荧光聚合酶链反应熔解曲线法快速检测结核分枝杆菌及异烟肼耐药突变的临床应用价值

目的探讨荧光聚合酶链反应(PCR)熔解曲线法快速检测结核分枝杆菌复合群(MTBC)及异烟肼耐药突变的临床价值。方法对延安市传染病医院2018年4-12月住院的370例肺结核患者痰标本采用MGIT320进行MTBC培养及药敏试验,同时应用荧光PCR熔解曲线法进行MTBC和异烟肼耐药突变检测,对检出MTBC的差异进行分析,以培养法药敏为金标准,评估熔解曲线法耐药突变检测的灵敏度、特异度、一致性等。结果 370例患者培养法检出MTBC 175株,阳性率47.3%,熔解曲线法检出157株,阳性率42.4%,两种方法检测的结果差异无统计学意义(P=0.073),一致性中等(Kappa=0.510);同时与有异烟肼药敏结果的115株进行比较,熔解曲线法灵敏度95.0%,特异度93.7%,与培养法结果比较差异无统计学意义(P=0.125),具有高度一致性(Kappa=0.807)。结论熔解曲线法试剂盒可用于结核菌快速筛查及耐药突变检测,对异烟肼耐药突变检测具有高灵敏度和特异度,有助于缩短耐药结核病诊断时间。     

青海省利福平耐药/耐多药肺结核流行特征分析

目的 掌握青海省利福平耐药结核病检出情况和耐多药结核病分布情况,为利福平耐药结核病防控提供理论依据.方法 收集青海省2016-2019年最终鉴定为结核分枝杆菌的1 182株菌株,采用比例法对4种一线及2种二线常用抗结核药品(异烟肼、利福平、乙胺丁醇、链霉素、卡那霉素、氧氟沙星)进行药物敏感性试验,并对上述菌株的利福平耐...     

浙江省宁波地区974例初治肺结核病例耐药情况分析

目的初步了解浙江省宁波地区初治肺结核病例耐药情况,对现行结核病控制策略效果进行评价。方法按照世界卫生组织《结核病耐药监测指南》(WHO/IUATLD)的要求对初治病例痰培养阳性菌株进行异烟肼、利福平、链霉素和乙胺丁醇4种抗结核药物的敏感性测定及菌群鉴定。结果研究共纳入结核分枝杆菌974株,初治患者总耐药率为29.8%,耐多药率为5.0%。初治耐药病例中,18.5%仅对1种药物耐药,4种药物的耐药率顺位由高到低依次为链霉素(18.5%)、异烟肼(16.7%)、利福平(6.7%)、乙胺丁醇(5.2%)。与1999年耐药监测初治患者总耐药率17.8%相比,宁波市初治患者总耐药率上升差异有统计学意义(χ2=13.463,P0.005),耐多药率水平也呈现升高趋势,结核分枝杆菌耐药性发生更趋向于单一耐药。结论宁波地区结核病耐药形势依然严峻,需进一步加强结核病防治工作。     

浙江省衢州市结核分枝杆菌耐药监测调查

目的 了解浙江省衢州市结核分枝杆菌临床分离株耐药状况, 为结核病的防治提供参考依据。 方法 收集2010年全年衢州4县2区6家医院肺结核就诊病例痰标本,用改良罗氏培养基进行病原分离,鉴别培养基培养法进行菌型鉴定。对分离到的结核分枝杆菌采用比例法对4种一线抗结核药物,异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)、乙胺丁醇(EMB),和二线抗结核药物氧氟沙星(OFX)、卡那霉素(KM)进行药物敏感性检测,用 SPSS 11.0统计软件进行统计分析。 结果 371 株结核分枝杆菌对4种一线抗结核药物,INH、RFP、SM和 EMB全部敏感的菌株为292株(78.71%),对二线抗结核药物OFX和KM全部敏感的菌株为337株(90.84%);耐药菌株89株(23.99%),其中,单耐药菌株51株(13.75%),耐多药菌株21株(5.66%),多耐药株14株(3.77%),广泛耐药株3株(0.81%)。结核分枝杆菌对4种一线药物INH、RFP、SM和 EMB的耐药率分别为15.36%(57/371)、7.01%(26/371)、11.86%(44/371)和3.23%(12/371);对2种二线药物OFX和KM的耐药率分别为7.82%(29/371) 和2.42%(9/371)。326例初治患者的耐药率为INH 10.12%(33/326)、RFP 2.45%(8/326)、SM 8.90%(29/326)、EMB 1.23%(4/326)、OFX 3.68%(12/326)、KM 1.53%(5/326),非耐药80.98%(264/326),耐多药1.84%(6/326);45例复治患者的耐药率为INH 53.33%(24/45)、RFP 40.00%(18/45)、SM 33.33%(15/45)、EMB 17.78%(8/45)、OFX 37.78%(17/45)、KM 8.89%(4/45),非耐药40.00%(18/45),耐多药33.33%(15/45)。 结论 衢州市结核分枝杆菌的耐药情况较为严重,每种药物复治患者的耐药率均明显高于初治患者,在制定结核病防控策略时应给予充分重视,同时进一步加强高质量的全程监督短程化疗。     

