促红细胞生成素对大鼠视网膜Müller细胞低氧损伤的保护作用

目的探讨促红细胞生成素对大鼠视网膜Müller细胞低氧损伤的保护作用。方法传代培养大鼠视网膜Müller细胞,分为N组(正常对照)、C50、C100、C150、C200、C300组(氯化钴浓度50,100,150,200,300μmol/L),MTT检测不同浓度氯化钴对Müller细胞活力的影响,确定制作低氧损伤的氯化钴浓度。然后再分组为N组(正常对照),C组(200μmol/L氯化钴),E1C组(1×104 IU/L rh EPO+200μmol/L氯化钴),E2C组(2×104 IU/L rh EPO+200μmol/L氯化钴),E4C组(4×104 IU/L rh EPO+200μmol/L氯化钴),MTT比色法比较五组视网膜Müller细胞活力的改变。Western blot检测各组细胞谷氨酰胺合成酶蛋白表达的情况。结果氯化钴浓度低于200μmol/L时,细胞活力不受氯化钴浓度的影响。从200μmol/L开始,细胞活力随氯化钴浓度增高而下降。E1C、E2C、E4C组细胞活力均高于C组,E4C组高于E2C组和E1C组,C组低于N组。Western blot检测谷氨酰胺合成酶表达结果显示,C组低于N组,EPO干预各组蛋白表达均高于C组,并随EPO浓度增高表达增高,但均低于N组。结论 EPO对视网膜Müller细胞低氧损伤有保护作用。     

促红细胞生成素对高浓度葡萄糖培养大鼠视网膜Müller细胞的保护作用

目的探讨促红细胞生成素对高浓度葡萄糖培养大鼠视网膜Müller细胞的保护作用。方法体外传代培养大鼠视网膜Müller细胞,分组为N组(正常对照),G组(25 mmol/L葡萄糖),E1G组(1×104 IU/L rh EPO+25 mmol/L葡萄糖),E2G组(2×104 IU/L rh EPO+25 mmol/L葡萄糖),E4G组(4×104 IU/L rh EPO+25 mmol/L葡萄糖),MTT比色法比较五组视网膜Müller细胞活力的改变。酶联免疫吸附试验检测各组细胞caspase-3蛋白表达的情况。结果 G组、E1G组、E2G组、E4G组细胞活力均低于N组,E1G组、E2G组、E4G组细胞活力高于G组,E4G组高于E2G组,E2G组高于E1G组。酶联免疫吸附试验检测结果显示G组caspase-3表达高于N组,rh EPO干预各组caspase-3表达均低于G组,并随EPO干预浓度增高表达降低,但均高于N组。结论促红细胞生成素对高浓度葡萄糖培养大鼠视网膜Müller细胞有保护作用。     

通窍活血中药复方对体外培养视网膜Müller细胞在缺氧状态下细胞活力的影响

目的观察通窍活血中药复方对体外缺氧条件下视网膜Müller细胞活力的影响。方法采用SD大鼠制备通窍活血中药含药血清和空白血清,以终浓度为0.5 mmol/L的连二亚硫酸钠作为低缺氧组条件,以终浓度1 mmol/L的连二亚硫酸钠作为高缺氧组条件,将体外纯化培养的大鼠P2代视网膜Müller细胞分为6组,分别置于加入空白血清(正常对照组)、中药含药血清(正常中药干预组)、空白血清+低连二亚硫酸钠(低缺氧组)、空白血清+高连二亚硫酸钠(高缺氧组)、中药含药血清+低连二亚硫酸钠(低缺氧中药干预组)、中药含药血清+高连二亚硫酸钠(高缺氧中药干预组)的DMEM培养基中,培养48 h后比较各组乳酸脱氢酶(LDH)漏出量。结果低、高缺氧组较正常对照组LDH值明显升高,差异有统计学意义(P0.05)。正常中药干预组LDH数值与正常对照组接近,差异无统计学意义(P0.05)。低、高缺氧中药干预组LDH漏出量均较对应的缺氧组明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论缺氧条件可导致体外纯化培养的大鼠视网膜Müller细胞膜稳定性下降,通透性增加,细胞活力降低,通窍活血中药含药血清可提高缺氧条件下视网膜Müller细胞活力,这可能是通窍活血中药复方对青光眼患者视神经保护的药物作用途径之一。     

