临床分离万古霉素耐药肠球菌van基因型及分子分型

目的明确临床分离万古霉素耐药肠球菌(VRE)基因型及分子分型。方法收集临床分离VRE 17株;采用16S r RNA测序对临床株进行菌种确认,微量稀释法和琼脂稀释法测定常用抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)。多重PCR进行van基因分型;采用多位点序列分型(MLST)进行分子分型。结果 17株VRE经16S rRNA测序确认均为屎肠球菌;其中12株对替考拉宁耐药。13株检出vanA基因,9株检出vanM基因,5株同时检出vanA及van M基因;17株VRE分属6个MLST型,其中ST78型8株、ST80型4株、ST555型2株,其余3株分别为ST117型、ST262型和ST341型。结论 VRE的临床分离株中van基因型主要为vanA(76.5%),其次为vanM(52.9%),首次发现同时携带vanA及vanM的VRE菌株。     

万古霉素耐药肠球菌耐药基因检测及分子流行病学调查

目的了解我院分离的万古霉素耐药肠球菌的耐药相关基因及流行情况。方法收集2012~2013年间分离的7株经E-test确认的万古霉素耐药肠球菌(VRE),提取基因组DNA,PCR检测van耐药基因型,多重PCR检测asal,gelE,cylA,esp,hyl5个毒力基因;多位点序列分型(MLST)及脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行流行病学调查。结果 7株VRE耐药基因型van均为A型;有6株检测到毒力基因esp、hyl,其余为阴性;MLST及PFGE均显示菌株2、4、5、7为主要型别(ST 17),其余3株各不相同。结论我院分离的VRE耐药基因型为vanA型,毒力基因esp、hyl检出率较高,2013上半年有小规模VRE流行,应加强对于VRE的管控工作。     

耐万古霉素肠球菌的基因检测

目的 调查上海华山医院2007-2009年间VRE的分离率,并对耐药菌株的分子特性进行研究,为本地区VRE的预防和控制提供有价值的信息.方法 通过琼脂平板稀释法(ADSP)从临床鉴定的890株肠球菌中筛选VRE菌株,并通过微量肉汤稀释实验测其对万古霉素及替考拉宁的MIC;采用PCR及测序方法检测万古霉素耐药基因以及可能毒力基因esp,hyl;运用MLST对VRE进行克隆分型并通过PFGE分型技术进行验证.结果 ADSP法及微量肉汤稀释实验共筛选出13株VRE菌株.其中6株VRE(2007-2008年)只对万古霉素耐药,但对于替考拉宁敏感(万古霉素MIC64～256μg/ml);耐药基因PCR产物测序结果提示这6株VRE均携带同一种可能导致万古霉素耐药的新型基因,该基因序列与已报道的耐药基因均不同;MLST及PFGE分型提示其属于不同型别.另外7株VRE(2009年1-7月)对万古霉素和替考拉宁的MIC结果分别为32～64μg/ml和16～32 μg/ml,耐药基因检测均为vanA.MLST分型结果提示13株VRE共分为4个不同的ST型,其中11株均属克隆复合型CC-17.13株VRE毒力基因esp和hyl的阳性率分别为69.2%和30.8%.结论 上海华山医院VRE克隆分型以CC17为主,同时发现上海华山医院存在一种可能导致万古霉素耐药的新型基因介导的VRE,该新基因的功能和定位尚待进一步研究.     

肠球菌临床感染情况和药物敏感性分析及耐万古霉素肠球菌耐药基因研究

目的分析肠球菌的临床分离情况,研究肠球菌抗菌药物敏感性和耐万古霉素肠球菌（VRE）耐药基因。方法采用VITEK COMPACT分析仪进行菌种鉴定和药敏测定;采用WHONET 5.5进行数据分析;采用PCR、基因测序及序列在线比对检测VRE耐药基因。结果共分离167株菌,屎肠球菌113株,粪肠球菌47株;标本类型前三位分别为尿液（34.1%）、血液（16.8%）和腹水（15.6%）;ICU分离率在临床科室中居首。屎肠球菌对青霉素G、氨苄西林、红霉素、环丙沙星、左氧氟沙星的耐药率高达90%以上,且明显高于粪肠球菌（P〈0.05）。检出11株VRE,携带vanA耐药基因。未发现利奈唑胺耐药株。结论肠球菌总体耐药形势严峻,屎肠球菌的分离率和耐药率高于粪肠球菌,应控制多重耐药株尤其VRE的传播。     

