大鼠角朊细胞增殖活性的影响因素

目的：探讨大鼠角朊细胞增殖活性的影响因素。方法：将传代培养的第2代大鼠角朊细胞（KCs）,以含有新生牛血清的DMEM-F12培养基进行无滋养层法培养,当细胞培养至对数生长期时,分别改用含有不同浓度表皮生长因子（EGF）、肝细胞生长因子（HGF）、成纤维细胞生长因子（FGF）、霍乱毒素（CT）、氢化可的松（HVB）、胰岛素（Insulin）、三碘甲腺原氨酸（T₃）的培养液继续培养,以MTT法测定细胞增殖活性。 结果：在一定浓度范围内,EGF(5～25 μg•L^-1)、HGF(0.1～10 μg•L^-1)、FGF(0.05～2.0 μg•L^-1)、CT(2～10 μg•L^-1)、HVB(0.1～0.8 mg•L^-1)、Insulin(0.5～6.0 mg•L^-1)及T₃(0.1～2.0 μg•L^-1)对KCs的增殖均具有不同程度的促进作用。 结论：采用无滋养层法培养大鼠表皮角朊细胞时,在培养液中加入一定浓度的EGF、HGF、FGF、CT、HVB、Insulin及T₃是必要的。     

氢化可的松抑制白细胞介素1α诱导的角膜基质细胞胶原降解

目的：探讨氢化可的松在白细胞介素1α(IL-1α)诱导的角膜基质细胞降解中的作用。 方法：利用角膜基质细胞三维胶原凝胶表面添加纤维蛋白溶酶原（0.06 μg•L^-1)、不同浓度的IL-1α（0、0.1、1.0、10.0 μg•L^-1）及IL-1α（10 μg•L^-1）与不同浓度的氢化可的松（0、1、10、100 mmol•L^-1）,在MEM培养液中培养24 h后,通过测定培养上清液中的羟脯氨酸（HYP）的量作为胶原降解的活性单位。 结果：在存在纤维蛋白溶酶原的情况下,随着IL-1α浓度的升高,HYP含量增加, IL-1α 0.1、1.0和10.0 μg•L^-1组与对照组比较及各剂量组间比较,差异均有显著性（P<0.025或P<0.05）;在存在纤维蛋白溶酶原、IL-1α（10 μg•L^-1）的情况下,随着氢化可的松质量浓度的增加,HYP含量减少,氢化可的松1、10、100 mmol•L^-1组与对照组（0 mmol•L^-1）比较及各剂量组间比较,差异均有显著性（P<0.025或P<0.05）。 结论：氢化可的松具有抑制IL-1α诱导的角膜基质细胞胶原降解的作用。     

不同浓度bFGF对体外培养人牙髓细胞增殖的影响

目的：探讨不同浓度碱性成纤维细胞生长因子(bFGF) 对体外培养人牙髓细胞增殖的影响，为寻求最佳影响浓度提供参考依据。方法：以常规组织块培养法体外获得牙髓细胞,随机分为5组，实验组分别加入bFGF，使其终浓度为0.1、1.0、10.0及100.0 μg•L^-1，无bFGF组作为阴性对照。采用MTT法分别测定各组吸光度A值，计算细胞相对增殖率（RGR），观察bFGF对牙髓细胞的增殖作用。结果：人牙髓细胞在不同浓度bFGF的作用下，除0.1 μg•L^-1bFGF组外，其他实验组RGR均高于对照组 (P<0.01)；组间比较显示10.0 μg•L^-1 bFGF组RGR最高，与1.0 μg•L^-1bFGF组比较差异有显著性(P<0.01)，但与100.0 μg•L^-1bFGF 组比较差异无显著性(P>0.05)。结论：bFGF能促进人牙髓细胞的增殖，bFGF的最小显效浓度是1.0 μg•L^-1，最佳增殖浓度是10.0 μg•L^-1。       

