溃疡性结肠炎患者结肠黏膜中MMP-3和VEGF的表达及临床意义

目的:探讨溃疡性结肠炎患者结肠黏膜中MMP-3和VEGF的表达及其临床意义。方法:收集我院门诊或住院收治的溃疡性结肠炎(UC)患者56例,根据Truelove分级分为轻度8例,中度10例,重度14例;内镜分级标准分为I级10例,II级26例,III级20例。另选择结肠镜检查正常者40例作为对照组。采用免疫组化方法检测UC患者结肠黏膜组织和对照组正常结肠黏膜组织中MMP-3和VEGF的表达,分析比较两者在不同病情程度和内镜分级溃疡性结肠炎和正常肠组织中的表达水平的差异。结果:UC患者结肠黏膜组织中MMP-3和VEGF阳性细胞数均明显高于对照组(P0.05);活动期UC患者结肠黏膜组织中,随UC病情加重和内窥镜分级增高,MMP-3和VEGF的表达阳性细胞数均呈逐渐增加趋势,三组差异均有统计学意义。结论:MMP-3和VEGF可能在UC发病机制中起重要作用,并对指导临床评估患者的疾病活动度具有重要意义。     

温补脾肾法对脾肾阳虚型UC大鼠JAK2/STAT3-SOCS6信号通路相关蛋白及基因表达的影响北大核心CSCD

目的:观察以温补脾肾法为指导的理中汤合四神丸对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎(UC)大鼠模型病变结肠组织中JAK2、STAT3、p-STAT3、SOCS6蛋白及基因表达的影响。方法:采用病证结合造模方法复制脾肾阳虚型UC模型,成模大鼠随机分为模型组、柳氮磺砒啶组(SASP组)、理中汤合四神丸高、中、低剂量组,16只/组,同时设16只大鼠作为空白组。空白组与模型组给予蒸馏水灌胃,各治疗组给予对应的药物及剂量灌胃治疗,连续21 d。HE染色观察大鼠结肠黏膜组织病理变化;免疫组化法检测大鼠结肠黏膜组织中JAK2、STAT3、p-STAT3、SOCS6蛋白表达情况;RT-qPCR检测大鼠JAK2、STAT3、SOCS6mRNA表达情况;ELISA检测大鼠组织和血清中TGF-β1、ICAM-1含量。结果:与空白组相比,模型组大鼠结肠黏膜组织JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达显著升高(P<0.01),JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白着色深,表达呈强阳性,SOCS6蛋白表达显著降低(P<0.01),SOCS6蛋白着色浅,表达呈弱阳性。JAK2、STAT3 mRNA表达显著升高,SOCS6 mRNA表达显著降低(P<0.01),组织和血清中TGF-β1含量显著降低(P<0.01),ICAM-1含量显著升高(P<0.01);与模型组相比,中药高、中剂量组及SASP组JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达显著降低(P<0.01),JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白着色浅,表达呈弱阳性,SOCS6蛋白表达显著升高(P<0.01),SOCS6蛋白着色深,表达呈强阳性。JAK2、STAT3 mRNA表达显著降低(P<0.01),SOCS6 mRNA表达显著升高(P<0.01),组织和血清中TGF-β1含量显著升高(P<0.01),ICAM-1含量显著降低(P<0.01)。结论:以温补脾肾法为指导的理中汤合四神丸可能通过抑制JAK2/STAT3-SOCS6信号通路的激活,调节免疫系统平衡,修复受损结肠黏膜,达到治疗UC的目的。     

基于IL-6/JAK2/STAT3信号通路探讨灰树花提取物对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织炎症反应的影响