载脂蛋白M单克隆抗体的制备及其初步应用

目的 制备亲和力高、纯度好的载脂蛋白M(apoM)单克隆抗体,并用以检测apoM在组织细胞及不同人群中的分布.方法 用重组apoM蛋白免疫Balb/c小鼠,经细胞融合、筛选及克隆化,得到生长良好、分泌稳定的杂交瘤细胞株;注射Balb/c小鼠腹腔,收取腹腔积液,纯化后得到apoM单克隆抗体,并用本实验制备的单克隆抗体检测健康对照组及冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)患者稳定型心绞痛(sA)组和急性冠状动脉综合征(ACS)组血清中的apoM蛋白浓度.结果 得到了3株单克隆抗体,经亚型鉴定、阻断试验和WB确定为apoM单克隆抗体;并通过该抗体在人细胞和组织中检测到了apoM蛋白.冠心病SA组的apoM浓度为(11.02±1.96)×10-3 g/L,ACS组apoM浓度为(10.76±1.32)×10-3g /L,对照组为(12.83±2.28)×10-3 g/L,3组间差异有统计学意义(F=11.544,P＜0.05).比较冠心病sA组和ACS组与健康对照组血浆apoM浓度,显示两组冠心病患者血浆apoM浓度均低于健康对照组(t=2.962、3.967,P＜0.05),两组冠心病组之间血浆apoM浓度差异无统计学意义(t=1.033,P＞0.05).结论 成功制备了3株apoM的单克隆抗体,可与人组织细胞中的apoM蛋白特异结合,为进一步研究apoM在脂代谢中的作用打下了基础.     

藏红花素对缺氧环境下Wistar大鼠视网膜Müller细胞活性和胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的 观察不同浓度藏红花素对缺氧条件下RMC活性和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响.方法 改良Reichenbach等方法原代培养Müller细胞,并采用GFAP和Vimentin染色鉴定RMC.RMC培养基中加入终浓度10 μmol/L、50 μmol/L和100 μmol/L藏红花素,于1~7 d计数细胞,于24 h和48 h台盼蓝染色测定细胞活性,对照组RMC培养基中未加入藏红花素.培养液中加入终浓度为200 μmol/L的CoCl2建立化学缺氧模型.实验分4组:缺氧组(H组)、藏红花素处理组(C组)、缺氧+藏红花素处理组(HC组)和正常对照组(NC组),其中C和HC组培养液中加入10 μmol/L藏红花素.处理24 h,台盼蓝染色检测细胞活性,采用Western blot法半定量检测GFAP的表达.结果 含10 μmol/L和50 μmol/L藏红花素的培养液中,细胞生长无抑制;100 μmol/L 藏红花素的培养液中细胞增生受到抑制,培养24 h和48 h RMC活性分别为(68±7)%、(59±9)%,与对照组相比,明显降低(t24h=3.723,P<0.05;t48h=4.103,P<0.05).在缺氧条件下,正常细胞和10 μmol/L 藏红花素的培养液中细胞活性受到明显抑制,藏红花素可减轻缺氧环境对细胞活性的抑制作用.在缺氧条件下,GFAP表达明显升高(t=2.945,P<0.05);藏红花素可部分抑制GFAP高表达(t=3.362,P<0.05).结论 缺氧能诱导体外培养视网膜Müller细胞死亡,适合浓度藏红花素可抑制缺氧诱导的视网膜Müller细胞死亡.     

