靶向COX-2的siRNA抑制三种不同分化程度胃癌细胞生长及作用机制

目的:利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术在体外抑制COX-2表达,研究其抑制三种不同分化程度的胃癌细胞(MKN-28,SGC-7901,BGC-823)的可能性,探讨RNAi抑制胃癌生长与胃癌细胞分化程度的相关性. 方法:设计靶向COX-2基因的siRNA,构建重组表达质粒pTZU6 1-siRNA-COX-2并导入胃癌细胞株,体外诱导RNAi,采用逆转录PCR(RT-PCR)和Western blotting检测COX-2基因表达变化,MTT法检测细胞活力,原位末端标记(TUNEL)及透射电镜检测细胞凋亡,Western blotting检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的改变. 结果:pTZU6 1-siRNA-COX-2质粒导入细胞后,SGC-7901和BGC-823中COX-2表达明显下调,细胞生长被抑制,并出现特征性的细胞凋亡,同时有Bax蛋白上调和Bcl-2蛋白下调. 对照组则无明显变化. 结论:RNAi显著抑制胃癌细胞生长,可能与下调COX-2基因表达和诱导细胞凋亡有关,其对中分化胃癌细胞的抑制作用最为显著,提示RNAi的作用可能依赖于胃癌细胞的分化程度.     

选择性环氧合酶-2抑制剂对胃癌细胞生长的影响

目的　观察选择性环氧合酶 - 2 ( COX- 2 )抑制剂 (美洛昔康、塞来昔布、罗非昔布 )对人胃癌细胞株SGC790 1生长的影响以及罗非昔布对人胃癌裸鼠移植瘤生长的抑制效应。方法　采用 3H-胸腺嘧啶核苷 ( 3H- Td R)掺入法了解细胞的增殖 ;用免疫组化检测细胞增殖核抗原 ( PCNA)及细胞 COX- 2的表达 ;用 TUNEL 染色法检测细胞凋亡。建立人胃癌裸鼠原位移植瘤模型 ,给予罗非昔布 8周 ,观察肿瘤大小、COX- 2及 PCNA表达情况。结果三种选择性 COX- 2抑制剂均较阿司匹林更有效抑制体外培养的胃癌细胞 3H- Td R掺入 ,3H-胸腺嘧啶掺入值与药物浓度呈负相关。美洛昔康、塞来昔布、罗非昔布对胃癌细胞 3H-胸腺嘧啶掺入的 IC50 分别为 1.18× 10 - 7mol/ L、1.68× 10 - 8mol/ L、4.3 9× 10 - 9mol/ L。经 1× 10 - 5m ol/ L 的上述三种药物作用 2 4h,SGC790 1细胞凋亡指数分别为 19.8%± 1.8%、2 4.6%± 1.2 % 3 1.2 %± 2 .2 %。 COX- 2抑制剂的选择性越高 ,凋亡指数也显著升高 ( P<0 .0 1)。罗非昔布对裸鼠胃癌原位移植瘤的抑瘤率为 93 .9% ;肿瘤组织的 COX- 2、PCNA表达均较对照组明显下降。结论　COX- 2抑制剂的选择性越高 ,对胃癌生长抑制作用越强。罗非昔布可成为胃癌综合治疗的重要药物之一     

阿司匹林对胃癌细胞增殖及血管生成相关因子作用的研究

目的:从抗血管生成的角度研究阿司匹林抗肿瘤作用的机理。方法:采用MTT法检测不同浓度阿司匹林对胃癌细胞增殖的影响;免疫细胞化学法检测阿司匹林对胃癌细胞COX-2、VEGF蛋白表达的影响。结果:①阿斯匹林对胃癌细胞的增殖具有抑制作用,随着作用时间的延长(F=402.062P<0.01),浓度的增加(F=50.141P<0.01),其抑制作用也增加。②当阿司匹林浓度为0 mmol/L、0.1 mmol/L、1.0 mmol/L、8.0 mmol/L时,COX-2蛋白质表达的A值分别为0.675±0.031、0.660±0.023、0.597±0.016、0.578±0.014,与0 mmol/L阿司匹林组相比,阿司匹林浓度为1.0 mmol/L8、.0 mmol/L组可明显抑制COX-2蛋白表达(P<0.05)。③阿司匹林浓度为0 mmol/L0、.1 mmol/L1、.0 mmol/L8、.0 mmol/L时,VEGF蛋白质表达的A值分别为0.480±0.014、0.457±0.027、0.407±0.032、0.363±0.029,与0 mmol/L阿司匹林组相比,阿司匹林浓度为1.0 mmol/L8、.0 mmol/L组可明显抑制VEGF蛋白表达(P<0.05)。结论:阿斯匹林对胃癌细胞增殖具有一定的抑制作用,其作用可能是通过对COX-2和VEGF等血管生成相关因子的抑制起作用。     

