乙酰肝素酶反义寡核苷酸对胃癌细胞侵袭和转移的影响Ⅰ.乙酰肝素酶反义寡核苷酸对SGC-7901细胞MMP-2和TIMP-2表达的影响

目的：探讨乙酰肝素酶（HPA）反义寡脱氧核苷酸（AS-OND）对人胃癌细胞株SGC-7901细胞基质金属蛋白酶-2（MMP-2）及组织金属蛋白酶抑制剂-2（TIMP-2）表达的影响。方法：采用脂质体介导法将HPA AS-ODN转染SGC-7901细胞,用RT-PCR检测HPA-mRNA表达．用免疫细胞化学的方法检测细胞内MMP-2和TIMP-2的变化。结果：AS-ODN转染48h后,SGC-7901细胞内HPA-mRNA表达下降（P〈0．01）,MMP-2的表达量亦减少（P〈0．01）。结论：HPAAS-ODN可以有效地抑制胃癌细胞MMP-2的表达。     

乙酰肝素酶反义寡核苷酸诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

目的：探讨乙酰肝素酶(HPA)反义寡脱氧核苷酸(AS-ODN)对人胃癌细胞株SGC-7901细胞凋亡的影响及其作用机制。方法：设计合成HPAAS-ODN．用脂质体介导法转染SGC-7901细胞,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染前后细胞HPA-mRNA及p53、bcl-2基因的表达;用倒置相差显微镜及扫描电镜观察转染前后细胞的形态学变化;用DNA末端原位标记染色法(TUNEL)检测转染前后细胞的凋亡指数;用流式细胞仪检测转染前后细胞凋亡率的变化。结果：HPAAS-ODN转染后,SGC-7901细胞内HPA-mRNA表达下降,p53的表达量升高,bcl-2的表达量降低;细胞凋亡指数和凋亡率升高;出现了典型的凋亡细胞的形态学变化。结论：HPAAS-ODN可有效地抑制胃癌细胞HPA mRNA的表达：并通过下调bcl-2,上调p53的表达,诱导胃癌细胞凋亡。     

胃癌细胞SGC-7901中乙酰肝素酶基因和CD44v6表达的关系

目的:探讨乙酰肝素酶(HPA)反义寡核苷酸(AS-ODN)对CD44v6表达的影响。方法:采用脂质体介导HPAAS-ODN转染人胃癌细胞株SGC-7901,RT-PCR检测HPAmRNA的表达,采用免疫细胞化学SABC法观察细胞内CD44v6表达的变化。结果:脂质体介导转染HPAAS-ODN48h后MSGC-7901胃癌细胞内HPAmRNA表达下降MCD44v6阳性表达率转染前69.4%M转染不同浓度的AS-ODN后分别为56.5%,54.1%,46.5%和41.3%。转染后细胞CD44v6表达明显减少(P<0.01)。结论:HPAAS-ODN可以有效抑制胃癌细胞CD44v6的表达。     

化痰通瘀解毒方水提取物对胃癌SGC-7901细胞划痕愈合及E-cadherin和MMP-2表达的影响

目的 观察化痰通瘀解毒方（Huatan Tongyu Jiedu Decoction,HTJD）水提取物对胃癌细胞SGC-7901 E-钙黏蛋白（Epithelial cadherin,E-Cad）、基质金属蛋白酶-2（matrix metallopro-teinase 2,MMP-2）表达及其侵袭转移能力的影响。方法 分别用含化痰通瘀解毒方水提取物5、10、20、30、40μg/mL的培养基干预人胃癌SGC-7901细胞24h后,采用划痕实验检测人胃癌细胞SGC-7901的侵袭迁移能力,采用酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）检测SGC-7901细胞中和E-Cad、MMP-2的表达水平。结果 HTJD 10、20、30、40μg/mL浓度组与空白对照组相比,划痕愈合距离（△d）明显减小（P<0.05或P<0.01）;HTJD 10、20、30、40μg/mL浓度组SGC-7901细胞上清液中E-Cad比空白对照组含量升高;细胞上清液中MMP-2的含量与空白对照组相比明显减少（P<0.05或P<0.01）。结论 化痰解毒方可抑制人胃癌细胞SGC-7901侵袭和迁移能力,其作用机制可能与下调MMP-2表达水平,上调E-Cad的表达水平有关。     