缺氧对视网膜Müller细胞水通道蛋白4表达的影响

目的 观察体外培养兔视网膜Müller细胞在缺氧条件下水通道蛋白4(AQP4)表达的变化.方法 本实验以体外培养的兔视网膜Müller细胞为研究对象,选定不同缺氧时间体外培养Müller,并采用AO/EB染色检测Müller细胞的凋亡情况,根据细胞凋亡情况选定最适缺氧时间进行检测,利用免疫细胞化学染色、流式细胞术及RT-PCR的方法 对实验组细胞AQP4的表达进行定性及定量测定.结果 Müller细胞缺氧24 h为缺氧最大耐受时间.缺氧组Müller细胞AQP4表达明显低于正常对照组;流式细胞仪检测中波峰位置明显提前,AQP4表达减少;RT-PCR半定量分析显示:AQP4 mRNA的表达比对照组明显降低(P<0.01).结论 缺氧使体外培养兔视网膜Müller细胞AQP4表达下调,缺氧可能影响细胞代谢变化,引起K+外流.     

促红细胞生成素对发育期小鼠脑损伤后神经细胞凋亡和caspase-3表达的影响

目的 研究促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对鹅膏蕈氨酸(ibotenic acid,Ibo)致发育期小鼠兴奋性脑损伤后神经细胞凋亡和caspase-3表达的影响.方法 以144只健康雌性昆明小白鼠作为实验动物,其中7日龄(P7)、21日龄(p21)和42日龄(P42)小鼠各48只；再将同日龄小鼠随机(随机数字法)分为假手术组(n=16)、Ibo模型组(n=16)和EPO治疗组(n=16).采用颅内微量注射法向小鼠左侧海马注射Ibo 1μl(5μg)建立脑损伤模型.EPO治疗组小鼠海马注射Ibo后,腹腔注射5000 U/ (kg·d) EPO,连续3 d；Ibo模型组和假手术组腹腔注射等体积生理盐水.各组小鼠在建模后3d处死,Nissl染色观察小鼠海马神经细胞凋亡病理改变；双抗体夹心ABC-ELISA法检测caspase-3含量变化；分光光度法检测caspase-3活性改变.结果 光学显微镜观察结果显示,与假手术组相比,Ibo模型组小鼠海马区神经细胞发生明显变性和死亡,神经细胞数量明显减少；EPO治疗组小鼠海马区神经细胞凋亡程度较轻.Ibo模型组与假手术组相比,caspase-3含量和活性明显升高(P ＜0.05)；EPO治疗组caspase-3含量和活性的升高幅度明显低于Ibo模型组(P＜0.05).结论 Ibo致脑损伤时,脑组织caspase-3的表达增强,导致神经细胞凋亡.EPO可减轻脑损伤后神经细胞凋亡,起到脑保护的作用,其机制可能与下调caspase-3的表达有关.     

血卟啉单甲醚对人宫颈癌Hela细胞体外影响的研究

目的:初步探讨血卟啉单甲醚(hematoporphyrin monomethyl ether,HMME)介导的光动力疗法(HMME-PDT)对体外培养的人宫颈癌Hela细胞的杀伤效应及影响宫颈癌细胞光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)杀伤效应的主要因素。方法:通过采用不同光敏剂浓度、光照能量密度及细胞孵育时间介导的光动力作用于人宫颈癌Hela细胞,MTT法检测24h后的细胞生长抑制率。结果:光敏剂浓度<2.5μg/mL的不同组细胞生长抑制率有明显差异,光照能量密度≥1.5J/cm2及孵育时间≥4h的细胞之间生长抑制率差异无统计学意义。HMME 2.5μg/mL、光照能量密度1.5J/cm2和孵育时间≥4h可能是PDT对Hela细胞杀伤作用的最佳参数。结论:特定光源下,光敏剂的浓度、光照剂量及孵育时间是影响HMME-PDT效应的主要因素。     

可溶性促红细胞生成素在肾性贫血检测中的意义

目的 探讨可溶性促红细胞生成素(EPO)在肾性贫血患者中的变化及其临床意义.方法 选择肾性贫血患者136例作为肾性贫血组,以同期体检中心100例健康体检者作为对照组,肾性贫血患者按贫血程度分为重度贫血组(Hb＜60 g/L)及轻中度贫血组(Hb:60～120 g/L);重度贫血组再按病程分为:＜3年组,≥3年组,应用SySmex XT-2000i全自动血液分析仪检测Hb,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)和OLYMPUS AU2700全自动生化分析仪分别检测血清EPO及肌酐(Cr)浓度.结果 与对照组比较,肾性轻度贫血组患者的内源性EPO的差异无统计学意义(P＞0.05),Hb和Cr浓度的差异有统计学意义(P＜0.05).Hb和Cr分别与EPO进行组内相关性分析,相关系数分别为0.135、0.243,相关性差.肾性重度患者内源性EPO与Cr浓度呈反比,但并非平行.结论 肾性贫血患者内源性EPO的检测对于肾性贫血患者的治疗具有重要临床意义.     

