芦荟大黄素对大鼠巨噬细胞[Ca2+]i和释放TNF-α的影响

目的研究芦荟大黄素对正常的和细菌脂多糖(LPS)刺激的大鼠腹腔巨噬细胞(PMφ)释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和细胞内自由Ca2 浓度([Ca2 ]i)的影响。方法应用MTT法检测TNF-α量和细胞钙离子成像系统检测单细胞内[Ca2 ]i的动态变化。结果芦荟大黄素可剂量依赖性活化正常PMφ释放TNF-α,同时诱发正常PMφ[Ca2 ]i呈波动式变化,[Ca2 ]i升高来源于胞外钙内流和胞内钙池释放钙。芦荟大黄素对LPS刺激PMφ升高[Ca2 ]i和释放TNF-α的影响有较复杂的剂量依赖性特征,即芦荟大黄素低浓度时对[Ca2 ]i升高有明确的抑制作用;其对TNF-α释放的抑制呈随浓度增高而减弱的趋势。大黄酸可增强芦荟大黄素对LPS升高[Ca2 ]i的抑制作用。结论芦荟大黄素对PMφ[Ca2 ]i和释放TNF-α表现出双向调节作用,其对[Ca2 ]i动力学的调制与其调节PMφ释放TNF-α间有明确的对应性。     

大黄素对大鼠腹腔巨噬细胞产生的TNF_α、IL-1、IL-6及细胞[Ca~(2 )]_i的影响

目的　研究中药大黄有效成分大黄素对不同状态下的巨噬细胞分泌 TNFα、IL- 1、IL- 6和 [Ca2 ]i 的影响。方法　利用脂多糖 (lipopolysacchride,L PS)刺激的大鼠腹腔巨噬细胞作为过度炎症反应的体外模型 ,用生物学方法和荧光分光光度法测定巨噬细胞合成分泌的 TNFα、IL- 1、IL- 6和 [Ca2 ]i。结果　大黄素对 TNFα 的分泌和[Ca2 ]i 有双向调节作用。结论　大黄素可能具有免疫双向调节功能。     

芦荟大黄素对T淋巴细胞增殖和细胞[Ca2+]i变化的影响

目的研究芦荟大黄素对植物血凝素(PHA)引起的大鼠T淋巴细胞增殖和细胞内Ca2 浓度([Ca2 ]i)变化的影响,探讨芦荟大黄素对T淋巴细胞增殖的作用和机制。方法采用MTT法检测细胞增殖,用单细胞钙成像系统记录细胞胞浆[Ca2 ]i。结果芦荟大黄素对PHA引起的细胞增殖有显著抑制作用,且其抑制作用与剂量有关;加入PHA引起细胞[Ca2 ]i迅速升高,并持续维持高[Ca2 ]i水平,芦荟大黄素对PHA引起的[Ca2 ]i升高有显著抑制作用,其作用途径包括阻断胞内Ca2 释放和抑制胞外Ca2 内流。结论芦荟大黄素可抑制T淋巴细胞增殖,其作用机制可能与抑制淋巴细胞内[Ca2 ]i升高相关。     

烧伤血清对大鼠腹腔巨噬细胞内游离钙浓度及其产生NO的影响

目的:观察烧伤血清对分离的大鼠腹腔巨噬细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)和产生NO的影响.方法:收集腹腔巨噬细胞,用Fura-2/AM作为细胞内游离钙离子指示剂测定[Ca2+]i,用烧伤血清刺激体外的腹腔巨噬细胞即刻进行[Ca2+]i的测定;用同浓度的烧伤血清刺激培养的腹腔巨噬细胞,测定上清NO稳定的代谢产物[NO2+NO3-]的浓度.结果:烧伤血清能显著地促进巨噬细胞[Ca2+]i的增高,以烧伤后6 h血清的作用最为明显,可达正常对照组的9倍,维拉帕米可部分抑制其作用.烧伤血清对腹腔巨噬细胞NO的产生有明显的抑制作用,也以6 h烧伤血清为最明显.结论:烧伤血清能显著地升高腹腔巨噬细胞[Ca2+]i,而NO的产生被明显地抑制.细胞内钙超载和NO产生减少可能是烧伤后早期巨噬细胞免疫功能损伤主要因素之一.     

