毒素清对肺炎痰热证大鼠肺组织Janus激酶/信号转导和转录激活因子信号通路的影响

目的 观察肺炎痰热证大鼠肺组织Janus激酶/信号转导和转录激活因子(JAK/STAT)转导通路,探讨毒素清治疗肺炎痰热证的作用机制.方法 将Wistar大鼠按随机数字表法分为正常组、肺炎组、肺炎痰热证组、阳性对照组、毒素清组,每组12只.制备细菌性肺炎痰热证大鼠模型,采用免疫组化法测定肺组织p-JAK2、p-STAT1、p-STAT3、细胞信号转导抑制蛋白3(SOCS3)表达,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定肺组织SOCS3 mRNA表达.结果 与正常组比较,肺炎组、肺炎痰热证组肺组织p-JAK2、p-STAT1、p-STAT3、SOCS3蛋白及SOCS3 mRNA表达均显著升高(均P<0.01),且肺炎痰热证组较肺炎组升高明显(均P<0.05).与肺炎痰热证组相比,毒素清组、阳性对照组肺组织p-JAK2、p-STAT1、p-STAT3蛋白表达明显减弱(均P<0.01),SOCS3蛋白及mRNA表达明显增强(均P<0.01),其中,毒素清组肺组织p-JAK2、p-STAT1、p-STAT3蛋白表达较阳性对照组减弱尤为明显(均P<0.05).结论 JAK/STAT信号转导通路参与了肺炎痰热证肺组织的病理损伤过程;毒素清治疗肺炎痰热证的作用机制可能与上调SOCS3,阻断JAK/STAT信号通路,继而减少炎症因子的释放有关.     

血小板源性生长因子-DD对肾小球系膜细胞JAK/STAT信号途径的影响

目的 探讨血小板源性生长因子-DD(PDGF-DD)对肾小球系膜细胞JAK/STAT信号途径的影响.方法 将实验用人肾小球系膜细胞分成对照组、PDGF-DD组(20μg/L)和PDGF-DD+AG490组(20 μg/L PDGF-DD+10 μmol/L AG490).采用免疫组化、蛋白印迹法、反转录聚合酶链反应等方法观察PDGF-DD对肾小球系膜细胞p-JAK2、STAT3、p-STAT3、SOCS1和SOCS3的蛋白及mRNA表达的影响.结果 PDGF-DD刺激后肾小球系膜细胞p-JAK2、STAT3、p-STAT3、SOCS1和SOCS3表达增强,AG490抑制上述蛋白的表达(P＜0.05或＜0.01).结论 PDGF-DD能够激活肾小球系膜细胞JAK/STAT信号途径,促进系膜细胞增殖.     

腺病毒肺炎婴幼儿外周血淋巴细胞因子信号抑制分子基因表达及其与血清干扰素-α水平关系

目的探讨腺病毒肺炎婴幼儿血清干扰素-α水平与外周血淋巴细胞因子信号抑制因子(suppressor of cytokine signaling,SOCS)基因表达的关系。方法 30例腺病毒肺炎患儿为腺病毒肺炎组,20例体检健康儿童为对照组,提取2组外周血淋巴细胞,检测细胞因子诱导抑制基因、SOCS1、SOCS3mRNA表达相对量及血清干扰素-α水平。结果腺病毒肺炎组血清干扰素-α水平[(0.261±0.109)g/L]明显高于对照组[(0.158±0.079)g/L](P0.01);腺病毒肺炎组外周血淋巴细胞SOCS1、SOCS3mRNA相对表达量(1.76±0.75、2.00±0.91)明显高于对照组(1.32±0.40、0.81±0.28)(P0.05),细胞因子诱导抑制基因mRNA相对表达量(1.51±0.81)与对照组(2.24±0.46)比较差异无统计学意义(P0.05)。结论急性腺病毒感染可诱导外周血淋巴细胞SOCS1、SOCS3mRNA相对表达量增多和血清干扰素-α水平升高。     