多柔比星联合顺铂对脑胶质瘤U251细胞株的作用

目的:体外观察多柔比星(Doxorubicin,ADM)联合顺铂(Cisplatin,CDDP)对脑胶质瘤U251细胞株的增殖抑制作用.方法:MTT法检测不同浓度ADM、CDDP以及两者间相同浓度间组合对U251细胞的增殖抑制作用.结果:MTT法检测结果显示,单用吡柔比星时,其对U251细胞的增殖抑制有统计学意义(P＜0.04),而单用顺铂时,其对U251细胞的增殖抑制差异有显著性(P＜0.00),两药联合应用时,其对U251细胞的增殖抑制差异有显著性(P＜0.00).结论:当高浓度(≥0.625 μg/mL) ADM联合相应浓度的CDDP时,两者之间存在明显的相加作用(0.85﹤Q﹤1.15).而当药物浓度(≤0.3125 μg /mL)ADM联合相应浓度的CDDP时,两者之间存在相互拮抗作用.     

二氢杨梅素对乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡的影响

目的研究二氢杨梅素(DMY)对乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡的影响。方法 2014年3月至2015年2月,该院采用99%纯度的DMY为抑制剂,以乳腺癌MCF-7细胞为研究对象,采用MTT法、流式细胞术法和免疫细胞化学来分析乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡的情况。结果当使用浓度大于20μg/mL的DMY处理细胞时,出现了抑制效果,但效果不佳;当用40与80μg/mL的DMY时,明显地抑制了乳腺癌细胞MCF-6的增殖,且有不同程度的敏感性。当DMY为80μg/mL时,其IC50为226.9μg/mL。抑制率和IC50分别与0μg/mL DMY比较,差异有统计学意义(P0.05)。40与80μg/mL的DMY处理乳腺癌细胞MCF-6可以诱导其周期阻滞在G2/M期(P0.01),并表现出明显的细胞凋亡现象,同时,G0/G1期也受到阻滞,S期细胞比例降低明显,差异有统计学意义(P0.05);当使用浓度大于20μg/mL的DMY时,PCNA阳性率有所下降,当浓度为40μg/mL的DMY时,乳腺癌细胞MCF-6的PCNA阳性率明显下降(P0.01),尤其浓度为80μg/mL的DMY时,阳性率为10.00%。与0μg/mL DMY比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论对乳腺癌患者采用DMY可以有效抑制癌细胞快速增殖,加速器凋亡,减缓患者病情,疗效突出。     

PI3K/Akt信号通路对人结肠癌HT-29细胞增殖的影响

目的探讨PI3K/Akt信号通路在人结肠癌HT-29细胞增殖中的作用。方法人结肠癌HT-29细胞分为结肠癌组和抑制剂组,癌旁正常细胞株为对照组,均取对数生长期细胞进行实验。结肠癌组和对照组应用培养基+等量生理盐水进行培养,抑制剂组应用培养基+PI3K/Akt信号通抑制剂LY294002 10μL进行培养。MTT法检测3组培养24、48、72h时细胞增殖情况,Western blot法检测3组PI3K、Akt、磷酸化Akt、P-糖蛋白表达,流式细胞仪检测3组细胞周期及凋亡情况。结果培养24、48、72h,对照组和抑制剂组细胞吸光度值均小于结肠癌组(P0.05),对照组与抑制剂组比较差异无统计学意义(P0.05);培养24h,对照组和抑制剂组PI3K、Akt、磷酸化Akt和P-糖蛋白表达均低于结肠癌组(P0.05),对照组与抑制剂组比较差异无统计学意义(P0.05);流式细胞仪检测结果显示,结肠癌组G_1期细胞比率[(62.54±5.15)%]、细胞凋亡率[(45.18±6.76)%]均高于对照组[(39.47±3.84)%、(10.98±0.62)%]和抑制剂组[(37.18±2.03)%、(9.31±0.41)%](P0.05),G_2/M期细胞比率[(11.34±2.06)%]低于对照组[(29.32±3.77)%]和抑制剂组[(28.71±2.35)%](P0.05),S期细胞比率[(26.75±2.46)%]与对照组[(29.81±3.18)%]和抑制剂组[(30.44±2.87)%]比较差异均无统计学意义(P0.05);抑制剂组G_1期、G_2/M期、S期细胞比率及细胞凋亡率与对照组比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论 PI3K/Akt信号通路可抑制人结肠癌HT-29细胞增殖,其机制可能与抑制其转导通路下游P-糖蛋白表达、使细胞周期阻滞于G_1期有关。     