分枝杆菌快速变色液体培养基系统的临床应用评价

目的评价一种快速检测分枝杆菌的培养、鉴定和药敏系统.方法采用分枝杆菌快速变色液体培养基系统检测200份标本,并与改良L-J培养基法进行比较.结果快速变色液体培养基系统阳性率(37.5%)明显高于改良L-J培养基(17%).变色液体培养基和改良L-J培养基涂阳平均检出时间分别为8天和19天,涂阴平均检出时间分别为13天和26天;污染率分别为3%和2.5%.与异烟肼、链霉素、利福平、乙胺丁醇一致率分别为87%、61%、93%和92%.且MTBC和MOTT的鉴定和MTBC的药敏只需要2～6天.结论这种新型变色液体培养基系统具有快速、操作简便、实用等特点,培养分枝杆菌阳性率高,鉴定和药敏系统快速准确,且可进行多种抗结核药物药敏检测和药物最小抑菌浓度测定,值得临床推广应用.     

腹泻患者826例便培养致病菌构成及结果分析

目的 了解腹泻患者粪便主要致病菌的构成及药物敏感性,指导临床用药.方法 采用普通培养和抗生素药物敏感实验进行回顾性分析.结果 826例便培养,52例阳性,阳性率6.3％,其中志贺菌34例(65.4％),沙门菌15例(28.8％),真菌3例(5.8％),52株致病菌中大多数呈多重耐药.耐2～4种抗生素的有25株(48.1％),4种及以上抗生素的有14株(26.9％).47株致病菌(真菌除外)对环丙沙星的敏感率为93.6％,对庆大霉素敏感率89.4％,对头孢哌酮/舒巴坦的敏感率83.0％,对亚胺培南(泰能)和美洛培南的敏感率都为100％,耐药率最高的是氨苄西林为95.7％.3种真菌对抗真菌药物的敏感率也为100％.结论 临床医生应在药敏检测结果指导下用药,以减少肠道致病菌耐药率的上升.     

严重耐多药结核病的临床实验室监测

目的 监测结核分枝杆菌对一线和二线抗结核药物的耐药性水平,掌握严重耐多药结核病的流行情况.方法 2004年10月至2007年4月期间山东省胸科医院收集的1021株临床菌株,采用绝对浓度法在鸡蛋培养基上检测1 021株菌株对4种一线和5种二线抗结核药物的药物敏感性.结果 结核分枝杆菌复合群989株(96.9%),非结核分枝杆菌32株(3.1%).989株结核分枝杆菌对一线抗结核药物的总体耐药率为32.3%(95%可信区间为28.7%～35.8%),其中耐多药结核菌株107株(10.8%),有20株菌株符合严重耐多药结核的定义标准.严重耐多药结核菌株占所有耐多药结核菌株的18.7%,全部来自复治肺结核患者.结论 结核分枝杆菌对二线抗结核药物耐药性水平较高,严重耐多药结核在复治结核患者中的流行情况严重.研究显示持续开展抗结核药物耐药性的临床实验室监测十分必要.     