目的：探讨灰树花提取物通过调控白细胞介素6(IL-6)/蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导和激活因子3(STAT3)信号通路,对溃疡性结肠炎（UC）大鼠结肠组织炎症反应的影响及作用机制。方法：将40只SD大鼠随机分为空白对照组、UC模型组、灰树花治疗组、西药治疗组、联合治疗组,每组8只。采用3%DSS自由饮用法7 d建立UC大鼠模型后,治疗组分别灌胃灰树花提取物10 mg/（kg·d）、柳氮磺吡啶0.3 g/（kg·d）及等量两种药物,连续14 d。实验期间观察大鼠一般状态,计算疾病活动指数（DAI）评分;采用HE染色法观察大鼠结肠组织病理改变;Western blot检测大鼠结肠组织IL-6、JAK2、STAT3、pSTAT3蛋白表达水平;ELISA检测大鼠血清中IL-6含量;免疫组化法测定大鼠结肠组织中IL-6R、MPO蛋白含量及表达情况。结果：与空白对照组比较,UC模型组大鼠一般状态欠佳,DAI评分升高,HE染色可见明显的组织黏膜损伤与炎症细胞浸润;结肠组织IL-6、JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达水平及IL-6R、MPO含量均显著升高（P<0.01）;血清...     

应用蛋白磷酸化流式细胞分析技术研究STAT在SLE患者PBMC中的活化

应用蛋白磷酸化流式细胞分析技术研究系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)STAT的活化,探讨SLE患者是否存在胞内信号传递网络的异常。采用蛋白磷酸化流式细胞分析技术测定28例SLE患者PBMC基础水平以及多种细胞因子刺激后胞内pSTAT1、pSTAT3、pSTAT5的水平,以18例正常人为对照。结果:基础水平,SLE患者T淋巴细胞pSTAT5表达百分率显著高于正常对照组(P<0.01);SLE患者T淋巴细胞可能存在STAT5的持续活化;SLE患者对IL-6、IL-10反应异常。SLE患者存在胞内信号蛋白STAT的活化异常,并具有一定的特征性。     

急性期川崎病信号转导和转录激活因子3的表达及意义

目的:探讨急性期川崎病IL-6介导信号转导和转录激活因子3的表达及意义。方法:急性期川崎病(KD)患儿64例,感染发热患儿18例,正常同年龄对照42例。采用Western blot检测外周血单个核细胞(PBMCs)IL-6刺激前后总蛋白,核蛋白STAT3,pSTAT3的表达水平。荧光定量PCR检测PBMCs IL-6刺激前后及IL-6R抗体阻断后STAT3 mRNA的表达水平。结果:急性期KD患儿PBMCs用IL-6刺激前、后总蛋白STAT3,pSTAT3表达水平高于正常儿童;核蛋白则为IL-6刺激前KD患儿STAT3,pSTAT3表达与正常儿童无明显差异,IL-6刺激后KD患儿STAT3,pSTAT3表达明显高于正常儿童。IL-6刺激前、后KD患儿STAT3 mRNA水平(1.15±0.19,1.74±0.59)均高于感染发热患儿(1.07±0.21,1.45±0.32)及正常儿童(0.56±0.37,1.03±0.51);KD冠脉损伤组(1.19±0.21,1.81±0.47)STAT3 mRNA高于冠脉未损伤组(1.13±0.29,1.73±0.48)。经IL-6R抗体阻断后,KD患儿STAT3 mRNA水平低于IL-6刺激前、后KD患儿及感染发热组(0.99±0.15)。结论:急性期KD患儿体内存在刺激STAT3表达和活化的因素,体外IL-6刺激能增强STAT3的表达和活化并进入细胞核;阻断实验提示IL-6在KD患儿STAT3过度表达、活化中起主导作用,本研究为用IL-6R阻断剂治疗川崎病提供了实验证据。     

