CpG-寡核苷酸对巨噬泡沫细胞形成相关基因表达的调控作用

CpG-寡核苷酸(CpG-ODN)具有直接激活巨噬细胞的作用．但其是否影响巨噬泡沫细胞的形成未见报道。我们在利用基因表达谱芯片研究CpG-ODN对免疫细胞基因表达谱影响的过程中发现3条与泡沫细胞形成相关的基因表达受CpG-ODN调控。为确证芯片杂交的结果．我们采用RT—PCR技术对相关基因的表达作了进一步研究。     

CpG-ODN对鼠巨噬细胞TLR-9及Th1/Th2类细胞因子分泌的影响

目的探讨非甲基化的胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤二核苷酸序列(CpG-ODN)对鼠单核-巨噬细胞系RAW264.7Toll样受体9(TLR-9)的表达及Th1/Th2类细胞因子分泌的影响。方法体外培养小鼠单核-巨噬细胞系RAW264.7细胞,逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)及Western blot检测Cp-ODN,鸟嘌呤胞嘧啶二核苷酸序列(Non-CpG-ODN),CpG-ODN 氯喹刺激24h后巨噬细胞TLR-9的表达,放免法及ELISA法检测刺激前后巨噬细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)及白细胞介素-12(IL-12)的表达水平。结果刺激24h后,CpG-ODN与CpG-ODN 氯喹组巨噬细胞TLR-9 mRNA及蛋白的表达明显增加(P<0.01,P<0.05);细胞上清液中TNF-α水平CpG-ODN组明显高于其他组,差异有显著性(P<0.05);各组IL-6、IL-12水平无显著性差异(P>0.05)。结论CpG-ODN刺激可引起鼠巨噬细胞TLR-9表达增高,调节Th1/Th2类细胞因子的分泌。     

基因芯片在抗肿瘤血管生成中草药相关基因筛选中的研究

目的:利用基因芯片技术,从基因水平解释抗肿瘤血管生成中草药的有效组分T3的分子机制.方法:(1)采用两种细胞系:人胃癌BGC823细胞和血管内皮细胞(EC),每种细胞分两组,一组为对照 ,另一组为T3药物刺激组;(2)抽提细胞总RNA,经反转录制备cDNA,对照组用Cy3、药物刺激组用Cy5荧光标记,获得cDNA探针;(3)cDNA探针与BioDoor基因表达谱芯片杂交,结果由扫描仪扫描并用ImaGene3.0软件进行分析统计.结果:(1)BGC823细胞组有2.53％基因表达谱发生明显的变化,其中158条基因在经T3刺激后表达量明显上升,44条明显下降;(2)EC组有0.46％的基因表达谱发生明显的变化,其中30条基因在经T3刺激后表达量明显上升,7条基因表达量明显下降.结论:利用基因芯片技术可从基因水平解释中药的作用机制,为新药的开发提供理论依据.     

期刊文摘

肠型胃癌基因表达的cDNA微阵列分析[李新华 ,张万岱 ,王波涛 ,肖　冰 ,张振书 .世界华人消化杂志 ,2 0 0 4 ;12 (1) :16 - 19]　　目的 :研究肠型胃癌发生发展的基因表达变化 .方法 :利用肠型胃癌和相应非癌组织的mRNA通过逆转录方法 ,将Cy3和Cy5两种荧光分别标记到两种cDNA上制成探针 ,然后与表达谱芯片 (含 4 0 96条基因 )进行杂交后扫描 ,通过计算机辅助判别基因的差异表达 .结果 :肠型胃癌和相应非癌组织组织中差异表达的基因有 6 6 6条 ,上调表达 333条 ,下调表达 333条 .参与细胞增生、凋亡、分化和转移调控的多种基因的表达水平…     

CDX2基因过表达促进胃癌细胞凋亡的分子机理研究

目的:利用基因表达谱芯片技术筛选CDX2高表达的胃癌MGC803/CDX2细胞和对照组MGC803/EV细胞中差异表达的基因,探讨CDX2高表达促进胃癌细胞凋亡的分子机理.方法:Trizol一步法提取高表达CDX2的MGC803/CDX2细胞和对照组MGC803/EV细胞的总RNA,并纯化mRNA,反转录合成荧光分子(Cy3/Cy5)标记的cDNA探针,与22 k基因表达谱芯片进行杂交;采用LuxScan 3.0图像分析软件对芯片图像进行分析,把图像信号转化为数字信号,最后以差异为>2倍或<0.5倍的标准来确定差异表达基因.结果:在23 238个基因中筛选出与细胞凋亡有关的差异性表达基因15条,其中8条基因表达上调和7条基因表达下调.结论:CDX2基因过表达促进胃癌细胞凋亡可能与这15条差异表达基因关系密切.     

