电针联合丰富康复训练对脑缺血再灌注损伤大鼠海马神经细胞的保护机制

目的:观察电针联合丰富康复训练对脑缺血再灌注损伤大鼠内质网应激(ERS)相关蛋白的影响,探讨电针联合丰富康复训练对脑缺血再灌注损伤大鼠海马神经细胞的保护机制。方法:将108只SD大鼠按照随机数字表法分为正常组(Normal组)、假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、电针组(EA组)、丰富康复训练组(RT组)和电针联合丰富康复训练组(EA+RT组)。使用改良线栓法制作大鼠脑动脉缺血再灌注模型。EA组和EA+RT组造模成功24 h后电针百会、神庭穴;RT组和EA+RT组设置丰富环境并参与多项康复运动。通过水迷宫实验对大鼠的学习记忆能力进行评估;采用TTC染色观察大鼠脑组织梗死体积;TUNEL法检测各组神经细胞凋亡指数;Western blot法检测大鼠脑梗死区组织ERS相关蛋白激酶样内质网激酶(PERK)、增强子结合蛋白环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达、蛋白激酶B(Akt)及磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)水平。结果:与Normal组、Sham组比较,Model组大鼠学习记忆能力下降(P0.01),脑梗死体积、凋亡指数以及PERK、CHOP、Bcl-2及Bax蛋白表达均明显升高(P0.01);3个治疗组与Model组比较,大鼠学习记忆能力上升(P0.01),脑梗死体积、凋亡指数以及PERK、CHOP及Bax蛋白表达明显降低(P0.01),Bcl-2蛋白表达和p-Akt水平均升高(P0.01);EA+RT组分别与EA组和RT组进行比较,发现大鼠学习记忆能力更强(P0.01),脑梗死体积、凋亡指数以及PERK、CHOP及Bax蛋白表达更低(P0.05),Bcl-2蛋白表达和p-Akt水平更高(P0.01);Normal组与Sham组比较、EA组与RT组比较,各项指标差异均无统计学意义(P0.05)。结论:电针联合丰富康复训练对于缺血再灌注损伤有良好的治疗效果,优于单一使用电针或丰富康复训练治疗,其作用可能是通过抑制ERS相关蛋白PERK、CHOP及Bax的释放和激活,上调抗凋亡蛋白Bcl-2表达和p-Akt水平,干预ERS介导的凋亡通路,降低细胞凋亡率,从而使大脑神经受到保护作用。     

蛇床子素后处理对大鼠心肌急性缺血/再灌注损伤心肌细胞凋亡的影响及其可能机制

目的观察蛇床子素后处理对大鼠心肌急性缺血/再灌注损伤心肌细胞凋亡的影响,并对其可能的作用机制进行探讨。方法结扎大鼠左冠状动脉前降支30 min后,松开结扎线再灌注120 min制备急性心肌缺血/再灌注损伤模型;将30只Wistar大鼠随机分为以下3组:对照(Sham)组、缺血/再灌注(I/R)组、I/R+蛇床子素后处理(Ost)组。采用TUNEL法原位标记缺血区凋亡心肌细胞并计算凋亡指数,采用Western blot法检测心肌组织中Caspase-3、Bcl-2及Bax三种蛋白的表达。结果与Sham组相比,I/R组心肌细胞凋亡指数、心肌组织Caspase-3蛋白、Bcl-2蛋白和Bax蛋白含量明显增高(均P<0.05);与I/R组相比,Ost组心肌细胞凋亡指数(P<0.05)、心肌组织Caspase-3蛋白(P<0.01)及Bax蛋白表达水平均降低(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达水平明显增高(P<0.05)。结论蛇床子素后处理能抑制急性心肌缺血/再灌注损伤所致的大鼠心肌细胞凋亡,同时上调心肌组织中Bcl-2蛋白的表达及下调心肌组织中Bax蛋白的表达,提示上调Bcl-2蛋白及下调Bax蛋白、进而上调Bcl-2/Bax比值可能是其发挥抗心肌细胞凋亡作用的机制。     