大黄素对小鼠腹腔巨噬细胞产生的TNFα、IL—1、IL—6及细胞[Ca^2＋]i的影响

目的 研究中药大黄有效成分大黄素对不同状态下的巨噬细胞分泌TNFα、IL-1、IL-6和[Ca^2 ]i的方法。利用脂多糖（lipopolysacchride,LPS)刺激的大鼠腹腔巨噬细胞作为过度炎症反应的体外模型,用生物学方法和荧光分光光度法测定巨噬细胞合成分泌的TNFα、IL-1、IL-6和[Ca^2 ]i。结果 大黄素对TNFα的分泌和[Ca^2 ]i有双向调节作用。结论 大黄素可能具有免疫双向调节功能。     

秋水仙素对巨噬细胞功能影响的实验研究

应用四种不同浓度的秋水仙素尾静脉注射小鼠后，分别观察其腹腔巨噬细胞吞噬功能和血清中TNF水平的改变结果显示，与对照组相比，12.5—100μg／只的注射量均能明显增强腹腔巨噬细胞的吞噬功能（P＜0．05）。发现25μg／只注射量组小鼠血清TNF水平显著增高（P＜0．05）。其它剂量组虽有升高,却无统计学意义。表明秋水仙素可增强巨噬细胞功能，且在一定的用药剂量下可促进巨噬细胞分泌TNF。     

磨损颗粒数量对人工关节假体——骨界面巨噬细胞激活影响的实验研究

目的：探讨磨损颗粒数量对人工关节假体骨界面巨噬细胞（MФ）激活的影响。方法：以正常人髋关节滑膜细胞系为模型，借助激光扫描共聚焦显微镜（CLSM），动态监测分别加入 1.0 mg/ml 和 1.5 mg/ml（W/V）Ti 合金和 CoCr 合金颗粒悬液后巨噬细胞样细胞（MCs）内游离Ca2+浓度（[Ca2+]i）的变化。结果：滴加不同浓度的两种颗粒悬液后 1 h 内，MCs 内[Ca2+]i可出现 1～6 次脉冲样升高，其脉冲次数、间隔时间、波动幅度等均与颗粒种类及浓度无关（P>0.05），唯Ti 合金颗粒低浓度组出现[Ca2+]i脉冲的潜伏期较高浓度组长（P<0.05）。空白对照组及成纤维细胞样细胞（FCs）不出现类似反应。结论：假体骨界面 MФ 激活本身与磨损颗粒数量无关，但活化 MФ 的数量可能与颗粒数量有关，这是关系到界面是否发生骨溶解及其程度的重要中间环节。     

大黄素对内毒素刺激下的大鼠腹腔巨噬细胞分泌TNFα及NO的影响

目的：研究大黄素抗炎作用机理。方法：利用脂多糖（Lipopolysacchride,LPS)刺激的大鼠腹腔巨噬细胞（PMφ）作为人体过度炎症反应的体外模型,用MTT法和荧光法测定了大黄素对不同状态下的巨噬细胞分泌TNFα,NO的影响。结果：大黄素可通过抑制LPS刺激的大鼠腹腔巨噬细胞分泌TNFα,抑制过度的炎症反应;而对于未经LPS刺激的大鼠腹腔巨噬细胞,大黄素可促进TNFα的分泌。大黄素能抑制炎症反应中的NO的大量合成与释放。结论：大黄素对机体的免疫功能可能具有双向的调节作用。     

血管紧张素Ⅱ及其拮抗剂对鼠系膜细胞内游离钙的影响

目的探讨Losartan拮抗局部肾素-血管紧张系统（RAS）对预防高血压致肾脏靶器官损伤的意义。方法应用细胞培养和Fura－2方法，观察血管紧张素Ⅱ（AugⅡ）和血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1受体）拮抗剂Losartan对自发性高血压大鼠（SHR）和正常血压大鼠（WKY）肾小球系膜细胞内游离钙（[Ca2 ]i）浓度的影响。结果AngⅡ使SHR系膜细胞[Ca2 ]i增高，对WKY无影响；AugⅡ对SHR系膜细胞[Ca2 ]i的作用可被Losartan抑制并呈剂量依赖关系。结论AngⅡ诱导的肾小球系膜细胞[Ca2 ]i增加是经AT1受体介异并被Losartan拮抗。Losartan可能有细胞水平的肾脏保护作用。     