耐万古霉素肠球菌基因分型及耐药性分析

目的明确万古霉素耐药肠球菌(vancomycin resistant enterococci,VRE)耐药基因型别及耐药性,指导临床用药。方法收集北京中日友好医院2016年10月至2017年10月临床分离的17株VRE,Vitek 2 Compact全自动细菌鉴定及药敏分析系统检测其对临床常用14种抗菌药物的敏感性,E-test法确证其对万古霉素和替考拉宁的药物敏感性;PCR法检测17株VRE的耐药基因vanA、vanB、vanC1、vanC2/3,并经测序验证。结果 17株VRE均为耐万古霉素屎肠球菌,均对环丙沙星、左氧氟沙星、莫西沙星、青霉素100%耐药,对利奈唑胺、替加环素、奎奴普丁/达福普汀等敏感;其耐药基因型均为vanA型,其中有4株vanB表型-vanA基因型。结论所收集的VRE均对万古霉素高水平耐药,耐药型均为vanA型,应加强临床分离株的耐药监控,合理使用抗菌药物。     

万古霉素耐药肠球菌的表型及基因型检测

目的了解我院耐万古霉素肠球菌(VRE)的耐药表型、基因型及流行情况。方法用K-B纸片扩散法检测临床分离肠球菌的药物敏感性,E-test法检测VRE对万古霉素的最低抑菌浓度(MIC);PCR检测vanA、vanB、vanC1和vanC2-3基因型;脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析VRE同源性。结果 73株肠球菌中检出3株万古霉素耐药屎肠球菌,检出率为4.1%;3株屎肠球菌对万古霉素和替考拉宁均耐药,但对利奈唑胺敏感;基因型检测显示3株屎肠球菌均为vanA型,PFGE结果显示该3株VRE不属于同一型别。结论我院住院患者中已出现VRE,应加强医院感染控制,以阻止VRE菌株在院内的传播和流行。     

258株肠球菌耐药性分析及耐万古霉素基因检测

目的研究肠球菌的耐药率及耐万古霉素肠球菌(VRE)的耐药表型和基因型。方法按照美国临床和实验室标准化研究所(CLSI)2009年推荐的微量稀释法进行临床分离肠球菌对各类药物的最小抑菌浓度(MIC)检测,VRE进一步用E-test药敏试验确认;PCR法检测VRE的耐药基因。结果 2010年7月至2011年11月沈阳军区总医院共检出粪肠球菌95株,屎肠球菌163株。粪肠球菌对万古霉素、替考拉宁保持较高敏感度,对氨苄西林、青霉素、呋喃妥因三种抗菌药物敏感度也在65%以上,对其他抗菌药物敏感度低,统计期内未检出耐万古霉素粪肠球菌菌株。屎肠球菌对多数抗菌药物表现为耐药,对氯霉素敏感率为70%,对万古霉素、替考拉宁敏感度下降,为90.7%。期间检出15株VRE,其耐药表型为多重耐药,PCR扩增结果显示,15株万古霉素耐药屎肠球菌VanA基因扩增均为阳性,产物长度在700～1000bp之间,约783bp,符合预期;VanB、VanC引物扩增均阴性。15株万古霉素耐药屎肠球菌对多数抗菌药物耐药,仅对氯霉素、四环素相对敏感,对万古霉素MIC>256mg/L,对替考拉宁也表现为耐药。结论屎肠球菌耐药性高于粪肠球菌,VRE多为多重耐药,给临床治疗带来困难,医院应加强对其预防监测。     