人血管内皮生长因子165和人组织基质金属蛋白酶抑制剂1基因过表达对心肌梗死大鼠的作用

目的探讨携带人血管内皮生长因子165(vascular endothelial growth factor 165, VEGF165)的重组腺病毒(Ad-hVEGF165)和携带人组织基质金属蛋白酶抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinase 1, TIMP-1)的重组腺病毒(Ad-hTIMP-1)对心肌梗死大鼠的作用及可能机制。方法健康雄性清洁级8周龄Wistar大鼠30只,采用随机数字表法随机分为5组,假手术组(Sham),空载病毒对照组(Ad-Track),Ad-hVEGF165组,Ad-hTIMP-1和双基因组(hVEGF165+hTIMP-1),每组6只。除Sham组外,各组大鼠均结扎冠状动脉左前降支建立心肌梗死模型,以心电图出现ST段弓背抬高,Q波或T波倒置,局部心肌变白为模型成功。分别在心肌梗死区域四点注射相应重组腺病毒病毒生理盐水稀释液100 μL(1×1010 VP/100 μL);Sham组未予任何处理。4周后实验动物完成超声心动图检测后处死取心脏组织。免疫组织化学检测大鼠心肌组织hVEGF165和hTIMP-1基因表达;实时荧光定量PCR检测各组大鼠心肌组织凋亡相关因子mRNA表达;免疫组织化学检测各组大鼠心肌组织凋亡相关因子蛋白表达。正态分布计量资料多组间均数比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。结果超声心动图检测结果显示:Ad-Track组心率(heart rate,HR)(480.83±24.09)次/min、左室舒张末径(left ventricular end-diastolic dimension,LVEDD)(6.88±0.44)mm、左室收缩末径(left ventricular end-systolic dimension,LVESD)(4.85±0.42)mm均较Sham组(433.16±17.86)次/min、(6.20±0.45)mm、(4.06±0.70),增加(P<0.05),左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)(62.70±3.17)、左室短轴缩短率(left ventricular fractional shortening,LVFS)(29.52±1.88)%均较Sham组(72.78±5.44)%、(37.20±4.71)%显著降低(P<0.01);hVEGF165-hTIMP-1组LVEF(71.50±6.23)%、LVFS(36.17±5.27)%均显著高于Ad-Track组(P<0.01),LVEDD(6.22±0.39)mm、LVESD(4.13±0.23)mm均低于Ad-Track组(P<0.05);hVEGF165-hTIMP-1组LVEF、LVFS均高于Ad-hVEGF165组(64.65±4.00)%、(30.95±2.57)%(P<0.05)。实时荧光定量PCR结果显示:hVEGF165-hTIMP-1组心肌组织Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Bal-xl/Bcl-2相关死亡促进因子(Bad)mRNA表达均较Ad-Track组降低(P<0.01或P<0.05),B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)mRNA表达均较Ad-Track组升高(P<0.01);hVEGF165-hTIMP-1组心肌组织Bax、Caspase-3 mRNA表达较Ad-hVEGF165组降低(P<0.05)。hVEGF165-hTIMP-1组心肌组织Bax、Caspase-3、Bad、Bcl-2 mRNA表达与Sham组差异无统计学意义(均P>0.05)。免疫组织化学结果显示:hVEGF165-hTIMP-1组Bax和Caspase-3蛋白表达较Ad-hVEGF165组、Ad-hTIMP-1组及Ad-Track组显著降低(均P<0.01),Bcl-2蛋白表达较Ad-hVEGF165组、Ad-hTIMP-1组及Ad-Track组升高(均P<0.05)。与Sham组比较,hVEGF165-hTIMP-1组Bax、Caspase-3、Bcl-2蛋白表达差异无统计学意义(均P>0.05)。结论联合hVEGF165和hTIMP-1基因过表达可改善大鼠心肌梗死后心脏收缩功能,其机制可能与抑制心肌细胞凋亡相关,且hVEGF165和hTIMP-1联合可能具有协同作用。     

电针对脑缺血大鼠海马神经元凋亡的影响

目的：探讨电针对脑缺血大鼠海马神经元凋亡的作用及可能内在机制。方法：将90只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组、电针+PKA抑制剂（H89）组和电针+生理盐水（NS）组,每组又分为7d、14d、21d 3个亚组。制备双侧颈总动脉永久性结扎（2VO）模型;电针百会穴（GV20）和大椎穴（GV14）;通过TUNEL法和免疫蛋白印迹法观测海马神经元凋亡及Bax蛋白、Bcl-2蛋白表达量。结果：各组大鼠组内3个时间点间的海马神经元凋亡率相比,模型组14d组、21d组较7d组显著增加（P<0.05）;其余各组各时间点差异均无统计学意义。凋亡相关蛋白表达量比较,电针组21d组较14d组Bcl-2蛋白量显著增多（P<0.05）。其余各组各个评价指标在3个时间点比较差异无统计学意义。同时间点各组大鼠间海马神经元凋亡率比较,模型组较假手术组均显著增加（P<0.05）;电针组较模型组均显著降低（P<0.05）;电针+H89组较电针+NS组均显著增多（P<0.05）。同时间点各组大鼠间的凋亡相关蛋白表达量比较,模型组较假手术组Bax蛋白量均显著增高（P<0.05）,而Bcl-2蛋白量均显著降低（P<0.05）;电针组较模型组Bax蛋白量均显著降低（P<0.05）,而Bcl-2蛋白量均显著增加（P<0.05）;电针+H89组较电针+NS组Bax蛋白量均明显增多（P<0.05）,而Bcl-2蛋白量明显降低（P<0.05）,但在14d时2组Bc-2蛋白表达差异无显著统计学意义。结论：电针百会穴和大椎穴可抑制Bax蛋白表达,促进Bcl-2蛋白表达而减轻脑缺血大鼠海马神经元凋亡,给予H89后电针的作用被抑制,说明电针抗凋亡作用的内在机制可能与激活PKA-CREB信号通路相关。     