NGF诱导PC12细胞向神经元的分化

目的：研究NGF诱导PC12细胞向神经元的分化情况。方法：实验分为10、20、50和80 μg•L^-1 NGF组及含10%胎牛血清的对照组。不同浓度的NGF组均诱导PC12细胞72 h,在24、48和72 h分别观察细胞的突起长度和细胞最大直径的变化情况;在诱导72 h后利用免疫细胞化学技术,观察不同剂量NGF作用后PC12细胞向MAP2阳性细胞分化的情况。 结果： 20、50和80 μg•L^-1 NGF组MAP2阳性细胞数明显高于对照组,且以50 μg•L^-1 组最为明显（P<0.05）。与对照组比较,加入NGF组分化的细胞其突起和细胞直径明显增长和增大,以50 μg•L^-1 组最为明显（P<0.01）。结论：NGF能够诱导PC12细胞向神经元分化,50 μg•L^-1 的NGF浓度是诱导PC12细胞向神经元分化的最适浓度。     

阿司匹林和塞来昔布对乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响

目的：观察阿司匹林和塞来昔布及二者分别联合阿那曲唑对乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响,探讨并比较阿司匹林和塞来昔布的抗肿瘤作用。方法：MTT法检测不同浓度的阿司匹林（2.5 、5.0和10.0 mmol•L^-1）和塞来昔布（30、60和120 μmol•L^-1）分别作用人乳腺癌细胞株MCF-7不同时间（24、48和72 h）的细胞增殖抑制率,以不含药物的培养液作为阴性对照组,以阿霉素作为阳性对照组。MTT法检测不同浓度阿那曲唑（0.5和1.0 mmol•L^-1及其分别联合不同浓度阿司匹林（2.5、5.0和10.0 mmol•L^-1）和塞来昔布（30、60和120 μmol•L^-1）作用于MCF-7细胞48 h的细胞增殖抑制率,以不含药物组为阴性对照组。结果：①阿司匹林各剂量组细胞增殖抑制率随药物浓度的增加、作用时间的延长而提高(P<0.01)。②塞来昔布各剂量组的细胞增殖抑制率随药物浓度的增加、作用时间的延长而升高(P<0.01)。③10 mmol•L^-1阿司匹林和120 μmol•L^-1塞来昔布单独作用72 h抑制率分别达68.88%和87.00％;阳性对照组阿霉素2.0 μmol•L^-1作用72h抑制率达86.30％。④0.5 μmol•L^-1阿那曲唑与阿司匹林联合各剂量组的抑制率均明显高于0.5 μmol•L^-1阿那曲唑单药组(P<0.05),0.5 μmol•L^-1阿那曲唑联合10.0 mmol•L^-1阿司匹林对MCF-7的抑制率明显高于0.5 μmol•L^-1阿那曲唑联合2.5、5.0 mmol•L^-1阿司匹林(P<0.05)。0.5 μ mol•L^-1阿那曲唑分别与60、120 μmol•L^-1塞来昔布联合组的抑制率明显高于0.5 μmol•L^-1阿那曲唑单药组及0.5 μmol•L^-1阿那曲唑与30 μmol•L^-1塞来昔布联合组的抑制率(P<0.05),0.5 μmol•L^-1阿那曲唑联合120 μmol•L^-1塞来昔布对MCF-7的抑制率明显高于0.5 μmol•L^-1阿那曲唑联合60 μmol•L^-1塞来昔布(P<0.05)。1.0 μmol•L^-1阿那曲唑分别联合10.0mol•L^-1阿司匹林、60和120 μmol•L^-1塞来昔布各组的抑制率明显高于1.0 μmol•L^-1阿那曲唑单药组(P<0.05),1.0 μmol•L^-1阿那曲     

