抑制Yes-相关蛋白表达促进芬太尼诱导乳腺癌细胞凋亡的研究

目的 探讨芬太尼调控Yes-相关蛋白(YAP)在乳腺癌细胞增殖凋亡中的作用及机制。方法 细胞增殖试验(MTT)检测乳腺癌细胞MCF-7增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western Blots检测相关蛋白表达,荷瘤小鼠体内验证芬太尼及YAP对乳腺癌生长的作用,Student t检验用于比较两组间的差异。结果 芬太尼(2μg/L)可抑制乳腺癌细胞的增殖并促进其凋亡,当敲除YAP蛋白表达后,该作用显著增强。芬太尼促进乳腺癌细胞中YAP蛋白的去磷酸化但不影响其表达,去磷酸化后的YAP高表达于细胞核中,并可促进YAP下游蛋白Survivin及Bcl2的表达。抑制μ阿片受体(MOR)、Gi的活性可逆转芬太尼诱导的YAP去磷酸化。芬太尼显著抑制YAP低表达MCF-7细胞荷瘤小鼠肿瘤生长,而对正常MCF-7细胞荷瘤小鼠肿瘤生长影响不显著。结论芬太尼可通过激活乳腺癌细胞中YAP信号通路;抑制乳腺癌细胞YAP表达,可促进芬太尼诱导的乳腺癌细胞凋亡。     

Hippo通路及靶因子YAP与肿瘤关系的研究进展

近年来研究发现,Hippo信号转导通路在维持组织器官大小及肿瘤发生发展中起着重要的作用.组织的生长和器官的大小是由发育过程中细胞增殖和凋亡的速度决定的,正常情况下,细胞增生与凋亡间的动态平衡维持着组织器官正常大小和机体内环境的稳态,而当细胞增殖或凋亡失控时,即可发生细胞恶性转化.Hippo通路通过多种肿瘤抑制因子组成的激酶链,调节细胞增生和凋亡间的平衡,Hippo通路的异常将导致细胞增生和凋亡间平衡失调、组织器官过度生长及肿瘤发生.YAP(Yes-associated protein)即Yes相关蛋白,作为Hippo通路的靶因子,以磷酸化的形式参与细胞内信号转导和对其下游靶因子的转录共激活过程,调控细胞增生和凋亡间的平衡,保证组织器官的正常大小及机体内环境的稳态.现已发现人类某些恶性肿瘤组织中YAP表达水平增高、活性增强,提示其可能参与肿瘤的发生、发展.现将Hippo通路及YAP与肿瘤关系的研究进展做一综述.     

丁苯酞通过混合谱系激酶3信号通路对1-甲基-4-苯基-吡啶离子诱导的SH-SY5Y细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨丁苯酞对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)诱导的SH-SY5Y细胞混合谱系激酶3(MLK3)通路的影响,及其对细胞增殖与凋亡的作用机制。方法对数生长期SH-SY5Y细胞分为对照组、MPP+组、丁苯酞组和URMC-099组,对照组正常培养,MPP+组加1 mmol/L MPP+培养24 h,丁苯酞组予10μmol/L丁苯酞预处理3 h后,加入MPP+培养24 h,URMC-099组予200nmol/L MLK3通路特异性抑制剂URMC-099预处理3 h后,加入MPP+培养24 h。倒置相差显微镜观察细胞形态,噻唑蓝比色法检测细胞活性,Annexin-V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率,Hoechst33342荧光染色法观察凋亡细胞,Western blotting检测MLK3磷酸化蛋白(p-MLK3)、c-Jun氨基末端激酶磷酸化蛋白(p-JNK)和细胞外调节蛋白激酶磷酸化蛋白(p-ERK1/2)的表达。结果 MPP+组细胞存活率低于对照组(P0.05),丁苯酞组和URMC-099组细胞存活率高于MPP+组(P0.05);MPP+组细胞凋亡率高于对照组(P0.05),丁苯酞组和URMC-099组细胞凋亡率低于MPP+组(P0.05);与对照组相比,MPP+组p-MLK3、p-JNK蛋白表达量增加(P0.05),p-ERK1/2蛋白表达量降低(P0.05);与MPP+组相比,丁苯酞组和URMC-099组p-MLK3、p-JNK蛋白表达量降低(P0.05),p-ERK1/2蛋白表达量升高(P0.05)。结论丁苯酞可减少MPP+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,促进细胞增殖,其机制可能是通过抑制MLK3通路,调节下游p-JNK、p-ERK1/2蛋白表达。     

