孕期自发性高血压鼠服卡托普利预防子鼠高血压及其机制

目的：探讨自发性高血压大鼠（SHR）在孕期服转换酶抑制剂卡托普利预防子鼠高血压的作用及其肾素血管紧张素系统机制。方法：观察孕期服卡托普利（Cap100mg·kg-1·d-1）对子鼠收缩压的影响；以放免法和反转录一聚合酶链式反应法分别测血浆、组织血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）浓度和组织AngⅡ－Ⅰ型受体（AT1）mRNA表达。结果：红血单纯在孕期服用卡托普利能有效桔抗子鼠随增龄的升压幅度（P＜0.01）；同时降低其大脑皮质、肾皮质地AngⅡ浓度，增高AT1mRNA表达。结论：证实胚胎期是SHR发病的关键阶段，在此期干扰AngⅡ的生成能有效预防子鼠发生高血压，为高血压病的防治提供了实验性启示。     

苯丙氨酸对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞内钙的影响

目的 探索苯丙氨酸对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞内钙的影响，方法 将ＳＨＲ和ＷＫＹ的血管平滑肌细胞在不同浓度苯丙酸培养液中培养一定时间后，加入（＾４５ＣａＣｌ２）温育一定时间后，测定进入细胞内（＾４５Ｃａ＾２＋）的量；而后将在不同浓度苯丙氨酸培养液中培养一定时间后的ＳＨＲ和ＷＫＹ的血管平滑肌细胞同ＰＳＳ液温育，采用Ｆｕｒａ－２／ＡＭ荧光指示剂测定不同浓度苯丙氨酸对细胞内游离Ｃａ＾２＋的影响。结果     

丝裂原活化蛋白激酶参与胰岛素对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞的增殖研究

目的:探讨高血压血管平滑肌细胞(VSMC)在胰岛素作用下胞内信号转导途径之一丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的影响,及其与VSMC增殖的关系。方法:选用6周龄自发性高血压大鼠(SHR)和WKY大鼠,无菌分离主动脉,体外纯化培养VSMC至6~8代,加胰岛素干预和蛋白激酶C(PKC)抑制剂,采用胶内髓磷脂碱性蛋白原位磷酸化法测定VSMC中MAPK活性,并用Western Blot检测VSMC中MAPK的含量, [³H]-TdR测定VSMC的DNA合成量。结果:胰岛素作用后,SHR组的DNA合成量显著增加,MAPK活性及蛋白含量也显著增加,PKC抑制剂可明显降低MAPK活性。结论:SHR体外培养的VSMC增殖与MAPK活性增加有关,胰岛素可影响其活性,并且可能存在胰岛素-PKC-MAPK轴。     

培养的大鼠血管平滑肌细胞中bFGF基因表达与血管紧张素Ⅱ释放的相互关系

采用Northern杂交检测培养的自发性高血压人鼠（SHR）和正常血压WKY大鼠的血管平滑肌细胞（VSMC）中碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）基因表达，用紫外法和放免法分别测定培养液中血管紧张素转换酶（ACE）活性和血管紧张素Ⅱ（Aug11）含量。发现AugⅡ能明显促进VSMC中bFGF基因表达，而bFGF则能明显诱导ACE活性和提高AugⅡ释放，臣SHRVSMC的bFGF基因表达、ACE活性和AugⅡ释放均显著高于WKY大鼠。结果提示，VSMC中bFGF基因表达和AugⅡ释放间存在相互促进的正反馈联系。     