兔骨髓间充质干细胞体外诱导软骨形成

目的：体外分离培养兔骨髓间充质干细胞(MSCs),在诱导刺激物作用下,使其分化为软骨细胞。方法：在骨髓MSCs培养液内加入地塞米松10_-7 mol•L^-1,维生素C 50 mg•L^-1, 基因工程牛酸性成纤维细胞生长因子(bFGF)10 μg•L^-1,培养1周后将bFGF换为基因工程人转化生长因子-β₁(TGF-β₁)10 μg•L^-1,继续培养3周。 结果：细胞形态由纺锤形变为圆形或椭圆形,细胞分泌了大量的甲苯胺蓝异染的基质,形成了类软骨陷窝。碱性磷酸酶(ALP)的活性增高了近20倍。逆转录PCR证实转化前的细胞主要表达Ⅰ型胶原mRNA。转化后的细胞主要表达Ⅱ型胶原mRNA。 结论：在该种诱导环境下,部分骨髓MSCs可以转化为软骨细胞。     

成人骨髓间充质干细胞生长特性及bFGF对其增殖的影响

目的：研究成人骨髓间充质干细胞（hMSC）生长特性、hMSC表面标记及bFGF对hMSC增殖的影响。 方法：绘制细胞生长曲线;流式细胞仪检测细胞表面标记;MTT法检测bFGF对hMSC增殖的影响。 结果：原代培养细胞生长潜伏期5~9 d,对数增殖期11~16 d,生长平台期18~20 d;传代培养细胞生长潜伏期12~24 h,对数增殖期为7~10 d,11~13 d进入细胞生长平台期。hMSC均一表达CD44,不表达CD45。bFGF在较低浓度（10 μg•L^-1）时即有显著的促进hMSC增殖的作用（P<0.05）, bFGF在25~100 μg•L^-1对hMSC的ALP活性有较显著的抑制作用。 结论：hMSC在体外可迅速扩增;bFGF对hMSC的增殖作用与浓度成正性剂量-效应关系。     

高浓度葡萄糖对体外培养小鼠胰岛细胞NF-κB的表达及细胞凋亡的影响

目的:探讨核因子κB（NF-κB）在高浓度葡萄糖诱导胰岛细胞凋亡中的作用。方法：对分离纯化的小鼠胰腺胰岛细胞进行体外培养,按DMEM培养液里葡萄糖浓度不同,分为6组：G1组（5.6 mmol•L^-1葡萄糖）、G2组（7.8 mmol•L^-1）、G3组（11.1 mmol•L^-1）、G4组（16.7 mmol•L^-1）、 G5组(22.2 mmol•L^-1)及G6组（27.6 mmol•L^-1）。采用放射免疫法检测各组胰岛细胞胰岛素分泌水平;免疫组织化学染色法检测NF-κB活性;免疫荧光法检测细胞色素C释放和细胞核染色检测细胞凋亡。结果：当葡萄糖浓度5.6～11.1 mmol•L^-1时,随着葡萄糖浓度升高,胰岛细胞胰岛素分泌逐渐增加（P<0.05),NF-κB的活性逐渐增加（P<0.05),但此时细胞凋亡未见显著的变化（P>0.05),细胞色素C释放的组间比较差异无显著性（P>0.05)。当葡萄糖浓度≥16.7 mmol•L^-1时,与葡萄糖浓度≤11.1mmol•L^-1各组比较, NF-κB表达明显增加,细胞色素C的释放也逐渐增强（P<0.05),胰岛细胞凋亡百分率同时也呈明显增加趋势（P<0.05）。结论：高浓度葡萄糖可以诱导胰岛细胞NF-κB表达增加,细胞色素C释放增强,同时诱导胰岛细胞凋亡,提示NF-κB的激活与胰岛细胞凋亡可能存在必然的联系,抑制NF-κB活性可能对于保护胰岛细胞有重要作用。     