MiR-144-3p靶向SGK3通过Hippo信号通路抑制卵巢癌的生长和侵袭

目的:探讨miR-144-3p对卵巢癌生长和侵袭的作用及机制。方法:RT-qPCR检测正常卵巢上皮细胞和卵巢癌细胞miR-144-3p与SGK3mRNA的表达,双荧光素酶报告检测靶向关系,将卵巢癌SKOV3细胞分为对照组(Control组)、模拟物对照组(mimic-NC组)、miR-144-3p高表达组(miR-144-3p mimic组)、SGK3高表达组(pc-SGK3组)、miR-144-3p和SGK3都高表达组(miR-144-3p+SGK3组),CCK-8法检测细胞增殖,克隆形成实验检测细胞生长,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,Transwell实验检测细胞侵袭,蛋白质印迹分析检测p-MST,p-LATS,p-YAP,MST,LATS,YAP蛋白表达水平;裸鼠后肢腹侧皮下注射SKOV3细胞悬液构建移植瘤,每周检测移植瘤体积,第30天颈椎脱位法处死裸鼠,完整取出皮下肿瘤,电子天平称重,蛋白质印迹分析检测SGK3,p-MST,p-LATS,p-YAP,MST,LATS,YAP蛋白表达水平。结果:MiR-144-3p在卵巢癌细胞中低表达,而SGK3高表达;miR-144-3p靶向负调控SGK3;miR-144-3p过表达能够明显减弱卵巢癌细胞增殖、减少每视野中卵巢癌细胞克隆数目,减短细胞周期,增加细胞凋亡率,减少侵袭细胞数目、上调p-MST/MST,p-LATS/LATS,p-YAP/YAP蛋白表达(P0.01),再加入SGK3高表达和Hippo信号通路抑制剂XMU-MP-1后均能逆转上述反应。结论:MiR-144-3p靶向SGK3通过Hippo信号通路抑制卵巢癌的生长和侵袭。     

丁苯酞通过混合谱系激酶3信号通路对1-甲基-4-苯基-吡啶离子诱导的SH-SY5Y细胞增殖和凋亡的影响北大核心CSCD

目的探讨丁苯酞对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)诱导的SH-SY5Y细胞混合谱系激酶3(MLK3)通路的影响,及其对细胞增殖与凋亡的作用机制。方法对数生长期SH-SY5Y细胞分为对照组、MPP+组、丁苯酞组和URMC-099组,对照组正常培养,MPP+组加1 mmol/L MPP+培养24 h,丁苯酞组予10μmol/L丁苯酞预处理3 h后,加入MPP+培养24 h,URMC-099组予200nmol/L MLK3通路特异性抑制剂URMC-099预处理3 h后,加入MPP+培养24 h。倒置相差显微镜观察细胞形态,噻唑蓝比色法检测细胞活性,Annexin-V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率,Hoechst33342荧光染色法观察凋亡细胞,Western blotting检测MLK3磷酸化蛋白(p-MLK3)、c-Jun氨基末端激酶磷酸化蛋白(p-JNK)和细胞外调节蛋白激酶磷酸化蛋白(p-ERK1/2)的表达。结果 MPP+组细胞存活率低于对照组(P<0.05),丁苯酞组和URMC-099组细胞存活率高于MPP+组(P<0.05);MPP+组细胞凋亡率高于对照组(P<0.05),丁苯酞组和URMC-099组细胞凋亡率低于MPP+组(P<0.05);与对照组相比,MPP+组p-MLK3、p-JNK蛋白表达量增加(P<0.05),p-ERK1/2蛋白表达量降低(P<0.05);与MPP+组相比,丁苯酞组和URMC-099组p-MLK3、p-JNK蛋白表达量降低(P<0.05),p-ERK1/2蛋白表达量升高(P<0.05)。结论丁苯酞可减少MPP+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,促进细胞增殖,其机制可能是通过抑制MLK3通路,调节下游p-JNK、p-ERK1/2蛋白表达。     