脂蛋白相关磷脂酶A_2基因沉默对炎症基因表达的影响

目的:观察氧化低密度脂蛋白(oxygenized low density lipoprotein,oxLDL)和脂蛋白相关磷脂酶A2(lip-oprotein associated phospholipase A2,Lp-PLA2)短发夹RNA(shRNA)对小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)Lp-PLA2活性、mRNA表达及炎症基因表达的影响。方法:采用0、20、40、60和80μg/ml oxLDL刺激RAW264.7细胞并用不同剂量Lp-PLA2shRNA转染oxLDL 60μg/ml处理组,应用ELISA、逆转录-聚合酶链反应检测Lp-PLA2、单核细胞趋化蛋白-1(Monocyte Chemoattractant Protein-1,MCP-1)及其mRNA表达的影响。结果:RAW264.7细胞经oxLDL刺激后Lp-PLA2表达明显升高,且呈时间和剂量依赖性。Lp-PLA2shRNA转染小鼠单核巨噬细胞后,炎症基因及mRNA表达明显下降。结论:Lp-PLA2shRNA转染可明显逆转oxLDL刺激引起的RAW264.7细胞炎症基因高表达。     

乳牙生理性吸收相关基因初探

目的:应用人类基因芯片技术对人乳牙生理性吸收的基因表达进行分析,筛选差异表达基因,以期研究牙根吸收的基因调控机制。方法:留取与乳牙根吸收部位相对应的软组织为实验组(A)及取适量切除的牙龈瓣为对照组(B),提取总RNA,逆转录为cDNA,用Cy3和Cy5荧光染料标记,与芯片杂交后扫描。结果:有明显差异表达的共有156条,其中表达上调的基因有91条;下调的基因有65条。结论:乳牙生理性吸收可能与多个基因相关。     

脂多糖对RAW264.7细胞IL-10分泌及mRNA表达的影响

目的 探讨脂多糖(LPS)对RAW264.7细胞白细胞介素10(interleukin-10,IL- 10)分泌及mRNA表达的影响.方法 采用体外培养巨噬细胞株RAW264.7细胞,实验分为正常对照组、LPS组.采用ELISA法、逆转录PCR(RT - PCR)技术检测IL- 10分泌及mRNA表达的变化.结果 LPS刺激RAW264.7细胞后IL- 10的分泌及mRNA表达较对照组增加(P＜0.05),并具有时间依赖性.结论 LPS可刺激RAW264.7细胞IL- 10分泌及mRNA表达的增加.     

JAB1表达下调对LPS诱导炎性因子TNF-α和IL-6的影响

目的 初步探讨JAB1基因表达下调对炎症反应的影响.方法 构建特异性针对小鼠JAB1基因的RNA干扰真核表达载体,转染到RAW264.7细胞中降低其JAB1基因的表达,观察LPS刺激后培养上清中炎性因子TNF-α和IL-6的浓度变化.结果 成功得到小鼠JAB1基因的RNA干扰真核表达载体(pPUR/U6-siJAB1),将其转染RAW264.7细胞后使JAB1的蛋白表达水平显著下降,经LPS刺激后培养上清中炎性因子TNF-α和IL-6的浓度较正常细胞明显降低.结论 小鼠JAB1基因的低表达使RAW264.7细胞在经LPS诱导后的炎性因子产生降低,推测其在炎症反应中对致炎因素的影响更大.     

钙激活钾通道KCa3.1对巨噬细胞吞噬功能的抑制性调节作用

目的 观察巨噬细胞膜的钙激活钾通道KCa3.1与吞噬功能的关系.方法 通过光镜下半定量观察RAW264.7巨噬细胞吞噬鸡红细胞,以及采用流式细胞术定量检测RAW264.7巨噬细胞吞噬异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记的大肠杆菌(FITC-tagged E.coli)等方法,研究正常RAW264.7细胞的吞噬活动,以及阻断KCa3.1通道后RAW264.7细胞吞噬能力的改变.结果 光镜检测结果显示,未受吞噬刺激因子激活的对照RAW264.7细胞对鸡红细胞有较弱的吞噬能力,其吞噬率为1.67％±0.29％;用KCa3.1通道选择性阻断剂TRAM-34(20nmol/L)处理RAW264.7细胞后,吞噬率增高至5.08％±0.38％,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.01),且单个RAW264.7细胞吞噬鸡红细胞的个数也明显增加.流式细胞术结果显示,阻断KCa3.1通道后,RAW264.7细胞吞噬FITC标记的大肠杆菌的数量明显增多,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.01).结论 KCa3.1通道的活动对RAW264.7巨噬细胞的吞噬活性有抑制性调节作用.     