非类固醇类消炎药对胃癌细胞形态学及蛋白表达的影响

目的观察3种非类固醇类抗炎药(non-steroidal anti-inflammatory drugs,NSAIDs)阿司匹林、消炎痛、NS-398对人胃低分化腺癌细胞株MKN-45的影响,探讨非类固醇类消炎药预防胃癌的机制.方法采用光镜、电镜、免疫细胞化学等技术,研究NSAIDs对胃癌细胞MKN-45的形态学变化以及对COX-1,2、hMLH1、hMSH2蛋白表达的影响.结果不同NSAIDs对细胞形态的影响不同.扫描电镜检查发现MKN-45细胞表面的分泌泡有脱失现象.免疫细胞化学研究发现正常MKN-45细胞COX-2、 hMLH1、hMSH2表达,COX-1不表达.30μmol/L NS-398作用于MKN-45细胞后COX-2表达缺失.结论 COX-2选择性抑制剂NS-398在一定浓度可以抑制COX-2表达,对治疗胃癌有一定作用.     

曲古抑菌素A诱导胃癌细胞细胞周期阻滞及其机制

目的研究去乙酰化酶抑制剂TSA对胃癌细胞SGC-7901细胞周期的作用及机制。方法利用细胞计数及流式细胞仪检测细胞生长及细胞周期；利用Western blot、基因芯片及实时定量PCR检测TSA对胃癌细胞周期相关基因的表达。结果TSA可诱导胃癌细胞SGC-7901细胞周期阻滞。TSA可增加胃癌细胞SGC-7901之p53，p21，p27等基因的表达，降低CDK2，CCNDl等基因的表达。TSA可通过调控多个细胞周期相关基因的表达阻滞胃癌细胞细胞周期，从而抑制胃癌细胞的生长。结论TSA可通过调控多个细胞周期相关基因诱导胃癌细胞细胞周期阻滞，从而达到其抑制胃癌细胞生长的作用。     

阿司匹林对人结肠癌细胞中肿瘤干细胞标记物Lgr 5表达的影响

目的探讨阿司匹林预防结直肠癌发生的可能机制。方法 Western blot检测不同浓度阿司匹林作用下Lgr 5蛋白在COX-2高表达的HT-29细胞及COX-2阴性表达的SW480细胞中的表达情况。结果Western blot结果表明阿司匹林能抑制结肠癌细胞株HT-29和SW480中Lgr 5蛋白的表达,并具有良好的量-效关系(P<0.05);两种细胞中Lgr 5蛋白的表达均无显著性差异(P>0.05)。结论阿司匹林能抑制肿瘤干细胞标志物Lgr 5的表达,从而达到预防结直肠癌的目的,其机制可能涉及到COX-2途径和非COX-2途径,且以非COX-2途径为主。     

阿司匹林对胃癌细胞株SGC-7901增殖及核因子kB表达的影响

目的:探讨阿司匹林对胃癌细胞SGC-7901增殖及核因子KB p65(NF-kB p65)表达的影响.方法:培养胃癌细胞株SGC-7901,采用MTT法检测阿司匹林在不同浓度和不同作用时间下对胃癌细胞增殖的影响;DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;蛋白质印迹法和免疫荧光法检测阿司匹林对胃癌细胞NF-kB p65表达的影响.结果:MTT结果显示,在0.1-10 mmol/L浓度区间内,随浓度增加和时间的延长,阿司匹林对SGC-7901细胞的抑制率逐渐增加.SGC-7901细胞经10 mmol/L阿司匹林作用6 h和12 h后,细胞发牛凋亡.随着阿司匹林作用浓度增加和作用时间延长,胃癌细胞NF-kB p65的表达逐渐降低.结论:阿司匹林对胃癌细胞SGC-7901的增殖具有抑制作用.且与阿司匹林的浓度和作用时间呈正相关,其作用机制可能与通过抑制胃癌细胞NF-kB p65的表达而使细胞发生凋亡有关.     

