Spata2-CYLD去ASC线性泛素化抑制NLRP3炎症小体活化

含NACHT-LRR-PYD结构域蛋白3(NOD-like receptor family pyrin domain-containing protein 3,NLRP3)炎症小体是由NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a...     

血清NLRP3蛋白水平对成人癫痫患者短期内再发风险的预测价值

为探究成人癫痫患者血清NOD样受体家族含pyrin结构域蛋白3(NOD-like receptor family pyrin domain-containing protein 3,NLRP3)水平对短期内(≤7 d)癫痫再发风险的预测价值,收集2018年9月-2019年8月于滨州医学院附属医院收治的61例癫痫患者,其...     

硫氧还蛋白相互作用蛋白介导的炎症反应及细胞凋亡在心肌梗死中的作用

背景：近年来有研究发现,在心肌梗死小鼠的心肌组织中,硫氧还蛋白相互作用蛋白表达升高。硫氧还蛋白相互作用蛋白是核苷酸结合寡聚化域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor family pyrin domain-like receptor containing pyrin domain 3,NLRP3)炎性小体的内源性激活物,那么,其是否通过激活炎症小体参与心肌梗死的病理过程目前尚不清楚。目的：探讨硫氧还蛋白相互作用蛋白对心肌梗死后心肌细胞凋亡和NLRP3炎症小体的影响,为临床心肌梗死的预防和治疗提供新思路。方法：选取8周龄雄性硫氧还蛋白相互作用蛋白基因敲除纯合子小鼠30只和同窝野生C57BL/6J小鼠30只,2种小鼠均随机分为心肌梗死组和伪手术组(n=15),建立心肌梗死模型。术后4 d取部分小鼠(n=10)麻醉处死,取心脏组织,TUNEL法(n=5)检测心肌细胞凋亡水平,Western blot(n=5)检测硫氧还蛋白相互作用蛋白、NLRP3、活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1、凋亡相关斑点样蛋白、活化白...     

NLRP3炎性小体在动脉粥样硬化中的研究进展

炎性小体是一种胞内多蛋白复合物,是固有免疫的重要组分,其中以NOD样受体蛋白3(NOD-like receptor pyrin domain containing 3,NLRP3)炎性小体最为著名。动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是诱发心血管疾病的重要风险因素。在AS病情发展过程中,机体通过释放白细...     

大黄素可通过抑制NLRP3炎性小体活化减轻哮喘小鼠的炎症反应

目的探讨大黄素对哮喘小鼠炎症反应及对肺组织中NOD样受体蛋白结构域相关蛋白3(NODlike receptor pyrin domain containing 3,NLRP3)、凋亡相关微粒蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)和胱冬肽-1(caspase-1)表达的影响。方法 36只BALB/c雌性小鼠随机分为对照组、哮喘组和大黄素组。以卵蛋白为致敏原制备哮喘小鼠模型。收集肺泡灌洗液(BALF)进行细胞计数和分类计数,ELISA方法检测BALF中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)与白介素-4(IL-4)水平。HE染色观察小鼠肺组织病理学改变。Western-blot检测各组小鼠肺组织中NLRP3、ASC和caspase-1的表达。结果大黄素能减少BALF中炎性细胞总数和嗜酸性粒细胞,降低BALF中TNF-α、IL-1β与IL-4含量,减轻肺组织炎性反应。Western-blot结果显示,哮喘组小鼠肺组织NLRP3、ASC和caspase-1的蛋白表达显著高于对照组(P0.01);与哮喘组比较,大黄素组小鼠肺组织NLRP3、ASC和caspase-1的蛋白表达显著降低(P0.01)。结论大黄素可通过抑制NLRP3炎性小体活化减轻哮喘小鼠的炎症反应。     

NOD样受体蛋白3炎症小体在急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征中的作用机制研究进展

急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征(ALI/ARDS)是由多种非心源性肺内外因素引起的急性进行性呼吸衰竭,发病核心为过度放大或失控的炎症反应,目前没有特效的治疗药物.NOD样受体蛋白3(nucleotide-binding domain (NOD)-like receptor protein 3,NLRP3)炎症小体是细胞受到刺激时形成的多蛋白复合体,活化后导致细胞焦亡及IL-1β、IL-18等产生,在多种感染性、炎症性疾病中起重要作用.引起肺损伤的多种因素均可导致NLRP3炎症小体形成、活化,有研究提示,与ALI/ARDS中的过度炎症反应有关.因而深入研究NLRP3炎症小体在ALI/ARDS中的作用,对于进一步阐明ALI/ARDS的发病机制有重要意义,甚至有望成为治疗ALI/ARDS的新靶点.     

