青龙衣胡桃醌类成分富集

目的 以胡桃醌类成分转移率为指标,通过静态吸附和解吸附筛选最佳树脂,建立青龙衣胡桃醌类成分的富集工艺.方法 比较4种不同极性的大孔吸附树脂对青龙衣胡桃醌类成分的静态吸附与解吸性能,筛选出AB8树脂为最佳树脂,优化其工艺参数.结果 最佳工艺参数为:上样液浓度0.0760 g/ml、上样pH2.0、上样流速3BV/h,洗脱浓度70%、洗脱体积3BV、洗脱流速2BV/h,径高比1:10.工艺优化后,青龙衣中胡桃醌类成分的含量由1.026%提升到11.08%,转移率为72.08%.结论 AB8型大孔树脂能有效地富集纯化青龙衣胡桃醌类成分.     

篮雪醌的合成

某些天然的和合成的1.4-基醌衍生物具有广谱的细胞毒特性。蓝雪酿(5-羟基-2-甲基-1,4-萘醌)是药用植物毛毡苔的主要成分。文献记载了许多关于蓝雪醌的合成方法,本文描述了较优的合成法,即胡桃醌的甲基化。胡桃醌的合成有三种方法:     

胡桃醌对白血病细胞增殖的抑制作用

目的: 探讨胡桃醌对白血病细胞增殖的抑制作用,阐明胡桃醌抗白血病的机制。方法: 体外培养人白血病K562、Jurkat、U937、U266及NB4细胞株,按不同处理因素分组：调零组,含有培养基、MTT和三联溶解液;空白对照组,含有各种人白血病细胞、药物溶解介质、培养液、MTT 和三联溶解液;实验组,分别采用不同浓度（终浓度为0.25、0.50、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00和16.00 mg/L）的胡桃醌作用各种细胞株。MTT比色法检测胡桃醌对白血病细胞的增殖抑制作用。流式细胞术测定不同浓度胡桃醌对K562细胞株凋亡的影响。结果: 胡桃醌对白血病K562、Jurkat、U937、U266及NB4细胞株增殖均有较强的抑制作用,其半数抑制浓度(IC50)(48 h)分别为3.87、1.13、4.48、1.87和4.67 mg/L。其中胡桃醌对Jurkat和U266细胞的抑制效果最为明显（P<0.05）,胡桃醌对其他3个白血病细胞株的IC50值均<40 mg/L,且胡桃醌对这5种细胞株增殖的抑制作用呈时间和剂量依赖性。流式细胞术检测显示,胡桃醌可诱导K562细胞凋亡,1、2、4、8和16 mg/L胡桃醌作用6 h,K562细胞凋亡率分别为(4.54±0.6) %、(11.5 4±0.6) %、(28.7±0.3) % 、(45.0±1.2) %和(76.1±1.4) %。结论: 胡桃醌可抑制多种白血病细胞株增殖,其机制可能与促进白血病细胞凋亡相关。     

胡桃醌对肝癌HepG2细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用

目的：探讨胡桃醌对肝癌HepG2细胞增殖的影响,阐明其可能的作用机制。方法：选取处于对数生长期的肝癌细胞株HepG2分为空白对照组和不同剂量（40、80、120、160和200 μmol/L）胡桃醌组。采用MTT法观察胡桃醌对HepG2细胞的抑制作用,并计算出半数抑制浓度（IC50）,依据IC50确定胡桃醌的有效浓度;在光学显微镜下观察细胞形态学变化;免疫化学法检测HepG2细胞中Caspase-3蛋白的表达;流式细胞术测定120 μmol/L胡桃醌对HepG2细胞凋亡周期的影响。结果：胡桃醌的IC50为139.888 1 μmol/L。与空白对照组比较,各剂量胡桃醌组HepG2细胞增殖抑制率明显升高(P<0.05或P<0.01),并呈剂量依赖性。形态学观察,胡桃醌组细胞体积缩小,连接消失。120 μmol/L胡桃醌组HepG2细胞的生长周期发生变化,出现明显的G2/M期阻滞。免疫细胞化学染色,与空白对照组比较,120 μmol/L胡桃醌组HepG2细胞中Caspase-3蛋白表达明显增加。结论：胡桃醌能诱导HepG2细胞发生凋亡,其机制可能与Caspase通路相关。     