siRNA沉默STAT3表达对IL-17诱导人角质形成细胞HaCaT增殖的影响

目的通过体外靶向沉默STAT3基因转录,探讨STAT3抑制对IL-17诱导人角质形成细胞HaCaT增殖能力的影响及其机制。方法采用IL-17A(80ng/ml)刺激体外培养的HaCaT细胞,采用小干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA)干扰技术体外沉默人角质形成细胞HaCaT中STAT3基因转录,采用qRT-PCR和Western blot分别检测细胞内STAT3 mRNA,STAT3和pSTAT3蛋白的表达变化,证实基因沉默效果,CCK-8法检测HaCaT细胞增殖能力的变化,Western blot检测STAT3的靶分子survivin及cyclin D1表达的变化,初步探讨STAT3抑制对IL-17诱导Hacat增殖调控的分子机制。结果转染STAT3 siRNA质粒可显著抑制HaCaT细胞中STAT3 mRNA表达,STAT3和pSTAT3蛋白表达(P0.05)。STAT3抑制后,IL-17诱导HaCaT增殖能力显著降低(P0.05),STAT3的靶分子survivin及cyclin D1表达水平显著降低(P0.05)。结论 siRNA干扰靶向抑制STAT3表达可抑制IL-17诱导HaCaT增殖,可能与其抑制survivin及cyclin D1表达有关。     

Notch4在溃疡性结肠炎中的表达与分析

目的研究Notch4在溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)中的表达、分布及意义。方法收集50例UC患者病变部结肠组织及32例结肠癌患者术后大体标本两端的正常黏膜组织。用免疫组化方法检测Notch4在50例UC及32例对照结肠黏膜组织中的表达情况。结果Notch4在UC患者结肠组织及对照的正常结肠组织中均有表达,两者之间的差异无统计学意义(P>0.05)。Notch4的表达与UC患者的性别、年龄及UC病变程度无统计学意义(P>0.05)。结论Notch4在UC患者结肠黏膜组织与正常结肠黏膜组织中的表达相似,差异无统计学意义。     

TSLP在溃疡性结肠炎患者结肠黏膜的表达及临床意义

目的探讨胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)在溃疡性结肠炎患者结肠黏膜上皮内的表达及其临床意义。方法分别采集溃疡性结肠炎患者结肠黏膜组织22例,健康人群结肠黏膜组织20例,将溃疡性结肠炎患者进行Mayo评分及分期,分别测出其血清C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、红细胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate,ESR)水平,通过免疫荧光法及免疫印迹法(Western blot,WB)检测溃疡性结肠炎患者结肠黏膜TSLP蛋白的表达,比较免疫印迹结果与CRP、ESR水平及Mayo评分的相关性。结果溃疡性结肠炎患者TSLP表达水平明显增加,主要表达于肠上皮腺体及基质内炎性细胞中;UC患者肠上皮黏膜内TSLP相对表达为1.076±0.091,健康对照组0.604±0.098,且与CRP、ESR水平呈正相关,与Mayo评分即疾病的活动度呈正相关。结论 TSLP的过表达提示其可能参与UC的发病机制。     

白细胞介素-12 通过抑制STAT3 途径调控非小细胞肺癌细胞生物学行为及免疫逃逸因子分泌的研究北大核心CSCD

目的探索白细胞介素-12(IL-12)对非小细胞肺癌细胞生物学行为及免疫逃逸因子分泌的影响。方法收集126例非小细胞肺癌患者癌组织及癌旁正常组织,通过实时定量PCR检测IL-12、STAT3 mRNA的表达水平。构建人肺腺癌A549细胞模型,分为空白对照组、腺病毒对照组、IL-12腺病毒组、质粒对照组、STAT3质粒组、IL-12与STAT3共转染组。比较各组细胞增殖及凋亡情况,采用ELISA法检测细胞培养液中IL-2、INF-γ、TNF-α的分泌量,采用Western blot法检测IL-12、STAT3、pSTAT3蛋白表达水平。结果肺癌组织较癌旁组织IL-12 mRNA表达量降低、STAT3 mRNA表达量增高。IL-12腺病毒组较各对照组细胞增殖及活力降低、凋亡增加。STAT3质粒组细胞增殖及凋亡结果则与之相反。IL-12、STAT3共转染组细胞增殖、活力以及凋亡情况介于IL-12腺病毒组与STAT3质粒组之间。此外,IL-12腺病毒组细胞培养液中IL-12、TNF-α、IFN-γ含量明显高于STAT3质粒组,而STAT3质粒组STAT3、p-STAT3蛋白表达水平显著高于在IL-12腺病毒组。结论IL-12对非小细胞肺癌细胞具有抑制增殖、降低活力及诱导凋亡的能力,其作用机制可能通过抑制STAT3途径以及免疫逃逸而实现。     