SOCS超甲基化与经典型慢性骨髓增殖性肿瘤的研究

目的 探讨细胞因子信号转导抑制蛋白(suppressor of cytokine signaling,SOCS)基因超甲基化在经典型骨髓增殖性肿瘤(MPD)中的临床作用及其机制.方法 采用甲基化特异性PCR方法检测SOCS1、2、3基因CpG岛甲基化发生情况,直接测序法检测100例MPD患者JAK2V617F突变情况,用实时定量PCR方法检测SOCS1、2、3的mRNA表达情况.结果 100例MPD患者中有27例(27％)存在SOCS1基因超甲基化,9例(9％)存在SOCS2基因超甲基化,34例(34％)存在SOCS3基因超甲基化.在100例MPN患者中,64例(64％) JAK2V617F突变阳性.MPD患者中SOCS1和SOCS3基因超甲基化组与未甲基化组相比,其SOCSl和SOCS3基因mRNA表达量明显减少(P＜0.05);SOCS1和SOCS3基因JAK2V617F突变组与野生型组相比,其SOCS1和SOCS3基因mRNA表达量明显减少(P＜0.05).结论 MPD患者中存在JAK2V617F突变及SOCS基因超甲基化,且JAK2V617F突变和SOCS基因甲基化导致SOCS mRNA表达水平降低,SOCS超甲基化和JAK2V617F突变可改变JAK-STAT信号通路等的转录活性而最终影响疾病的发展,这些改变可能代表了一种潜在的治疗方向.     

儿童急性淋巴细胞白血病SOCS3 mRNA的表达水平与临床特点、早期治疗反应的相关性

目的:观察细胞因子信号转导抑制因子-3(SOCS3 mRNA)在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)中的表达水平,分析SOCS3 mRNA表达水平高低与儿童ALL疾病状态、危险度之间的关系,探讨SOCS3 mRNA在儿童ALL疾病状态和危险度评估、靶向治疗中的应用。方法:采用SYBR Green荧光定量PCR的方法检测45例新诊断ALL患儿初诊时、诱导缓解期和13例正常儿童骨髓单个核细胞中SOCS3 mRNA表达水平;分别采用方差分析和秩和检验的方法分析SOCS3 mRNA表达水平与ALL危险度、临床特点的关系。同时采用免疫荧光组织化学染色联合激光共聚焦显微技术测定ALL患儿骨髓单核细胞中SOCS3 mRNA的位置与表达量。结果:45例患儿初诊时SOCS3mRNA表达水平明显低于正常儿童(P0.05);诱导缓解期45例患儿的SOCS3 mRNA表达水平与正常儿童无显著差异(P0.05);初诊时中、高危组患儿SOCS3 mRNA表达水平高于低危组(P0.05);按照中位数法将45例患儿初诊时SOCS3 mRNA表达水平分为高表达组和低表达组,比较2组患儿临床特点发现,SOCS3 mRNA高表达组具有更高的外周血白细胞计数、乳酸脱氢酶水平和预后不良基因。此外,2组在危险度比较时SOCS3 mRNA高表达组危险度更高。结论:SOCS3 mRNA在初诊时下调而在疾病诱导缓解后恢复正常表达,SOCS3可以作为评价疾病状态的指标。SOCS3 mRNA的高表达使ALL危险度上调,SOCS3 mRNA可以作为评价ALL危险度的因子,通过调节SOCS3 mRNA表达水平治疗ALL或许可以成为治疗的新方向。     

硫化氢在脓毒症大鼠心肌损伤中的作用

目的 研究硫化氢(H2S)在脓毒症大鼠心肌损伤中的作用.方法 雄性SD大鼠60只,月龄3～4个月,体质量180 ～220 g,随机(随机数字法)分为4组:对照组(Ⅰ组)、脓毒症组(Ⅱ组)、脓毒症+ NaHS(H2S供体)预处理组(Ⅲ组)、脓毒症+PAG(H2S代谢酶CSE抑制剂)组(Ⅳ组),每组各15只.采用盲肠结扎穿孔法制作脓毒症大鼠模型,观察各组大鼠血流动力学改变,测定心肌组织中H2S的变化,采用RT-PCR方法观察CSE mRNA表达,采用髓过氧化物酶(MPO)测定试剂盒测定各组心肌组织MPO含量,用ELISA方法检测心肌组织TNF-α、IL-1β的表达,光学显微镜下观察心肌形态学改变.结果 与Ⅰ组相比,Ⅱ组血压下降,心肌组织中H2S、TNF-α、IL-1β、MPO含量出现不同程度增加(P＜0.01或P＜0.05),CSE mRNA表达水平提高(P＜0.05);与Ⅱ组相比,Ⅲ组血压下降更为显著,心肌组织中H2S、TNF-α、IL-1β含量增加,MPO活性增强(P＜0.05),但CSE mRNA表达水平并无显著改变;与Ⅱ组相比,Ⅳ组血压水平接近,心肌组织中H2S、TNF-α、IL-1β 含量均降低,MPO活性减弱(P＜0.05),CSE mRNA表达水平下降(P＜0.05).四组心肌组织形态学损伤由轻到重依次为Ⅰ、Ⅳ、Ⅱ、Ⅲ.结论 脓毒症大鼠心肌组织CSE/H2S体系上调,给予H2S可以升高脓毒症大鼠心肌组织中MPO、TNF-α、IL-1β水平,加重心肌损伤,给予H2S抑制剂可以减轻心肌损伤.     