胡桃醌通过促进c-Myc泛素化降解抑制宫颈癌细胞的生长和促进凋亡

目的 观察c-Myc蛋白在宫颈癌HeLa细胞中的表达,探讨胡桃醌通过影响c-Myc蛋白泛素化降解进而影响HeLa细胞的增殖与凋亡。方法 培养人宫颈癌HeLa细胞,分为对照组：正常培养;10、20、50 μmol/L胡桃醌组：培养液中分别加入对应浓度的胡桃醌。以Western blot方法分析胡桃醌处理后c-Myc蛋白的表达。HeLa细胞分为对照组和20 μmol/L胡桃醌组,在培养0、2、4、8 h分别用Western blot检测c-Myc蛋白表达的变化;放线菌酮（CHX）法检测c-Myc蛋白半衰期的变化;CoIP方法检测c-Myc蛋白降解影响。HeLa细胞分为空白对照组：正常培养;胡桃醌组：20 μmol/L胡桃醌培养液培养;0.5、1.0、2.0 μmol/L MG132组：分别与0、1.0、2.0 μmol/L蛋白酶体抑制剂MG132加20 μmol/L胡桃醌培养,检测c-Myc蛋白表达的水平。将si c-Myc转染入HeLa细胞后,将细胞分siNC组：空载体组;si-NC;胡桃醌组：空载体加20 μmol/L胡桃醌处理;si-cMyc组：转染Myc RNA;si-cMyc20 μmol/L胡桃醌组：转染Myc RNA加20 μmol/L胡桃醌处理。MTT及流式细胞术检测20 μmol/L胡桃醌处理后对敲除及未敲除c-Myc基因的细胞增殖及凋亡的影响。结果 与对照组相比,不同浓度胡桃醌可下调c-Myc蛋白表达且曾时间及剂量依赖性（P<0.05;P<0.01）;胡桃醌可缩短c-Myc蛋白的半衰期,加入不同浓度的MG132后,即可明显上调c-Myc蛋白水平（P<0.05; P<0.01）。未用胡桃醌组相比,胡桃醌可明显增加c-Myc蛋白的泛素降解水平。未敲除c-Myc组相比,敲除组在胡桃醌处理后吸光度值明显增加（P<0.05）和早期凋亡率明显下降（P<0.05）。结论 胡桃醌通过影响c-Myc蛋白的泛素化降解过程,进而抑制HeLa细胞增殖并促进其凋亡的发生。     

胡桃醌通过PI3K/AKT途径促进前列腺癌LNCaP细胞氧化应激

目的 探讨胡桃醌对人前列腺癌LNCaP细胞的杀伤活性与其诱导氧化应激反应的相关性及机制.方法 采用 0、6.25、12.5、25、50和100 μmol/L胡桃醌作用前列腺癌 LNCaP细胞,MTT法检测不同剂量胡桃醌对LNCaP细胞生长抑制影响;胡桃醌联合抗氧化剂NAC作用细胞后,DCFH-DA作为荧光探针,用荧光酶标法检测活性氧(ROS);胡桃醌联合PI3K/AKT通路抑制LY294002作用细胞后,Western blot法检测p-AKT、AKT和Nrf2蛋白表达变化.结果 与阴性对照组比较,胡桃醌浓度在12. 5 μmol/L或以上显著抑制前列腺癌细胞生长(P＜0. 05, P＜0. 01).胡桃醌能够促进细胞ROS含量(P＜0. 01);胡桃醌联合抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)导致ROS含量下降(P＜0. 05),细胞存活率升高(＜0. 01).胡桃醌抑制p-AKT的表达,NAC能够恢复胡桃醌抑制的p-AKT表达.胡桃醌能够抑制细胞核Nrf2的表达,与PI3K/AKT抑制剂LY294002联合使用进一步抑制了 Nrf2的表达.结论 胡桃醌能够抑制前列腺癌LNCaP细胞增殖,作用的机制可能与促进ROS产生从而抑制PI3K/ AKT途径,导致Nrf2表达下降有密切关系.     

胡桃醌不同给药途径对人肝癌细胞BEL-7402裸鼠皮下移植瘤生长的影响

目的采用裸鼠皮下移植瘤模型,通过不同给药途径对胡桃醌抗肿瘤活性和毒性进行评价。方法建立人肝癌BEL-7402细胞裸鼠皮下移植瘤模型,通过腹腔注射和局部注射两个给药途径观察胡桃醌抑制肿瘤生长的效果。结果①以600、300和150μg/kg胡桃醌腹腔注射于人肝癌BEL-7402细胞裸鼠皮下移植瘤模型,发现该剂量胡桃醌对肿瘤生长没有明显的影响;NK细胞活性检测发现,600、300μg/kg胡桃醌对裸鼠免疫功能有影响(P均<0.01),150μg/kg胡桃醌则没有影响(P>0.05);与阳性对照组(5-Fu)相比,600μg/kg胡桃醌组NK细胞活性差异无显著性(P>0.05),300和150μg/kg胡桃醌组NK细胞活性差异有显著性(P<0.05,P<0.01),结果提示胡桃醌对小鼠免疫系统有一定的损伤作用。②以4.5、3和1.5 mg/kg胡桃醌腹腔注射于人肝癌BEL-7402细胞裸鼠皮下移植瘤模型,抑瘤率分别为为78.24%、66.57%、48.94%;4.5、3 mg/kg胡桃醌的抑瘤作用可与阳性对照组比拟(P均>0.05)。但4.5 mg/kg胡桃醌组裸鼠出现明显的皮下脂肪减少、消瘦,并有死亡现象。③以pH...     