虎杖甙对正常人血管平滑肌细胞内钙和膜电位的调节作用

目的和方法：观察虎杖甙（ＰＤ）对人脐带动脉平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）内游离钙、细胞膜电位的变化,以探讨ＰＤ对血管平滑肌的调节机制。用Ｆｌｕｏ－３－ＡＭ、ＤｉＢＡＣ４（３）标记培养的ＶＳＭＣ,在激光共聚焦显微镜上测定细胞内游离钙和膜电位变化。结果：给ＰＤ（０５ｍｍｏｌ／Ｌ）１０ｍｉｎ后,ＶＳＭＣ内游离钙浓度升高５６％±５６％。当ＰＤ加入前用维拉帕米和ＥＧＴＡ预处理后,则游离钙不再升高;ＥＧＴＡ和肝素预处理也抑制ＰＤ的升钙作用,而ＥＧＴＡ和普鲁卡因预处理则使细胞内钙显著升高。ＰＤ还可使ＶＳＭＣ膜电位去极化,加入钠通道阻断剂河豚毒素（２５μｍｏｌ／Ｌ）可完全阻断ＰＤ的去极化作用：加甲氰咪胍、维拉帕米、优降糖和利及丁预处理不能阻断ＰＤ去极化作用。结论：：ＰＤ可通过细胞外钙内流来增加细胞内游离钙浓度,并促进细胞外钠离子内流而导致细胞去极化     

抗高血压因子对大鼠血管平滑肌钙内流的影响

实验观察了从原发性高血压病患者红细胞中提取的抗高血压因子(AHF)对自发性高血压大鼠(SHR)、肾性高血压大鼠(RHR)和正常血压的WKY大鼠和Wistar大鼠主动脉和肠系膜动咏平滑肌Ca~(2+)内流的影响。结果表明,SHR和RHR的肠系膜动脉Ca~(2+)内流显著高于主动脉;AHF可显著抑制SHR和RHR主动脉和肠系膜动脉Ca~(2+)内流,抑制作用呈剂量依赖性,且对肠系腆动脉Ca~(2+)内流抑制作用更明显;AHF也可抑制正常动物血管平滑肌Ca~(2+)内流。本工作提示,AHF的降压机制可能与其抑制血管平滑肌特别是小动脉血管平滑肌Ca~(2+)内流有关。     

胰岛素对自发型高血压大鼠血管平滑肌细胞TGF β及其受体的调节作用

目的:从细胞增生、转化生长因子β₁和受体表达等方面,探讨胰岛素对自发型高血压大鼠血管平滑肌细胞(SHR VSMC)和正常血压Wista-Kyoto大鼠血管平滑肌细胞(WKY VSMC)的影响异同。方法:采用组织移植法培养SHR和WKY大鼠胸主动脉VSMC|用细胞计数仪和流式细胞仪分别检测细胞增生情况|TGF β及其受体的mRNA水平利用定量RT-PCR技术进行检测。结果:(1)胰岛素加强SHR VSMC的增生,而不影响WKY VSMC的增生。胰岛素加强SHR VSMC的增生,且呈剂量依赖方式(2)以20%小牛血清培养基培养VSMC, SHR VSMC的S期百分率为31.44%,而WKY VSMC的S期百分率仅为19.86%|以2%小牛血清培养基培养VSMC,SHR VSMC的G₀／G₁和S期百分率分别为73.23%和9.35%,加入胰岛素后,SHR VSMC的G₀／G₁降低为67.58%,S期百分率则增加到15.64%。但是,加入胰岛素前后,WKY VSMC各期百分率无明显变化|(3)RT-PCR分析结果表明,生长静止的SHR VSMC和WKY VSMC均有TGF β₁、Ⅰ型和Ⅱ型TGF β受体的表达,但SHR VSMC的TGFβ₁、Ⅰ型TGF β受体的表达量高于WKY VSMC的TGF β₁、Ⅰ型TGF β受体的表达量,胰岛素加强了WKY VSMC的TGF β₁、Ⅰ型TGF β受体的表达(P＜0.01和P＜0.05),而削弱了SHR VSMC相应分子的表达(P＜0.01和P＜0.05),胰岛素不影响二株系大鼠VSMC Ⅱ型TGF β受体的表达(P＜0.05)。结论:胰岛素对SHR VSMC和WKY VSMC的TGF β和它的受体表达具有不同的调节作用,这种异常调节作用可能和胰岛素加强SHR VSMC的增生密切相关。     