杭州市五家医院万古霉素耐药肠球菌耐药转座子结构及分子分型

目的 明确万古霉素耐药肠球菌(VRE)耐药转座子结构及分子分型.方法 收集2006年4月至2007年4月杭州市5家医院21株VRE菌株,用Etest法进行抗菌药物的药敏试验,并通过PCR、接合试验、质粒提取、耐药转座子结构、脉冲凝胶电泳(PFGE)、多位点序列分型(MIST)及多位点串联重复序列分型(MLVA)进行研究.结果 21株VRE基因型及表型均符合vanA.属于10个不同的PFGE型,7个不同的MLST分型,4个不同的MLVA分型,其中18株属于克隆复合体CC17,另外3株为ST343与CC17接近.所有VRE菌株均对利奈唑胺及替加环素敏感.多对引物对转座子的不同区域的PCR扩增并进行序列拼接、比对,发现其中2株VRE菌株携带典型的耐药转座子Tn1546,其余19株VRE菌株均携带一种新的与Tn1546相似耐药转座子,均在vanXY之间反向插入IS1485.18株VRE菌株均可通过滤膜接合试验进行万古霉素耐药转移,接合菌均含有约54 000 bp大小的质粒.结论 杭州市5家医院21株VRE菌株均为vanA表型及基因型,发现了一种新的万古霉素耐药转座子结构.21株VRE菌株经MLST分型属于7个不同的序列分型,属于或接近易在医院环境里生存并在近年来迅速造成了全球播散的克隆复合体CC17.     

多重PCR检测万古霉素耐药的肠球菌

目的检测2005～2007年澳大利亚墨尔本地区万古霉素耐药的肠球菌基因。方法用多重PCR检测肠球菌4种耐药基因(vanA,vanB,vanC1和vanC2),鉴定4种肠球菌E.faecalis(粪肠球菌),E.faecium(屎肠球菌),E.gallinarum(母鸡肠球菌)和E.casseliflavus(产黄肠球菌)。结果vanA基因扩增阳性可见732bp条带;vanB基因为635bp条带;vanC1基因为822bp条带;vanC2/3基因为439bp条带。粪肠球菌基因扩增见941bpDNA条带,屎肠球菌为550bpDNA条带。3年回顾性研究中,最常见的万古霉素耐药基因是vanB型(84.9%),菌种是屎肠球菌(76.3%)。2007年还出现2株同时含有vanA和vanB耐药基因的屎肠球菌菌株。结论万古霉素耐药的肠球菌菌株逐年增多,多重PCR检测万古霉素耐药的肠球菌,简便迅速,有利于准确及时地发出报告。     

MALDI-TOFMS快速鉴定耐万古霉素屎肠球菌及其流行病学分型性能分析

目的利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)快速鉴别van A型万古霉素耐药屎肠球菌(VREfm)和万古霉素敏感屎肠球菌(VSEfm),并对VREfm进行流行病学相关性分析。方法收集139株屎肠球菌临床分离株,其中VREfm66株、VSEfm73株。采用聚合酶链反应(PCR)确定66株VREfm的万古霉素耐药基因。采用MALDI-TOFMS鉴定屎肠球菌。随机选取45株VREfm和50株VSEfm,采用ClinProTools 3.0软件对质谱峰进行分析并建立模型,用最佳模型验证另外的21株VREfm和23株VSEfm。随机选取21株VREfm进行多位点序列分型(MLST)分析,并采用MALDI-TOF MS对其进行层次聚类分析。结果 MALDI-TOF MS鉴定出所有菌株均为屎肠球菌,鉴定分值为2.321～2.602。66株VREfm均为vanA基因型。采用ClinProTools 3.0软件建立的最佳模型进行外部验证时,敏感性和特异性分别为95.2%和95.7%。21株VREfm共有7种序列分型(ST)型别,以ST78最常见。MALDI-TOF MS将21株VREfm分为4个集群,绝大多数ST78菌株被归于同一集群,与ST78高度相关的其他ST型别也被归于此集群。结论在严格控制实验条件的前提下,MALDI-TOF MS可快速区分vanA型VREfm和VSEfm,但无法区分与VREfm高度相关的ST型别。     