4-HPR 联合顺铂对人卵巢癌细胞株 SKOV3增殖和 Akt／Bax 表达的影响

目的探讨4-HPR 联合顺铂对人卵巢癌细胞株 SKOV3增殖和 Akt/Bax 表达的影响。方法 MTT法检测单独使用4-HPR、顺铂及联合使用对SKOV3细胞增殖的影响;用流式细胞仪检测4-HPR、顺铂对SKOV3细胞周期和Akt/Bax表达的影响。结果顺铂联合不同浓度的4-HPR可以显著抑制SKOV3细胞的增殖,同单独使用顺铂相比抑制作用较强,差异显著（ P＜0.05）。顺铂联合4-HPR同使用顺铂相比可以使G0～G1期细胞比例进一步下降,S期和G2～M期细胞比例进一步上升,差异显著（ P＜0.01）。顺铂联合4-HPR的凋亡率同单独用顺铂组相比差异有统计学意义（ P＜0.01）。顺铂联合不同浓度的4-HPR时可以使SKOV3细胞Akt的表达下调和促进Bax的表达的上调,同单独使用顺铂相比差异有统计学意义（ P＜0.01）。结论顺铂联合4-HPR可以更好地抑制细胞株SKOV3增殖,使得细胞停滞在S期和G2～M期,这可能与可以促进Akt的表达下调和Bax的表达上调有关。     

淫羊藿提取物对小鼠自发活动和睡眠功能的影响

背景本草纲目记载小檗科淫羊藿属植物淫羊藿有益精气,坚筋骨,补腰漆,强心力等功能,近年来临床应用及药理作用报道较多.目的观察在抖笼换能器法,阈上、阈下剂量戊巴比妥钠干预的情况下淫羊藿提取物对小鼠自发活动和睡眠功能的影响.单位赣南医学院,数理教研室,分析实验室,药理教研室.材料健康成年昆明种雄性小鼠110只,清洁级,体质量18～22 g.方法2004-08/09在赣南医学院科研中心实验室完成.①小鼠(n=30)腹腔注射1 000 g/L的淫羊藿提取物(0.01 mL/g),15 min后放入吊笼中,稳定3 min后记录用药后15 s内自发活动波形.②小鼠(n=40)腹腔注射1 000 g/L的淫羊藿提取物(0.01 mL/g),15 min后,腹腔注射阈上剂量的戊巴比妥钠(2.5 g/L)0.02 mL/g,观察小鼠翻正反射消失时间.③小鼠(n=40)腹腔注射1 000 g/L的淫羊藿提取物(0.01 mL/g),15 min后,腹腔注射阈下剂量的戊巴比妥钠(2.5 g/L)0.01 mL/g,观察小鼠翻正反射消失时间.主要观察指标小鼠自发活动次数;阈上剂量戊巴比妥钠小鼠睡眠时间;阈下剂量戊巴比妥钠小鼠睡眠时间.结果实验动物110只,全部进入结果分析.①浓度为0.1 mL/10 g的淫羊藿提取物具有明显抑制小鼠自发活动,与对照组比较中波、大波出现次数显著减少(7.4±6.5,47.1±18.7;t=3.265,P＜0.01).②浓度为0.01 mL/g淫羊藿提取物能显著加速阈上剂量戊巴比妥钠小鼠的入睡时间和延长睡眠时间,与对照组差异显著[(3.9±2.8),(219.7±87.2);(5.8±2.9),(113.0±77.4)min;t=2.452,2.501,P＜0.05].③浓度为0.01 mL/g淫羊藿提取物能显著加速阈下剂量戊巴比妥钠的入睡时间和延长睡眠时间,与对照组比较差异显著[(6.6±5.2),(60.3±71.7);0,0 min;t=3.275,P＜0.01],与戊巴比妥钠有协同的中枢抑制作用.结论淫羊藿提取物具有明显的中枢抑制作用,能明显抑制小鼠自发活动,同时还能明显加快阈上剂量戊巴比妥钠小鼠的入睡时间,同时还可显著延长阈上剂量戊巴比妥钠小鼠的睡眠时间.增强阈下剂量戊巴比妥钠的催眠时间和增加入睡动物数.     