西藏地区169例复治失败肺结核病例耐药状况检测

目的 了解西藏地区复治肺结核患者中的结核分枝杆菌对抗结核化学药物的耐药状况,为有效防治肺结核病提供科学依据.方法 收集西藏自治区结核病防治所2000-2005年复治失败病例169例痰标本,用改良罗氏培养基分离培养结核分枝杆菌,绝对浓度法检测分离菌株对4种抗结核药物[链霉素(SM)、异烟肼(INH)、乙氨丁醇(EMB)、利福平(RFP)]的耐药性测定.结果 共检测169株结核分枝杆菌,其中耐药株165株,总耐药率高达97.63%,其中耐多药(所耐药物中含R和H)133例,耐多药率为78.70%.复治失败的耐药率和耐多药率明显高于全国46.50%的水平.对RFP、INH、SM和EMB的耐药率分别为91.12%(154/169)、84.02%(142/169)、75.15%(127/169)和21.30%(36/169).结论 西藏地区属高耐药区,应加强结核分枝杆菌的耐药监测和控制.     

上海地区肺结核病患者氧氟沙星耐药情况分析

目的 了解上海地区肺结核病患者氧氟沙星耐药的分布情况及可能的危险因素.方法 收集2009-2010年上海市各结核病定点医院的447株对任意一种一线抗结核药物(异烟肼、利福平、链霉素和乙胺丁醇)耐药的菌株,同期随机选取151株对上述4种一线抗结核药物全敏感菌株,对这598株结核分枝杆菌菌株进行氧氟沙星敏感性检测,分析氧氟沙星耐药的分布情况.收集肺结核患者的年龄、性别、抗结核治疗史和户籍资料,采用多因素分析研究氧氟沙星耐药可能的危险因素.用DNA测序分析氧氟沙星耐药菌株gyrA、gyrB基因耐药突变的特征.结果 447株耐药菌株中,72株(16.1%)对氧氟沙星耐药,MDR(至少同时对异烟肼、利福平耐药)结核分枝杆菌中氧氟沙星耐药44株(39.6%).在151株一线抗结核药物全敏感菌株中,4株(2.6%)耐氧氟沙星.多因素分析结果显示MDR和多耐药(对一种以上抗结核药物耐药,但不对异烟肼和利福平同时耐药)等与氧氟沙星耐药有关(OR分别为19.5、5.6,95% CI 分别为6.4～59.4、1.7～18.1,P均＜0.05).患者为复治病例与氧氟沙星耐药相关(OR=2.3,95%CI:1.2～4.0,P＜0.05).氧氟沙星耐药与年龄偏大有关(OR=1.03,95%CI:1.01～1.05,P＜0.05).76株氧氟沙星耐药菌株的gyrA、gyrB基因序列分析显示62株(81.6%)发生耐药突变.结论 上海地区MDR结核病患者中氧氟沙星耐药率高于对一线抗结核药物全敏感的肺结核病患者.MDR、多耐药、复治、年龄为氧氟沙星耐药可能的危险因素,其中以MDR与氧氟沙星耐药的关联强度最大.     

多种耐药结核病及其治疗

多种耐药结核病(multidrug resistant tuberculosis,MDR—TB)指结核患者的结核菌株体外检测对两种或更多种的一线抗结核药物耐药。1990年全国第三次结核病流行病学抽样调查结果显示,耐两种以上抗结核药物的多耐率为20.2％。近几年有些作者把MDR-TB定义为结核菌株体外检测至少对异烟肼(INH)和利福平(RFP)同时耐药,因为这是两种最有效的抗结核药。过去,曾一度认为耐药性结核菌传染性低,但现在发现有同样的传染性。多种耐药结核病的传播,将可导致     

2013-2018年浙江省丽水市结核病患者一线抗结核药物耐药分析

目的了解2013-2018年浙江省丽水市结核病患者对一线抗结核药物的耐药情况,为结核病疫情控制提供参考依据。方法收集2013-2018年浙江省丽水市结核病病例,分离菌株并进行菌型鉴定,测定结核分枝杆菌对异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇4种一线抗结核药物敏感性。结果共测定1883株结核分枝杆菌的耐药性,其中初治肺结核患者1770株,复治肺结核患者113株,总耐药率为17.15%,耐多药率为5.74%。初始耐药率是15.42%(273/1770),低于获得性耐药率的44.25%(50/113);初治肺结核患者耐药顺位链霉素>异烟肼>利福平>乙胺丁醇;复治患者耐药顺位为异烟肼>利福平>链霉素>乙胺丁醇。结论丽水市肺结核患者总的耐药率和耐多药率低于全省及全国耐药基线调查及丽水市上一轮的监测数据,但是耐多药形势仍较为严峻。     