硝苯地平导致高血压大鼠血管平滑肌细胞的凋亡

血管平滑肌细胞的凋亡 (程序性死亡 )在血管管壁结构的调节中是一个基本的必经的过程。目前一些抗高血压药物的药理学效应就是促进血管平滑肌细胞的凋亡。血管平滑肌细胞凋亡的生物化学的规律是复杂的。我们选择一些抗高血压的药物作用于培养的正常血压大鼠 (ＷＫＹ)和高血压大鼠(ＳＨＲ)的血管平滑肌细胞。观察这些药物能否导致这两种大鼠平滑肌细胞的凋亡。我们选择的药物是 :Ｌ型Ｃａ通道拮抗剂—硝苯地平 ;一氧化氮的供体—硝普钠 ;毛喉素 (一种腺苷酰环化酶的活化剂 )。或一种肌浆网选择性抑制Ｃａ2 +—三磷酸腺苷酶。用这些药物对比它…     

卡托普利对自发性高血压大鼠血压和心肌血管组织ATⅡ,ET,NE…

本实验在自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）观察了卡托普利对血压，心肌和主动脉组织ＡＴⅡ，ＥＴ，ＤＡ，ＮＥ的影响。结果表明，ＳＨＲ心肌、主动脉组织ＡＴⅡ、ＥＴ含量显著增加，而ＤＡ、ＮＥ含量则呈消耗性减少。卡托普利治疗能降低ＳＨＲ心肌、主动脉ＡＴⅡ、ＥＴ含量，增加ＤＡ、ＮＥ含量，同时显著降低大鼠血压。提示卡托普利的降压作用机制可能与抑制心肌、血管组织ＡＴⅡ、ＥＴ、ＮＥ和ＤＡ的生成和释放有关。     

不同年龄高血压大鼠血管平滑肌中ERK和MKP-1的表达

目的：研究不同年龄的自发性高血压大鼠（SHR）和Wistar Kyoto大鼠（WKY）主动脉平滑肌中丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）及其磷酸酶（MKP-1）的表达及其与高血压的关系。 方法： 用tail-cuff测量大鼠尾动脉血压；分别用Western blotting法和RT-PCR法半定量测定血管平滑肌中磷酸化细胞外信号调节激酶（p-ERK）和MKP-1的蛋白表达以及MKP-1 mRNA的含量。 结果： （1）SHR的血压自8周龄起明显高于WKY（P<0.01），且随年龄增长而升高（P<0.05）至14周以后趋于稳定；（2）SHR主动脉平滑肌中的p-ERK表达明显高于同年龄的WKY（P<0.01），随年龄增长而递增（P<0.05），与血压呈正相关；（3）SHR主动脉平滑肌中MKP-1蛋白明显高于同龄WKY，而mRNA的表达在5周龄时明显高于WKY，之后均随年龄的增长而递减（P<0.05），与血压和ERK呈负相关，而WKY下降不明显。 结论： MKP-1在高血压的发生和发展过程中起重要作用，其表达逐渐下降可能是导致ERK激活增加，从而导致血管平滑肌细胞增殖、血压升高的重要原因。     

血浆高血压因子的实验研究

本研究证实了在自发性高血压大鼠血浆中存在一种循环高血压因子。当给正常血压ＳＤ大鼠静脉注射时，可以产生血压延迟性升高，在４５分钟达高峰，６０分钟恢复至原来水平。这种因子还可提高大鼠平滑肌细胞对＾４５Ｃａ＾２＋的摄取，其摄取的时间过程与血压反应一致。由此说明血浆高血压因子不是体液中已知的加压物质，而是一种有自己独特的来源、理化性质和生理功能的有形成分。可能是原发性高血压病的发病因素之一。     

巯甲丙脯酸和倍他乐克对高血压大鼠左心室MHC基因表达的影响

目的和方法：采用核酸斑点杂交技术,测定双肾双夹（2K2C）肾性高血压大鼠早期左心室肌球蛋白重链（MHC）基因表达的变化,及血管紧张素转换酶抑制剂巯甲丙脯酸和β-受体阻断剂倍他乐克对该变化的影响。结果：2K2C组大鼠术后24 h,左心室α-MHCmRNA水平即有所降低,72 h时明显降低,为对照组的0.48倍（P<0.05）;与此相反,2K2C组β-MHC mRNA水平,在术后24 h已略有升高,72 h时明显增加,为对照组的2.7倍（P<0.05）。巯甲丙脯酸可抑制2K2C引起的MHC基因表达的改变,而倍他乐克不能阻止该变化。结论：肾性高血压早期,MHC基因表达发生改变,肾素血管紧张素系统可能起重要作用。     

