蛋白激酶C抑制剂诱导CNE—2Z细胞凋亡的研究

目的和方法：采用蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）催化区抑制剂ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ（ＳＴ）、调节区抑制剂ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ（ＳＳ），诱导ＣＮＥ—２Ｚ细胞２４ｈ。结果：（１）ＳＴ、ＳＳ对细胞ＤＮＡ裂解的影响均随浓度增高而逐步增强，作用明显的终浓度分别为１×１０６ｍｏｌ／Ｌ和４×１０５；（２）核形态观察：诱导后部分细胞核变小，核浓缩及核碎裂；（３）ＤＮＡ琼脂糖电泳：诱导后的细胞有典型梯状ＤＮＡ条带；（４）流式细胞仪分析：诱导组Ｇ１期前均有ＤＮＡ亚二倍体峰，即凋亡峰。细胞周期改变：ＳＴ使Ｇ２期增加、Ｇ１、Ｓ期减少；ＳＳ使Ｓ期增加和Ｇ１期减少。结论：ＰＫＣ抑制剂可有效地促进ＣＮＥ－２Ｚ细胞凋亡，但与抑制剂剂量有关，细胞周期的改变可能在ＰＫＣ抑制剂诱导的细胞凋亡中起重要作用。     

蛋白激酶C亚型在鼻咽癌细胞中的分布及在增殖中的作用

本文检测了人低分化鼻咽癌上皮细胞系（ＣＮＥ－２Ｚ）颗粒部分与胞浆部分ＰＫＣ的三种主要亚型的含量和分布。结果发现：（１）ＣＮＥ－２Ｚ细胞的颗粒部分中ＰＫＣ－Ⅱ型相对较少，而ＰＫＣ－Ⅰ，Ⅲ型则相对较多；（２）随ＴＰＡ浓度增大，ＰＫＣ总量及颗粒部分的ＰＫＣ－Ⅲ下降明显，细胞的生长也受抑制，１０－６ｍｏｌ／Ｌ时，ＰＫＣ－Ⅲ仅为对照的３５．６％，抑制率达６０％；（３）随ＴＰＡ作用时间延长，ＰＫＣ总量及颗粒部分的ＰＫＣ－Ⅲ下降明显，ＰＫＣ－Ⅲ的变化自１５ｍｉｎ时开始，１２０ｍｉｎ时仅为对照的１８．６％；在１３ｈ后，细胞增殖出现抑制，２６ｈ抑制率达５５％。结果提示，ＰＫＣ在ＣＮＥ－２Ｚ细胞中以Ⅰ，Ⅲ型含量较多，尤其ＰＫＣ－Ⅲ对生长起重要作用。     

缺氧对肺动脉平滑肌细胞增殖的影响及其传递途径

本文观察了低氧对离体培养成年牛肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）＾３Ｈ－ＴｄＲ参入的影响，并用异搏定、Ｈ７、ＰＭＡ和ＥＧＦ进行干预实验，对ＭＳＣ增殖中信息传递途径作了初探。结果显示：（１）缺氧２４ｈ，ＰＡＳＭＣ＾３Ｈ－ＴｄＲ参入显著增高。（２）异搏定及Ｈ７显著降低低氧Ｈ－ＳＭＣ＾３Ｈ－ＴｄＲ参入，而ＰＭＡ及ＥＧＦ显著增加ＨＳＭＣ＾３ＨＴｄＲ参入。（３）Ｈ－ＳＭＣ对ＰＭＡ和ＥＧＦ反应强于常氧Ｎ－ＳＭＣ；     

锌对免疫细胞的细胞周期影响的研究

锌对免疫器官细胞的动力学和增殖特性研究，对临床防治缺锌、提高免疫能力，将提供有价值的生物信息。通过建立大鼠缺锌（ＺＤ）、高锌（ＺＥ）模型，采用流式细胞仪检测锌对骨髓、胸腺、脾脏细胞周期的影响。结果表明：（１）ＺＤ、ＺＥ组的骨髓、胸腺、脾脏细胞周期以及脾Ｔ、Ｂ淋巴细胞周期显示：Ｇ＿０／Ｇ＿１期细胞增多，而Ｓ期、Ｇ＿２＋Ｍ期细胞减少，与配对（ＰＦ）组、自由喂养（ＡＬ）组及缺锌后补锌（ＺＤ＋ＡＮ）组间差别非常显著；（２）ＺＤ、ＺＥ组的脾脏Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ３、ＣＤ４，非常显著地低于ＰＦ、ＡＬ、ＺＤ＋ＡＬ组，ＣＤ８、ＣＤ４／ＣＤ８比值也有显著地下降。以上结果提示，适量锌有促进免疫器官——骨髓、胸腺、脾脏细胞ＤＮＡ复制，使Ｇ＿０／Ｇ＿１期细胞增殖进入Ｓ期和Ｇ＿２＋Ｍ期。而缺锌和高锌则抑制免疫器官细胞的增植分化。     