医院获得性尿路感染肠球菌耐药性与毒力基因型相关研究

目的研究医院获得性尿路感染肠球菌毒力因子和耐药分布,以及两者间的关系,为临床合理使用抗菌药物和控制感染提供依据。方法分离出临床尿路感染标本中74株肠球菌进行菌株鉴定,采用纸片扩散法(KB法)做药物敏感试验;PCR检测cylL-L、cylL-S、cylL-A、esp、acm、gelE、asa-I、cpd、ace毒力基因。结果 74株肠球菌中有粪肠球菌45株(60.8%),屎肠球菌29株(39.2%)。屎肠球菌对青霉素G、氨苄西林、环丙沙星耐药率分别为89.66%、89.66%、79.31%,明显高于粪肠球菌。粪肠球菌对庆大霉素120、四环素耐药率分别为46.67%、53.33%,略高于屎肠球菌。cylL-L、cylL-S、cylL-A、esp、acm、gelE、asa-I、cpd、ace毒力基因的阳性率分别为24.32%、44.59%、22.97%、44.59%、60.81%、22.97%、25.67%、22.97%、9.46%。屎肠球菌毒力基因分布与耐药性间差异有统计学意义(P0.05)。结论粪肠球菌是医院获得性尿路感染的主要肠球菌,屎肠球菌表现为多重耐药,粪肠球菌携带更多的毒力因子,屎肠球菌毒力基因数与耐药性之间密切相关,临床应注意抗菌药物的合理应用,防止肠球菌耐药性的产生和传播。     

四川省自贡市食品和环境携带屎肠球菌的耐药性和多位点序列分型研究

目的 研究四川省自贡市食品和环境样本中屎肠球菌耐药性及携带毒力基因情况,并对分离菌株进行序列分型（ST）。方法 对2013年采集的157份食品和环境样本进行屎肠球菌分离鉴定,全自动微生物鉴定仪检测屎肠球菌对14种常见抗生素的敏感性;使用聚合酶链式反应方法检测屎肠球菌携带毒力基因（hyl,esp）的情况,并应用多位点序列分型（MLST）方法对分离菌株进行序列分型。结果 自贡地区肉制品和冰箱拭子样本屎肠球菌分离率为28.03%（44/157）,其中耐药菌株的比例为86.36%（38/44）。分离菌株对红霉素、四环素和利福平的耐药率分别为65.91%（29/44）、31.82%（14/44）和27.27%（12/44）,对环丙沙星,高浓度链霉素和高浓度庆大霉素以及氯霉素也有一定的耐药率。分离到1株喹奴普丁-达福普丁耐药的菌株。未检测到对青霉素类、糖肽类、脂肽类、喹诺酮类和恶唑烷酮类抗生素耐药的菌株。44株屎肠球菌分为38个ST型别,ST94克隆群为优势克隆群,包括13株菌。分离到1株CC17克隆群的屎肠球菌多重耐药菌株和1株ST957的八重耐药菌株。检测到2株携带esp基因的屎肠球菌。结论 自贡市食品和环境中存在多种ST型别的屎肠球菌,且对多种抗生素耐药。应重视肉制品中耐药屎肠球菌对公众健康的潜在威胁。     

166株分离自前列腺液中肠球菌的耐药性分析

目的监测2000至2004年分离的肠球菌的耐药情况,为治疗其感染提供参考资料。方法采集来我院就诊的1 186例患者的前列腺液标本进行细菌培养,采用生物梅里埃API条进行细菌鉴定,标准纸片扩散法进行耐药性分析。结果1 186例患者中共分离到肠球菌166株,其中粪肠球菌68株,屎肠球菌92株,其他肠球菌6株。耐药性检测结果显示,粪肠球菌对青霉素、氨苄西林、环丙沙星及左氧氟沙星的耐药率分别为48.53%、41.18%、50.00%、47.69%。而屎肠球菌的耐药率则分别为94.38%、90.32%、93.55%、91.95%。氨基糖苷类高水平耐药筛选屎肠球菌耐药率也高于粪肠球菌。肠球菌对万古霉素的耐药性最低,粪肠球菌为0%,屎肠球菌为3.26%。结论肠球菌对临床常用的头孢类抗生素呈天然耐药,万古霉素的敏感性最高,但已有万古霉素耐药菌株出现,耐万古霉素肠球菌(VRE)的出现需要引起高度重视,要防止万古霉素的过度使用,预防VRE的产生。     