稳定期慢性阻塞性肺疾病频繁急性加重的影响因素及其与血清SFRP1、PGRN水平的相关性

目的:探究稳定期慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)频繁急性加重的影响因素及其与血清分泌型卷曲相关蛋白1(secreted frizzled-related protein 1,SFRP1)、颗粒蛋白前体(progranulin,PGRN)水平的相关性...     

运动神经元生存蛋白SMN与Sm蛋白的结合作用

脊髓性肌萎缩症(spinal muscular atrophy,SMA)是一类与运动神经元存活基因(survival of motor neurons gene,SMN gene)突变有关的神经系统变性疾病,而SMN基因的转录产物即为SMN蛋白(survival of motorneurons protein,SMN protein).SMN蛋白与多种蛋白结合后发挥作用,如SMN-Sm蛋白的相互作用在富含尿嘧啶的小核核糖核蛋白体(uridine-rich small ribonucleo-proteins,UsnRNPs)转运装配中有重要意义.SMN蛋白是通过其Tudor结构域与剪接体Sm蛋白的二甲基化修饰的富含精氨酸-氨基乙酸域(arginine and glycine-rich,RG)结合.     

柯萨奇病毒B3 VP1蛋白、rAd/VP1和pcDNA3/VP1的免疫效果比较

目的 观察柯萨奇病毒B3(Coxsackievirus B3,CVB3)衣壳蛋白VP1、表达VP1蛋白的重组腺病毒rAd/VP1和重组质粒pcDNA3/VP1的免疫效果.方法 用原核细胞表达VP1蛋白并纯化、扩增重组腺病毒rAd/VP1,扩增并提取真核表达质粒pcDNA3/VP1.BALB/c小鼠随机分为4组,每组18只,分别在股四头肌注射VP1蛋白、rAd/VP1、pcDNA3/VP1和PBS.VP1蛋白组和pcDNA3/VP1组免疫3次,间隔3周;rAd/VP1组免疫2次,间隔2周.VP1蛋白、pcDNA3/VP1和rAd/VP1每次每只注射剂量分别为50μg、100μg和1.2×107PFU.用ELISA法和微量中和试验法检测各次免疫后血清CVB3特异性IgG抗体和中和抗体滴度;末次免疫后3周,CCK-8法检测脾脏淋巴细胞的CTL杀伤活性;用致死量CVB3攻击小鼠后,检测血中病毒滴度并观察动物的存活情况.结果 VP1蛋白组血清特异性IgG抗体和中和抗体滴度明显高于其他实验组(P＜0.05),而脾脏淋巴细胞CTL杀伤活性低于rAd/VP1组(P＜0.05);致死量病毒攻击后,VP1蛋白组血中病毒滴度低于pcDNA3/VP1和rAd/VP1组(P＜0.05),生存率明显高于这两组(P＜0.05).结论 VP1蛋白疫苗能诱导较高水平的体液免疫应答,对动物有明显的免疫保护作用,免疫效果优于质粒pcDNA3/VP1和重组腺病毒rAd/VP1.