PPAR-γ配体联合顺铂对人肺癌PLA-801D细胞增殖抑制及诱导凋亡作用

目的：探讨15-脱氧前列腺素J₂(15d-PGJ₂ )联合顺铂（DDP）对人肺癌PLA-801D细胞生长的影响及其诱导凋亡的机制。方法：取生长良好的人肺癌PLA-801D细胞株,接种于96孔培养板,培养24 h后分别加入不同浓度15d-PGJ₂(0、5、10、20、40、80 μg•L^-1) (单纯使用15d-PGJ₂各组)和联合加入15d-PGJ₂与DDP (3 mg•L^-1)(15d-PGJ₂+DDP各组)(0 μg•L^-1 为对照组),作用24 h后用倒置显微镜观察每组细胞形态学的变化。采用MTT比色法检测15d-PGJ₂联合顺铂对人肺癌PLA-801D细胞增殖抑制作用;DPA 法检测其活性;流式细胞术检测其诱导细胞凋亡及周期的变化。结果：当低浓度15d-PGJ₂（5、10和20 μg•L^-1）,作用于人肺癌PLA-801D细胞时,细胞生长抑制率、凋亡率、DNA 片段化比率和caspase-3 活性与对照组比较差异均无显著性（P>0.05）,当浓度为40 μg•L^-1时,细胞生长抑制率、凋亡率、DNA 片段化比率和caspase-3活性均高于对照组(P<0.01);当 15d-PGJ₂(10 μg•L^-1)和DDP（3 mg•L^-1）联合应用时, 即可使人肺癌PLA-801D细胞生长抑制率、细胞凋亡率、DNA 片段化比率和caspase-3 活性均较单独使用15d-PGJ₂明显增高(P<0.01)。当15d-PGJ₂(40 μg•L^-1)作用人肺癌PLA-801D细胞24 h后,G₀/G₁期细胞比例明显高于对照组（P< 0.01）,S和 G₂/M 期细胞比例均明显低于对照 组（P<0.01）。结论：单独使用15d-PGJ₂在高浓度时可以诱导人肺癌PLA-801D细胞凋亡, 15 d-PGJ₂与DDP联合应用时,前者低浓度即可诱导人肺癌PLA-801D细胞凋亡作用增强。     

抗氧化剂PDTC对酸性环境诱导的人卵巢癌SKOV3细胞IL-8表达的作用及机制

目的：探讨二硫氨基甲酸吡啶（PDTC）对酸性环境中培养的人卵巢癌细胞SKOV3的增殖活性及白细胞介素8 (IL-8) 表达的影响,以及细胞核转录因子-κB（NF-κB）在此过程中的作用。方法：将SKOV3细胞分为5组:常规培养液组（对照组）和酸性培养组以及酸性培养液加PDTC组(分别加入终浓度为25、50、100 μmol•L^-1的PDTC);各组培养12 h后,MTT法检测PDTC对SKOV3细胞增殖的影响,ELISA法检测培养上清中IL-8蛋白含量,Western blotting检测核内NF-κB蛋白的表达。结果： SKOV3细胞在酸性环境中IL-8表达水平［(1 384.211±42.320) ng•L^-1］高于对照组［（617.505±47.850） ng•L^-1］ ( P<0.01)。加入不同浓度PDTC（25、50、100 μmol•L^-1） ,IL-8表达逐步降低［（1 239.053±14.490）、（1 113.578±29.140）、（1 014.457±55.490） ng•L^-1］ ,均低于酸性培养组( P<0.05)。在酸性环境中的SKOV3细胞可观察到颜色较深的核内NF-κB蛋白条带,应用PDTC后NF-κB在核内的蛋白条带颜色变浅。结论： PDTC对酸性环境中SKOV3细胞IL-8的表达具有抑制作用,该作用与PDTC抑制NF-κB的活化有关。     

EGF对大鼠真皮成纤维细胞增殖的影响

目的观察EGF对大鼠真皮成纤维细胞增殖活性的影响。方法将传代培养的第3代大鼠真皮成纤维细胞(FB)以含有新生牛血清的DMEM培养基进行培养,当细胞培养至对数生长期时,分别改用添加有不同浓度EGF的培养液继续培养,以MTT法测定细胞增殖活性。结果在培养液中添加不同浓度的EGF,FB的增殖活性均有不同程度的增加。结论EGF对体外培养大鼠真皮成纤维细胞的增殖具有促进作用。     