芦荟大黄素抑制胃癌细胞生长与细胞周期阻滞的关系

目的 探讨芦荟大黄素抑制胃癌细胞生长与细胞周期阻滞的关系.方法 人胃癌SGC-7901细胞用2.5、5、10、20、40 μmol/L芦荟大黄素处理1～5 d.分别用MTT方法和流式细胞术检测细胞增殖情况和细胞周期的变化,然后用Western blotting方法检测细胞周期相关调控蛋白周期蛋白(cyclin)和周期蛋白依赖性激酶(cyclindependent kinase,CDK)的变化.结果 芦荟大黄素以剂量依赖方法抑制胃癌细胞的生长;芦荟大黄素引起细胞阻滞在G2/M期;其分子机制为引起cyclin A和CDK2的表达水平下降、cyclinBl和CDKl的表达水平上升.结论 芦荟大黄素抑制胃癌细胞生长的机制之一是阻滞细胞周期,说明芦荟大黄素在胃癌治疗方面有潜在的临床价值.     

非甾体类抗炎药对MKN-45细胞影响的研究

目的：观察3种非甾体类抗炎药(non—steroidal anti—inflammatory drugs,NSAIDs)阿司匹林、消炎痛、NS-398对人胃低分化腺癌细胞株MKN-45的影响,探讨非甾体类抗炎药治疗胃癌的可能机制。方法：采用生长曲线、细胞毒性试验、光镜、电镜、免疫细胞化学等技术,研究NSAIDs对胃癌细胞MKN-45的增殖抑制、形态学变化以及对COX-1,2、hMLH1、hMSH2的影响。结果：不同NSAIDs对细胞生长的抑制作用不同,NS-398的抑制作用最强。阿司匹林、消炎痛、NS-398对MKN-45细胞的IC50值分别约为600μmol／L、80μmol／L、50μmol／L。扫描电镜检查发现MKN-45细胞表面的分泌泡有脱失现象。免疫细胞化学研究发现正常MKN-45细胞COX-2、hMLH、hMSH2表达,COX-1不表达。30μmol／LNS-398作用于MKN-45细胞后COX-2表达缺失。结论：NSAIDs抑制MKN-45细胞生长,对细胞有毒性作用;COX-2选择性抑制剂NS-398在一定浓度可以抑制COX-2表达,对治疗胃癌有一定作用。     

非甾体类抗炎药对胃癌SGC7901细胞增生及环氧合酶活性的影响

目的　探讨非甾体类抗炎药 (nonsteroidal anti- inflam matory drugs,NSAID)对体外培养的胃癌细胞 SGC790 1生长及环氧合酶活性的作用 .方法　用 MTT法观察阿司匹林、尼美舒利对胃癌细胞 SGC790 1生长的影响 ;免疫细胞化学方法检测 Ki- 6 7及 COX- 2蛋白表达 ;采用放射免疫分析法测定细胞培养上清 PGE2 水平 .结果　阿司匹林和尼美舒利呈时间、剂量依赖性方式抑制细胞增生 ,减少 Ki- 6 7蛋白表达 .胃癌细胞 SGC790 1COX- 2蛋白表达阳性 ,并伴有 PGE2 释放 ,尼美舒利可减少 PGE2 产生 ,但对 COX- 2蛋白表达无影响 .结论　阿…     

Mechanism of inhibition on activator protein-1 activity by all-trans retinoic acid in gastric cancer cells

Objective To determine the mechanism of all-trans retinoic acid (ATRA) on growth inhibiti on in human gastric cancer cells.Methods Gastric cancer cell lines: MGC80-3, BGC-823, SGC-7901 and MKN-45. CAT assay , Northern blot, Western blot, gene transfection and MTT assay. Results ATRA can inhibit the activator protein-1 (AP-1) activity in ATRA-sensitiv e cell lines, but not in ATRA-resistant cell line, and the anti-AP-1 activity of ATRA is mediated by its receptor, retinoic acid receptor α (RARα). ATRA c an al so inhibit the expression of cJun and cFos. One of the mechanisms for ATRA to i nhibit the growth of gastric cancer cells may be through its inhibitory effect o n the AP-1 activity and its influence on up-regulation of RARα expression. T he inhibition of cJun and cFos expressions by ATRA may also contribute to the an ti-AP-1 activity. Conclusions ATRA inhibits the growth of gastric cancer cells through the regulation of AP-1 activity. This action is mediated by RARα.     