鹰嘴豆芽素A对LPS诱导的肺泡上皮细胞氧化应激损伤的影响

目的 探讨鹰嘴豆芽素A(BCA)调节核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞氧化应激损伤的影响。方法 将肺泡上皮细胞BEAS-2B分为ctrl组(正常培养的BEAS-2B细胞)、LPS组(10μg/mL浓度的LPS)、BCA低剂量组(5μmol/L BCA)、BCA中剂量组(10μmol/L BCA)、BCA高剂量组(20μmol/L BCA)、抑制剂组(20μmol/L BCA+5μmol/L Nrf2抑制剂ML385),除ctrl组外,其余组均给予10μg/mL LPS刺激24 h。采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,DCFH-DA荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS)水平,分光光度法检测细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)水平,试剂盒检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6水平,免疫印迹法(Western blotting)检测细胞Nrf2、HO-1、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、激活型半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved caspa...     

氧化低密度脂蛋白诱导内皮祖细胞凋亡的机制探讨

目的:探讨氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉血内皮祖细胞(EPCs)凋亡的信号途径.方法:密度梯度离心法获取人脐静脉血单个核细胞,培养7天后,收集贴壁细胞分成以下各组:(1)空白对照组:不作任何处理,以RPMI1640培养液继续培养48 h;(2) ox-LDL各浓度组(共3组):EPCs培养24 h后,再分别换用含5,10,20 mg/L ox-LDL的RPMI 1640培养液继续培养24 h;Western blot检测细胞内Akt、磷酸化Akt的蛋白表达时加上一组.(3) Wortmannin组:EPCs培养24 h后,换用含Wortmannin 100 μmol/L RPMI1640培养液继续培养24 h.采用MTI法检测EPCs增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡率;提取细胞RNA,采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测Bcl-2mRNA表达;采用免疫细胞化学法检测Bcl-2蛋白表达水平;采用Western blot检测磷酸化Akt的蛋白表达.结果:Ox-LDL呈浓度依赖性抑制EPCs增殖、诱导EPCs凋亡(P＜0.01),基础状态下内皮祖细胞表达Bcl-2mRNA及蛋白,ox-LDL处理能抑制其表达,降低磷酸化Akt的表达,并存在量效关系(P＜0.05).结论:Ox-LDL抑制EPCs增殖、诱导EPCs凋亡的作用是通过抑制Akt活化,下调凋亡抑制蛋白Bcl-2实现的;Ox-LDL的作用机制至少部分是依赖PI3K/Akt信号通路实现,这可能影响血管内皮的修复及新生血管的形成.     