Abstract：

Objective To compare the immune effects of Coxsackievirus B3 (CVB3) capsid protein VP1 expressed bacterially, recombinant adenovirus rAd/VP1 and recombinant plasmid pcDNA3/VP1which express VP1 protein in mice. Methods After expressed in prokaryotic cells, VP1 protein was purified. Recombinant adenovirus rAd/VP1 and recombinant plasmid pcDNA3/VP1 were amplified and extracted. Six to 8-week-old, male BALB/c mice were divided into four groups randomly. Each group contained 18 mice. The mice of pcDNA3/VP1 group or VP1 protein group were immunized intramuscularly with three injections at three weeks apart, of recombinant plasmid pcDNA3/VP1 at a dose of 100 μg/mouse or recombinant protein VP1 at a dose of 50 μg/mouse. The mice of rAd/VP1 group were immunized intramuscularly twice at two weeks interval with rAd/VP1 at a dose of 1.2 × 107 PFU. The control group was mock-immunized with 100 μl of PBS intramuscularly. Mice were bled from the retroorbital sinus plexus every two weeks after each immunization. ELISA and micro-neutralization test were used to detect levels of CVB3-specific IgG antibody and neutralizing antibody titers in the sera of immunized mice. Three weeks after the last immunization, the cytotoxic T lymphocyte(CTL) killing activity of spleen lymphocytes was detected with CCK-8 assay. Subsequently, virus titers in the sera of immunized mice were determined by the 50% cell culture infective dose( CCID50 ) assay on HeLa cell monolayers and percentage of animals surviving were observed after lethal CVB3 attack over a period of 21 days. Results The titers of specific IgG antibody and neutralizing antibody in sera of VP1 protein immunized mice were higher than other groups( P ＜0.05 ). While CTL killing activity of spleen lymphocytes of VP1 protein immunized mice was lower than mice in rAd/VP1 group( P ＜0. 05). Virus titers in sera of VP1 protein immunized mice were lower than the mice in pcDNA3/VP1 or rAd/VP1 groups ( P ＜ 0.05 ), while survival rate was significantly higher than these two groups ( P ＜ 0.05 ).Conclusion VP1 protein induced higher level of humoral immune response and acquired obvious immune protection effects in mice. The immunizing potency of VP1 protein vaccine surpassed plasmid pcDNA3/VP1or recombinant adenovirus rAd/VP1. It appeared to be a promising candidate among the three different vaccines.     

磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白信号通路在肺部疾病中的研究进展

磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(phosphatidylinositol-3-kinase/protein kinase B/mammalian target of rapamycin,PI3K/Akt/mTOR)是细胞内重要信号通路,在细胞生长、增殖、分化和蛋白合成等过程中起重要作用.肺癌、哮喘、肺动脉高压、肺纤维化、慢性阻塞性肺疾病(chronic pulmonary obstructive disease,CORD)等疾病是呼吸系统常见疾病,其病理机制涉及细胞增殖及凋亡等,与PI3K/Akt/mTOR信号通路关系密切.     

miR-21通过抑制A20促进小鼠RAW264.7细胞NF-κB和NLRP3的表达

目的 探讨调控微小RNA21(miR-21)表达对脂多糖(LPS)刺激下RAW264.7细胞中核因子κB(NF-κB)及含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)表达的影响及机制.方法 RAW264.7细胞给予100 ng/mL LPS刺激24h后,采用实时荧光定量PCR检测miR-21表达水...     

二甲双胍抑制实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠NLRP3炎性体相关蛋白表达并减轻其炎症

目的 探讨二甲双胍(MET)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠含pyrin结构域寡核苷酸结合结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)炎性体的调节作用.方法 建立EAE小鼠模型同时设正常阴性对照组,在免疫的第14天(小鼠开始出现神经功能缺损),将建模小鼠随机分成EAE组和MET处理组,MET处理组腹腔注射MET,剂量为...     

维吾尔族妇女子宫颈癌ARPC2/3的表达及其相关性

目的 探讨肌动蛋白相关蛋白复合体2/3(actin-related protein complex 2/3, ARPC2/3)在宫颈鳞癌中的表达及其临床意义.方法 制备40例维吾尔族妇女子宫颈癌及15例正常宫颈组织中总RNA,采用RT-PCR法分析 ARPC2/3基因的mRNA表达水平,同时采用免疫组化SP法检测其蛋白表达.结果 (1)维吾尔族妇女子宫颈癌组织及正常宫颈组织中ARPC2/3基因及蛋白阳性率分别为63%～65%及20%～27%(P<0.005)表达差异有显著性.(2)ARPC2/3基因及其蛋白在维吾尔族子宫颈癌不同临床分期及不同分化程度组织中表达差异无显著性(P>0.05),但是在维吾尔族妇女子宫颈癌淋巴结转移阳性组中表达率明显高于淋巴阴性组,差异有显著性(P<0.05).结论 ARPC2/3在维吾尔族宫颈鳞癌中高表达,对宫颈癌的诊断及预后判断有重要的参考价值.     