表达谱基因芯片筛选前体脂肪细胞分化相关基因的研究

目的:运用基因芯片技术研究前体脂肪细胞分化相关基因表达谱的变化。方法:体外培养前体脂肪细胞(3T3-L1),诱导分化为成熟脂肪细胞。提取脂肪细胞总RNA,纯化mRNA后逆转录制备目标序列,应用含有45038种小鼠基因cDNA的表达谱芯片Mouse430_2进行差异表达谱分析。结果:在前体脂肪细胞分化的基因表达谱中差异表达基因共有640条,其中表达水平显著变化的有38条(表达水平改变5倍以上),上调基因24条,下调基因14条。差异表达基因中有细胞凋亡相关基因、原癌基因和抑癌基因、细胞信号和传递蛋白基因等多种基因。这些基因可能与脂肪细胞分化相关疾病的发病机制有关。结论:采用基因芯片技术筛选脂肪细胞分化相关基因,可能为脂肪细胞分化相关疾病病因和发病机制的研究提供新思路。     

应用基因表达谱芯片研究硫化砷作用后K562细胞基因表达的变化

目的：利用基因表达谱芯片检测K562细胞在硫化砷作用前后基因表达的差异性进行比较研究。方法：研究对象为人慢性粒细胞白血病细胞株K562,用cy3和cy5两种不同的荧光染料通过逆转录反应将K562经硫化砷作用前后的mRNA分别标记成两种探针,并与载有一组靶的基因表达谱芯片进行杂交,通过计算机扫描分析得到这些基因在经硫化处理前后的表达差异,结果：筛选出包括与DNA结合,转录和转录因子,蛋白翻译,细胞周期等相关表达差异的基因共11条,其中7条表达上调,4条表达下调,结论：周期素E2,周期素G2可能参与硫化砷诱导K562细胞凋亡发生机制。     

理冲生髓饮对卵巢癌细胞株SKOV3基因表达的影响

目的:研究理冲生髓饮对人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞株SKOV3的抑制作用,并利用基因表达谱芯片探索其作用机制。方法:Wistar大鼠随机分组,灌胃给药,采血制备含药血清。提取对照组及理冲生髓饮组肿瘤细胞mRNA,制备cDNA探针并分别用Cy3和Cy5两种荧光染料标记,与基因表达谱芯片进行杂交,经扫描、分析,得出药物作用后表达有差异的基因。结果:共筛选出显著表达差异基因136种,其中16种基因表达水平下调,120种基因表达上调。结论:理冲生髓饮对SKOV3生长有抑制作用,调节癌基因及其相关的信号传导、改变肿瘤细胞蛋白合成等可能是其作用机制。     

应用基因芯片技术对2型糖尿病胰岛素抵抗脂肪信号转导相关基因的研究

目的 应用基因芯片技术比较2型糖尿病胰岛素抵抗(IR)患者与正常人大网膜脂肪组织信号转导相关基因表达谱的差异,以进一步阐明IR的发病机制并探索新的治疗方法。方法 分别以Cy5和Cy3两种荧光染料通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)将IR组和对照组脂肪组织的mRNA标记成探针,并与载有1组靶基因的基因表达谱芯片进行杂交。通过扫描荧光强度,经计算机软件分析,寻找两组差异表达基因。结果 IR组和对照组之间共筛选出82条差异表达基因。其中信号转导相关差异表达基因19条,表达增加的基因12条,表达降低的基因7条。RT-PCR验证,IR组MKP-4表达明显升高。结论 基因表达谱芯片筛选提示IR的发病涉及多个方面,并与受体信号转导密切相关,为阐明IR的信号转导机制提供强有力的工具。     

表达谱基因芯片筛选大隐静脉曲张致病相关基因的初步研究

目的:运用基因芯片技术研究曲张大隐静脉基因表达谱的变化.方法:选取原发性大隐静脉曲张病人隐-股交界瓣膜区静脉6条,取6条正常静脉作对照.提取血管组织总RNA,纯化mRNA后逆转录制备目标序列,应用含有4096种人类基因cDNA的表达谱芯片进行差异表达谱分析.结果:在原发性大隐静脉曲张的基因表达谱中差异表达基因共有168条,上调基因96条,下调基因72条,共存性差异表达基因39条,其中上调基因28条,下调基因11条.差异表达基因中有细胞凋亡相关基因、原癌基因和抑癌基因、细胞信号和传递蛋白基因等多种基因.这些基因可能与原发性大隐静脉曲张的发病机制有关.结论:采用基因芯片技术筛选大隐静脉曲张的致病相关基因,可能为其病因和发病机制的研究提供新思路.     