乌司他丁对百草枯中毒大鼠肺细胞自噬和凋亡的影响

目的 观察在急性百草枯中毒大鼠经过乌司他丁(UTI)治疗后,肺细胞中自噬和凋亡的变化.方法 将150只Wistar大鼠按计算机生成的随机排列表法分为3组,每组50只.对照组(con组)则一次性给予1 mL生理盐水灌胃,之后每日2次腹腔注射1 mL生理盐水;采用一次性灌胃40 mg/kg PQ溶液1 mL制备PQ染毒模型,之后每日1次腹腔注射1 mL生理盐水;PQ染毒UTI治疗组大鼠给予UTI(12万U/kg)腹腔注射(2次/d);染毒后第7天留取肺脏组织,行肺部HE染色观察肺组织形态,免疫组织化学法检测肺组织LC3和Bcl-2的表达,Western blot检测肺组织中LC3、Bax、Bcl-2蛋白的表达.结果 HE染色结果显示,Con组大鼠肺组织形态正常;PQ染毒组肺组织结构部分破坏,部分肺泡壁塌陷,部分肺泡腔扩大,局部炎细胞浸润.可见肺泡隔显著增厚,明显的局部出血;UTI治疗组肺组织结构破坏较轻.Western blot结果显示,与Con组相比,PQ组LC3 A/B蛋白含量表达增高且差异具有统计学意义[LC3表达量(A值):0.22±0.05vs.0.14±0.03,F=22.48,P＜0.01];与PQ组相比,PU组中LC3 A/B蛋白含量表达增高差异有统计学意义[LC3表达量(A值):0.36±0.08vs.0.22±0.05,F=22.78,P＜0.01].与Con组相比,PQ组Bcl-2/Bax蛋白含量表达明显降低差异有统计学意义[Bcl-2/Bax表达量(A值):0.11±0.04vs.0.83±0.09,F=154.43,P＜0.01];与PQ组相比,PU组中Bcl-2/Bax蛋白含量表达增高差异有统计学意义[Bcl-2/Bax表达量(A值):0.63±0.08vs.0.11 ±0.04,F=154.43,P＜0.01].免疫组化结果显示:与Con组相比,PQ组LC3、Bcl-2蛋白含量表达降低有统计学意义(LC3A值:78.34±10.71vs.117.58±15.26,F=31.63,P＜0.01) (Bcl-2A值:62.54±9.74vs.130.52±9.86,F=118.44,P＜0.01);与PQ组相比,PU组LC3、Bcl-2蛋白表达量增高差异有统计学意义(LC3A值:162.58±25.76 vs.78.34±10.71,F=31.63,P＜0.01) (Bcl-2A值:145.56±10.26vs.62.54±9.74,F=118.44,P＜0.01).结论 急性PQ中毒大鼠肺组织发生内质网应激-自噬.UTI治疗急性PQ中毒时可通过调节自噬,增加Bcl-2的表达,提高Bcl-2/Bax比例来保护肺组织.     

p38 MAPK在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的作用

目的探讨p38 MAPK在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用及可能机制。方法雄性SD大鼠随机分为5组:空白对照组、假手术组、缺血再灌注组、给药组及溶媒组。除对照组及假手术组外各组采用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型。给药组和溶媒组分别侧脑室注射p38 MAPK特异性抑制剂SB202190及1%DMSO。每组分别进行行为学评分和检测Bcl-2、Bax表达的变化。结果①行为学结果:空白对照组及假手术组,缺血再灌注后24 h大鼠神经功能评分降低,给药组大鼠神经功能评分高于缺血再灌注组,有统计学差异(P<0.01)。②免疫印迹检测结果:空白对照组及假手术组可见少量Bcl-2、Bax蛋白表达,两组间无统计学差异(P>0.05);缺血再灌注组再灌注后24 h可见Bcl-2表达减少,但与空白对照组及假手术组相比无统计学差异(P>0.05),而再灌注后24 h可见Bax蛋白表达明显增加,与空白对照组及假手术组相比有统计学差异(P<0.05);给药组与缺血再灌注组相比再灌注后24 h可见Bax蛋白表达明显减少(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达明显增加(P<0.05)。结论抑制p38 MAPK激活可以减轻大鼠脑缺血再灌注时的脑神经元的凋亡。     