锯叶棕提取物对人脑胶质瘤细胞凋亡和PI3K蛋白表达影响的研究

目的：通过锯叶棕提取物对人脑胶质瘤细胞的干预,观察人脑胶质瘤细胞中细胞凋亡和PI3K蛋白表达的变化。方法体外培养U251细胞,应用锯叶棕提取物进行预处理,应用TUNEL法检测细胞凋亡,应用Western Blot法检测PI3K蛋白表达水平的变化。结果TUNEL法染色检测锯叶棕提取物对人脑胶质瘤细胞凋亡的影响,24 h与48 h均可见TUNEL阳性反应细胞即凋亡细胞,胞体缩小,形态不规则,胞核固缩浓染,呈棕黄色或棕褐色;1.5μL/mL组48 h与24 h比较,凋亡数量显著增多（P＜0.01）;对照组24 h与48 h偶见凋亡细胞,2.0μL/mL组与1.5μL/mL组比较,凋亡率增大（P＜0.01）。用Western blot法检测锯叶棕提取物对人脑胶质瘤细胞PI3K蛋白表达的影响,锯叶棕提取物预处理U251细胞与对照组比较, PI3K蛋白表达水平显著降低（P＜0.01）。结论锯叶棕提取物能诱导人脑胶质瘤细胞凋亡;锯叶棕提取物诱导人脑胶质瘤细胞凋亡的机制可能是通过阻断PI3K/Akt信号转导通路。     

shRNA沉默NSD2基因表达对OCI-Ly3细胞增殖、凋亡及Akt/mTOR信号通路的影响

目的:探讨干扰shRNA下调NSD2基因表达对弥漫大B细胞淋巴瘤OCI-Ly3细胞增殖、凋亡及Akt /mTOR信号通路的影响。方法:NSD2 shRNA慢病毒转染OCI-Ly3细胞,应用real time Q-PCR检测NSD2 mRNA的表达和Western blot法检测NSD2蛋白的表达,以鉴定NSD2 shRNA的沉默效果,应用CCK-8试验检测细胞增殖,AnnexinⅤ/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot测定组蛋白H3K36二甲基化水平(H3K36me2)、BAX BCL-2、caspase-3、Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、磷酸化mTOR(p-mTOR)、磷酸化P70核糖体蛋白S6激酶(phosphorylation P70 ribosomal protein S6 kinase,p-P70S6K)的变化。结果:NSD2 shRNA慢病毒转染OCI-Ly3细胞72 h后,real time Q-PCR和Western blot检测显示NSD2的mRNA和蛋白表达均有明显下降(P0.05),NSD2 shRNA组细胞增殖率明显低于对照和Neg shRNA组(P0.05),NSD2 shRNA组细胞的凋亡率明显高于对照组和和Neg shRNA组(30.37±4.22)%vs(1.36±0.52)%和(2.17±1.43)%(P0.05);促凋亡蛋白BAX表达上调,抑制凋亡蛋白BCL-2表达下调,caspase-3表达上调;H3K36me2水平较对照组明显下降,而检测Akt /mTOR通路蛋白发现,Akt总蛋白水平未明显下降,但是活性形式的磷酸化p-Akt、p-mTOR和p-P70S6K表达下调。结论:干扰沉默NSD2基因可抑制弥漫大B细胞淋巴瘤OCI-Ly3细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能是调节组蛋白H3K36me2水平变化,特异性地抑制Akt /mTOR信号通路的活性。     

shRNA干扰AKT基因对Jeko-1细胞增殖、凋亡及Notch1信号通路的影响

目的:探讨RNA干扰沉默AKT基因对套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞株的增殖、凋亡及Notch1信号通路的影响。方法:设计针对AKT基因短发夹RNA,将其连入pGPU6/GFP/Neo质粒中,构建AKT shRNA真核表达载体,经脂质体转染入Jeko-1细胞,应用RQ-PCR及Western blot鉴定其干扰效果,MTT法绘制细胞生长曲线,流式细胞术检测细胞凋亡的变化,Western blot检测凋亡相关蛋白信号及通路相关蛋白p-AKT、Notch1、HES1的变化。结果:AKT shRNA转染Jeko-1细胞后,AKT的mRNA和蛋白表达均明显下降,有统计学意义(P0.05);转染组细胞增殖率明显低于Neg-shRNA组和空白对照组(P0.05),AKT shRNA传染48 h后,凋亡率为(37.72±4.39)%,而NegshRNA组和空白对照组分别为(2.62±1.53)%、(1.57±0.42)%,差异有统计学意义(P0.01);凋亡相关蛋白BCL-2表达下降,而BAX、caspase-3、caspase-9表达上升;PI3K/AKT信号通路相关蛋白p-AKT磷酸化水平下降、Notch1信号通路相关蛋白Notch1、HES1表达下调。结论:干扰沉默AKT基因可抑制套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能是特异性抑制PI3K/AKT信号通路也能下调Notch1信号通路的活性。     