2009—2013年肠球菌属临床感染及耐药性分析

目的了解肠球菌属临床分布及耐药性特征,为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法回顾性分析855株临床分离的肠球菌,采用VITEK2 Compact全自动微生物分析仪做细菌鉴定和药敏试验,K-B纸片法筛检高水平庆大霉素耐药株,数据统计分析用WHONET5.5软件。结果共检出465株屎肠球菌和347株粪肠球菌,主要分离自尿液、引流液和伤口分泌物。屎肠球菌总体耐药率较高,其对氨苄西林、环丙沙星、青霉素和左氧氟沙星耐药率≥71.4%,明显高于粪肠球菌对这4种抗菌药物的耐药率(≤37.2%);粪肠球菌对四环素、奎奴普丁-达福普汀的耐药率(分别为76.4%和72.6%)明显高于屎肠球菌对这两种抗菌药物的耐药率(分别为59.4%和5.6%);两种细菌对红霉素均显示较高的耐药率(≥76.9%),对万古霉素和替考拉宁耐药率较低(均≤2.2%)。812株屎肠球菌和粪肠球菌中共筛检出高水平庆大霉素耐药株537株,占66.1%(537/812)。结论肠球菌属感染以屎肠球菌、粪肠球菌为主;屎肠球菌对大多数抗菌药物耐药率高于粪肠球菌;已检出多株万古霉素耐药肠球菌;大部分肠球菌为高水平庆大霉素耐药株;临床治疗应根据病原菌药物敏感试验结果选择适当的治疗药物。     

肠球菌种属鉴定及万古霉素耐药基因型检测的多重聚合酶链反应方法的建立及应用

目的 建立快速准确的肠球菌种属鉴定及万古霉素耐药基因检测的多重聚合酶链反应(multiplex polymerase chain reaction,MPCR)方法,并在人及动物源菌株中应用. 方法 针对肠球菌属、粪肠球菌、屎肠球菌、vanA、vanB、vanC1、vanC2/C3保守基因设计引物,建立肠球菌种属鉴定及万古霉素耐药基因型检测的MPCR方法;应用建立的MPCR方法检测98株人及动物源菌株菌种及万古霉素耐药基因,并比较MPCR方法检测结果与检测菌株的VITEK Compact 60自动微生物鉴定仪菌种鉴定结果及琼脂稀释法的万古霉素及替考拉宁药敏检测结果,分析MPCR方法检测结果与其他方法的一致性. 结果 成功建立了用于检测肠球菌属和常见肠球菌种及万古霉素耐药基因型的MPCR方法.MPCR方法和VITEK Compact 60自动微生物鉴定仪对98株检测菌株菌种鉴定结果一致;MPCR方法检测98株菌万古霉素耐药基因型与药敏检测其耐药表型相对应. 结论 建立的MPCR方法成功用于检测人及动物源肠球菌种属及万古霉素耐药基因型,为快速准确鉴别肠球菌种属及万古霉素耐药肠球菌耐药基因型提供方法,对于有效监测万古霉素耐药肠球菌,控制其传播、流行具有重要意义.     

万古霉素耐药肠球菌的药敏表型及基因特性研究

目的研究万古霉素耐药肠球菌(VRE)的耐药表型和基因特性。方法采用浓度梯度法(E-test)测定VRE对万古霉素(VA)、替考拉宁(TP)的耐药表型;采用聚合酶链反应检测vanA、vanB、vanC1、vanC2、vanC3基因,并对van基因产物进行测序。结果万古霉素耐药基因检测结果:VRE经PCR扩增,均获得vanA基因阳性片段。未检测到vanB、vanCl及vanC2/3基因。结论万古霉素耐药肠球菌的耐药表型与耐药基因型一致,菌株之间有较高的同源性。住院患者肠道中VRE携带率高,是医院感染的危险因素。     

166株分离自前列腺液中肠球菌的耐药性分析

目的监测2000至2004年分离的肠球菌的耐药情况,为治疗其感染提供参考资料。方法采集来我院就诊的1 186例患者的前列腺液标本进行细菌培养,采用生物梅里埃API条进行细菌鉴定,标准纸片扩散法进行耐药性分析。结果1 186例患者中共分离到肠球菌166株,其中粪肠球菌68株,屎肠球菌92株,其他肠球菌6株。耐药性检测结果显示,粪肠球菌对青霉素、氨苄西林、环丙沙星及左氧氟沙星的耐药率分别为48.53%、41.18%、50.00%、47.69%。而屎肠球菌的耐药率则分别为94.38%、90.32%、93.55%、91.95%。氨基糖苷类高水平耐药筛选屎肠球菌耐药率也高于粪肠球菌。肠球菌对万古霉素的耐药性最低,粪肠球菌为0%,屎肠球菌为3.26%。结论肠球菌对临床常用的头孢类抗生素呈天然耐药,万古霉素的敏感性最高,但已有万古霉素耐药菌株出现,耐万古霉素肠球菌（VRE）的出现需要引起高度重视,要防止万古霉素的过度使用,预防VRE的产生。     