胡桃醌对肝癌HepG2细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用

目的:探讨胡桃醌对肝癌HepG2细胞增殖的影响,阐明其可能的作用机制。方法:选取处于对数生长期的肝癌细胞株HepG2分为空白对照组和不同剂量(40、80、120、160和200μmol·L1)胡桃醌组。采用MTT法观察胡桃醌对HepG2细胞的抑制作用,并计算出半数抑制浓度(IC50),依据IC50确定胡桃醌的有效浓度;在光学显微镜下观察细胞形态学变化;免疫化学法检测HepG2细胞中Caspase-3蛋白的表达;流式细胞术测定120μmol·L1胡桃醌对HepG2细胞凋亡周期的影响。结果:胡桃醌的IC50为139.8881μmol·L1。与空白对照组比较,各剂量胡桃醌组HepG2细胞增殖抑制率明显升高(P<0.05或P<0.01),并呈剂量依赖性。形态学观察,胡桃醌组细胞体积缩小,连接消失。120μmol·L1胡桃醌组HepG2细胞的生长周期发生变化,出现明显的G2/M期阻滞。免疫细胞化学染色,与空白对照组比较,120μmol·L1胡桃醌组HepG2细胞中Caspase-3蛋白表达明显增加。结论:胡桃醌能诱导HepG2细胞发生凋亡,其机制可能与Caspase通路相关。     

胡桃醌对宫颈癌caski细胞的细胞毒作用的研究

目的探讨胡桃醌对宫颈癌caski细胞增殖的影响。方法将宫颈癌caski细胞专代培养至对数生长期,分组加入不同浓度的胡桃醌,并设空白对照组,用MTT比色法观察胡桃醌对体外培养的宫颈癌caski细胞生长的抑制作用,光学显微镜观察细胞形态学变化。结果MTT比色法测定显示,胡桃醌作用于宫颈癌caski细胞后可以抑制其增殖且呈剂量依赖性。结论胡桃醌能抑制体外培养的宫颈癌caski细胞的增殖。     

不同干燥方法、贮藏年限及采收时间对青龙衣中胡桃醌的影响

方法 采用 HPLC 法测定不同干燥方法、贮藏年限及采收时间的青龙衣药材中胡桃醌的量。结果 不同干燥方法对青龙衣药材中胡桃醌量有不同的影响，60 ℃ 烘干处理后药材中胡桃醌的量显著低于其他的方法 (P＜001)。青龙衣宜采用阴干或 40 ℃ 烘干的方法干燥。青龙衣贮藏时间越长，胡桃醌的量越低。青龙衣适宜的采收时间是7～8月份果实未成熟时采收。结论 不同干燥方法、贮藏年限及采收时间对青龙衣药材中胡桃醌的量有一定影响。     

胡桃醌体外抗胰腺癌细胞机制的初步研究

目的:探讨胡桃醌体外抗胰腺癌细胞的机制.方法:采用MTT法检测胡桃醌对BXPC-3细胞的生长抑制作用,流式细胞仪分析胡桃醌对BXPC-3细胞周期的影响.结果:MTT法试验结果显示,胡桃醌对体外培养的人胰腺癌BXPC-3细胞具有明显的生长抑制作用,24、48 h的IC50值为1.64x10-5,5.8x10-5 mol/L.同时胡桃醌能随着浓度的增加,时间的延长,诱导BXPC-3细胞周期停滞于G2期和S期,呈G2期和S期阻滞作用.结论:胡桃醌对胰腺癌BXPC-3细胞有明显的生长抑制作用,并能阻止其周期,诱导BXPC-3细胞凋亡.     