白藜芦醇对溃疡性结肠炎小鼠结肠黏膜氧化应激水平及SIRT3表达的影响

目的研究白藜芦醇对溃疡性结肠炎(UC)小鼠结肠黏膜氧化应激水平以及乙酰化酶3(SIRT3)表达的影响。方法采用葡聚糖硫酸钠(DSS)制作UC型(MD)组、低剂量治疗组(RLD)、高剂量治疗组(RHD)。造模7 d后同时停止使用造模药物,随后RLD组及RHD组给予白藜芦醇治疗7 d,NC组及MD组给予生理盐水7 d。14 d后处死小鼠,取结肠组织行HE染色,并检测结肠黏膜中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)、活性氧(ROS)活性及丙二醛(MDA)含量;采用PCR及Western blot检测SIRT3的mRNA及蛋白的表达量。结果 MD组氧化应激水平升高,SIRT3表达降低;白藜芦醇治疗后,氧化应激水平减低,SIRT3表达升高,且RHD组效果优于RLD组。结论白藜芦醇可通过上调结肠黏膜SIRT3、GSH、SOD以及下调MDA、ROS从而降低黏膜氧化应激水平,进而对UC发挥一定的治疗作用,且其效果呈剂量依赖性。     

稳定表达EGFRvⅢex的NIH3T3细胞株的建立及其免疫原性分析

目的:建立表皮生长因子突变体Ⅲ胞外区(EGFRvⅡ-Iex)的NIH3T3稳定细胞系并分析其免疫原性。方法:将编码EGFRvⅢex基因的表达质粒pLNCX2-EGFRvⅢex转染NIH3T3细胞后,用G418筛选阳性克隆,得到多个细胞克隆。采用免疫组化和Western blot法鉴定这些细胞克隆。选取高表达EG-FRvⅢex的细胞株(命名为3T3-vⅢex)免疫BALB/c小鼠,制备抗血清。用ELISA、Western blot和免疫荧光分别检测抗血清的效价和特异性。结果:成功地构建了真核表达载体pLNCX2-EGFRvⅢex并获得了稳定高表达EGFRvⅢex的NIH3T3细胞系3T3-vⅢex。用3T3-vⅢex免疫小鼠所获得的抗血清效价为10-5。Western blot和免疫荧光鉴定证明抗血清可以与EGFR-vⅢex特异结合。结论:人EGFRvⅢex可在NIH3T3细胞内获得稳定表达,以其免疫小鼠可以获得高效价、高特异性的抗血清。     

融合蛋白hCGβ-hC3d3增强人免疫活性细胞对hCGβ抗原的免疫原性

目的:探讨分子佐剂hC3d3与hCGβ的融合蛋白hCGβ-hC3d3作用于人外周血单个核细胞(PBMC)对hCGβ抗原的免疫原性的影响.方法:对人PBMC进行细胞分离纯化,分别用1、10、100 nmol/L的hCGβ、hCGβ-hC3d3及PWM等抗原体外作用于B细胞、B T细胞、PBMC和Raji细胞8～12天,用3H-TdR掺入法了解不同抗原刺激后各组细胞增殖情况;用ELISA检测培养上清中总免疫球蛋白(Ig)水平;而ELISPOT可测定各种抗原刺激后Ig分泌细胞数量.结果:用不同浓度hCGβ、hCGβ-hC3d3及PWM作用于B细胞、B T细胞、PBMC、Raji细胞8～12天后,3H-TdR掺入法分析显示:与hCGβ处理组相比,融合蛋白hCGβ-hC3d3能使各组细胞增殖明显升高,且呈浓度依赖性;100 nmol/L hCGβ-hC3d3与前3组细胞共培养上清中总Ig的含量分别为hCGβ刺激组的4倍、10倍和10.85倍,且呈浓度依赖性.ELISPOT结果与培养上清液检测结果类似,经与hCGβ-hC3d3共培养后Ig生成细胞较hCGβ组明显增加.结论:融合蛋白hCGβ-hC3d3明显增强人免疫活性细胞抗hCGβ的免疫原性.     