基因芯片筛选门静脉高压症脾亢脾和正常脾巨噬细胞中差异表达基因

目的运用基因芯片技术检测门静脉高压症脾亢脾和正常脾巨噬细胞中基因表达的差异,探讨其在门静脉高压症脾亢发生中的意义。方法提取门静脉高压症脾亢脾巨噬细胞和正常脾巨噬细胞的总RNA,分别用标有荧光素的dCTP反转录制备cDNA探针,将探针与含有14112点cDNA的Biostar-H140scDNA表达谱芯片杂交后扫描荧光强度。上述方法重复3次,从而筛选出恒定的差异表达基因。结果3张芯片分别检测到896、1330和898个差异表达基因,恒定的差异表达基因共有121个,占总基因数的0.86%。其中表达上调的已知基因有21个,表达下调的已知基因有73个。差异表达基因涉及离子通道和运输蛋白、细胞周期蛋白类、细胞骨架和运动、细胞受体、细胞信号和传递蛋白、代谢、免疫相关等多个方面。这些基因可能与门静脉高压症脾亢的发病机制有关。结论采用基因芯片技术筛选门静脉高压症脾亢脾和正常脾巨噬细胞中差异表达的基因,可能为其病因和发病机制的研究提供新思路。     

亚砷酸钠影响免疫功能相关基因表达水平的研究

目的：利用基因芯片技术研究亚砷酸钠对免疫功能相关基因表达的影响,探讨砷的分子遗传学机制。方法：将肝细胞cDNA克隆库的基因点在芯片上（每个克隆的基因尚未知）,然后与暴露于不同砷浓度肝细胞中得到的cDNA第一链杂交,对表达有差异的基因进行基因测序,再明确基因,最后筛选出与免疫功能相关的基因。结果：砷可通过抑制细胞角蛋白8基因（CK8）和人类白细胞抗原A基因（HLA－A）的表达来影响机体免疫功能。结论：从基因水平研究砷对免疫功能的作用机制是可行的,显示其对免疫系统的毒性作用。     

高通量基因芯片初步筛选ITP脾和正常脾巨噬细胞的差异表达基因

目的研究免疫性血小板减少性紫癜(ITP)患者脾和正常脾巨噬细胞的差异表达基因。方法提取9例ITP患者及9例正常人脾巨噬细胞的总RNA,反转录制备含荧光分子Cy5标记的cDNA探针,与含有30968点cDNA的表达谱芯片杂交后扫描荧光强度,筛选出差异表达的基因并进行分析。结果基因芯片共筛选出1545个差异表达基因,其中上调基因718个,下调基因827个。差异表达基因涉及免疫反应、细胞黏附及受体调节、细胞信号转导、细胞骨架和运动代谢、细胞凋亡、酶调活性等方面。差异表达基因生物路径涉及Toll样受体信号通路,Fcγ受体介导吞噬通路,促分裂原活化蛋白激酶信号通路、细胞内吞通路等。结论基因芯片筛选ITP患者脾巨噬细胞的差异表达基因是有效的。差异表达基因可能为ITP发病机制的研究提供新证据和治疗靶标。     

糖尿病血管病变患者血管组织基因谱的表达

目的　利用基因芯片初步观察糖尿病外周血管病变的血管组织基因谱的差异性表达。方法　用cy3和cy5两种荧光染料通过逆转录反应将正常人血管和糖尿病外周血管病变患者血管的mRNA分别标记成两种探针 ,并与载有一组靶基因的基因芯片进行杂交 ,通过计算机扫描分析得出差异表达的某些基因。结果　筛选出包括与细胞周期蛋白、离子通道、细胞凋亡相关的蛋白、DNA合成、修复和DNA结合、转录和转录因子、蛋白翻译合成、代谢、细胞受体、细胞信号和传递蛋白等相关表达差异的基因 4 33条 ,其中 2 0 1条表达上调 ,2 32条表达下调。结论　糖尿病患者血管组织某些基因的异常表达可能是糖尿病外周血管病变的基础。     

应用基因芯片研究E2F-1过表达对胃癌细胞免疫相关基因表达的影响

目的利用基因表达谱芯片技术筛选过表达E2F-1的胃癌MGC-803细胞与对照组间差异表达的免疫相关基因,初步探讨E2F-1对胃癌细胞免疫功能影响的机制。方法分别抽取转染E2F-1的胃癌MGC-803细胞和未转染E2F-1的胃癌MGC-803细胞的总RNA．纯化mRNA,逆转录合成cDNA标记后,与22K人类基因表达谱芯片进行杂交,扫描后筛选出与免疫相关的差异表达基因,半定量RT-PCR方法验证差异表达基因。结果在21522条基因中,两组细胞间差异表达的免疫相关基因有10条,其中上调基因2条,下调基因8条。上调基因中有1条功能信息不明。其中myc的RT-PCR结果与基因芯片扫描结果相似,具有相同的方向性。结论利用基因芯片技术筛选出E2F-1过表达影响胃癌细胞免疫功能的相关基因,为今后更深入的研究E2F-1对胃癌免疫功能的影响奠定了基础。