JAK家族基因与细胞因子信号传导抑制因子家族基因在白血病细胞中的表达及意义

目的 探讨SOCSs基因和JAKs基因在急性髓系白血病(AML)患者中的表达情况.方法 RT-PCR方法检测AML患者和正常对照骨髓SOCS 1～7、JAK 1～3和TYK 2 mRNA的表达.结果 ①AML患者SOCS 1、4、5、7的表达明显低于缓解组和正常对照组(P<0.01),SOCS 3、6表达水平较缓解组和正常对照组高(P<0.01),SOCS 2在各组无明显差异;AML患者JAK2、JAK3、TYK2 mRNA平均表达水平较缓解组和正常对照组明显增高(P<0.05).初治AML患者JAK1 mRNA表达水平较正常对照组略增高,但差异无统计学意义(P>0.05),复发AML患者JAK1 mRNA表达水平较正常对照组明显增高(P<0.05).结论 AML患者的SOCS 1、4、5、7基因表达缺失或降低,JAK家族基因表达明显增高,提示二者可能共同参与髓系白血病的发生.     

氟伐他汀对高糖状态下肾小球系膜细胞JAK/STAT信号蛋白表达的影响

目的 观察氟伐他汀对体外培养的肾小球系膜细胞信号蛋白Janus酪氨酸激酶2(JAK2)、信号转导和转录活化因子1(STAT1)、STAT3表达的影响.方法 体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分别给予高糖和氟伐他汀干预.采用免疫沉淀和蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测JAK2磷酸化表达;Westernblotting检测信号蛋白JAK2、STAT1、p-STAT1、STAT3和p-STAT3的表达;半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA的表达;酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞上清液中TGF-β1和纤维连接蛋白(FN)的含量.结果 与低糖组比较,高糖组肾小球系膜细胞p-JAK2(802±124比204±31)、p-STAT1(2 856.6±337.8比617.7±76.2)和P-STAT3(3 049.8±421.3比946.7±141.2)表达均明显增强;上清液中TGF-β1[(2.87±0.34)μg/L比(1.20±0.11)μg/L]和FN((6.34±0.61)mg/L比(3.24±0.26)mg/L]的含量均增高,TGF-β1 mRNA表达增加(P均＜0.01).与高糖组比较.高糖+氟伐他汀组p-JAK2(412±67)、p-STAT1(1 178.4±137.1)和p-STAT3(1 572.6±181.2)表达均明显下调,TGF-β1[(1.94±0.27)μg/L]和FN[(4.27±0.33)mg/L]含量减少,同时TGF-β1 mRNA表达降低(P均＜0.05).结论 高糖能激活肾小球系膜细胞JAK/STAT信号途径,氟伐他汀抑制肾小球系膜细胞TGF-β1和FN的分泌可能部分是通过影响JAK/STAT信号通路的激活而实现的.     