人源分子佐剂hC3d3促进人免疫活性细胞协同刺激分子表达及对hCGβ抗原的反应性

目的探讨分子佐剂hC3d3与hCGβ的融合蛋白hCGβ-hC3d3对人外周血单个核细胞（PBMC）中的B细胞与T细胞表面协同刺激分子表达及对hCGβ抗原反应性的影响。方法从人肝细胞cDNA文库克隆hC3d基因片段；构建pCI-gs-signal-6His-hCGβ及pCI-gs-signal-6His-hCGβ-hC3d3真核表达质粒，表达和纯化重组蛋白抗原hCGβ及hCGβ-hC3d3融合蛋白。实验分组：将B细胞、B＋T细胞组或PBMC，分别应用hCGβ、hCGβ-hC3d3或美洲商陆（PWM）等抗原进行体外处理48h。用流式细胞术分析培养后的上述淋巴细胞表面的CD80、CD86、CD154、CD25等协同刺激分子的表达；用ELISA检测培养上清中IL-2的含量。结果本研究成功克隆了hC3d基因，构建了真核表达质粒pCI-gs-signal-6His-hCGβ及pCI-gs-signal-6His-hCGβ-hC3d3；经转染CHO细胞，获得了目的蛋白高效分泌表达。经鉴定及纯化成功获得了较高纯度的目的蛋白hCGβ及hCGβ-hC3d3。hCGβ-hC3d3蛋白能够显著上调B细胞表面CD80、CD86分子的表达，尤其是CD86分子的表达（P〈0．01）；能明显增强T细胞表面CD154、CD25分子的表达（P〈0．05）。hCGβ-hC3d3蛋白提高B细胞抗原提呈能力及T细胞活化后分泌IL-2的能力（P〈0．05）。结论人源分子佐剂hC3d3明显促进人免疫活性细胞协同刺激分子表达及对hCGβ抗原的反应性。     

神经肽Y促进3T3L1前脂肪细胞的增殖和分化

目的:观察神经肽Y对3T3L1前脂肪细胞增殖和分化的影响,并对其机制进行初步探讨。方法:3T3-L1细胞由3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(3-isobutyl-1-methylxanthine,IB-MX)、胰岛素和地塞米松联合诱导分化,2 d后将细胞分为空白对照组(未加任何诱导剂组)、经典诱导组(胰岛素诱导)和NPY干预组(10-8、10-9、10-10mol/L NPY)。培养的第7、12天用相差显微镜观察各组细胞形态的变化,培养第12天用油红O染色观察脂肪细胞分化程度。MTT检测细胞增殖。Western blot检测脂肪细胞分化相关基因过氧化物体增殖剂活化受体-γ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPAR-γ)、CAAT/增强子结合蛋白-α(CCAAT/enhancer-bind-ing protein-α,C/EBP-α)蛋白的表达。结果:10-8mol/L NPY能促进3T3-L1细胞的分化。10-9mol/L NPY,10-8mol/L NPY均能促进3T3-L1细胞增殖。10-8mol/L NPY增加C/EBPα、PPARγ的表达。结论:NPY促进3T3L1前脂肪细胞的增殖和分化,其机制可能与上调PPARγ、C/EBPα的表达有关。     