MMP-2、TIMP-2在食管鳞状细胞癌的表达与临床意义

目的:探讨基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达与术后复发或转移和预后之间的关系.方法:采用组织芯片技术,用免疫组织化学法检测ESCC术后存活5年以上且无复发转移组(A组)和术后在1年内发生复发转移死亡组(B组)肿瘤组织细胞中的MMP-2、TIMP-2表达情况.结果:MMP-2、TIMP-2在正常食管鳞状上皮中不表达或少量表达,在ESCC组织中有不同程度的表达,但MMP-2和TIMP-2在B组的表达水平均显著高于A组(P<0.01).MMP-2表达与肿瘤分化程度和有无淋巴结转移均有相关关系(P<0.05和P<0.01);TIMP-2表达与分化程度和有无淋巴结转移率亦均有相关关系(P<0.01和P<0.05).TIMP-2表达与MMP2表达呈正相关关系(P<0.01).结论:MMP-2、TIMP-2 表达在食管癌组织中高表达,其表达情况与食管癌术后发生复发转移有明显相关性,联合检测 MMP-2、TIMP-2表达对预测ESCC术后发生复发转移和预后有重要价值.     

藤梨根制剂对胃癌SGC-7901细胞MMP-2、MMP-9和SDF-1表达的影响

目的:通过观察藤梨根制剂对胃癌细胞基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)和基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)表达的影响,探讨藤梨根制剂的抗胃癌机制。方法:分别采用0 g·L~(-1)、15 g·L~(-1)、20 g·L~(-1)、25 g·L~(-1)、30 g·L~(-1)藤梨根制剂处理胃癌SGC-7901细胞,分别处理12 h、24 h、48 h、72 h,采用噻唑蓝比色法(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)实验检测胃癌SGC-7901细胞增殖情况,采用Transwell实验及细胞划痕实验检测胃癌SGC-7901细胞侵袭、迁移能力,采用实时荧光定量聚合酶链式反应及蛋白印迹法检测胃癌SGC-7901细胞MMP-2、MMP-9、SDF-1 m RNA及蛋白表达水平。结果:MTT检测结果可见,15 g·L~(-1)、20 g·L~(-1)、25 g·L~(-1)、30 g·L~(-1)藤梨根制剂可明显抑制胃癌SGC-7901细胞增殖,且呈现一定剂量、时间依赖性(P0.05);细胞划痕实验结果可见,15 g·L~(-1)、20 g·L~(-1)、25 g·L~(-1)藤梨根制剂可明显降低胃癌SGC-7901细胞迁移能力,且呈现一定剂量、时间依赖性(P0.05);15 g·L~(-1)、20 g·L~(-1)、25 g·L~(-1)藤梨根制剂可明显抑制胃癌SGC-7901细胞侵袭能力,且呈现一定剂量依赖性(P0.05);15 g·L~(-1)、20 g·L~(-1)、25 g·L~(-1)藤梨根制剂可明显抑制胃癌SGC-7901细胞MMP-2、MMP-9、SDF-1 m RNA及蛋白水平表达,且呈现一定剂量依赖性。结论:藤梨根制剂可明显抑制胃癌SGC-7901细胞增殖、迁移、侵袭,其作用机制可能为下调胃癌细胞MMP-2、MMP-9、SDF-1表达。     

MDI301调节MMP-1、MMP-2、TIMP-1和前胶原蛋白的表达

目的:检测MDI301对正常细胞和高糖细胞中基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)和I、III型前胶原蛋白表达的影响。探讨MDI301对糖尿病皮肤溃疡和足溃疡的治疗潜力。方法:采用Real time PCR检测人成纤维细胞中MMP-1、MMP-2和TIMP-1 mRNA的表达水平;ELISA方法检测细胞培养基中TIMP-1蛋白表达量;Western blot检测I型和III型前胶原蛋白表达水平。结果:MDI301能降低高糖细胞中MMP-1和MMP-2 mRNA的表达(P<0.05),增加TIMP-1 mRNA和细胞培养上清中TIMP-1蛋白的表达(P<0.05);同时还能增加高糖细胞中I和III型前胶原蛋白的表达量(P<0.05)。结论:MDI301可能会对糖尿病患者体内MMP-1、MMP-2、TIMP-1和I、III型前胶原蛋白的表达有相似的作用,使其有望用于糖尿病皮肤溃疡和足溃疡的治疗。     