单核细胞趋化蛋白－1在大肠杆菌中的表达

将人单核细胞趋化蛋白－１（ＭＣＰ－１）的ｃＤＮＡ插入融合蛋白表达载体ｐＧＥＸ－４Ｔ－１中，构建成质粒ｐＧＥＸ／ＭＣＰ转化大肠杆菌ＪＭ１０９，经ＩＰＴＧ诱导后合成ＧＳＴ－ＭＣＰ－１融合蛋白。用１２％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测在３０ｋＤ左右有新生蛋白条带出现，表达量约占菌体总蛋白的３１．７％。趋化实验证明，该产物具备明确的单核细胞趋化活性。     

微丝重组对细胞增值作用的研究

用罗丹明－鬼笔环肽（ｒｈｏｄａｍｉｎｅ－ｐｈａｌｌｏｉｄｉｎ）显示微丝（ｍｉｃｒｏｆｉｌａｍｅｎｔｓ，ＭＦ）的荧光染色法对Ｇ期小鼠Ｃ３Ｈ１０Ｔ１／２成纤维细胞向Ｓ期过渡过程中，ＭＦ结构的变化及ＭＦ重组对ＤＮＡ合成的影响进行了研究，Ｇ期细胞在血清刺激１ｈ后ＭＦ解聚，３ｈ后重新组装，并恢复原来的分布。我们发现细胞松弛素Ｂ（ｃｙｔｏｃｈａｌａｓｉｎＢ，ＣＢ）使ＭＦ解聚并与蛋白激酶Ｃ（ｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＣ，ＰＫＣ）激活剂──佛波酯（ｐｈｏｒｂｏｌｅｓｔｅｒ，ＴＰＡ）同样可促进Ｇ期细胞提前进入Ｓ期，促进ＤＮＡ合成，但ＴＰＡ和ＣＢ的刺激作用必需依赖于血清的存在，而ＰＫＣ抑制剂Ｈ７则阻断Ｇ期细胞进入Ｓ期，ＭＦ稳定剂ｐｈａｌｌｏｉｄｉｎ对ＤＮＡ合成具有一定的抑制作用，实验结果表明，Ｇ期细胞向Ｓ期过渡的早期阶段存在ＭＦ重组过程，ＣＢ促使Ｇ细胞ＭＦ解聚并可促进ＤＮＡ合成，提示ＭＦ重组是Ｇ期细胞向Ｓ期过渡的一个重要的早期事件。     

单核细胞趋化蛋白—1在大肠杆菌中的表达

将人单核细胞趋化蛋白－１（ＭＣＰ－１）的ｃＤＮＡ插入融合蛋白表达载体ｐＧＥＸ－４Ｔ－１中，构建成质粒ｐＧＥＸ／ＭＣＰ转化大肠杆菌ＪＭ１０９，经ＩＰＴＧ诱导后合成ＧＳＴ－ＭＣＰ－１融合蛋白。用１２％ＳＣＳ－ＰＡＧＥ检测在３０ｋＤ左右有新生蛋白条带出现，表达量约占菌体总蛋白的３１．７％，趋化实验证明，该产物具备明确的单核细胞趋化活性。     

降钙素基因相关肽对人血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的：从细胞周期的角度探讨降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）地人血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖的影响,揭示其抗动脉粥样硬化的作用机制。方法：流式细胞仪分析ＣＧＲＰ对ＶＳＭＣ细胞周期的影响,免疫组织化学检测细胞周期蛋白Ｄ１、Ｅ的表达。结果：ＣＧＲＰ使细胞停留于Ｇ０／Ｇ１期,并能降低细胞中周期蛋白Ｄ１、Ｅ的表达。结论：ＣＧＲＰ可能是通过抑制周期蛋白Ｄ１、Ｅ的积累,使人ＶＳＭＣ停留于Ｇ０／Ｇ期,限制细胞周期的     