右美托咪定对老年小鼠剖腹探查术所致神经元凋亡的影响

目的:探讨右美托咪定对老年小鼠剖腹探查术所致神经元凋亡的影响。方法:将40只16月龄的C57BL/6老年小鼠根据随机数字表随机分成4组:控制对照组(Con组)、右美托咪定组(Dex组)、手术组(Surgery组)、右美托咪定+手术组(Dex+Surgery组),每组10只。Con组腹腔注射等体积0.9%生理盐水;Dex组腹腔注射25μg/kg右美托咪定;Surgery组行剖腹探查术;Dex+Surgery组在行剖腹探查术前20分钟预先腹腔注射25μg/kg右美托咪定。手术结束6小时后,使用TUNEL试剂盒检测海马CA1区和DG区的神经元凋亡情况。用Western blot法检测海马凋亡相关蛋白表达情况(包括cleaved caspase-3、calpain 2、Bax、Bcl-2)。结果:与Con组相比,Surgery组老年小鼠海马CA1区和DG区TUNEL阳性细胞数明显增加(P<0.05),而与Surgery组相比,Dex+Surgery组老年小鼠海马CA1区和DG区TUNEL阳性细胞数明显降低(P<0.05)。Con组与Dex组海马CA1区和DG区TUNEL阳性细胞数无统计学差异(P>0.05)。与Con组相比,Surgery组cleaved caspase-3(P<0.05)、calpain 2(P<0.05)、Bax(P<0.05)表达明显升高,而Bcl-2(P<0.05)表达下降,与Surgery组相比,Dex+Surgery组cleaved caspase-3(P<0.05)、calpain 2(P<0.05)、Bax(P<0.05)表达明显下降,而Bcl-2(P<0.05)表达升高。Con组与Dex组海马cleaved caspase-3、calpain 2、Bax、Bcl-2无统计学差异(P>0.05)。结论:右美托咪定能抑制老年小鼠剖腹探查术所致神经元凋亡。     

氧化修饰高密度脂蛋白对大鼠颗粒细胞激素分泌的影响及相关机制

目的研究氧化修饰高密度脂蛋白(Ox-HDL)对大鼠颗粒细胞激素分泌的影响及相关机制。方法 30只6周龄SPF级SD雌性大鼠经适应性饲养5 d后,采用孕激素拮抗剂米非司酮进行多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠造模。随机选择25只雌鼠,每天对大鼠进行1次皮下注射,每次剂量0.2 mL米非司酮(20 mg/mL),连续14 d。其余5只雌鼠作为对照组。选择造模成功的15只雌鼠,分为模型组,低剂量组及高剂量组,每组5只。对照组及模型组大鼠尾静脉注射0.05 mL生理盐水,连续14 d。低剂量组和高剂量组每天尾静脉注射0.05 m L Ox-HDL溶液(浓度分别为200、400μmol/L),连续14 d。并收集大鼠卵巢颗粒细胞。采用ELISA试验检测大鼠血清雌激素及孕酮水平;采用HE染色检测Ox-HDL对PCOS卵巢病理形态的影响观察;采用Hoechest33258凋亡染色检测大鼠颗粒细胞凋亡水平的影响;采用RT-PCR法检测Ox-HDL对大鼠颗粒细胞Bcl-2、FSHR、StAR及Bax基因表达的作用;采用Western blot法检测Ox-HDL对大鼠颗粒细胞Bcl-2、FSHR、StAR及Bax蛋白表达的作用。结果 PCOS大鼠在Ox-HDL作用后,雌激素及孕酮水平均下降差异有统计学意义(P<0.05),高剂量组的雌激素及孕酮均显著低于其它各组差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色发现PCOS大鼠给予高剂量Ox-HDL后,囊肿卵泡进一步增多,颗粒细胞排列较为疏松,大鼠卵巢病理症状有一定加剧。Hoechest33258凋亡染色检测发现高剂量组细胞凋亡水平显著高于其它各组(P<0.05)。RT-PCR实验发现发现Ox-HDL可抑制颗粒细胞Bcl-2、FSHR、StAR基因的mRNA表达水平差异有统计学意义;Ox-HDL可促进颗粒细胞Bax基因的mRNA表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。Western blotting实验发现发现Ox-HDL可抑制颗粒细胞Bcl-2、FSHR、StAR蛋白表达水平;Ox-HDL可促进颗粒细胞Bax蛋白表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Ox-HDL可促使PCOS大鼠卵巢病理症状加剧,诱导颗粒细胞发生凋亡,并导致颗粒细胞激素分泌能力紊乱。     