韶关市农村留守儿童孤独感状况调查

目的了解广东省韶关市农村地区留守儿童孤独感现状及其影响因素。方法对韶关市某地区两所农村小学3～6年级学生中的489名留守儿童采用儿童孤独量表和自编调查表进行问卷调查。结果17．6％留守儿童存在孤独感，不同性别孤独感发生率无差异性，不同年龄及不同年级间孤独感发生率差异均有极显著性（P〈0.01）；随年级增加，孤独感发生率呈下降趋势（X^2趋势=5．970，P〈0.05）。留守儿童孤独感与健康状况、学习成绩、学习困难程度、父母教育方式、父母间关系和老师教育方式等因素显著相关（P〈0.01～0．05）。结论农村地区留守儿童中存在一定程度的孤独感问题，老师和家长应以正确的态度和方法对待留守儿童，以减少其孤独感的发生。     

产科新生儿不同部位经皮测黄报警预值的可靠性观察

目的对比观察产科新生儿不同部位经皮胆红素（TCB）报警预值的可靠性。方法132例产科新生儿采取随机数字分组法分为正常产组和剖宫产组各66例,新生儿均于产后第4天同一时间点应用KJ8000经皮测黄仪分别测量额、胸、腹、额胸、额胸腹TCB值,TCB〉12．9mg／dl者,取得亲属同意抽取静脉血检测血清胆红素（SB）,对比分析不同部位TCB及其与sB值的差异。结果两组分别有17例或21例达到TCB报警预值。两组TCB或sB相同方法及相同部位比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;两组TCB不同部位对比,额部值最低、胸部值最高,且与其他部位同组对比差异均有统计学意义（P〈0．01）;两组sB值对比差异无统计学意义（t=1．53,P〉0．05）,与不同部位TCB对比均以胸部数值差异无统计学意义（P〉0．05）,而与其他部位TCB两组差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论正常产与剖宫产新生儿术后sB对比差异无意义;TCB动态监测以胸部结果更接近SB。     

Determination of loss of quality of life

Physiatrists are a valuable resource in legal settings, where assessment of functional capacity to perform work and of future medical needs must be determined. Physiatrists help determine what future medical care is needed to restore and maintain an individual at the maximum level of life function. This article focuses on the use of a quality of life (QOL) rehabilitation model, rather than a medical model, for enhancing functional performance, modifying environments, and facilitating patient coping. We discuss use of the QOL model to describe and influence a patient's physical, psychological, cognitive, vocational/economic, and social/leisure domains.     

血液透析患者家庭护理提供者的生活质量调查

目的:了解江汉油田血液透析(血液透析)患者家庭护理提供者(护理者)的生活质量。方法:对60例血液透析患者的家庭护理提供者进行一般情况和生活质量综合评定问卷(QOLI-74)调查,并进行相关性和多因素回归分析。结果:家庭护理提供者各维度的主观生活满意度与其客观指标相关,但也与其需求、年龄、文化程度、与患者的关系有关。结论:客观状态是影响主观生活满意度的重要因素,同时应考虑护理者的需求、年龄、文化程度、与患者的关系对护理者主观生活满意度的影响。     

星状神经节阻滞治疗失眠疗效观察

失眠症又称不寐，指入睡困难，或维持睡眠障碍（易醒、早醒和再入睡困难）导致睡眠时间减少或睡眠质量下降，不能满足身体生理需要，明显影响日间社会功能和生活质量。现将星状神经节阻滞治疗失眠疗效观察总结如下。