巯甲丙脯酸和倍他乐克对高血压大鼠左心室MHC基因表达的影响

目的和方法：采用核酸斑点杂交技术,测定双肾双夹（２Ｋ２Ｃ）肾性高血压大鼠早期左心室肌球蛋白重链（ＭＨＣ）基因表达的变化,及血管紧张素转换酶抑制剂巯甲丙脯酸和β－受体阻断剂倍他乐克和对该变化的影响。结果：２Ｋ２Ｃ组大鼠术后２４ｈ,左心室α－ＭＨＣｍＲＮＡ水平即有所降低,７２ｈ时明显降低,为对照组的０．４８倍;与此相反,２Ｋ２Ｃ组β－ＭＨＣｍＲＮＡ水平,在术后２４ｈ已略有升高,７２ｈ时明显增加,为对照     

虎杖甙对正常大鼠血管平滑肌细胞内游离钙浓度的影响

目的：观察虎杖甙（ＰＤ）对培养的大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）内钙离子浓度的变化机理。方法：用Ｆｌｕｏ－３－ＡＭ标记培养的ＶＳＭＣ，在粘附式细胞仪上测定细胞内游离钙的变化。结果：实验结果表明，ＰＤ（００２～２０ｍｍｏｌ／Ｌ）可使大鼠ＶＳＭＣ内游离钙浓度升高，波形变宽，其引起的钙波形态与去甲肾上腺素（ＮＥ）及氯化钾所引起的高尖钙波不同，ＰＤ使ＶＳＭＣ产生一种剂量依赖性的、持续缓慢升高的钙波。ＰＤ引起的细胞内游离钙升高可被ＥＧＴＡ（２ｍｍｏｌ／Ｌ）及维拉帕米（５０μｍｏｌ／Ｌ）明显抑制。结论：以上结果提示ＰＤ既促进ＶＳＭＣ外钙离子进入细胞内，还能诱导细胞内钙离子释放；ＰＤ可能会提高正常ＶＳＭＣ的收缩性，增加正常血管的张力。     

卡托普利对高血压心脏钙调蛋白磷酸酶与核因子κB p65蛋白表达的影响

 目的：探讨卡托普利对高血压大鼠心脏钙调蛋白磷酸酶（calcineurin）、核因子κBp65（NFκBp65）蛋白表达影响及其机制。 方法：建立腹主动脉缩窄高血压大鼠模型，术后1周用卡托普利治疗，连续10周。以尾动脉测压法观察血压变化，用免疫组织化学和形态计量学方法，观察calcineurin 、NF-κBp65在心脏表达和心脏系数的变化。 结果：经卡托普利治疗，高血压大鼠血压降低（mmHg，P<0.01），心脏系数显著减小（g/100 g，P<0.01），心脏calcineurin和NF-κBp65蛋白高表达下调，阳性表达面积和面积百分比缩小（μm²，P<0.01，或P<0.01）。 结论：卡托普利能通过调控信号转导通路calcineurin-NFAT- NF-κBp65关键蛋白表达，逆转高血压心血管重构。     

Caveolin-1在内皮素-1诱导血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的: 探讨caveolin-1蛋白在VSMC的分布、在ET-1诱导的VSMC增殖中表达的变化情况。方法: 在培养的VSMC上,使用 TdR掺入法观察ET-1和BQ123对其DNA合成的影响;用荧光免疫组化方法观察caveolin-1蛋白在VSMC的分布,ET-1对caveolin-1蛋白表达的影响;用Western blot检测ET-1和BQ123对caveolin-1蛋白表达的影响。结果: ET-1可以呈浓度梯度地刺激VSMC的增殖,ETAR特异性阻断剂BQ123可以抑制ET-1的作用;免疫荧光证实了在VSMC上,caveolin-1分布于细胞表面,在ET-1刺激增殖过程中,VSMC上caveolin-1蛋白荧光强度下降;Western blot证实ET-1可以抑制caveolin-1蛋白的表达。结论: 在VSMC上,caveolin-1主要分布于细胞表面,在ET-1刺激增殖过程中,caveolin-1蛋白表达发生了变化,ET-1可通过ETAR抑制caveolin-1蛋白的表达。     