电针对家兔高血压及心肌细胞游离钙镁浓度的影响

利用AR-CM-COM阳离子测定系统和离子探针Fura-2-AM及Furaptra-A从观察了电针在治疗家兔实验性高血压时心肌细胞内游离钙离子浓度（[Ca2＋]i）和游离镁离子浓度（[Mg2＋]i）的变化情况。静脉滴注去甲肾上腺素（NE）造成家兔实验性高血压,心肌细胞[Ca2＋]。随血压升高而增大,[Mg2＋]i则降低,[Ca2＋]i／[Mg＋]i比值升高;电针两侧“足三里”穴位后治疗组家兔血压明显降低,[Ca2＋]i明显低于高血压组,[Ca2＋]i／[Mg2＋]i比值降低;电针对正常家免心肌细胞[Ca2＋]i和[Mg2＋]i均无明显影响。结果提示心肌细胞内游离Ca2＋、Mg2＋在针刺调整血压的过程中可能发挥一定的作用。     

胆必清对内毒素诱导的大鼠腹腔巨噬细胞内游离钙浓度的影响

目的：探讨中药胆必清对内毒素诱导的大鼠腹腔巨噬细胞游离钙浓度的影响。方法：制备大鼠腹腔巨噬细胞并在体外进行孵育,使用荧光探针用荧光法测定钙浓度。巨噬细胞随机分为正常对照组,内毒素LPS组,小、中和大剂量中药组。结果：LPS能诱导巨噬细胞[Ca2^ ]i的升高。加入胆必清后,[Ca2^ ]i可有不同程度的降低。结论：胆必清能抑制LPS诱导的大鼠腹腔巨噬细胞内的[Ca2^ ]i升高,提示该药具有抗炎和免疫调节作用。     

AngⅡ对大鼠肝脏星状细胞内 [Ca2+]i及其增殖的影响

目的观察不同浓度血管紧张奏Ⅱ(Ang Ⅱ)对大鼠肝脏星状细胞(HSC) [Ca2+]i及其增殖的影响,以探讨HSC和细胞内 [Ca2+]i的相关性. 方法HSC分离培养后,采有MTT法和Fura-2/AM荧光指示剂负载分别测定HSC增殖情况及细胞内 [Ca2+]i. 结果10-9 ～10-5mol/L Ang Ⅱ能显著增加HSC内游离 [Ca2+]i(P＜ 0.01),且呈剂量依赖关系;10-9 ～10-6mol/L Ang Ⅱ均能促进HSC增殖(P＜0.05),但10-5mol/L Ang Ⅱ却对HSC增殖无显著影响(P＞0.05). 结论在一定剂量范围内Ang Ⅱ能够剂量依赖性地促进HSC增殖和增加HSC内游离 [Ca2+]i,二者存在一定相关性.     

甲状旁腺激素对大鼠远曲肾小管细胞内Ca^2＋调节作用机制的研究

本实验以Percoll密度梯度离心法分离出大鼠肾皮质的近曲肾小管细胞（proximalconvolutedtubules，PCT）和远曲肾小管细胞（distalconvolutedtubules，DCT），应用荧光指示剂Fluo3－AM成功测定了人甲状旁腺激素［hPTH（1－84）］、双丁酰环磷酸腺苷酸（dbCAMP，系一种可进入细胞内的CAMP激动剂）及前列腺素E2（PGE2）对DCT细胞内钙浓度（［Ca2 ］i的影响，发现PTH、dbcAMP和PGE2均可引起[Ca2 ］i的增加。提示：（1）cAMPP在DCT细胞中可能与PTH所致的［Ca2 ］i的升高有关；（2）PGE2可能在PTH对[Ca2 ]的调节作用中充当某种信使物质。     