脑啡肽和褪黑素对失血性休克心肌细胞RIPK3表达的影响

目的:观察失血性休克时脑啡肽(D-Ala2-Leu5-enkephalin,DADLE)和褪黑素对受体相互作用蛋白3(receptor-interacting protein kinase 3,RIPK3)、三磷酸肌醇受体/电压依赖性阴离子通道(1,4,5-trisphosphate receptor/voltage ...     

甘露聚糖结合凝集素与妊娠期糖尿病的研究进展

甘露聚糖结合凝集素(mannose binding lectin,MBL)也曾称为甘露聚糖结合蛋白(mannan binding protein)是一种钙离子依赖的(C型)血清凝集素蛋白,也是第一个被发现的具有防御功能的C型凝集素。MBL作一种急性时相蛋白由肝脏合成分泌,是宿主体内非特异免疫最重要的免疫分子。一直以     

腹腔镜与开腹手术阑尾切除患者血清PRE、RbP、CRP和IL-6测定及其临床意义

目的:探讨不同手术方式对阑尾切除患者临床及血清八项指标水平的变化,为临床手术方式的择优提供有价值的实验室依据.方法:本文根据课题要求将60例阑尾切除患者设置为两组:即腹腔镜手术组(n=30)和开腹手术组(n=30)及健康者作对照组(n=34)进行分析.血清前白蛋白(prealbumin,PRE)和视黄醇结合蛋白(retinal-binding protein,RbP)测定采用免疫散射比浊法,C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)和白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)测定采用放射免疫分析.结果:开腹手术组与腹腔镜手术组临床四项资料比较皆无统计学差异(均P>0.05).两组患者手术前RbP和PRE二项内脏蛋白指标水平略低于正常对照组,但无显著统计学差异(P>0.05),二项炎性介质水平均显著高于正常对照组(P均<0.05).手术后1d RbP和PRE二项内脏蛋白指标水平开腹手术组均显著低于正常对照组(P<0.05,P<0.01),腹腔镜手术组水平则略有下降,但无显著统计学差异(P>0.05),两手术组间比较开腹手术组水平显著低于腹腔镜手术组(P均<0.05).二项炎性介质水平两手术组均显著高于正常对照组(P<0.05,P<0.01),两手术组间比较开腹手术组水平显著高于腹腔镜手术组(P均<0.05).术后3d RbP和PRE二项内脏蛋白指标水平两手术组均显著低于正常对照组(P<0.05,P<0.01),而两手术组间比较则开腹手术组水平显著低于腹腔镜手术组(P均<0.05).二项炎性介质水平两手术组均显著高于正常对照组(P<0.05,P<0.01),两手术组间比较开腹手术组水平显著高于腹腔镜手术组(P均<0.05).开腹手术组和腹腔镜手术组二项内脏蛋白水平术后3d均显著低于术后1d(P<0.05,P<0.01),二项炎性介质水平术后3d也显著低于术后1d(P均<0.05).结论:二项内脏蛋白和炎性介质水平的变化表明,腹腔镜手术方式的应激反应较开腹手术要轻,建议临床应优先选择这项手术方式.     

小鼠抗NLRP3单克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备小鼠抗含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)的单克隆抗体(mAb)并检测其特异性。方法 将编码小鼠NLRP3基因外显子3(Ms-N3)的基因片段插入载体p36-G3-throhFc中构建重组质粒Ms-N3-throhFc,然后将该质粒转染到HEK293F细胞中,进行真核蛋白表达。进一步利用蛋白A亲和层析柱纯化得到Ms-N3蛋白并免疫NLRP3基因敲除(NLRP3^-/-)小鼠,将免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞。进而通过ELISA和免疫荧光方法筛选能够分泌特异性识别小鼠NLRP3的mAb的杂交瘤细胞。结果 成功构建Ms-N3-throhFc重组质粒并证明该质粒能在HEK293F细胞中稳定表达。ELISA初步筛选获得12株杂交瘤细胞,经过免疫荧光实验检测发现其中的9-B8-3-2-C5分泌的mAb能够特异性识别非变性的小鼠NLRP3蛋白,该mAb的重链亚型为IgM,轻链亚型为κ。结论 成功获得小鼠抗NLRP3 mAb。     