三七总甙对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及胶原合成的作用

目的　观察三七总甙对体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及胶原合成的作用 ,以寻找治疗人增生性瘢痕的有效药物。方法　体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞 ,分别应用MTT比色法和3H 脯氨酸掺入法检测三七总甙作用后细胞增殖及胶原合成的变化。结果　和对照组相比 ,三七总甙能够显著抑制成纤维细胞增殖及胶原合成 (P <0 0 1)。结论　三七总甙具有体外抗纤维化作用 ,可能成为治疗增生性瘢痕的有效药物     

EGF与bFGF对体外大鼠巩膜成纤维细胞增殖的影响

目的研究表皮生长因子（EGF）和碱性成纤维生长因子（bFGF）在体外对大鼠巩膜成纤维细胞生长的影响。为进一步了解近视发生的分子机制提供依据。方法采用植块法培养大鼠巩膜成纤维细胞。细胞经传代纯化鉴定后，取第3～4代细胞加入不同浓度的EGF（0．1～200ng／mL）、bFGF（0．1～50ng／mL）。分别培养24、48、72h用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞的增殖密度。观察不同浓度、时间下细胞增殖情况。结果发现0．1～100ng／mL的EGF和0．1～50ng／mL的bFGF对大鼠巩膜成纤维细胞均有明显的促增殖作用，且呈剂量相关性。结论一定浓度的EGF、bFGF对体外培养的大鼠巩膜成纤维细胞的生长具有促进作用。     

壳聚糖胶原支架复合胰岛素样生长因子-1在牙周组织工程中的应用

目的:观察复合胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的壳聚糖胶原支架对体外培养的人牙周韧带细胞(PDLC)的影响,以探讨复合IGF-1的壳聚糖胶原支架在人PDLC增殖中的作用。方法:将体外培养PDLC接种于复合IGF-1的壳聚糖胶原支架上,通过MTT法测定对细胞增殖的影响,同时通过半定量PCR检测细胞mRNA合成变化。结果:PDLC在两种不同支架上的增殖及mRNA合成情况有显著性差异(P<0.5)。结论:该复合支架可以作为IGF-1的载体;复合在支架上的IGF-1对PDLC的粘附与增殖及细胞外基质的合成均有较好地促进作用。     

川芎嗪对心脏成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的观察川芎嗪（TMP）对体外培养心脏成纤维细胞（CF）的增殖与胶原合成的影响。方法用消化法培养新生SD大鼠的CF，用四氮唑蓝（MTT）比色法测定细胞增殖，羟脯氨酸碱水解法测定胶原合成．观察不同浓度TMP对CF增殖和胶原合成的影响。结果随着TMP浓度的升高，MTT比色法A490值呈下降趋势；CF分泌的胶原随着TMP作用浓度和时间的增加呈递降趋势。结论TMP具有抑制SD新生大鼠CF增殖和胶原合成的作用。     

风湿性心脏病人心瓣膜成纤维细胞的体外培养及其胶原合成

目的：观察风湿性心脏病人瓣膜成纤维细胞的胶原合成，为研究风湿性心脏病瓣膜纤维化的发病机制建立基础。方法：采用消化组织块培养法建立人二尖瓣和主脉瓣成纤维细胞体外培养方法，对５例风湿性心脏病人和５例尸检中除外心血管疾病和胶原系统疾病的二尖瓣和主动脉瓣成纤维细胞进行了体外培养，并用３Ｈ－脯氨酸测定瓣膜成纤维细胞的胶原合成。结果：二尖瓣和主动脉瓣的瓣膜成纤维细胞其形态、生长方式及胶原合成差异均不明显，风湿性心脏病瓣膜成纤维细胞的胶原合成明显高于对照组。结论：体外培养的风湿性心脏病人瓣膜成纤维细胞胶原合成明显增加     