α-细辛醚对Fmr1基因敲除小鼠跳台行为和海马P-Akt表达的影响

目的通过观察α-细辛醚对Fmr1基因敲除小鼠(KO鼠)跳台行为和海马磷酸化蛋白激酶B(P-Akt)表达的影响,初步探讨α-细辛醚对KO鼠学习记忆缺陷的治疗作用及其可能的机制。方法采用4周龄纯合子(-/-)FVB Fmr1基因敲除型及4周龄纯合子(+/+)FVB野生型(WT)近交系小鼠小鼠共计231只。KO及WT小鼠各分7组,分别为:空白对照组,阴性对照组(生理盐水组),α-细辛醚治疗组3 mg/kg组,6 mg/kg组,9 mg/kg组,12 mg/kg组,24 mg/kg组,KO小鼠每组16只;WT小鼠每组17只。4周龄小鼠予连续腹腔注射生理盐水及α-细辛醚6 d,第7天腹腔注射30 min后行跳台实验(第1天),测定小鼠避暗及跳台潜伏期和错误次数,第8天腹腔注射30 min后行跳台实验(第2天),测定小鼠避暗及跳台潜伏期和错误次数,第9天腹腔注射30 min后取脑海马,并通过Western blot观察小鼠海马内P-Akt及Akt表达。结果跳台实验结果:KO小鼠阴性对照组,3 mg/kg,6 mg/kg,9 mg/kg及12 mg/kg用药组的跳台潜伏期较空白对照组有明显增高(P0.05),而在24 mg/kg组,虽然潜伏期较空白组有增加,但是无统计学意义差异(P0.05)。KO小鼠各组的跳台实验错误次数之间无统计学差异(P0.05)。WT小鼠腹腔注射生理盐水及不同剂量α-细辛醚后,各组间的跳台实验的潜伏期及错误次数均无统计学差异(P0.05)。KO小鼠海马中的P-Akt均较WT小鼠明显减少。而Akt的表达在KO及WT小鼠中均无统计学意义的变化(P0.05)。用药后KO小鼠各用药组之间P-Akt表达变化无统计学差异(P0.05)。结论部分α-细辛醚剂量可改善KO小鼠的跳台行为,KO小鼠的Akt通路可能受损,这可能是导致KO小鼠学习记忆受损的可能原因之一。     