反义Gαq/11亚基ODNs对平滑肌细胞DNA合成和PC蛋白表达的影响

目的：探讨Ｇｑ蛋白介导血管活性多肽对ｖＳＭＣＤＮＡ合成及增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）蛋白表达的影响。方法：用硫代修饰的Ｇαｑ／１１亚基反义寡聚脱氧核苷酸（Ｇαｑ／１１ＡＳ－ＯＤＮｓ），以６μｍｏｌ／Ｌ的浓度加入含１０－７ｍｏｌ·Ｌ－１ＥＴ－１刺激无血清ＤＭＥＭ培养基中体外培养ｖＳＭＣ。用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定ｖＳＭＣＤＮＡ合成、免疫细胞化学技术检测ｖＳＭＣＰＣＮＡ蛋白表达。结果：Ｇαｑ／１１ＡＳ－ＯＤＮｓ可明显抑制ｖＳＭＣＤＮＡ的合成，在１２ｈ，２４ｈ时抑制率分别为８４２％和８５３％；Ｇαｑ／１１ＡＳ－ＯＤＮｓ亦明显降低ｖＳＭＣＰＣＮＡ蛋白的表达。而相同浓度的正义Ｇαｑ／１１ＯＤＮｓ只呈现少量抑制作用。结论：本实验提示Ｇαｑ／１１ＡＳ－ＯＤＮｓ有可能进一步应用于由血管活性多肽刺激引起的ｖＳＭＣ增生性疾病如经皮冠脉腔内血管成形术（ＰＴＣＡ）后再狭窄的防治的研究     

高,低分化的鼻咽癌细胞膜电位比较

用玻璃微电极细胞内记录法，对体外培养的人胚鼻咽上皮细胞、人低分化鼻咽癌（ＣＮＥ－２Ｚ）和高分化鼻咽癌（ＣＮＥ－１）细膜膜电位（ＭＰ）进行研究，结果表明：（１）与人胚细胞相比，癌细胞ＭＰ负值增大，各细胞ＭＰ差异大，分布弥散，尤以ＣＮＥ－２Ｚ细胞为甚；（２）这３种细胞，细胞外Ｋ＾＋对数浓度与ＭＰ值均呈高度负相关；（３）比较３种细胞ＭＰ值与细胞外液Ｋ＾＋对数浓度的回归系数，ＣＮＥ－２Ｚ的最大，人胚的最小     

PKC抑制剂与六种海洋生物和中草药对鼻咽癌细胞生长的影响

本文检测了几种海洋生物与中草药对鼻咽癌细胞ＣＮＥ一２Ｚ生长的作用，分别观察了作用于蛋白激酶Ｃ（ｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＣ，ＰＫＣ）催化区与调节区的抑制剂ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ（ＳＴ）与ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ（ＳＳ）对这些药物作用的影响。发现①ＰＫＣ抑制剂ＳＴ或ＳＳ能抑制ＣＮＥ一２Ｚ细胞生长；②浒苔、青蟹与皂角刺对其生长产生明显抑制，制天南星则有一定的刺激作用（Ｐ＜０．０５）；③ＳＴ（２×１０（－７）ｍｏｌ／Ｌ）与ＳＳ（１０（－５）ｍｏｌ／Ｌ），能消除制天南星刺激生长的作用（Ｐ＜０．０５），能增强多数抑制生长的药物的抑制效应；④对某些药物，ＳＳ的促抑制效应显著强于ＳＴ：如皂角刺、高良姜、青蟹，ＳＳ对它们的效应的抑制率（分别为４２％、３４％、７０％）明显强于ＳＴ的抑制率（分别为７％、１３％、２９％）。提示对ＰＫＣ调节区的抑制可明显加强某些海洋生物及中草药的抑制鼻咽癌细胞生长的作用。结果为这些药物的抗癌作用机制和应用的研究提供了新线索。     

与成人多囊肾病PKD1紧密连锁的四种微卫星DNA在中国人群中的？…

目的 为了评估成人多囊肾病ＰＫＤ１基因内的微卫星ＤＮＡＫＧ８及与ＰＫＤ１紧密连锁的微卫星ＳＭ６，ＣＷ４和ＣＷ２在基因诊断中的有效性。方法 采用ＰＣＲ，聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）和银染法分的了部分无血缘关系的中国汉族人。结果 在中国汉族人群中的ＫＧ８有６种等位片段，其多态性信息量（ＰＩＣ）为０．３１２；ＳＭ６具有２４种等位片段，其ＰＩＣ为０．８０；ＣＷ４有９种片段，ＰＩＣ为０．８５０，ＣＷ２有７     