Bcl-2、Bax、Caspase-3表达与颞叶癫癎发病的相关性研究

目的:探讨神经元凋亡与颞叶癫癎患者海马硬化的关系。方法:取15例颞叶癫癎患者手术切除标本(癫癎组)和5例无癫癎发作的患者正常脑组织标本(对照组),用原位末端标记(TUNEL)方法检测神经元凋亡,免疫组化染色检测细胞凋亡相关基因表达产物Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达。结果:癫组和对照组的TUNEL阳性细胞平均百分率分别为(52.2±3.2)%、(4.0±1.8)%,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化染色结果表明,对照组患者脑组织内Bcl-2蛋白无表达,癫癎组患者脑内Bcl-2蛋白表达明显增强(P<0.05);Bax蛋白在癫癎组与对照组中均微弱表达,差异无统计学意义;Caspase-3在对照组中有轻微表达,在癫癎组表达明显增强,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:神经元凋亡部分参与癫癎患者海马硬化的形成,Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白在这一过程中可能发挥作用。     

表儿茶素对大鼠缺血再灌注后神经元凋亡及Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白的影响

目的:研究表儿茶素(EC)对大鼠缺血再灌注后缺血侧脑皮质神经元凋亡及Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白的影响。方法:将SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(I/R组)、EC5mg/kg组、EC10mg/kg组、EC20mg/kg组、依达拉奉(ED)3 mg/kg组,每组9只。除Sham组外,其余组采用线栓法制备大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,缺血2 h,于再灌注后0 h、12 h、24 h三个时间点给药,第12 h、24 h进行神经功能评分,第36 h取脑称重,应用缺口末端标记法(TdT-mediated d UTP nick end labeling,TUNEL)检测缺血侧脑皮质区神经元凋亡情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax、Bcl-2的表达情况。结果:与Sham组比较,I/R组神经功能评分显著升高(P0.05),脑指数无明显差异,凋亡指数明显增大(P0.05),Caspase-3、Bax蛋白表达显著增加(P0.05),Bcl-2蛋白表达显著减少(P0.05)。与I/R组比较,EC5mg/kg组、EC10mg/kg组、EC20mg/kg组、ED3mg/kg组脑指数无明显差异,凋亡指数明显减小(P0.05),Caspase-3蛋白表达明显减少(P0.05),Bcl-2蛋白表达显著增加(P0.05),EC10 mg/kg组、EC20 mg/kg组、ED3mg/kg组神经功能评分显著降低(P0.05),Bax蛋白表达明显减少(P0.05)。结论:表儿茶素可增强大鼠脑缺血再灌注后抗凋亡能力,可能与减少Caspase-3、Bax蛋白表达,增加Bcl-2蛋白表达有关。     

The effect of Ulinastatin on myocardial cell apoptosis and Caspase-3 channel北大核心CSCD

Objective To investigate the effect of ulinastatin on myocardial injury in rats with sepsis. Methods Thirty male SD rats were randomly (random number) divided into 3 groups: sham operation group (Sham group, n=\0), sepsis group (sepsis group, n=10) and ulinastatin group (UTI group, n=10). The sepsis model of the rats was subjected to cecal ligation and puncture (CLP). Rats of UTI group were given 200 000 U/kg ulinastatin at 6 hour after modeling, and dosing was repeated every 12 h. Blood samples were collected from inferior vena cava at 6, 12, 24, 36 h after modeling for determination of cardiac troponin-I (cTnl) and the inflammatory factor by ELISA, then the rats were sacrificed and hearts were removed for myocardial tissue stained with hematoxylin eosin (HE) staining, the expression of Bax/Bcl-2 protein level and myocardial cell apoptosis were detected by TUNEL. The level of caspase-3 protein in myocardial tissue was detected by Western-blot. Results The level of cTnl (ng/mL ) in serum in UTI group at 6, 12, 24 and 36 h after modeling were significantly lower compared with sepsis group(P<0.05). The protein expression levels of TNF-a and IL-6 (ng/mL) in group UTI were higher than those in Sham group, but was significantly lower than those in Sepsis group (PO.05). HE staining showed that inflammatory cell infiltration present in myocardial cells, edema and vacuole formation were observed in sepsis group, while those were significantly attenuated in UTI group compared with sepsis group. UTI increased the level of myocardial Bcl-2 protein in the rats (P<0.05), and reduced the level of myocardial Bax protein (P<0.05). TUNEL and HE staining showed apoptosis cells in UTI group was significantly reduced compared with sepsis group [(32.24.8)% vs. (58.45.6)%, P<0.05]; Western-blot method showed the level of Caspase-3 protein in UTI group was higher than that in group sham (0.320.048) vs. (0.12.03), P<0.05], but significantly lower than that of Sepsis group [(0.320.048) vs. (0.550.052), PO.05]. Conclusions Ulinastatin can reduce proinflammatory mediators release in the blood of sepsis rats, and inhibit the apoptosis of myocardial cells protecting myocardial cells through the regulation of the Caspase-3 pathway during sepsis. © 2018 Chinese Medical Association. All Rights Reserved.     