LAT1及CD98hc在胃癌细胞SGC-7901中的表达及LAT1对其细胞生物学行为的影响

目的观察L型氨基酸转运载体1(LAT1)与其异二聚体CD98hc在胃癌细胞SGC-7901中的表达及LAT1对细胞增殖与迁移能力的影响。方法将胃癌细胞SGC-7901分为1、10、100μmol/L BCH干预和空白对照共4组,RT-PCR、IF与Western blot检测胃癌细胞SGC-7901中LAT1与CD98hc mRNA、蛋白的表达。不同浓度的BCH作用于胃癌细胞SGC-7901 48 h后,新型四唑氮盐(MTS)比色法检测各组细胞生长情况,流式细胞仪检测各组细胞周期分布情况,Transwell细胞迁移小室检测各组细胞迁移能力的变化。结果 LAT1及其异二聚体CD98hc在胃癌细胞SGC-7901中呈高表达。与空白对照组相比,随着BCH浓度的提高,胃癌细胞SGC-7901的增殖能力与迁移能力逐渐降低。细胞周期分析发现,BCH处理的胃癌细胞组S期细胞减少,而G0/G1期细胞增加(P<0.05)。结论 LAT1及其异二聚体CD98hc在SGC-7901细胞中有表达,LAT1可能促进SGC-7901细胞的增殖,加快细胞周期进程,增强SGC-7901细胞的迁移能力。     

Effects of combined octreotide and aspirin on the growth of gastric cancer

Gastricadenocarcinomaisstillthesecondmostcommoncancerandthesecondmostcommoncauseofcancerdeathintheworld Inspiteofconsiderableprogressinendoscopydiagnostics ,earlydiagnosisofgastriccancerisstilldifficultbecauseofthelackofsymptoms Advancedtumorsappeartobepoorprognosticfeatures Chemotherapyorradiationtherapyhasgenerallyshownsomeclinicalresponsebutlittlesurvivaladvantageandisintolerableinmanypatients 1Therefore,othertherapeuticregimensforgastricadenocarcinomaneedtobeexplored Ithasbeenreportedthat…     

沉默Beclin1基因对β-榄香烯抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖与诱导自噬的影响

目的探讨Beclin1基因对β-榄香烯抗人胃癌SGC-7901细胞增殖及自噬诱导的影响。方法用前期实验构建成功的GV112-Beclin1-shRNA1(short hairpin RNA,短发夹RNA)慢病毒载体感染人胃癌SGC-7901细胞。采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测β-榄香烯对SGC-7901细胞增殖的抑制作用,以及沉默Beclin1基因后对β-榄香烯抗增殖能力的影响。免疫蛋白印迹(Western blot)检测自噬相关蛋白LC3-II、P62的表达,评价β-榄香烯作用SGC-7901后的自噬水平和Beclin1基因沉默对β-榄香烯诱导自噬的影响。结果 MTT法显示,β-榄香烯能够抑制胃癌SGC-7901细胞增殖,抑制作用随浓度的增加而递增(浓度为20、50、100μg/mL比0μg/mL时,抑制率为21.5%、31.7%、37.4%比0,P<0.05);沉默Beclin1基因后β-榄香烯抑制胃癌SGC-7901细胞抑制率增加(42.3%比36.1%,P<0.05)。Western blot法显示,β-榄香烯能诱导SGC-7901细胞发生保护性自噬,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ表达上调,P62蛋白表达下降,沉默Beclin1基因可抑制β-榄香烯对SGC-7901细胞保护性自噬的增强,LC3-Ⅱ蛋白表达水平下降,P62蛋白表达增加。结论β-榄香烯可诱导胃癌SGC-7901细胞发生保护性自噬,下调Beclin1基因有助于降低保护性自噬的发生,从而增强β-榄香烯的抗癌效果。     

白杨素增强rhsTRAIL对人胃癌SGC-7901细胞毒性

目的:研究白杨素(ChR)是否具有增强rhsTRAIL对人胃癌SGC-7901细胞毒性作用。方法:体外培养SGC-7901细胞。MTT比色法测定细胞毒性。碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)分析细胞死亡率。结果:ChR、rhsTRAIL以及两者合用对SGC-7901细胞活性的半数抑制浓度(IC50值)分别为134μmol/L、402ng/mL和47ng/mL,合并用药效应的CI值是0.4676。ChR40μmol/L、rhsTRAIL100ng/mL以及两者合用的细胞死亡率分别为4.65%±0.58%、3.60%±0.16%和49.87%±4.27%。结论:亚细胞毒性浓度的白杨素具有增强rhsTRAIL对人胃癌SGC-7901细胞毒性作用。     