锌对大鼠免疫器官细胞周期增殖特性分析

本文通过建立大鼠缺锌（ＺＤ）、高锌（ＺＥ）模型检测锌对骨髓、胸腺、脾脏细胞周期的影响。结果表明：（１）ＺＤ、ＺＥ组的骨髓、胸腺、脾脏细胞周期，以及脾Ｔ、Ｂ淋巴细胞的Ｇ·／Ｇ１期细胞增多，而Ｓ期、Ｇ２＋Ｍ期细胞减少、与配对组（ＰＦ）、自由喂养组（ＡＬ）、缺锌补锌组（ＺＤ＋ＡＬ）间差别非常显著。（２）ＺＤ、ＺＥ组的脾脏Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ３·ＣＤ４非常显著低于ＰＦ、ＡＬ、ＺＤ＋ＡＬ组。ＣＤ４／ＣＤ８比值也显著下降。提示适量锌促进免疫器官细胞ＤＮＡ复利，而缺锌、高锌则抑制其细胞的增殖分化。     

人醛缩酶A单克隆抗体的制备及应用

纯化并鉴定了人醛缩酶Ａ、Ｂ、Ｃ（ｈＡＬＤ－Ａ、Ｂ、Ｃ）。用ｈＡＬＤ－Ａ免疫Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠，将免疫的脾细胞和Ｐ＿３－Ｘ＿（６３）－Ａｇ８．６５３骨髓瘤细胞用ＰＥＧ进行融合，用ＥＬＩＳＡ法筛选，ｈＡＬＤ－Ｂ、Ｃ作阴性对照，将阳性反应的杂交瘤细胞进行克隆，获得３株杂交瘤细胞株。其ＭｃＡｂ的亚类分别为ＩｇＧ２ｂ，ＩｇＧ１、ＩｇＭ，亲合常数分别为７．５×１０￣（１０）、３．５×１０￣９、２．３×１０￣９。３株细胞株分泌的单抗通过Ｉｍｍｕｎｏｂｌｏｔｔｉｎｇ得到证实。用亲合层析法从人肝癌细胞中提纯了ＡＬＤ－Ａ，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示为单一区带，但其电泳迁移率较ｈＡＬＤ－Ａ滞后。     

α-MSH对EGTA发热的作用

目的：观察α－ＭＳＨ对ＥＧＴＡ发热反应的作用及其可能机制。方法：建立ＥＧＴＡ发热模型；在离体条件下，应用Ｆｕｒａ－２荧光指示剂测定细胞内Ｃａ２＋浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）；体外培养下丘脑神经细胞。结果：α－ＭＳＨ能明显抑制ＥＧＴＡ性发热反应（Ｐ＜０．０１）；ＥＧＴＡ可以降低下丘脑神经细胞［Ｃａ２＋］ｉ水平（Ｐ＜０．０１），但α－ＭＳＨ不影响正常下丘脑神经细胞［Ｃａ２＋］ｉ及ＥＧＴＡ对下丘脑神经细胞［Ｃａ２＋］ｉ的作用（Ｐ＞０．０５）；ＥＧＴＡ可刺激体外培养的下丘脑神经细胞释放ＣＲＨ（Ｐ＜０．０５），而α－ＭＳＨ能抑制ＥＧＴＡ的这种作用（Ｐ＜０．０５）。结论：α－ＭＳＨ抑制中枢发热介质ＣＲＨ的产生可能是降低ＥＧＴＡ发热反应的主要机制之一；中枢ＣＲＨ的产生和释放增加可能是ＥＧＴＡ性发热的一个重要因素。     

重组人GM-CSF／IL-3融合蛋白(G3)的分离纯化

Ｇ３是由基因工程技术构建、在大肠杆菌中高效表达获得的由ＧＭ－ＣＳＦ和ＩＬ－３组成的融合蛋白,能刺激造血细胞的增殖、分化和调节免疫应答。Ｇ３的生物学活性与ＧＭ－ＣＳＦ和ＩＬ－３相比有明显提高［１］。本文用抗Ｇ３单抗（ＭＧ３１）分别与ＣＮ－Ｂｒ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ和ｒＰｒｏｔｅｉｎＡ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ偶联制备免疫亲和色谱（ＩＡＣ）柱,对Ｇ３进行纯化,取得了满意的结果。１　材料和方法１．１　ＭＧ３１单抗［２］的纯化　饱和硫酸铵溶液沉淀法。１．２　ＭＧ３１－ＣＮＢｒ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ柱（…     