脉冲电磁场对去卵巢骨质疏松症大鼠成骨细胞和破骨细胞凋亡的影响

目的观察脉冲电磁场（PEMF）对去卵巢骨质疏松症（OVX-OP）大鼠成骨细胞、破骨细胞凋亡的影响，并探讨PEMF治疗OVX-OP的作用机制。方法取6月龄雌性未孕Wistar大鼠40只，随机分为假手术组、卵巢切除组（模型组）、卵巢切除＋雌激素替代治疗组（雌激素组）和卵巢切除＋PEMF治疗组（电磁场组）。模型组、电磁场组和雌激素组均行双侧卵巢切除术，假手术组不切除卵巢。术后第9周开始治疗：雌激素组采用苯甲酸雌二醇肌肉注射，剂量为0．5mg／kg体重，每2周注射1次；电磁场组大鼠暴露于PEMF中，每日1次，每次1h。模型组和假手术组动物不予以任何治疗。治疗10周后处死各组实验动物，取左侧胫骨上1／3进行骨形态计量学检查。采用原位DNA末端标记染色法（TUNEL法）和透射电镜检测L6椎体成骨细胞、破骨细胞的凋亡情况。采用免疫组织化学法检测k椎体成骨细胞、破骨细胞中Fas、Bax和Bcl-2的表达。结果①透射电镜观察显示，电磁场组成骨细胞活性增强，无明显凋亡征象；而破骨细胞活性减弱，可见典型细胞凋亡征象。②电磁场组的成骨细胞凋亡指数明显低于模型组（P〈0．05），而破骨细胞凋亡指数明显高于模型组（P〈0．05）。③电磁场组Fas阳性成骨细胞数明显少于模型组，Fas阳性破骨细胞数明显多于模型组（P〈0．05），成骨细胞Bax／Bcl-2显著降低（P〈0．05），破骨细胞Bax／Bcl-2显著增高（P〈0．05）。④电磁场组OVX-OP大鼠骨小梁面积百分数、骨小梁厚度、骨小梁数量明显高于模型组，而骨小梁分离度明显低于模型组（P〈0．05）。结论PEMF对OVX-OP大鼠成骨细胞凋亡具有抑制作用，对破骨细胞凋亡具有促进作用，汶可能县苴治疗OVX-0P的机制之一。     

氢吗啡酮后处理经PI3K/Akt通路减轻大鼠心肌缺血-再灌注细胞凋亡

目的:探讨PI3K/Akt信号通路在氢吗啡酮后处理减轻大鼠心肌缺血-再灌注细胞凋亡中的作用。方法:健康雄性SD大鼠40只,按照随机数表法随机分为5组,每组8只,假手术组（Sham组）、缺血-再灌注组（I/R组）、缺血-再灌注+氢吗啡酮组（I/R+H组）、缺血-再灌注+PI3K抑制剂组（I/R+W组）、缺血-再灌注+氢吗啡酮+ PI3K抑制剂组（I/R+ H+ W组）。采用左冠状动脉前降支结扎30 min、再灌注120 min的方法建立心肌缺血-再灌注损伤模型。实验结束后,用TTC染色法测心肌梗死面积;用比色法检测血清乳酸脱氢酶（LDH）漏出量;末端标记法（TUNEL）测心肌细胞凋亡;Western blot法检测p-Akt、Bcl-2、Bax蛋白表达。采用SPSS 13.0软件行统计分析。采用单因素方差分析进行组间比较。结果:与Sham组比较,I/R组心肌梗死面积、血清LDH漏出量及心肌细胞凋亡增多,p-Akt表达和Bax表达上调,Bcl-2表达下调（ P<0.05）;与I/R组比较,I/R+H组心肌梗死面积、血清LDH漏出量及心肌细胞凋亡减少,心肌p-Akt及Bcl-2表达上调,Bax表达下调（ P<0.05）;与I/R+H组比较,I/R+H+W组心肌梗死面积、血清LDH漏出量及心肌细胞凋亡增多,p-Akt表达和Bcl-2表达下调,Bax表达上调（ P<0.05）。 结论:氢吗啡酮后处理可减轻心肌缺血-再灌注引起的心肌细胞凋亡,其心肌保护机制可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。     