桑白皮水提取液的耐缺氧作用

目的:研究桑白皮水提取液对小鼠耐缺氧作用的影响。方法:①小鼠(n=40)腹腔注射500g/L的桑白皮水提取液(0.01mL/g,0.02mL/g),15min后,将小鼠分别放入250mL的磨口广口瓶内密封,以最后一次呼吸为指标,观察小鼠存活时间。②小鼠(n=30)腹腔注射500g/L的桑白皮水提取液(0.01mL/g,0.02mL/g),15min后,不需麻醉,用剪刀在耳下部快速断头,记录喘气时间。③小鼠随机分为3组,每组12只,对照组按0.03mL/g剂量给小鼠皮下注射生理盐水,5min后按0.02mL/g剂量给小鼠腹腔注射生理盐水;模型组按0.015mg/g的剂量给小鼠皮下注射异丙肾上腺素,5min后按0.02mL/g剂量给小鼠腹腔注射生理盐水。给药组按0.015mg/g剂量给小鼠皮下注射异丙肾上腺素,5min后腹腔注射桑白皮水提取液。给药后10min,分别放入广口瓶内密封,记录小鼠存活时间。结果:①500g/L桑白皮水提取液(0.01mL/g,0.02mL/g)能非常显著延长常压耐缺氧条件下小鼠的存活时间犤(66.4±8.9)min,(90.3±7.4)min犦,与对照组犤(36.2±4.3)min犦比较差异有显著性意义(t=3.358,3.617;P均<0.01)。②对断头小鼠的呼吸时间犤(21.2±0.8)s,(23.5±0.7)s犦有显著延长作用(t=2.824,3.432;P<0.05,P<0.01)。③模型组和给药组小鼠在常压缺氧条件下的生存时间犤(27.9±2.6)min,(50.6±3.4)min犦     

家蝇胚胎细胞抗菌肽对黑色素瘤细胞A375抑制作用的实验研究

目的 研究家蝇胚胎细胞MDEC-07114抗菌肽对黑色素瘤细胞A375的抑制作用.方法 利用脂多糖诱导家蝇胚胎细胞MDEC-07114提取抗菌肽.将家蝇胚胎细胞抗菌肽分为40,80,160,320和640 μg/ml五个实验组,同时以PBS和培养基作为正常对照组.采用MTT比色法测定不同浓度抗菌肽作用下细胞生长曲线,流式细胞术观察抗菌肽对黑色素瘤细胞A375周期及凋亡的影响.结果 ①在不同浓度家蝇胚胎细胞抗菌肽作用下,黑色素瘤细胞A375的生长受到明显的抑制,药物浓度越高、作用时间越长,对细胞的抑制作用越强.②各浓度组抗菌肽引起A375细胞的G2/M期升高,高浓度组(＞160 μg/ml)可引起G0/G1期降低,PI明显升高,与正常对照组相比差异具有统计学显著性意义(F=214.89,P＜0.05).与正常对照组相比,各实验组引起的A375细胞凋亡率差异无统计学显著性意义(F=14.17,P＞0.05).结论 家蝇胚胎细胞抗菌肽对肿瘤细胞的抑制作用随着药物剂量的增加和作用时间的延长而增强.家蝇胚胎细胞抗菌肽对A375细胞的抑制机理可能主要是阻滞细胞周期的正常发育.     

氧化应激及凋亡与重症急性胰腺炎肠屏障功能障碍

目的 通过动物实验,观察重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)肠道屏障功能变化,探讨炎症因子释放、肠黏膜氧化应激及凋亡在肠屏障功能障碍中的作用.方法 上海交通大学附属第一人民医院动物实验中心内,24只BALB/c小鼠,随机数字法分为2组,SAP组:以雨蛙素联合脂多糖腹腔注射法诱导,先腹腔内注射雨蛙素50 μg/kg,连续6次,每次间隔1h,在末次雨蛙素注射同时,腹腔内注射脂多糖10 mg/kg(LPS E.Coli);对照(假手术)组:每小时一次腹腔注射生理盐水2 ml,共6次.两组动物分2批(每批6只/组)分别于建模后4h及8h,麻醉后打开腹腔取血及标本.观察小鼠胰腺及肠道病理变化并予评分,测定小鼠血二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)、淀粉酶、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量,测定肠黏膜丙二醛( malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、还原型谷胱甘肽( glutathione,GSH)含量及黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XO)活力,检测小鼠肠黏膜细胞caspase-3酶活性,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)法检测小鼠肠黏膜凋亡细胞并计算凋亡指数.以PASW 18.0软件对数据进行方差分析及t检验,明确上述检测指标在两组小鼠间差异是否有统计学意义,从而明确重症急性胰腺炎肠道屏障功能障碍的机制.结果 建模后4h及8h,SAP组小鼠胰腺出血、坏死、炎症细胞浸润较对照组严重,胰腺病理评分与对照组比较差异具有统计学意义(P＜0.01),血淀粉酶含量与对照组比较差异具有统计学意义(P＜0.05);肠组织病理评分及血DAO质量浓度与对照组比较差异具有统计学意义(P＜0.01);血TNF-α质量浓度与对照组比较差异具有统计学意义(P＜0.01);肠黏膜MDA含量及XO活力与对照组比较差异具有统计学意义(P＜0.01),肠黏膜SOD含量与对照组比较差异具有统计学意义(P＜0.01)、GSH含量与对照组比较差异具有统计学意义(P＜0.05);肠黏膜细胞caspase-3酶活性及凋亡指数与对照组比较差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 重症急性胰腺炎发病后,TNF-α等炎症因子瀑布样释放,导致肠黏膜缺血-再灌注损伤,形成严重的氧化应激反应,进一步激活caspase-3通路,导致肠黏膜细胞凋亡增加,是肠黏膜屏障功能受损的重要机制.     