硫化氢在脓毒症大鼠肺损伤中的作用

目的 探讨硫化氢(H2S)在脓毒症大鼠肺损伤中的作用.方法 雄性SD大鼠60只,随机分为4组:对照组(Ⅰ组)15只,脓毒症组(Ⅱ组)15只,脓毒症+PAG(H2S代谢酶CSE抑制剂)组(Ⅲ组)15只,脓毒症+NaHS(H2S供体)预处理组(Ⅳ组)15只.采用盲肠结扎穿孔法制作脓毒症大鼠模型,观察各组动物的行为学特征,测定肺组织H2S浓度、肺组织CSE mRNA的表达、肺组织湿干重比(W/D)、肺组织MPO水平、肺组织TNF-α和IL-1β的表达,观察肺组织形态学改变.结果 CLP模型组动物出现呼吸加快,与Ⅰ组比较,Ⅱ组动物肺组织H2S、W/D、TNF-α、IL-1β水平明显升高(P＜0.01),MPO活性明显增加(P＜0.01),肺组织CSE mRNA的表达明显升高(P＜0.01);与Ⅱ组比较,Ⅲ组动物呼吸频率接近,肺组织H2S、W/D、TNF-α、IL-1β水平明显降低(P＜0.01),MPO活性明显减弱(P＜0.01),肺组织CSE mRNA的表达明显降低(P＜0.01);与Ⅱ组比较,Ⅳ组动物呼吸频率明显加快,少数出现呼吸衰竭,肺组织W/D、TNF-α、IL-1β水平明显升高(P＜0.01),MPO活性明显增强(P＜0.01),肺组织CSE mRNA的表达有所降低,但差异无统计学意义(P＞0.05);四组肺组织光镜下损伤由轻到重依次为:Ⅰ、Ⅲ、Ⅱ、Ⅳ.结论 给予内源性H2S抑制剂可以使脓毒症大鼠肺组织W/D、TNF-α、IL-1β、MPO水平明显降低,减轻肺组织炎症及水肿损伤,给予外源性H2S可以加重肺炎症损伤.     

JAK/STAT3通路在瘦素促进肺癌细胞增殖机制中的作用

目的:探讨瘦素在促进肺癌细胞增殖过程中的可能机制,并探讨其在肺癌发生发展中的作用.方法:MTT法检测瘦素对肺癌A549细胞的促增殖作用.流式细胞术检测不同浓度瘦素处理组肺癌A549细胞的增殖率.免疫细胞化学法检测经不同浓度瘦素处理的A549细胞中STAT3、p-STAT3及Bcl-2蛋白的表达.结果:STAT3、p-STAT3及Bcl-2蛋白在A549细胞中均有表达.瘦素处理后的A549细胞中STAT3、p-STAT3及Bcl-2的表达随着处理浓度增加而增强,且100ng/mL瘦素处理组表达增加最明显,与对照组比较差异有显著性(P＜0.05);瘦素刺激A549细胞24h后增殖效应最明显,且100.ng/mL组G2/M期细胞所占的比例较对照组和10ng/mL组显著增加(P＜0.05).结论:瘦素可能通过JAK/STAT3通路,活化STAT3介导抗凋亡基因Bcl-2的过度表达而使肺癌细胞呈持续增殖.     

饱和氢气盐水对大鼠急性肺损伤的保护作用

目的 探讨饱和氢气盐水在油酸导致的大鼠急性肺损伤(ALI)中的作用及其机制.方法 将健康成年SD大鼠80只随机分为4组:对照(Ⅰ)组、肺损伤(Ⅱ)组、肺损伤静脉H2干预(Ⅲ)组和肺损伤腹腔H2干预(Ⅳ)组,每组20只.检测血气分析;肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性、丙二醛(MDA)以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和NF-kB p65含量;并观察肺组织病理变化.结果 与注射油酸前比较,Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组在注射油酸3h后PaO2显著降低(P＜0.05).同时与Ⅰ组比较也存在PaO2显著降低(P＜0.05).此外,Ⅲ和Ⅳ组PaO2显著高于Ⅱ组(P＜0.05),且Ⅳ组PaO2高于Ⅲ组(P＜0.05).与Ⅰ组比较,Ⅱ组肺组织MPO活性及MDA水平显著增加(P＜0.01),Ⅲ和Ⅳ组肺组织MPO活性及MDA水平明显增加(P＜0.05),Ⅲ和Ⅳ组肺组织MPO活性及MDA水平与Ⅰ组比较显著降低(P＜0.05),且Ⅳ组肺组织MPO活性及MDA水平较Ⅲ组低(P＜0.05).Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组大鼠肺组织TNF-α、IL-1β和NF-κB p65水平明显高于Ⅰ组(P＜0.05).与Ⅱ组比较饱和氢气盐水治疗可降低油酸致肺损伤大鼠肺组织TNF-α、IL-1β和NF-κB p65水平(P＜0.05),且腹腔给药治疗较尾静脉给药治疗可更进一步降低油酸致肺损伤大鼠肺组织TNF-α、IL-1β和NF-κB p65水平(P＜0.05).结论 饱和氢气生理盐水能够降低大鼠油酸肺损伤模型中肺的损伤程度,且经腹腔注射给药效果更好,其机制可能与氢分子在体内的选择性抗氧化作用以及对肺组织内炎细胞浸润和炎症级联反应的抑制有关.     