应用组织芯片研究Pim-3、p-STAT3在胰腺癌中的表达及临床意义

目的 探讨Pim-3、p-STAT3蛋白在胰腺导管腺癌组织中的表达情况及生物学行为意义.方法 应用组织芯片和免疫组化的方法,检测88例人胰腺导管腺癌组织和11例非癌组织中Pim-3、p-STAT3蛋白的表达,并分析其与临床病理特征及患者预后的关系.结果 在88例胰腺癌组织中Pim-3、p-STAT3的阳性表达率分别为76.1%和75.0%,在非癌胰腺组织内均为阴性表达.Pim-3在肿瘤细胞的胞质内表达,p-STAT3在肿瘤细胞的胞核与胞质内表达,两者的表达与胰腺癌的临床分期、淋巴结转移相关(P<0.01),与患者年龄、性别、肿瘤大小、位置和病理学分级无关(P>0.05),且其之间成正相关(r=0.416,P<0.01).Kaplan-Meier生存分析结果显示,胰腺癌组织中Pim-3、p-STAT3表达阳性的患者生存时间缩短.Cox多因素相关分析表明Pim-3和p-STAT3阳性表达是影响患者生存期的独立预后因素(分别P=0.003和P=0.015).结论胰腺癌中Pim-3、p-STAT3的阳性表达与肿瘤临床分期和淋巴结转移密切相关,且两者均可作为胰腺癌患者预后不良的判断因子.     

Hemicholinium 3-bromo mustard: A new high affinity inhibitor of sodium-dependent high affinity choline uptake

A newly synthesised mustard analog of hemicholinium 3. the trivial name of which is hemicholinium 3-bromo mustard, was evaluated as an inhibitor of the sodium-dependent high affinity choline uptake system. When synaptosomes prepared from rat striatum were incubated for ten minutes with a low concentration (10 nm) of the cyclised bi-ethylenimine form of hemicholinium 3-bromo mustard, the sodium-dependent high affinity choline uptake activity was reduced by more than 80°_o. The inhibition profile produced by the bi-ethylenimine ion was consistent with mixed kinetics, in that both the V_max and K_m of the sodium-dependent high affinity choline uptake system were lowered in the presence of the compound in a non-parallel fashion. The reduction in V_max was investigated further to establish if it resulted from a reversible non-competitive interaction or whether it was of a more enduring nature. Synaptosomes pretreated with low concentrations of the bi-ethylenimine form of hemicholinium 3-bromo mustard (25 nM) were thoroughly washed free of inhibitor and subsequently incubated at 37 C for up to 15 minutes before assaying the uptake activity. Under these conditions part of the inhibition effected by the mustard was found to persist and remain unchanged throughout the incubation period.The results are consistent with the bi-ethylenimine form of hemicholinium 3-bromo mustard effecting, possibly via alkylation of sites involved in the high affinity reversible binding of hemicholinium 3, a potent and enduring inhibition of the sodium-dependent high affinity choline uptake system.     

High incidence of a polymorphic variant of erythrocyte membrane protein,Band 3-Memphis,on a western Japanese island

Summary Band 3 is the major membrane protein of erythrocytes, which binds membrane skeletal proteins, glycolytic enzymes, and hemoglobin and transports various kinds of anions. Band 3-Memphis is a variant of Band 3, the amino terminal fragment of which depicts a slow electrophoretic mobility on sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel. The frequency of Band 3-Memphis varies among populations, with a higher frequency among the Japanese. We investigated the frequency of Band 3-Memphis in a western Japanese island which is relatively isolated from the main islands, finding that the frequency of Band 3-Memphis of the inhabitants of this island is significantly higher than the frequency of the Japanese based on the survey in Kyushu Island. This indicates that there may be differences of population in the frequency of Band 3-Memphis in Japan and that Band 3-Memphis may be a good marker to genetically differentiate each population.     

hCGβ-C3d融合蛋白在CHO细胞中的表达

为了提高hCGβ的免疫原性 ,构建含新型分子佐剂C3d的hCGβ真核细胞表达质粒pcDNA3 hCGβ C3d3,使其转染稳定表达系统中国仓鼠卵细胞 (CHO )后 ,检测融合蛋白分泌情况。CHO细胞转染了pcDNA3 hCGβ C3d3质粒后 ,经 4 8h培养 ,1 0× 10 6个CHO细胞可分泌 6 6 0ng的重组融合hCGβ C3d3蛋白。细胞免疫化学技术分析显示 ,表达产物既有hCGβ的组分也有C3d的成分。经SDS PAGE及免疫印迹试验发现CHO细胞培养上清液中含有三组蛋白成分 ,其相对分子质量分别为12 0 0 0 0、90 0 0 0和 6 5 0 0 0。利用新型分子佐剂C3d与hCGβ的连接 ,构建了pcDNA3 hCGβ C3d3真核细胞表达质粒 ,为提高hCGβDNA免疫避孕疫苗的免疫原性及抗生育作用奠定了基础     