转染B7—1基因至鼻咽癌细胞株及其诱导的细胞免疫应答

通过包装细胞把逆转录病毒载体ｐＬＸＳＮ／Ｂ７－１导入鼻咽癌细胞株ＣＮＥ１，利用ＲＴ－ＰＣＲ及ＦＡＣｓ等技术证实Ｂ７－１的表达情况，同时检测了ＣＮＥ１细胞表面ＭＨＣＩ抗原。在此基础之上，观察了表达Ｂ７－１的ＣＮＥ１细胞（ＣＮＥ１／Ｂ７－１）对健康个体ＰＢＬ（外周血淋巴细胞）的增殖及细胞因子分泌的影响，结果表明：ＣＮＥ１／Ｂ７－１可以促进ＰＢＬ的增殖及细胞因子的分泌，且增高水平的细胞因子主要是ＩＬ－２和ＩＦＮ－γ。提示：ＣＮＥ１／Β７－１诱导的免疫应答以细胞免疫为主。     

恶性疟原虫抗原基因在鼠伤寒沙门氏菌中的表达及免疫原性的初步鉴定

将人工合成的恶性疟原虫杂合７４肽抗原基因克隆到表达载体ｐＷＲ４５０－１中，获得了重组质粒ｐＷＲＣ，将其先转化到减毒伤寒沙门氏菌ＬＢ５０００修饰后，再转化到ＳＬ３２６１，得到重组减毒鼠伤寒沙门氏菌ＳＬ３２６１（ｐＷＲＣ）。ｐＷＲＣ在ＳＬ３２６１中以β－半乳糖苷酶－杂合多肽抗原Ｃ融合蛋白（ＧＺ－Ｃ）形式表达，表达量约占菌体蛋白总量的１１．３％．Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ及免疫双扩散显示ＧＺ－Ｃ可与兔抗ＧＺ－Ｃ抗原的免疫血清发生特异反应。ＧＺ－Ｃ识别兔抗ＧＺ－Ｃ及鼠抗恶性疟原虫抗血清的ＥＬＩＳＡ滴度分别为１：３２００及１：５１２０。初步结果表明ＳＬ３２６１（ｐＷＲＣ）表达的ＧＺ－Ｃ具有抗原性。连续传代ＳＬ３２６１（ｐＷＲＣ）未见质粒ｐＷＲＣ丢失及对宿主有明显的毒性。     

中国登革2型病毒分离株乳鼠致病性差异与基因变化关系的研究

本文报道１９８７年从广西病人血清中分离的登革２型（Ｄ２）病毒Ｄ２－４３株和１９８５年从海南病人血清中分离的Ｄ２－０４株乳鼠致病性的差异与基因变化的关系。结果表明Ｄ２－４３株对乳鼠致病，Ｄ２－０４株不致病。Ｄ２－４３株和Ｄ２－０４株Ｃ到ＮＳ１基因的读码框架基本相同，均由３３８１核苷酸组成，编码氨基酸总数１１２７。包含三个结构蛋白Ｃ．ＰｒＭ（Ｍ）、Ｅ和一个非结构蛋白ＮＳ１。该两株病毒核苷酸序列同源性为９３．８％，氨基酸序列的类似性为９１．３％。Ｃ和Ｅ基因同源性为９５．０％～９５．８％，ＮＳ１基因为９２．２％，Ｍ基因为８６．７％，两株之间核苷酸序列的主要差异是在Ｍ基因。两株病毒的Ｃ－ＮＳ１基因与国际参考毒株比较，４３株与ＪＡＭ株类侧性最高，其次是ＮＧＣ株，与Ｓ１株类似性最小。而０４株只有Ｃ、Ｅ和ＮＳ１与ＪＡＭ株最高，ＰｒＭ（Ｍ）都与ＮＧＣ株最高。４３株与０４株的Ｍ基因相比较，０４株的ＰｒＭ（Ｍ）基因的同源性低于４３株，说明两株与国际参考毒株比较，主要差异也在Ｍ基因，乳鼠致病性差异可能与Ｍ基因变化有关。     

转化生长因子β1对G1期的负性调节

ＴＧＦ是具有生物活性的多肽，它通过下调Ｇ１期细胞周期蛋白Ａ，Ｄ，Ｅ的表达、改变细胞周期蛋白依赖性激酶ＣＤＫ２，ＣＤＫ４和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子ｐ１６，ｐ１５，ｐ２１，ｐ２７的活性，使细胞停滞在Ｇ１期，ＴＧＦ－β１还可通过抑癌基因产物Ｒｂ非磷酸化状态的聚积和下调Ｇ１早期“演进因子”ｃ－ｍｙｃ的表达阻止Ｇ１期细胞向Ｓ期进展