徐州市结核分枝杆菌耐药情况调查

目的了解徐州市结核分枝杆菌的耐药情况。方法采用整群抽样的方法连续收集徐州市城区结核防治门诊2008年8月至2010年4月痰菌阳性的肺结核患者的痰标本193例,用比例法做一线药物（异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇）的敏感试验,耐多药的患者做二线药物（左氧氟沙星、阿米卡星、卷曲霉素、丙硫异烟胺）的敏感试验。结果符合条件并纳入调查的细菌有178株;178株结核分枝杆菌总的耐药率为38.8%,初治和复治耐药率分别为21.4%、72.1%,耐多药率为18.0%,初治和复治耐多药率分别为4.3%、44.3%,4种一线药物耐药顺序由高到低分别为耐异烟肼30.3%,耐链霉素29.2%,耐利福平22.5%,耐乙胺丁醇19.1%,复治患者对4种一线药物的耐药率明显高于初治患者;同时耐1种、2种、3种、4种药物的初治和复治耐药率分别为6.8%、8.5%、2.6%、4.3%,9.8%、14.8%、9.8%、29.5%,复治患者同时耐3、4种药物的耐药率明显高于初治者;32例耐多药患者对4种二线药物总耐药率为37.5%,耐药顺序由高到低分别为耐左氧氟沙星28.1%,耐丙硫异烟胺15.6%,耐阿米卡星12.5%,耐卷曲霉素6.3%。结论徐州市结核分枝杆菌整体耐药率仍处于高水平,各部门的结核病防治工作者应采取切实有效的措施,降低耐药结核病的发生。     

Comparative evaluation of the nitrate reduction assay, the MTT test, and the resazurin microtitre assay for drug susceptibility testing of clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis

OBJECTIVES: To evaluate the performance of three rapid low-cost methods for the detection of resistance to first-line drugs in Mycobacterium tuberculosis. METHODS: One hundred M. tuberculosis clinical isolates were tested by the nitrate reductase assay (NRA), the MTT test and the resazurin microtitre assay (REMA), and the results compared with those obtained with the gold standard proportion method (PM) on Lowenstein Jensen medium. RESULTS: The results using the three methods showed a good sensitivity and specificity between 94% and 100% for the detection of rifampicin and isoniazid resistance. Specificity for ethambutol and streptomycin using MTT and resazurin was low (58-89%). In contrast, NRA showed a good agreement for all first-line drugs tested. Conclusions: This study shows a high level of agreement of these three low-cost methods compared with the PM for rapid detection of rifampicin and isoniazid resistance. However, more standardization is needed for ethambutol and streptomycin using the MTT test and resazurin microtitre assay. The nitrate reductase assay might represent an inexpensive procedure for rapid detection of resistance to first-line drugs in low-resource countries.     

结核分枝杆菌对一线抗结核药物的耐药情况分析

目的了解东莞市2015-2018年结核分支杆菌对四种一线抗结核药物的耐药情况以及耐药患者人群分布特征,为制定科学的耐药结核病治疗和预防策略提供依据。方法收集东莞市2015-2018年登记的痰培养阳性的肺结核患者3975例,菌群鉴定为结核分支杆菌的标本进行药敏试验。药敏试验采用比例法,药物敏感试验药物种类包含异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)、乙胺丁醇(EMB)四种一线抗结核药物。结果3751株结核分枝杆菌对一线抗结核药物总体耐药率为25.70%(964/3751),四年间总体耐药率呈逐年增高趋势。单耐药率、耐多药率和多耐药率分别为17.41%(653/3751)、3.81%(143/3751)、4.48%(168/3751)。单耐药中耐链霉素(Sm)比例最高,耐多药中INH+RFP+EMB+Sm四种全耐的菌株比例最高。3751株结核分支杆菌对四种一线抗结核药物的耐药顺位为:Sm14.98%(562/3751)>EMB10.16%(381/3751>INH9.68%(363/3751)>RFP5.01%(188/3751)。卡方检验结果显示,年龄越大越容易耐多药(χ^2=9.27,P<0.05)和多耐药(χ^2=6.18,P<0.05)。复治患者更易患单一耐药(χ^2=11.70,P<0.05)、耐多药(χ^2=200.81,P<0.05)和多耐药(χ^2=4.66,P<0.05)。结论东莞市各耐药率水平低于全国平均水平,但呈现逐年增高水平,防控形势不容乐观。建立持续的耐药监测机制以及提供更多的标准化治疗方案并将其纳入免费治疗序列势在必行。     