小檗碱对小鼠耐缺氧作用的影响

目的:研究小檗碱对小鼠耐缺氧作用的影响及其机制。方法:①小鼠(n=40)随机分为4组,分别腹腔注射小檗碱0.1mg/g,0.2mg/g,15min后,将小鼠分别放入250mL的磨口广口瓶内密封,以最后一次呼吸为指标,观察小鼠存活时间。②小鼠(n=30)随机分为3组,分别腹腔注射小檗碱0.1mg/g,0.2mg/g,15min后,不需麻醉,用剪刀在耳下部快速断头,记录喘气时间。③小鼠(n=30)随机分为3组,对照组按0.03mL/g剂量给小鼠皮下注射生理盐水溶液,5min后按0.02mL/g剂量给小鼠腹腔注射生理盐水;模型组按0.015mg/g的剂量给小鼠皮下注射异丙肾上腺素,5min后按0.02mL/g剂量给小鼠腹腔注射生理盐水溶液。给药组按0.015mg/g剂量给小鼠皮下注射异丙肾上腺素,5min后腹腔注射小檗碱(0.1mg/g)。给药后10min,分别放入广口瓶内密封,记录小鼠存活时间。结果:小檗碱(0.1,0.2mg/g)能非常显著延长常压耐缺氧条件下小鼠的存活时间犤(67.8±11.2)和(81.2±13.5)min犦,与对照组犤(41.3±5.2)min犦比较,差异均有显著性意义(t=3.112,3.312;P均<0.01);小檗碱(0.1mg/g,0.2mg/g)能显著延长断头小鼠的呼吸时间犤(22.8±1.6)和(26.1±3.1)s犦,与对照组犤(18.5±1.6)s犦比较,差异有显著性意义(t=2.654,3.423;P<0.05～0.01);小檗碱(0.1mg/g)能非常显著延长皮下注射异丙肾     

丙泊酚对体外人肝癌HepG2细胞周期及凋亡的影响

目的:观察丙泊酚对体外培养人肝癌HepG2细胞周期及凋亡的影响。方法:用不同浓度(30、60、120μg/mL)的丙泊酚处理HepG2细胞,分为P30、P60组及P120组,同时设对照组及溶剂脂肪乳组。48h后,TUNEL法及流式细胞仪检测HepG2细胞的凋亡;流式仪检测HepG2细胞周期。结果:TUNEL法显示各组HepG2细胞凋亡率(AI)为:对照组(1.80±0.23)%;脂肪乳组(1.90±0.20)%;P30组(2.02±0.31)%;P60组(2.10±0.28)%;P120组(2.30±0.36)%。与对照组比较,其他各组AI无统计学差异(P>0.05)。流式细胞图显示各组HepG2细胞的AI为:对照组0.22%,脂肪乳组0.61%,P30组2.15%,P60组2.12%,P120组1.91%。与对照组比较,P30、P60、P120组及脂肪乳组的细胞凋亡差异无统计学意义(P>0.05)。细胞周期图示:P30、P60、P120组及脂肪乳组细胞在G1、G2/M、S期的分布比例无统计学差异(P>0.05)。结论:30～120μg/mL的丙泊酚对HepG2细胞的细胞周期及凋亡无影响。