侵袭性垂体腺瘤中MMP-2和TIMP-2的表达及其相互关系的研究

目的探讨基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和组织金属蛋白酶抑制物-2(TIMP-2)在垂体腺瘤中的表达及其与垂体腺瘤侵袭性的相关性。方法用免疫组化SP法和RT-PCR法检测55例垂体腺瘤标本的MMP-2及TIMP-2的表达,分析其与侵袭性垂体腺瘤的关系及两者之间的相关性。结果免疫组化显示MMP-2在侵袭性垂体腺瘤的强阳性及阳性表达率分别为65.6%和93.8%,明显高于非侵袭性垂体腺瘤的13.1%和43.5%(P<0.05或P<0.01)。侵袭性和非侵袭性垂体腺瘤的TIMP-2强阳性表达率分别为6.3%和43.5%(P<0.01),阳性表达率分别为50.0%和82.6%(P<0.05)。RT-PCR显示侵袭性垂体腺瘤的MMP-2 mRNA表达明显高于非侵袭性垂体腺瘤(1.126±0.081,0.425±0.083,P<0.01)。侵袭性腺瘤组TIMP-2 mRNA表达(0.209±0.032)较非侵袭性腺瘤组(0.768±0.050)显著降低(P<0.01)。侵袭性腺瘤组中MMP-2与TIMP-2 mRNA表达呈负相关(r=-0.67,P<0.05),而非侵袭性腺瘤组中无相关性(r=-0.24,P>0.05)。结论MMP-2高表达及TIMP-2低表达与垂体腺瘤的侵袭性密切相关,MMP-2及TIMP-2可以作为垂体腺瘤侵袭性的有效参考指标。     

银杏叶提取物对糖尿病大鼠肾组织MMP-2及TIMP-2表达的影响

目的:观察基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶抑制因子-2(TIMP-2)在糖尿病大鼠肾组织中的表达及银杏叶提取物(EGB)对两者表达的影响。方法:30只雄性SD大鼠随机分为3组:正常对照组(C组),糖尿病组(DM组),EGB治疗组(EGB组,8 mg.kg-1.d-1)。腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导大鼠造成糖尿病模型,EGB组用银杏叶提取物进行灌胃。8周后,用免疫组化方法检测各组大鼠肾皮质MMP-2、TIMP-2的蛋白表达。结果:糖尿病组大鼠肾小球MMP-2蛋白表达较正常对照组明显减少,TIMP-2蛋白明显升高(P<0.01);EGB组MMP-2较糖尿病组表达升高(P<0.01)、TIMP-2表达较糖尿病组减少(P<0.01)。结论:EGB可通过调节MMP-2/TIMP-2的平衡,减少细胞外基质积聚而对糖尿病大鼠起到肾脏保护作用。     

肺癌MMP-2和TIMP-2的表达及意义

目的探讨肺癌组织中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和组织基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)的表达及其意义.方法采用免疫组化S-P法检测20例癌旁正常肺组织、74例肺癌组织中MMP-2和TIMP-2的表达.结果肺癌组织MMP-2表达显著高于癌旁正常肺组织(p＜0.01).肺癌MMP-2表达有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者(P＜0.01),Ⅲ～Ⅳ期高于Ⅰ～Ⅱ期(P＜0.05).肺癌TIMP-2表达有淋巴结转移者低于无淋巴结转移者(P＜0.05).结论MMP-2和TIMP-2表达与肺癌侵袭转移密切相关.     

TIMP-2拮抗胃癌SGC-7901细胞侵袭能力实验研究

目的 探讨基质金属蛋白酶抑制剂－２（ＴＩＭＰ－２）对ＳＧＣ－７９０１胃癌细胞体外侵袭能力的影响。方法 将人全长ＴＩＭＰ－２基因经脂质包裹转染ＰＡ３１７细胞系,Ｇ４１８筛选,感染人ＳＣＧ－７９０１胃癌细胞系,经体外细胞和电泳率、软琼脂形成和侵袭能力均明显低于对照组,而与对照组相比细胞增殖曲线没有明显的变化。结论 ＴＩＭＰ－２基因转染可以肿瘤细胞的表面电荷发生变化,使细胞的电泳能力、细胞的移动性和侵袭     