3种钙激动剂促培养的大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的：探讨不同来源的细胞内钙离子（[Ca²⁺]i）对血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells, VSMCs）丝裂素活化蛋白激酶（MAPK）介导的增殖反应的作用。方法：以培养的大鼠VSMCs为靶细胞,用血管紧张素II（Ang Ⅱ）剌激VSMCs跨膜Ca²⁺内流、三磷酸肌醇（IP₃）和雷尼丁（RY）剌激胞内Ca²⁺释放,[γ-³² P]-ATP掺入法和免疫印迹（Western blot）测MAPK活性及蛋白含量,氚-亮氨酸（[³H]-Leu）、氚-胸腺嘧啶（[³H]-TdR）掺入量作为VSMCs增殖的指标。结果：Ang Ⅱ、IP₃和RY均能显著增加VSMCs的[Ca²⁺]i浓度、MAPK活性及蛋白含量,并提高[³H]-Leu、[³H]-TdR掺入量,与对照组VSMCs相比差异显著（P<0.01）。结论：钙激动剂诱导的MAPK活性及含量的增加参与了VSMCs的增殖,VSMCs的肥大增殖与[Ca²⁺]i浓度增加有关,而与[Ca²⁺]i的来源无关。     

血管紧张素Ⅱ2型受体对大鼠血管平滑肌增殖的影响及其机制

目的：观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）2型受体（AT2R）对培养的大鼠血管平滑肌细胞 （VSMC）增殖的影响。方法： 将AT2R cDNA转染到培养的大鼠VSMC中， 分别观察AngⅡ、AngⅡ＋losartan、AngⅡ+PD123319等不同处理因素处理对VSMC的 细胞数目以及PCNA、 NOS表达的影响。 结果：losartan 处理组细胞数目和PCNA表达量少于AngⅡ处理组，NOS表达量高于AngⅡ处理组， 而PD123319处理组细胞数目和PCNA表达量显著高于AngⅡ处理，NOS表达量较之为少。结论： 激活AT2R能拮抗AngⅡ的由AT1R介导的促细胞增殖作用，这种作用可能与激活AT2R后NOS表达增多使 NO合成增多有关。     

卡托普利对缺氧/复氧乳鼠心室肌细胞游离钙的影响及其离子通道机制

目的：观察卡托普利晚期预处理对缺氧/复氧乳鼠心室肌细胞游离钙的影响及其离子通道机制。方法:建立培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型。设正常对照组、缺氧/复氧组、缺氧预适应组和卡托普利组。经Flou-3/AM负载染色后，采用流式细胞分析技术，测定细胞内钙离子浓度(［Ca²⁺］i)；利用膜片钳技术，观察L-型钙通道和钠钙交换电流的变化。结果:（1）缺氧/复氧时，［Ca²⁺］i和Na⁺/Ca²⁺交换电流高于正常对照组（P<0.01），L-型钙电流（I_Ca-L）峰值下降，I-V曲线上移，半数失活电压(V_0.5)减小，ICa-L失活曲线左移。（2）晚期预处理和卡托普利使缺氧/复氧时［Ca²⁺］i低于缺氧/复氧组（P<0.01）；I_Ca-L增加，I-V曲线下移，V_0.5增大及稳态失活曲线右移；Na⁺/Ca²⁺ 交换电流减少；但［Ca²⁺］i和Na⁺/Ca²⁺交换电流高于对照组（P<0.05）。（3）卡托普利组与缺氧预适应组比较上述指标均无显著差异 。结论：心肌细胞缺氧/复氧，通过Na⁺/Ca²⁺交换电流的异常增加可引起［Ca²⁺］i的异常升高及其钙超载；卡托普利通过轻度增加Na⁺/Ca²⁺交换电流及其［Ca²⁺］i而触发晚期预处理，抑制后续缺氧/复氧引起的Na⁺/Ca²⁺交换电流及其［Ca²⁺］i的异常增加。