MiR-467b调控JAK/STAT信号通路在脂多糖诱导ATDC5细胞增殖及炎症反应中的作用

目的:探讨miR-467b调控JAK/STAT信号通路在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导ATDC5细胞增殖及炎症反应中的作用。方法:将ATDC5细胞分为4组:对照组、LPS组、NC mimics组、miR-467b mimics组。于转染培养48 h后收集细胞并进行后续实验:采用ELISA检测各组细胞TNF-α、IL-1β水平;采用qRT-PCR法检测各组细胞miR-467b的表达水平;采用MTT法检测各组细胞的增殖能力;采用蛋白质印迹和qRT-PCR法检测各组细胞JAK/STAT信号通路相关基因的蛋白质及mRNA表达水平。结果:与对照组相比,LPS组和NC mimics组ATDC5细胞TNF-α、IL-1β的表达水平均显著升高、miR-467b的表达水平显著降低(P<0.05);MTT实验结果表明:LPS组在24、48、72 h的吸光度值显著降低(P<0.05)。蛋白质印迹结果发现:与对照组相比,LPS组和NC mimics组ATDC5细胞STAT1、STAT3、JAK2、p-STAT1、p-STAT3、p-JAK2蛋白表达水平及STAT1、STAT3、JAK2 mRNA表达水平均显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。与NC mimics组相比,miR-467b mimics组TNF-α、IL-1β的表达水平均显著降低而miR-467b的表达水平显著升高(P<0.05);过表达miR-467b后,细胞在24、48、72 h的吸光度值显著升高(P<0.05),而STAT1、STAT3、JAK2、p-STAT1、p-STAT3、p-JAK2蛋白表达水平及STAT1、STAT3、JAK2 mRNA表达水平均显著降低(P<0.05)。结论:LPS刺激ATDC5细胞后可通过激活JAK/STAT3信号通路引起细胞炎性损伤,过表达miR-467b后可抑制JAK/STAT3信号通路的活化,降低ATDC5细胞的炎症水平。     

聚ADP核糖聚合酶抑制剂对重症急性胰腺炎大鼠肺炎症介质表达和肺损伤的影响

目的 探讨多聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶(PARP)抑制剂3-氨基苯甲酰胺(3-AB)对重症急性胰腺炎(SAP)肺损伤治疗作用的机制.方法 36只Wistar大鼠按随机数字法分为假手术对照组(SO组)、SAP组和3-AB处理组.采用5％牛磺胆酸钠逆行胰胆管注射法制备SAP模型,3-AB组在SAP造模前、后30 min分别经静脉注射3-AB (10 mg/kg).术后12 h测定血清淀粉酶、肺组织湿/干比、肺髓过氧化物酶(MPO)水平,光镜观察胰腺和肺脏病理变化,逆转录-聚合酶链反应法检测肺组织IL-1β和IL-6 mRNA表达,蛋白免疫印迹法检测肺组织TNF-α和ICAM-1蛋白表达.结果 SAP制模后血清淀粉酶、胰腺和肺损伤评分、肺组织湿/干比和MPO值,肺IL-1β和IL-6 mRNA的表达、TNF-α和ICAM-1蛋白表达水平均明显升高(P＜0.05).应用3-AB处理后,上述指标较SAP组均明显下降(P＜0.05).结论 PARP抑制剂3-AB可能通过抑制肺组织MPO,下调IL-1β、IL-6、TNF-α和ICAM-1等炎症介质的表达,对SAP肺损伤发挥保护和治疗作用.     

生长抑素阻断瘦素诱导肝星状细胞增殖及基质分泌的分子机制

目的：研究生长抑素（SS）与酪氨酸蛋白酶1B（PTP1B）对瘦素诱导肝星状细胞（HSC）的增殖和基质蛋白分泌以及对JAK2／STAT3通路的影响。方法：运用MTT法检测各浓度SS对瘦素致激活的HSC细胞增殖的影响;实验分为对照组、瘦素组、瘦素＋低浓度SS组、瘦素＋高浓度SS组,运用RT-PCR、Western blot、ELISA法分别检测各组PTP1B、TIMP-1、I型胶原蛋白和mRNA以及JAK2／STAT3磷酸化程度。结果：生长抑素可抑制瘦素致HSC增殖;生长抑素可提高HSC内PTP1B的表达,高剂量生长抑素较低剂量提高明显;并减少TIMP-1mRNA、I型胶原mRNA和蛋白的表达,下调JAK2／STAT3蛋白的磷酸化,同时高剂量生长抑素较之低剂量降低明显。结论：生长抑素能上调瘦素作用下HSC内PTP1B的表达,降低JAK2／STAT3磷酸化,抑制其增殖,减少肝纤维化因子的分泌。     