葛根素对心肌缺血再灌注大鼠心肌组织Bcl-2、Bax和Caspase-3表达水平的影响

目的探讨葛根素对心肌缺血再灌注大鼠心肌组织细胞凋亡的影响。方法以雄性Wistar大鼠为研究对象,将实验动物分为5组：即假手术组、心肌缺血再灌注模型组（I/P）、葛根素2mg/Kg给药组（A组）、葛根素5mg/Kg给药组（B组）和葛根素10mg/Kg给药组（C组）。采用结扎大鼠冠状动脉左前降支（LAD）的方法,建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型;采用免疫组织化学方法检测,大鼠心肌组织中Bcl-2、Bax和Caspase-3的蛋白含量采用RT-PCR法,检测大鼠心肌组织中Bcl-2、Bax和Caspase-3mRNA的表达水平。结果与假手术组相比较,心肌缺血再灌注模型组Bcl-2、Caspase-3的蛋白含量和Bcl-2、Caspase-3mRNA的表达水平均显著降低（P〈0.01）,而Bax的蛋白含量和BaxmRNA的表达水平均显著升高（P〈0.01）;B、C组Bcl-2、Bax、Caspase-3的蛋白含量和Bcl-2、Bax、Caspase-3mRNA的表达水平均未见显著差异（P〉0.01）;A组Bcl-2、Caspase-3的蛋白含量和Bcl-2、Caspase-3mRNA的表达水平均显著降低（P〈0.01）,而Bax的蛋白含量和Bax mRNA的表达水平均显著升高（P〈0.01）。结论葛根素能够通过提高Bcl-2、Caspase-3的表达及降低Bax的表达调控心肌组织细胞的凋亡,从而起到保护心肌组织的功能。     

氨甲酰化促红细胞生成素逆转慢性心力衰竭大鼠左室重构的研究

目的:探讨氨甲酰化促红细胞生成素(CEPO)对慢性心力衰竭(CHF)大鼠左心室重构的影响。方法:健康雄性Wistar大鼠90只,随机选取10只作为对照组,其余腹腔注射异丙肾上腺素(ISO)进行造模。5周后将造模成功者再分为CHF组和CEPO组,后者腹腔注射CEPO50μg/kg,2次/周,CHF组和对照组同期腹腔注射等量生理盐水,4周后检测各组大鼠血流动力学指标、血浆B型脑钠肽(BNP)水平,并计算左心室重量指数(LVW/BW)。结果:与对照组相比,CHF组左室内压峰值(LVSP)、左室内压上升/下降最大速率(±dp/dtmax)显著降低,左室舒张末压(LVEDP)显著升高(P<0.05),血浆BNP水平显著升高(P<0.05),LVW/BW也显著升高(P<0.05)。与CHF组相比,CEPO组LVSP、±dp/dtmax均显著升高,而LVEDP则显著降低(P<0.05),血浆BNP水平显著降低(P<0.01),LVW/BW也显著降低(P<0.05)。结论:CEPO可通过降低血浆BNP水平、减轻左心室重构来改善CHF大鼠的心功能。     

Effect of exogenous phosphocreatine on cardiomycytic apoptosis and expression of Bcl-2 and Bax after cardiopulmonary resuscitation in rats

BACKGROUND:

Ischemia-reperfusion injury in the myocardium after cardiac arrest (CA) and cardiopulmonary resuscitation (CPR) is an important pathologic basis of post-cardiac arrest of syndrome (PCAS), and apoptosis is one of the major mechanisms in myocardial ischemia-reperfusion injury. To lessen myocardial ischemia-reperfusion injury after cardiac arrest and CPR, it is important to reduce energy consumption and to increase energy supply in the myocardium. This study aimed to observe changes of cell apoptosis and expression of Bcl-2 and Bax protein on the myocardium after CPR in rats, and the protective effects of different doses of exogenous phosphocreatine (creatine phosphate, CP) on them.

METHODS:

A total of 32 male adult Sprague-Dawley rats were randomly divided into 4 groups: control group (group A), CPR group (group B), low-dose CP group (group C, CP 0.5 g/kg at beginning of CPR and 1.0 g/kg at 2 hours after CPR) and high-dose CP group (group D, CP 1.0 g/kg at beginning of CPR and 2.0 g/kg at 2 hours after CPR). Cardiac arrest was induced by asphyxiation and CPR started at 7 minutes after asphyxiation in groups B, C and D. Myocardium samples were taken at 24 hours after CPR. Cardiomycytic apoptosis was detected by the TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling (TUNEL) method. The expression of Bcl-2 and Bax protein was measured by immunohistochemistry.

RESULTS:

Cardiomyocytic apoptosis index (AI) and expression of Bcl-2 and Bax protein increased more significantly in groups B, C and D than in group A (P<0.01), but Bcl-2/Bax ratio significantly decreased (P<0.01). Cardiomyocytic AI and expression of Bcl-2 and Bax protein decreased more significantly in groups C and D than in group B (P<0.01), but Bcl-2/Bax ratio increased more significantly (P<0.01). Cardiomyocytic AI and expression of Bcl-2 and Bax protein decreased more significantly in group D than in group C (P<0.05), but Bcl-2/Bax ratio increased more significantly (P<0.05).