PM2.5通过激活巨噬细胞内质网应激进而影响ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化斑块

探讨细颗粒物（PM2.5）通过激活巨噬细胞内质网应激促进巨噬细胞细胞质内Ca2+的积累,进而影响ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化(AS)斑块的形成。方法 体内实验 ：8周龄ApoE-/-小鼠共计24只,随机分为对照组和PM2.5组,每组12只。采用高脂饲料喂养8周后,对照组小鼠气管内滴注生理盐水,PM2.5组小鼠气管内滴注PM2.5的生理盐水混悬液（30 mg/kg/d）。8周后主动脉根部石蜡切片行movat染色、DHE法检测氧自由基（ROS）水平;采用TUNEL法对斑块内细胞凋亡情况进行检测;Western Blot法检测内质网应激下游炎症因子IL-6、TNF-α、MCP-1蛋白的表达量。体外实验：分离培养小鼠原代腹腔巨噬细胞后,将细胞分为对照组（无刺激）、LPS组（模型组,LPS 100ng/mL,24 h）、LPS+PM2.5组（24 h）。采用钙离子荧光探针Fura-2 AM检测巨噬细胞内Ca2+ 的积累量,Western Blot法检测巨噬细胞内IL-6、TNF-α、MCP-1蛋白的表达量。结果 体内实验 PM2.5组小鼠AS斑块面积明显增大,ROS水平显著增高(P＜0.001);斑块内坏死凋亡细胞数量明显增多,内质网应激下游炎症因子IL-6、TNF-α、MCP-1蛋白表达量升高(P＜0.001);体外实验 LPS+PM2.5组与LPS组比较,细胞内Ca2+ 积累量明显增多(P＜0.001);IL-6、TNF-α、MCP-1蛋白的表达量均升高(P＜0.001)。结论 经PM2.5处理的高脂饲养的ApoE-/-小鼠,PM2.5可作用于巨噬细胞,激活其内质网应激,导致巨噬细胞细胞质中Ca2+ 积累增加,使氧自由基的产生与斑块内细胞坏死凋亡数量增加,对动脉粥样硬化斑块的发生发展起到促进作用     

人参皂苷Rg1对吗啡依赖海马神经元胞内游离钙离子浓度的影响

目的探讨人参皂苷Rg1对吗啡依赖海马神经元胞内游离钙离子浓度(intracellular free Ca2+concentration,[Ca2+]i)的影响。方法采用荧光钙离子指示剂Fluo-3/AM,利用激光扫描共聚焦显微镜观察低剂量(1μmol/L)、中剂量(10μmol/L)、高剂量(100μmol/L)人参皂苷Rg1处理吗啡依赖原代培养大鼠海马神经元后[Ca2+]i的改变。结果低、中、高剂量人参皂苷Rg1单独处理海马神经元前后并没有引起胞内[Ca2+]i的显著改变(P>0.05),而吗啡依赖海马神经元胞内[Ca2+]i较正常海马神经元细胞明显增高(P<0.01)。此外,低、中、高剂量人参皂苷Rg1处理吗啡依赖海马神经元细胞后,均能显著抑制胞内[Ca2+]i的升高(P<0.01),并呈剂量依赖性,Rg1剂量越大,抑制作用越明显(P<0.01)。结论人参皂苷Rg1可以抑制吗啡依赖海马神经元细胞内[Ca2+]i的增高,对吗啡的成瘾性具有明显的拮抗作用,为合理安全有效地应用人参戒毒提供了实验依据。     

大黄素对内毒素激活后巨噬细胞释放HMGB1的影响

目的探讨大黄素对内毒素激活后巨噬细胞高迁移率族蛋白B1（HMGB1）基因表达和胞外释放的影响。方法内毒素脂多糖激活后小鼠腹腔巨噬细胞培养物经不同浓度（5、20、50μmol/L）大黄素作用一定时间,观察培养上清液HMGB1、TNF-α含量的变化及细胞HMGB1mRNA表达的改变。结果大黄素（50μmol/L）明显抑制脂多糖激活后小鼠腹腔巨噬细胞HMGB1mRNA的表达和HMGB1、TNF-α的释放（均P（0.01）。结论大黄素具有抑制巨噬细胞HMGB1mRNA表达和HMGB1胞外释放的作用。     