Nipah病毒F蛋白的B细胞表位预测

Nipah病毒(Nipah Virus,NiV)是近年来新出现的一种人兽共患的病毒,属副黏病毒科、亨尼帕病毒属,可引起人和动物急性中枢神经系统病变。病毒的六个结构基因从3'端开始依次编码N蛋白、P蛋白、M蛋白、F蛋白、G蛋白和L蛋白。其中,F蛋白(fusionprotein,F protein)为Ⅰ型糖蛋白,它与G蛋白共     

PTEN抑制剂BPV通过下调细胞焦亡水平改善LPS诱导的急性肺损伤

目的：探究第10号染色体丢失的张力蛋白同源磷酸酶基因(PTEN)抑制剂过氧化氢氧化矾酸钾(BPV)对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)的影响及作用机制。方法：将60只雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为假手术组(Sham组)、BPV组、LPS组和BPV+LPS组，其中又将LPS组分为LPS刺激后6 h、12 h、24 h、48 h组；Western blot检测LPS各组小鼠肺组织中PTEN蛋白表达变化；检测小鼠肺组织湿/干重(W/D)，分析Sham组，BPV组、LPS组及BPV+LPS组小鼠肺组织水肿情况；HE染色观察4组小鼠肺组织病理学改变；ELISA和流式细胞术分别检测4组小鼠肺组织灌洗液(BALF)中炎症因子IL-1β、IL-6、IL-18和TNF-α的表达水平及巨噬细胞数量变化；组织免疫荧光染色检测各组小鼠肺泡巨噬细胞中pyrin结构域NLRP3表达；Western blot检测4组小鼠肺组织中NLRP3介导的焦亡途径中NLRP3、caspase-1 p10、ASC和GSDMD p30蛋白表达及PTEN/Akt/NF-κB信号通路中PTEN蛋白、Akt^s...     

Pyrin重组蛋白通过TGF-β1/SMAD及Jagged1/Notch1信号通路减轻慢性支气管哮喘小鼠气道炎症及气道重塑

目的探讨pyrin重组蛋白是否通过抑制转化生长因子β1(TGF-β1)/SMAD及Jagged1/Notch1信号通路缓解卵清蛋白(OVA)诱导的慢性哮喘小鼠气道炎症及气道重塑。方法选取雄性BALB/c小鼠32只,分为4组,每组8只。分别为对照组、 OVA模型组、 pyrin重组蛋白治疗组(100μg/kg)、地塞米松(DEX)治疗组(1 mg/kg)。ELISA测定各组小鼠肺泡灌洗液(BALF)中炎症因子的表达, HE染色观察小鼠支气管炎症浸润情况,过碘酸雪夫反应(PAS)染色观察杯状细胞数量变化, Masson染色观察胶原纤维沉积,免疫组织化学染色法观察α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、 TGF-β1和Notch1蛋白在肺组织中表达分布情况, Western blot法检测肺组织中α-SMA、上皮钙黏素(E-cadherin)、 TGF-β1、 SMAD2/3、 SMAD7、 Jagged1、 Notch1、 Hes1蛋白水平。结果 Pyrin重组蛋白能够改善OVA诱导的支气管哮喘小鼠气道炎症反应,抑制杯状细胞的增生及胶原纤维沉积,降低BALF中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、 IL-4、 IL-13含量,抑制肺组织中TGF-β1、 SMAD2/3、 Jagged1、 Notch1、 Hes1、α-SMA的蛋白表达。结论 Pyrin重组蛋白通过下调TGF-β1/SMAD及Jagged1/Notch1信号通路减轻哮喘小鼠气道炎症及气道重塑。