江苏省海门市耐药肺结核病流行现状分析

目的 了解江苏省海门市耐药肺结核病流行现状、流行特点与危险因素,探索耐药肺结核病的防治方法. 方法 自2009年10月至2013年9月,对到海门市结核病防治机构就诊的全部336例痰涂片阳性肺结核患者的痰标本进行痰培养检查,所有涂阳患者连续纳入,不得跳选.对培养阳性的菌株进行菌型鉴定.对结核分枝杆菌菌株进行4种一线抗结核药物异烟肼(INH)、利福平(RFP)、乙胺丁醇(EMB)、链霉素(SM)敏感试验检查.计数资料的比较采用2分析,检验水准=0.05. 结果 4年共培养成功获得阳性菌株317株,其中结核分枝杆菌310株.在310株结核分枝杆菌分离株中,总耐药率24.5%(76/310),单耐药率9.7%(30/310),多耐药率2.9%(9/310),耐多药率11.9%(37/310).复治涂阳患者总耐药率和耐多药率均高于初治涂阳患者(2=55.294,P0.005, 2=71.471,P0.005).涂阳患者菌株单耐药谱中分离菌株对SM和INH单一耐药的比例较高,分别达46.7%和36.7%.多耐药谱中分离菌株对INH+SM耐药比例较高,占88.9%.耐多药谱中分离菌株以耐INH+RFP和耐INH+RFP+SM组合所占比例较高,分别达46.0%和29.7%. 结论 海门市耐多药肺结核病的流行较为严重,应加强耐多药肺结核病的发现和治疗管理工作.复治肺结核患者发生耐药的危险性较初治患者更高,应加强正规治疗等结核病防治知识的宣传、培训,重视对初治肺结核患者的治疗管理.     

A case of isoniazid-induced liver injury diagnosed by use of the DLST,and successful reintroduction of isoniazid for pleural tuberculosis

A 54-year-old woman was admitted for pleural tuberculosis diagnosed by right chest pain and cough. She received combination antituberculosis therapy consisting of isoniazid, rifampicin, ethambutol, and pyrazinamide. However, liver damage was observed 15 days after initiation of therapy (aspartate aminotransferase (AST) 248 IU/l, alanine transaminase (ALT), 132 IU/l). The patient was given glycyrrhizinate intravenously, but liver damage gradually increased (AST 628 IU/l, ALT 467 IU/l) and all tuberculosis drugs were ceased. We diagnosed drug-induced liver damage due to isoniazid according to results of the drug lymphocyte stimulation test. We successfully reintroduced rifampicin and streptomycin, and carried out desensitization therapy for isoniazid without liver injury recurrence. Reintroduction of a drug suspected to cause drug-induced liver injury is generally not recommended; however, our experience suggests that isoniazid, a first-line antituberculosis drug, may be reintroduced after desensitization.     

2017-2020年黑龙江省佳木斯市肺结核患者耐药情况分析

  目的   了解黑龙江省佳木斯市肺结核患者的耐药情况,为结核病疫情防控提供可靠的参考依据。   方法   收集2017 — 2020年黑龙江省佳木斯市结核病参比实验室接收的575例分枝杆菌培养阳性患者菌株进行菌种鉴定,采用固体比例法进行药物敏感度测试,分析异烟肼、利福平、乙胺丁醇、链霉素、氧氟沙星、卡那霉素的药敏试验结果。   结果   总耐药率为35.29%（198/561）,初治患者总耐药率为32.35%（143/442）,复治患者总耐药率为46.22%（55/119）,两者间差异有统计学意义（χ2=7.893,P=0.005）;总耐多药率为10.16%（57/561）,初治患者耐多药率为7.92%（35/442）,复治患者耐多药率为18.49%（22/119）,两者间差异有统计学意义（χ2=11.473,P=0.01）。 结核分枝杆菌菌株耐药率顺位分别是链霉素（22.82%,128/561）、异烟肼（19.25%,108/561）、利福平（15.69%,88/561）、氧氟沙星（6.77%,38/561）、乙胺丁醇（6.6%,37/561）、卡那霉素（2.14%,12/561）。   结论   2017 — 2020年佳木斯市肺结核病耐药情况较严重,特别是利福平耐药患者的比例较高,应尽早发现耐药结核病患者并进行针对性规范化治疗管理,避免耐药结核病的传播。