硒云芝多糖对巨噬细胞一氧化氮的影响

目的：研究了硒云芝多糖（Se-PSK)对巨噬细胞一氧化氮（NO）含量的影响。方法：用Grisse法测定Se-PSK在不同剂量，不同作用时间与NO的产量，并与云芝多糖（PSK）作同步比较。结果：Se-PSK在400μg/mL作用48h达到NO释放的峰值，与PSK比较效果更为明显。结论：Se-PSK能显著促进巨噬细胞释放NO，并有明显的剂量依赖关系。     

极化心脏停搏液对成熟心肌细胞保护作用的研究

目的观察Na＋通道阻滞剂河豚毒素（TTX）极化心脏停搏液对离体成熟大鼠心肌细胞[Na＋]i、[Ca2＋]i的影响,探讨其对成熟心肌细胞的保护作用。方法成年Wistar大鼠心脏,用酶解法分离成具有搏动性的单个成熟心室肌细胞悬液,随机分成基础组、STH2组（对照组）和TTX组（实验组）,STH2组和TTX组分别应用St.Thomas II号停搏液和TTX停搏液处理,建立模拟缺血/再灌注损伤的停搏/复搏细胞模型,激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）测定各组细胞不同时期的[Na＋]i和[Ca2＋]i。结果 TTX组和STH2组成熟心肌细胞复搏后[Na＋]i、[Ca2＋]i均明显高于基础组（P〈0.01）,但TTX组明显低于STH2组（P〈0.01）。结论极化心脏停搏液较去极化心脏停搏液能减轻成熟心肌细胞Na＋、Ca2＋超载,对成熟心肌细胞有较好的保护作用。     

AngⅡ对大鼠肝脏星状细胞内 [Ca2+]i及其增殖的影响

目的观察不同浓度血管紧张奏Ⅱ (Ang Ⅱ )对大鼠肝脏星状细胞 (HSC) [Ca2 +] i 及其增殖的影响 ,以探讨HSC和细胞内 [Ca2 +] i 的相关性。　方法HSC分离培养后 ,采有MTT法和Fura -2 AM荧光指示剂负载分别测定HSC增殖情况及细胞内 [Ca2 +] i。　结果 10 - 9～ 10 - 5mol LAngⅡ能显著增加HSC内游离 [Ca2 +] i(P <0 .0 1) ,且呈剂量依赖关系 ;10 - 9～ 10 - 6mol LAngⅡ均能促进HSC增殖 ( P <0 .0 5 ) ,但 10 - 5mol LAngⅡ却对HSC增殖无显著影响 (P >0 .0 5 )。　结论在一定剂量范围内Ang Ⅱ能够剂量依赖性地促进HSC增殖和增加HSC内游离 [Ca2 +] i,二者存在一定相关性。     

重组人内抑素对兔耳增生性瘢痕成纤维细胞内钙离子浓度的影响

目的通过探讨重组人内抑素（rhEndostatin）促进兔耳增生性瘢痕成纤维细胞（HSFs）凋亡的部分机制,为临床上药物治疗增生性瘢痕（HS）提供实验依据。方法取新西兰大耳兔6只制备瘢痕模型。以HSFs为研究对象,应用激光共聚焦显微镜（CLSM）结合Fluo-4/AM（Ca2+荧光指示剂）检测在Hanks与D-Hanks液中（有、无细胞外钙）rhEndostatin（100 μg/mL）对HSFs胞内Ca2+浓度（[Ca2+]i）的影响。结果当细胞外液为Hanks液时,rhEndostatin（100 μg/mL）可使HSF胞质内[Ca2+]i水平持续增加,当持续10 s给予rhEndostatin处理后,HSFs胞内[Ca2+]i可迅速增加达峰顶再缓慢下降,在停止药物处理后,HSFs胞内[Ca2+]i继续下降,停止处理约50 s后,胞内[Ca2+]i尚未至基线水平;而当细胞处于D-Hanks液中时,rhEndostatin对HSFs胞质内[Ca2+]i无明显影响。结论rhEndostatin可通过干扰HSFs胞内钙离子稳态,推动胞外Ca2+内流导致胞内钙超载来诱导HSFs凋亡。