强力霉素对人胃癌细胞体外增殖的影响

目的研究强力霉素对人胃癌细胞SGC-7901增殖的影响及其机制。方法用MTT法和免疫组织化学法分别检测SGC-7901细胞的增殖及基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)蛋白表达水平。结果强力霉素作用于SGC-7901的抑制效应呈浓度和时间依赖性,SGC-7901经强力霉素处理后MMP-2的表达,不同浓度间有显著性差异(P<0．01)。结论强力霉素对胃癌细胞SGC-7901有抑制增殖的作用,其机制可能与下调MMP-2蛋白表达有关。     

Prognostic value of matrix metalloproteinase- 2 and tissue inhibitor of metall oproteinase- 2 in bladder carcinoma

Objectives To detect the level of matrix metalloproteinase- 2 (MMP- 2) mRNA and the tissue inhibitor of metalloproteinase- 2 (TIMP- 2) mRNA in bladder transitional cell carcinoma (BTCC), and to estimate the prognosis for bladder tumor based on the quality and quantity of MMP- 2 and TIMP- 2 mRNA. Methods Thirty- five samples of human BTCC and 15 normal fresh bladder tissues were studied by RT- PCR analysis followed by computer- assisted image analysis. Results The level of the MMP- 2 mRNA in BTCC was significantly increased compared with that in normal bladder epithelium. The positive rates of MMP- 2 and TIMP- 2 mRNA were 71. 4% and 65. 7% in BTCC, and 66. 7% and 60. 0% in the normal bladder wall. The expression intensity of the MMP- 2 mRNA by image analysis tended to increase with tumor grading and staging, which showed statistical significance. Similarly, the MMP- 2 to TIMP- 2 ratio also showed statistically significant difference between normal bladder tissue and bladder carcinoma (P&lt;0. 01). Conclusions A high level of the MMP- 2 mRNA exists in BTCC, which may function to damage collagen Ⅳ inside the basement membrane and the extracellular basement of the bladder. The level of the MMP- 2 mRNA is proportional to BTCC grading and staging, which may have prognostic value. The MMP- 2 to TIMP- 2 ratio may play a more significant role in the determination of the aggressiveness and prognosis of bladder tumor.     

hTERT上调FOXM1乙酰化影响胃癌细胞侵袭能力

目的 探讨人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse enzyme,hTERT)促进胃癌细胞侵袭的分子机制.方法 构建稳定过表达hTERT的细胞株SGC-7901-hTERT,采用Western blot检测叉头盒蛋白(forkhead box M1,FOXM1)的表达,qRT-PCR和Western blot检测FOXM1下游侵袭相关基因基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的mRNA和蛋白表达;构建FOXM1的shRNA干扰质粒,在SGC-7901-hTERT细胞中转染该质粒,Transwell法检测细胞侵袭能力,qRT-PCR和Western blot检测MMP-2、MMP-9的mRNA和蛋白表达;构建FOXM1启动子活性报告质粒,在SGC-7901-hTERT细胞中用双荧光素酶报告实验检测FOXM1启动子活性,qRT-PCR检测FOXM1 mRNA表达;构建稳定过表达FOXM1的细胞株SGC-7901-HA-FOXM1,并在此细胞中转染hTERT过表达质粒,免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)检测FOXM1乙酰化水平变化,免疫荧光实验检测hTERT与FOXM1的细胞定位.结果 与对照组比较,过表达hTERT促进FOXM1及其下游分子MMP-2、MMP-9的蛋白表达,同时也促进肿瘤细胞侵袭(P＜0.01),但不影响FOXM1的启动子活性及mRNA表达;与过表达hTERT组比较,干扰FOXM1可抑制MMP-2、MMP-9的mRNA和蛋白表达,同时也抑制肿瘤细胞侵袭(P＜0.01);hTERT与FOXM1存在细胞共定位,且过表达hTERT可上调FOXM1乙酰化水平.结论 hTERT通过上调FOXM1乙酰化促进胃癌细胞侵袭.     

Hedgehog信号通路对人胃癌SGC-7901细胞侵袭迁移作用及机制探讨

目的:探讨Hedgehog(Hh)信号通路对人胃癌SGC-7901细胞侵袭迁移的作用及其机制.方法:环靶明特异性阻断Hh信号通路后,Transwell小室和划痕实验检测SCC-7901细胞侵袭和迁移的能力;RT-PCR检测SGC-7901细胞中MMP-2和MMP-9 mRNA表达;细胞免疫化学检测SGC-7901细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达.结果:阻断Hh信号通路能显著抑制SGC-7901细胞的侵袭和迁移能力(P＜0.05).MMP-2和MMP-9的mRNA以及蛋白表达亦显著降低(P＜0.05).结论:Hh信号通路可能是通过调节MMP-2和MMP-9的表达促进SCC-7901细胞侵袭、迁移.     

