为（27．7±2．5）％,S期细胞为（55．2±1．4）％,分别与对照细胞[分别为（67．6±1．5）％、（15．7±1．0）％]比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）;胰岛素对G2／M期细胞无影响（P〉0．05）。（4）随着胰岛素浓度的增加,Ishikawa3-H-12细胞凋亡率逐渐下降。1×10^-4mol／L胰岛素作用最显著,作用24、48、72、96h时的细胞凋亡率分别为（1．76±0．16）％、（1．70±0．15）％、（1．56±0．20）％、（1．31±0．24）％,分别与对照细[分别为（9．81±0．61）％、（9．93±1．44）％、（9．10±0．66）％、（10．30±1．20）％]比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论 胰岛素对子宫内膜癌Ishikawa3-H-12细胞具有促进增殖、抑制凋亡的作用。     

Stromal cell-derived factor 1alpha stimulates human endometrial carcinoma cell growth through the activation of both extracellular signal-regulated kinase 1/2 and Akt

OBJECTIVE: The aim of study was to investigate the proliferative effects of stromal cell-derived factor-1alpha (SDF-1alpha) on endometrial carcinomas cell lines with different estrogen receptors (ER) and PTEN protein profiles. METHODS: MTT assays was used to detect the proliferation of HEC-1A and Ishikawa cells, and Western blotted analysis was used to detect activation of Akt and ERK1/2 in both cell lines after exposure to various concentrations of SDF-1alpha, MAPK-specific inhibitor PD98059 or PI3K-specific inhibitor LY294002. RESULTS: Low concentrations of SDF-1alpha (50 ng/ml) induced proliferation in both cell lines. ERK1/2 was significantly activated for more than 2 h by SDF-1alpha at 20 ng/ml in HEC-1A cells, but not in Ishikawa cells. In contrast, Akt was significantly activated for over 2 h in Ishikawa cells but remained unchanged in HEC-1A cells. High concentrations of SDF-1alpha activated Akt and ERK1/2 pathways in both cell lines in a dose-dependent manner, which was primarily inhibited by LY294002 for pAkt and by PD98059 for pERK 1/2. CONCLUSIONS: SDF-1alpha could stimulate the cell proliferation of endometrial carcinoma with different expression status of ER and PTEN in vitro, likely through the activation of both Akt and ERK1/2 signaling pathways.     

PI3K/PKB信号激活在妊娠滋养细胞疾病发病机制中的作用

目的:探讨磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/PKB)信号激活对妊娠滋养细胞疾病(GTD)进展及相关干细胞转录因子FoxD3、Nanog、Stat3、Oct4和Sox2表达的影响。方法:选取20例正常胎盘、38例良性转归葡萄胎(HM-regressed)和13例恶性进展葡萄胎(HM-progressed)、6例绒癌的石蜡包埋组织,采用免疫组化检测p-PKBSer473表达。实时荧光定量PCR(RT-PCR)和Western blot法检测绒癌细胞株JEG3和JAR中FoxD3、Nanog、Stat3、Oct4和Sox2 mRNA和蛋白表达。CCK8和Transwell小室检测细胞增殖、迁移/侵袭能力。结果:p-PKBSer473表达的免疫组化评分由高到低依次为绒癌、HM-progressed、HM-regressed和正常胎盘,两两比较差异均有统计学意义(P0.05)。PI3K抑制剂LY294002阻遏了PKB的活化,显著减弱了绒癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,降低了FoxD3、Nanog、Stat3的mRNA和蛋白表达,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:PI3K/PKB信号通道激活与GTD的进展和侵袭表型有关,可通过增强调控滋养细胞的干细胞特性而发挥作用。     

17 Beta-estradiol-stimulated nitric oxide production by neutrophils: effect on platelet activation

OBJECTIVE: To evaluate the effect of 17beta-estradiol (E2) on the ability of human neutrophils to produce nitric oxide (NO) and its effects on platelet activation. METHODS: The expression of neuronal nitric oxide synthase (nNOS) protein and the formation of NO by 17beta-E2-incubated neutrophils from men were studied in vitro (ten male volunteers, no medical-surgical antecedents, aged 25-45 years). Platelet aggregometry and changes in cyclic guanosine monophospate (cGMP) levels were used to bioassay the functionality of NO released from neutrophils. RESULTS: Incubation of neutrophils derived from men with physiologic concentrations of 17beta-E2 (10(-10) to 10(-8) mol/L) enhanced the expression of nNOS protein. 17Beta-E2-incubated neutrophils also showed a significant increase in their ability to generate NO measured by the conversion of [3H]-L-arginine to [3H]-L-citrulline. Furthermore, 17beta-E2-incubated neutrophils showed a greater ability to prevent adenosine diphosphate (ADP)-induced platelet activation. Moreover, increased levels of cGMP were found in the coincubation of platelets with 17beta-E2-treated neutrophils. CONCLUSION: These results suggest that 17beta-E2 increases the ability of human neutrophils to produce NO and therefore may contribute to cardiovascular disease protection.