川芎嗪抑制瘢痕成纤维细胞增殖及胶原的合成

目的：研究川芎唪治疗增生性瘢痕的机制。方法：对增生性瘢痕成纤维细胞进行体外培养,通过ＭＴＴ法检测成纤维细胞细胞的增殖生,用羟脯氨酸（ＨＰ）比色法测定细胞胶中成含量。结果：ＭＴＴ法显示川芎嗪增生性瘢痕成纤维细胞的增殖活性,可以减少成纤维细胞的胶原合成使细胞形态学发生改变。结论;川芎唪可以抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖及胶原合成。     

氟伐他汀对大鼠肺成纤维细胞增殖的抑制作用

目的:观察氟伐他汀(fluvastatin, Flu)对体外培养的大鼠肺成纤维细胞(fibroblast, Fb)增殖的抑制作用.方法:在体外培养的大鼠肺Fb中,加入Flu,用计数法和MTT比色法观察并比较不同浓度的Flu对培养细胞增殖的抑制作用、对大鼠肺Fb分裂指数及分泌胶原的影响.结果:计数法和MTT比色法均显示,Flu对体外培养的大鼠肺Fb的增殖具有明显的抑制作用(P<0.01),并呈剂量依赖效应,10-4 mol/L的Flu已可使培养细胞的增殖受到完全抑制.培养的大鼠肺Fb细胞分裂指数及胶原分泌量在Flu的作用下也有明显降低(P<0.01).结论:Flu对体外培养的大鼠肺Fb的增殖及其胶原分泌具有明显的抑制作用,为肺纤维化的治疗提供了一种新的方法.     

氢气水通过升高Nrf2的表达减轻百草枯诱导的肺纤维化

目的 探讨氢气水依赖Nrf2对百草枯诱导的肺成纤维细胞增殖,转化及胶原分泌的影响。方法 人肺成纤维细胞（HFL-1）体外培养,采用RNA干扰技术沉默HLC-1细胞中Nrf2的表达,设置对照组、百草枯（PQ）染毒组、PQ+氢气水治疗组、PQ+氢气水+Nrf2siRNA综合干预组。设置对照组：人肺成纤维细胞（HFL1）正常培养;染毒组：HFL1+600 μmol/L PQ 24 h;氢气水治疗组：HFL1+600 μmol/L PQ24 h后+氢气水;综合干预治疗组：HFL1转染siRNA+600 μmol/LPQ 24 h后+氢气水。MTT法检测细胞的增殖,Western blot、qt-PCR、免疫荧光检测各组肺成纤维细胞Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、α-SMA、Nrf2的表达,同时ELISA检测抗氧化物SOD、CAT、GSH的含量。结果 氢气水治疗组较PQ染毒组Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、α-SMA的表达明显降低,干扰Nrf2基因表达后,氢气水疗效较治疗组显著下降（P<0.05）。氢气水治疗组Nrf2表达量较PQ染毒组增加（P<0.05）。结论 氢气水可能通过诱导Nrf2的表达促进肺成纤维细胞的增殖和抗氧化物的生成,同时抑制其转化和分泌功能。     

补肾活血方对大鼠心脏成纤维细胞增殖及胶原表达的影响

摘要：目的探讨补肾活血方对大鼠成纤维细胞增殖及胶原表达的影响,为其抗心肌纤维化提供实验依据。方法通过血清药理
学方法制备补肾活血方含药血清,与DMEM配成细胞培养液。提取大鼠心脏成纤维细胞（CFs）并传代培养,将3~4代CFs分为
4组：A组为10%含药血清培养液培养,B组为20%含药血清培养液培养,C组为不含药血清培养液培养,D组为对照组,为常规胎
牛血清培养液培养。培养72 h后CCK-8检测CFs增殖,RT-PCR检测胶原基因表达,Western blotting检测胶原蛋白表达。结果
与C组、D组相比,A组、B组CFs增殖明显降低,B组较A组进一步降低（P<0.05）;Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA在A、B两组表达较C、
D两组明显下调（P<0.05）,Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达在A、B两组明显低于C、D两组（P<0.05）。结论补肾活血方可以抑制大鼠
成纤维细胞增殖及胶原表达。