丙戊酸钠联合三氧化二砷对NB4细胞株血管内皮生长因子及其受体表达的影响

目的 探讨丙戊酸钠(VPA)联合三氧化二砷(As2O3)对急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)NB4细胞株血管内皮生长因子(VEGF)及其受体Flt-1表达的影响.方法 实验分空白对照组、As2O3组、As2O3+VPA组,采用反转录聚合酶链反应方法检测VEGF、Flt-1 mRNA的表达,应用蛋白印迹法(Western-blot)检测VEGF、Flt-1蛋白的表达.结果 NB4细胞在As2O3作用下VEGF mRNA、VEGF蛋白、Flt-1 mRNA和 Flt-1蛋白表达水平明显增高,分别为VEGF mRNA 0.426±0.026 vs 0.268±0.023,VEGF蛋白0.648±0.027 vs 0.588±0.031,Flt-1 mRNA 0.922±0.032 vs 0.766±0.030,Flt-1蛋白0.520±0.032 vs 0.320±0.036(P<0.05或<0.01).As2O3+VPA组VEGF mRNA、VEGF蛋白、Flt-1 mRNA和 Flt-1蛋白比对照组和As2O3组均明显降低(均P<0.01).VEGF mRNA表达水平降至0.129±0.028,VEGF蛋白表达水平降至0.328±0.029,Flt-1 mRNA表达水平降至0.522±0.025,Flt-1蛋白表达水平降至0.124±0.024.结论 As2O3诱导NB4细胞VEGF、Flt-1表达增高,VPA可下调As2O3引起的VEGF、Flt-1表达增高.     

上调急性淋巴细胞白血病中细胞因子信号传导抑制因子3的表达促进NK细胞杀伤活性的机制研究

目的:检测细胞因子信号传导抑制因子3(SOCS3)在急性淋巴细胞白血病(ALL)中的表达水平,并探讨NK细胞对过表达SOCS3细胞系Jurkat细胞的杀伤作用。方法:采用RT-PCR技术检测20例ALL患儿及20例健康体检儿童(正常对照组)外周血单个核细胞中SOCS3 mRNA表达水平。免疫磁珠分选健康人外周血NK细胞,采用流式细胞术检测其纯度。慢病毒载体感染Jurkat细胞使之过表达SOCS3,RT-PCR检测慢病毒感染后细胞中SOCS3 mRNA表达情况。将NK细胞与Jurkat细胞共培养,LDH释放法检测杀伤活性,ELISA检测TNF-α和IFN-γ浓度。流式细胞术检测过表达SOCS3后Jurkat细胞表面NKG2D配体MICA与MICB的表达。Western blot检测过表达SOCS3对Jurkat细胞中STAT3蛋白磷酸化水平的影响。结果:ALL患儿外周血单个核细胞中SOCS3 mRNA表达水平较正常对照组显著降低。流式细胞术检测分离NK细胞纯度可达70%以上。慢病毒感染的Jurkat细胞中SOCS3 mRNA表达显著增加。过表达SOCS3的Jurkat细胞可显著促进NK细...     

粉防己碱对转化生长因子-β1诱导的人近端小管上皮细胞转分化的干预作用及机制

目的探讨粉防己碱(tetrandrine,Tet)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人近端肾小管上皮细胞(HK-2)转分化的拮抗效应及其机制。方法体外培养的HK-2随机分为正常对照组、Tet组(100ng/ml)、TGF-β1(5ng/ml)组和TGF-β1(5ng/ml)+Tet(100ng/ml)组。Westernblot法检测细胞中TβRI蛋白、SnoN蛋白水平、Smad7蛋白水平和Smad2/3磷酸化水平的改变;半定量反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法观察细胞中TβRI mRNA、Smad7 mRNA、SnoN mRNA表达的改变。免疫荧光检测间充质细胞标记物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果 Tet能抑制TGF-β1诱导α-SMA的表达,显著上调SnoN mRNA和蛋白的表达(P<0.01);Tet对TβRI表达、Smad2/3的磷酸化及Smad7的表达没有影响。结论 Tet能抑制人近端小管上皮细胞转分化,其机制与Tet上调SnoN表达有关。     