缺氧后处理中CYP2J3/EETs系统对心肌凋亡的影响

目的: 观察缺血后处理中心肌细胞内源性细胞色素P450表氧化酶2J3/环氧二十碳三烯酸系统(CYP2J3/EETs)对心肌细胞凋亡的调节作用机制。方法: 取Wistar乳鼠(12-24 h)心脏做原代心肌细胞培养。实验分为7组:对照组、缺氧/复氧组、缺氧后处理组、CYP2J3转染组、空质粒组、6-(2-炔丙基氧苯基)己酸(PPOH,一种CYP2J3抑制剂)组、二甲基亚砜(DMSO)溶剂组。除对照组外,其它各组均进行缺氧/复氧处理。用MTT法检测心肌细胞活力,高压液相色谱法检测心肌细胞培养液中11,12-EET浓度,Western blotting检测心肌细胞中caspase-3蛋白的表达,caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3蛋白的活性。结果: 缺氧后处理组心肌细胞活力和11,12-EET浓度明显高于缺氧/复氧组(P<0.01),CYP2J3转染组比后处理组明显增高(P<0.01),PPOH组比后处理组明显下降(P<0.01)。后处理组caspase-3蛋白的表达及活性低于缺氧/复氧组(P<0.01),CYP2J3转染组caspase-3 蛋白表达及活性低于后处理(P<0.01),而PPOH组caspase-3蛋白表达及活性高于缺氧后处理组(P<0.01)。结论: 在缺氧后处理中CYP2J3/EETs可能通过抑制caspase-3蛋白的表达及活性来影响细胞凋亡,从而对心肌起保护作用。     

黄芪注射液对缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元钙调蛋白表达的影响

目的: 观察黄芪注射液对缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元钙调蛋白(CaM)表达的影响, 探讨黄芪注射液抑制缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡的机制。方法: 取原代培养8 d的大鼠海马神经元,随机分为4组:正常对照组、缺氧缺糖/复氧复糖组、黄芪注射液溶剂对照组和黄芪注射液组。除正常对照组外均进行缺氧缺糖0.5 h再复氧复糖。各组于复氧复糖后0 h、0.5 h、2 h、6 h、24 h、48 h、72 h和120 h采用免疫组织化学染色法检测caspase-3的表达,采用Western blotting和RT-PCR方法检测CaM的表达。结果: 与正常对照组相比,除0 h和0.5 h之外,缺氧缺糖/复氧复糖组各时点海马caspase-3蛋白阳性神经元数目、占神经元总数的百分率及平均吸光度值均明显增多(P<0.05),于24 h达到高峰。黄芪注射液组除0 h和0.5 h之外,各时点以上指标比缺氧缺糖/复氧复糖组显著减少(P<0.05)。黄芪注射液溶剂对照组以上指标与缺氧缺糖/复氧复糖组无差异(P>0.05)。各时点缺氧缺糖/复氧复糖组海马神经元CaM 蛋白表达均较正常对照组明显升高(P<0.05);与缺氧缺糖/复氧复糖组相比,黄芪注射液溶剂对照组各时点CaM蛋白表达无明显变化(P>0.05),而黄芪注射液组在各个时点CaM蛋白表达明显降低(P<0.05)。各时点缺氧缺糖/复氧复糖组海马神经元CaM mRNA表达均较正常对照组明显降低(P<0.05);与缺氧缺糖/复氧复糖组相比,黄芪注射液溶剂对照组各时点CaM mRNA表达无明显变化(P>0.05),而黄芪注射液组在各个时点CaM mRNA表达明显升高(P<0.05)。结论: 黄芪注射液抑制CaM表达,可能是其减轻缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡的机制之一。