CONCLUSION:

Exogenous phosphocreatine, especially at a large dose, could inhibit cardiomyocytic apoptosis and alleviate myocardial injury after CPR in rats.KEY WORDS: Cardiopulmonary resuscitation, Phosphocreatine, Apoptosis, Bcl-2, Bax, TUNEL     

莫诺苷对心肌梗死模型大鼠心肌纤维化的改善及作用机制研究

目的探究莫诺苷对心肌梗死模型大鼠心肌纤维化的改善及相关作用机制。方法选取50只SD健康雄性大鼠,10只为正常组,其余40只建立心肌梗死模型,并分为模型组、低、中、高剂量组。正常组、模型组使用0.9%氯化钠溶液进行灌胃处理,低、中、高剂量大鼠分别使用30、60、120 mg/kg莫诺苷溶液进行灌胃处理。检测各组大鼠心肌梗死面积、心肌细胞凋亡指数;酶联免疫吸附实验法检测各组大鼠白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-17(IL-17)水平,免疫透射比浊法检测各组大鼠超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平;蛋白质印迹法检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)及Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)、Smad3、Smad2、转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白相对表达水平。结果与正常组比较,模型组、低、中、高剂量组大鼠心肌梗死面积、心肌细胞凋亡指数显著升高,差异有统计学意义(P <0.05);与模型组比较,低、中、高剂量组大鼠心肌梗死面积、心肌细胞凋亡指数显著降低,且高剂量组较低、中剂量组降低更明显,差异有统计学意义(P <0.05)。与正常组比较,模型组、低、中、高剂量组大鼠IL-8、IL-17、hs-CRP水平显著升高,差异有统计学意义(P <0.05);与模型组比较,低、中、高剂量组大鼠IL-8、IL-17、hs-CRP水平显著降低,且高剂量组较低、中剂量组降低更明显,差异有统计学意义(P <0.05)。与正常组比较,模型组、低、中、高剂量组大鼠Bcl-2、Caspase-3、Smad3、Smad2、TGF-β1相对表达水平显著升高,Bax相对表达水平显著降低,差异有统计学意义(P <0.05);与模型组比较,低、中、高剂量组大鼠Bcl-2、Caspase-3、Smad3、Smad2、TGF-β1相对表达水平显著降低,Bax相对表达水平显著升高,差异有统计学意义(P <0.05);且高剂量组较低、中剂量组变化更明显,差异有统计学意义(P <0.05)。结论使用莫诺苷干预后,心肌梗死大鼠心肌梗死面积缩小、心肌细胞凋亡指数下降,能够抑制心肌细胞凋亡,减轻心肌组织炎症反应及心肌纤维化,且作用呈剂量依赖性。     

miR-22修饰的骨髓间充质干细胞外泌体抑制急性心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡

目的探讨miR-22修饰的骨髓间充质干细胞(BMSCs)外泌体对急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌细胞凋亡的作用及其机制。方法扩增培养从SD大鼠骨髓中分离的BMSCs,将携带miR-22重组慢病毒载体及其阴性对照(miR-NC)载体分别转染至BMSCs,并提取转染后BMSCs的外泌体。将60只SD大鼠随机分为Sham组、AMI组、Exo BMSCs组、Exo BMSCs/miR-NC组和Exo BMSCs/miR-22组,每组12只。采用冠状动脉左前降支结扎术构建AMI大鼠模型,于心肌梗死区原位注射外泌体进行干预。干预72 h后,采用超声心动图监测大鼠心脏功能;TTC染色观察大鼠心肌梗死情况;TUNEL染色观察心肌细胞凋亡水平;qRT-PCR检测心肌组织中miR-22及p53 mRNA表达水平;Western blot检测心肌组织中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶剪切体(Cleaved-caspase-3)及p53蛋白表达水平。结果与Sham组比较,AMI组大鼠心脏功能明显降低(P <0.05),心肌梗死面积(%:1.16±0.84 vs.38.68±5.31)和心肌细胞凋亡率(%:9.04±1.95 vs.66.70±5.92)明显增加(P <0.05),心肌组织中miR-22和Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P <0.05),而p53、Bax和Cleavedcaspase-3等蛋白表达水平明显升高(P <0.05);与AMI组比较,各外泌体干预组大鼠心功能明显改善(P <0.05),心肌梗死面积(%:38.68±5.31 vs.23.54±3.94,22.33±4.12,13.79±2.25)和心肌细胞凋亡率(66.70±5.92 vs.43.73±3.39,42.67±2.87,30.73±2.97)明显降低(P <0.05),心肌组织中miR-22以及Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P <0.05),而p53、Bax和Cleaved-caspase-3等蛋白表达水平明显降低(P <0.05),其中Exo BMSCs/miR-22组大鼠各指标改善情况均优于Exo BMSCs组和Exo BMSCs/miR-NC组。结论 miR-22修饰的BMSCs外泌体可有效抑制p53介导的心肌细胞凋亡,从而改善AMI大鼠的心功能。