瘦素与胎肺发育关系的初步研究

目的:探讨瘦素与胎肺发育及瘦素与地塞米松促胎肺成熟作用之间的关系.方法:采用逆转录定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测孕16～21 d Wister大鼠胎肺组织瘦素mRNA相对表达水平以及地塞米松对原代胎肺成纤维细胞瘦素mRNA表达的影响.结果:瘦素在胎肺组织有普遍表达,表达水平在孕16～17 d、孕18～19 d、孕20～21 d有逐渐上升的趋势(P＜0.05);原代培养胎肺成纤维细胞经地塞米松处理24 h后,处理组瘦素表达水平高于对照组(P＜0.05).结论:大鼠孕晚期胎肺组织中均有瘦素的表达,且随着胎肺的发育有增加的趋势.地塞米松能刺激培养的胎肺成纤维细胞瘦素的表达.     

β-七叶皂苷钠对心肺复苏后大鼠脑细胞中低氧诱导因子-1α的影响

目的 探讨自主循环恢复(return of spontaneous circulation,ROSC)后大鼠脑细胞中低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)的表达及β-七叶皂苷钠对其影响.方法 清洁级SD成年大鼠60只,随机(随机数字法)分3组(n=20).(1)实验组:ROSC后即刻腹腔注射β-七叶皂苷钠(5 mg/kg)一次;(2)对照组:ROSC后即刻腹腔注射等量生理盐水一次;(3)假手术组:未经历心搏骤停-心肺复苏和未给药.采用窒息合并冰氯化钾停跳液法制备大鼠心搏骤停-心肺复苏模型.分别在ROSC后1、6、12、24 h抽血,然后处死取脑组织.ELISA检测血清NSE、S100β,免疫组化和Real-time PCR检测脑细胞HIF-1α、VEGF、EPO蛋白和mRNA.各组同一时间点之间比较采用成组t检验,组内不同时间点之间比较采用单因素方差分析,多重比较采用Bonferroni法.相关性分析采用Pearson法.结果 与假手术组比较,ROSC后1、6、12和24 h对照组大鼠血清NSE与S100β明显升高(P＜0.05),脑细胞中HIF-1 α、VEGF、EPO蛋白和mRNA表达均明显增加(P＜0.05).与对照组比较,ROSC后1、6、12、24 h实验组大鼠血清NSE与S100β明显降低(P＜0.05),脑细胞中HIF-1α、VEGF、EPO蛋白和mRNA表达均明显增加(P＜0.05).ROSC后大鼠脑细胞HIF-1αmRNA与EPO mRNA、VEGF mRNA均呈正相关(r=0.866,P＜0.05;r =0.952,P＜0.01).结论 心肺复苏后大鼠脑细胞HIF-1α表达增加,β-七叶皂苷钠能上调HIF-1α转录和蛋白表达,可能是通过增加EPO、VEGF基因转录及蛋白表达而增加脑细胞对缺血缺氧的耐受性,从而起神经保护作用.     

烟碱型乙酰胆碱受体α7亚型在产后抑郁中的作用机制研究

目的 探讨烟碱型乙酰胆碱受体α7亚型(α7nAChR)在产后抑郁(PPD)中的作用机制。方法 使用激素模拟妊娠(HSP)诱导的PPD小鼠模型,并将小鼠分为4组：对照组、PPD组、PNU282987组和PNU282987+α7nAChR inhibitor组。对小鼠进行悬尾试验和强迫游泳试验以评估抑郁样行为。分别通过Nissl染色和免疫荧光染色检测海马CA1区神经细胞和α7nAChR表达。通过蛋白质印迹分析NLRP3炎症小体激活情况。结果 与PPD组相比,PNU282987组鼠海马组织中α7nAChR表达和海马区的神经细胞数量显著增加(P<0.01),和尾悬测试和强迫游泳测试中的不动时间显著降低(P<0.01);PNU282987组小鼠海马组织中NLRP3、NF-κB、pro-IL-1β、cleaved-caspase 1和IL-1β表达较PPD组显著降低(P<0.05);与PNU282987组小鼠相比,PNU282987+α7nAChR inhibitor组小鼠在尾悬测试和强迫游泳测试中的不动时间显著增加(P<0.01),且海马区的神经细胞数量显著降低(P<...