滤膜法万古霉素耐药肠球菌转移方式的研究

目的 研究万古霉素耐药肠球菌转座子的转移方式,为临床预防感染和流行病学调查提供依据.方法 滤膜法进行质粒接合转移试验;依据2009年美国临床实验室标准化研究所(CLSI)推荐的纸片扩散法对万古霉素耐药的屎肠球菌进行药敏试验;PCR方法检测接合子耐药基因.结果 40株VRE供体菌均将VanA基因型转移给受体菌粪肠球菌JH2-2,并伴有其他耐药性的同时转移.40株接合子均检测出VanA基因.证实40株VRE全部转移成功.结论 肠球菌携带VanA基因的转座子Tn1546可以通过质粒接合转移试验在种间转移,引起肠球菌耐药播散.接合转移试验是研究肠球菌耐药性转移的重要方法.     

临床血液和尿液样本分离肠球菌毒力基因分析

目的 分析分离自临床血液样本和尿液样本的肠球菌毒力基因携带情况。方法 收集2017—2019年南京医科大学鼓楼临床医学院分离自临床血液样本和尿液样本的粪肠球菌（93株）和屎肠球菌（103株）。采用聚合酶链反应（PCR）检测肠球菌毒力基因（cylA、esp、asa1、hyl、gelE和agg）,比较不同菌种和不同来源菌株毒力基因表达的差异。结果 93株粪肠球菌主要携带asa1(76.3%)、gelE(71.0%)、cylA(64.5%)、esp(60.2%)和agg(22.6%)基因,未检出hyl基因。103株屎肠球菌主要携带esp(68.9%)和hyl(31.1%)基因,未检出cylA、asa1、gelE和agg基因。血液样本分离粪肠球菌以gelE基因检出率（75.0%）最高;尿液样本分离粪肠球菌以asa1基因检出率（85.7%）最高。尿液样本分离粪肠球菌cylA、asa1基因检出率高于血液样本（P<0.05）;屎肠球菌esp基因检出率高于血液样本（P<0.05）。结论 粪肠球菌比屎肠球菌携带更多种毒力因子,不同样本来源肠球菌毒力基因的分布存在差异。     

氨基糖苷类高水平耐药肠球菌的耐药及分子机制的研究

目的分析氨基糖苷类高水平耐药（HighLevelAminoglyeosideResistant,HLAR）肠球菌的耐药性与耐药基因,并研究其耐药分子机制。方法采用VITEK-2全自动鉴定仪法测定53株氨基糖苷类高水平耐药肠球菌对11种抗菌药物的最小抑菌浓度,用聚合酶链反应（PCR）检测肠球菌转座子Tn917和Tnl546／Tn916、红霉素耐药基因er—mB、毒力岛基因mefA、I类整合酶Intll、氯霉素耐药基cat、表面蛋白基因esp,并对万古霉素耐药肠球菌（Vancomy—cin—resistantEnterococc,VRE）进行基因分型（vanA、vanB、vanC）。结果53株肠球菌检出含ermB26株,占49．0％;含mefA9株,占17．0％;含Tnl546／Tn91619株,占35．8％;含Tn91711株,占20．8％;含Intll26株,占49．1％;含esp15株,占28．3％;未检出cat。53株肠球菌对复方新诺明全部耐药,对红霉素耐药高达94．3％,对高水平庆大霉素、高水平链霉素、环丙沙星、四环素和氨苄西林的耐药率分别为75．5％、73．6％、75．5％、66．0％、62．3％;对利奈唑胺和替考拉宁的敏感率高达98．1％;1株耐万古霉素,其基因和表型均为VanA。结论HLAR肠球菌可携带多种耐药基因,耐药基因与肠球菌耐药性密切相关,可能在多重耐药机制中起重要作用。