Effects of Spinach Powder Fat—Solouble Extract on Proliferation of Human Gastric Adenocarcinoma Cells

Four kinds of assays were used to study the effect of a fat-soluble extract of spinach powder (SPFE) on the proliferation of human gastric adenocarcinoma cell line (SGC-7901) in vitro. These studies included: (i) cell growth assay, (ii) colony forming assay, (iii) MTT colorimetric assay, and (iv) 3H-TdR incorporation assay. The concentrations of SPFE expressed as the level of beta-carotene in the medium were 2 x 10(-8), 2 x 10(-7) and 2 x 10(-6) mol/L beta-carotene in assay (i)-(iii), but 4 x 10(-8), 4 x 10(-7) and 4 x 10(-6) mol/L beta-carotene in assay (iv) respectively. The results indicated that SPFE inhibited the proliferation and colony forming ability of SGC-7901 cells. And in MTT assay, SPFE inhibited the viability of SGC-7901 cells, but no inhibitory effect of SPFE was observed on the viability of lymphocytes in peripheral blood of healthy people. Finally, in the 3H-TdR incorporation test, both SPFE and beta-carotene showed significant inhibitory effects on DNA synthesis in SGC-7901 cells, but SPFE was more effective than beta-carotene.     

脂多糖对人胃癌细胞环氧化酶-2基因启动子活性的影响

目的 研究炎症状态下人胃癌细胞中环氧化酶- 2( COX-2)基因启动子活性.方法 采用免疫组织化学染色方法观察人胃癌组织中COX-2的表达情况.构建人COX-2基因启动子重组质粒pGL3-COX-2-promoter,采用脂质体介导转染法将重组质粒和内参质粒pRL-TK共转染胃癌细胞株SGC-7901和BGC-823.以不同质量浓度的脂多糖(LPS)工作液刺激细胞,于干预后不同时间点收集细胞,利用双荧光报告系统进行双荧光素酶报告基因活性检测,Western blotting检测COX-2蛋白的表达.结果 免疫组织化学染色观察发现,胃癌癌细胞胞质及癌旁黏膜上皮细胞的胞质中均有COX-2蛋白表达.在相同时间点,SGC-7901和BGC-823内COX-2基因启动子活性随LPS质量浓度的上升而增高(P＜0.05);高浓度(10 μg/mL)LPS刺激6h后COX-2基因启动子活性达到峰值,随后逐渐降低(P＜0.05).Western blotting检测结果显示:在10 μg/mL LPS干预下,SGC-7901和BGC-823内COX-2蛋白表达随LPS干预时间的延长而呈现上升趋势.结论 炎症刺激可激活人胃癌细胞COX-2基因启动子的表达活性.     

17肽胃泌素及其受体拮抗剂L-365260对人胃癌细胞株SGC-7901生长的影响

目的 旨在探讨17肽胃泌素(G-17)及L-365260对人胃癌细胞生长的影响及其作用机制。方法 采用G-17及L-365260作用于人胃癌细胞株SGC-7901,通过MTT活细胞染色法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测Bcl-2和Bax蛋白表达。结果 G-17在1×10-9～1×10-5mol/L浓度范围内对SGC-7901细胞有明显促进作用。L-365260在1×10-8～1×10-5mol/L浓度范围内对SGC-7901细胞有明显抑制作用。L-365260可明显抑制G-17对SGC-7901细胞的促生长作用。G-17可使SGC-7901细胞中的Bcl-2蛋白表达显著增加,对Bax蛋白无影响。L-365260不仅可使SGC-7901细胞中的Bcl-2蛋白表达显著减少,而且还可使Bax蛋白表达显著增加。结论 G-17对人胃癌细胞生长具有促进作用,而L-365260则对其具有抑制作用。上调Bcl-2蛋白表达,以抑制SGC-7901细胞凋亡可能是G-17促进胃癌细胞生长的机制之一。L-365260可能通过下调Bcl-2、上调Bax蛋白表达,诱导SGC-7901细胞凋亡,以抑制癌细胞生长。