基质金属蛋白酶-7及其组织抑制因子-1在胃癌中的表达与浸润、转移的关系研究

目的:探讨基质金属蛋白酶-7(MMP-7)及其组织抑制因子-1(TIMP-1)在胃癌中的表达与浸润、转移的关系。方法:应用免疫组化检测36例胃癌标本中肿瘤组织及癌旁组织中MMP-7和TIMP-1的表达,并进行回顾性随访。结果:胃癌组织中MMP-7阳性表达率(58.3%)明显高于癌旁组织(5.6%,P<0.01),胃癌组织中TIMP-1阳性表达率(44.4%)与癌旁组织(50.0%)无统计学意义。胃癌中MMP-7和TIMP-1之间表达强度关系无明显相关性。TIMP-1表达随胃癌TNM分期增加而减少(P<0.05)。结论:MMP-7表达与胃癌组织学行为有关,TIMP-1可能抑制胃癌的浸润、转移。     

Inhibition of Metastatic Progression of SSTR2 Gene Transfection Mediated by Adenovirus in Human Pancreatic Carcinoma Cells

The poor prognosis of pancreatic cancer is dueto the delayed diagnosis and the high invasive andmetastatic potential of pancreatic tumors,resultingin a lowrate of curative resections and a highinci-dence of relapse.It is of pri mei mportance to eluci-date the molecular events involved in the progres-sion of this disease,and developing newtherapeu-tic strategies have become a key point in this field.Gene therapies may provide more favorable thera-peutic benefits than the conventional treat ment…     

RNA干扰沉默STAT3基因对胃癌细胞侵袭力的影响

目的观察瞬时转染信号传导与转录激活因子3（STAT3）小干扰RNA（siRNA）后对人胃癌细胞SGC-7901侵袭力的影响,探讨干扰STAT3后降低胃癌细胞侵袭力的机制。方法以人胃癌细胞系SGC-7901为研究对象,培养瞬时转染特异性siRNA的SGC-7901细胞系,通过RT-PCR、免疫细胞化学、Transwell体外侵袭实验等检测该siRNA对SGC-7901细胞STAT3及MMP-9基因表达和对细胞侵袭转移能力的影响。结果STAT3 siRNA转染SGC-7901细胞48 h后,STAT3 mRNA水平下降了73.04%,MMP-9 mRNA水平下降了57.2%;Transwell体外侵袭实验显示,STAT3 siRNA组能显著抑制SGC-7901的侵袭力（P〈0.01）。结论应用siRNA技术能有效抑制SGC-7901STAT3基因的表达,进而可能通过抑制MMP-9基因的表达,降低细胞的侵袭力,为以STAT3为靶向的胃癌基因治疗提供了新的思路和方法。     

胃癌组织中基质金属蛋白酶-2和组织基质金属蛋白酶抑制剂-2的表达及其与临床病理特征的关系

目的 探讨基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和组织基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)在人胃癌组织中的表达,及其与胃癌临床病理特征的关系.方法 选取100个胃癌手术切除标本中胃癌组织、癌旁组织及正常胃组织,采用免疫组织化学法检测MMP-2和TIMP-2蛋白的表达,并分析两者的表达及其与胃癌临床病理特征之间的相关性.结果 胃癌组织中的MMP-2蛋白阳性率为77.0%,显著高于癌旁组织的33.0%和正常胃组织的8.0%(P值均＜0.01),癌旁组织又显著高于正常胃组织(P＜0.01).胃癌组织中的TIMP-2蛋白阳性率为29.0%,显著低于癌旁组织的62.0%和正常胃组织的76.0%(P值均＜0.01),癌旁组织又显著低于正常胃组织(P＜0.01).随着肿瘤浸润深度的增加(Tis～T4)、周围淋巴结转移的增多(N0～N3)、临床分期的进展(0～Ⅳ期),MMP-2蛋白阳性率逐渐升高,TIMP-2蛋白阳性率逐渐降低,且差异有统计学意义(P值均＜0.01).结论 MMP-2和TIMP-2的表达可能与胃癌的发生、侵袭和转移有关,检测MMP-2和TIMP-2的表达有助于预测胃癌转移.