正交试验法优选青龙衣中胡桃醌的提取工艺

目的 探讨不同溶剂对青龙衣中胡桃醌提取率的影响,进一步通过正交试验优选青龙衣中胡桃醌最佳提取工艺。方法 以胡桃醌的量为评价指标,以乙醇、氯仿、石 油醚、醋酸乙酯为溶剂分别进行超声提取,用HPLC法测定提取物中的胡桃醌,确定出最佳提取溶剂。以溶剂用量(倍)、提取时间(min)、提取次数（次）为考察因素,采用正交试验法L₉(3⁴)确定提取青龙衣中胡桃醌的最佳工艺。结果 最佳提取溶剂为醋酸乙酯,最佳提取工艺条件为A3B3C2,即10倍量的醋酸乙酯,超声2次,每次40 min。结论 用正交试验法优选所得胡桃醌的提取工艺科学合理,适于工业生产。     

胡桃醌对人肝癌BEL-7402细胞亚显微结构的影响

目的 了解胡桃醌对人肝癌BEL-7402细胞亚显微结构的影响.方法 12.5 μmol/L胡桃醌作用于BEL-7402细胞24h后固定,分别行HE染色、考马斯亮蓝染色、扫描电镜及透射电镜样品制备.结果 12.5 μmol/L胡桃醌处理组细胞形态和细胞骨架发生改变.扫描电镜结果显示BEL-7402细胞胞体体积缩小,与周围细胞群脱离,表面微绒毛卷曲、畸变、小球结构逐渐增多,细胞间连接逐渐断裂,细胞间隙增宽,有凋亡小体形成.透射电镜结果显示胡桃醌作用BEL-7402细胞24 h后,细胞内质网扩大,线粒体结构疏松,胞核核仁裂解,凋亡小体形成.结论 胡桃醌能有效改变人肝癌BEL-7402细胞亚显微结构,诱导细胞凋亡.     

HPLC法测定青龙衣中胡桃醌的含量

目的:建立高效液相色谱(HPLC)对青龙衣中胡桃醌含量测定的方法。方法:色谱柱为:Waters symmetry shieldTM RP18(21mm×150mm×3.5mm),流动相为甲醇:水(梯度洗脱),流速为0.2ml/min,紫外检测波长为250nm。青龙衣烘干粉碎过筛后,采用索氏提取法提取青龙衣中胡桃醌成分,再水浴蒸干加甲醇溶解超声,离心后取上清液,用高效液相色谱法进行含量测定。结果:胡桃醌在1～150g内进样量与峰面积线性关系良好,线性方程为Y=5891.8X-5679.1,r=0.9982(n=6)。结论:该法灵敏度高,简便快捷,重现性好。     

胡桃醌对宫颈癌SiHa细胞增殖及细胞周期的影响

目的: 探讨胡桃醌对人宫颈癌SiHa细胞增殖及细胞周期的影响,阐明胡桃醌在宫颈癌治疗中的作用。方法: 选取处于对数生长期的SiHa细胞,随机分为对照组和10、20、40、60、80和100 μmol·L^-1胡桃醌处理组。倒置显微镜下观察细胞的形态学变化,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性和细胞生长抑制率,流式细胞术检测SiHa细胞的细胞周期。结果: 与对照组比较,胡桃醌处理组SiHa细胞体积缩小,连接消失,与周围细胞脱离。与对照组比较,胡桃醌处理组细胞增殖活性降低(P<0.05),细胞生长抑制率升高(P<0.05),且呈剂量依赖性,半数抑制浓度(IC₅₀)为20.7 μmol·L^-1;流式细胞术检测,与对照组比较,10和100 μmol·L^-1胡桃醌处理组SiHa细胞的亚二倍体峰(SubG₁)比率增加,G₀/G₁和S期细胞比率降低,G₂/M期细胞比率先升高后降低。结论: 胡桃醌对SiHa细胞增殖具有抑制作用,并可使细胞周期SubG₁比率增加。     

HPLC法测定青龙衣中胡桃醌的含量

目的：建立高效液相色谱（HPLC）对青龙衣中胡桃醌含量测定的方法。方法：色谱柱为：Waters symmetry shieldTM RP18（21mm×150mm×3．5mm），流动相为甲醇：水（梯度洗脱），流速为0．2ml／min，挚外检测波长为250nm。青龙衣烘干粉碎过筛后，采用索氏提取法提取青龙衣中胡桃醌成分，再水浴蒸干加甲醇溶解超声，离心后取上清液，用高效液相色谱法进行含量测定。结果：胡桃醌在1～150g内进样量与峰面积线性关系良好，线性方程为Y=5891．8X-5679．1．r=0．9982（n=6）。结论：该法灵敏度高，简便快捷，重现性好。     

不同采摘时期的青龙衣中胡桃醌的含量比较

目的对不同时间采集的青龙衣中胡桃醌的含量进行分析比较。方法用高效液相色谱测定胡桃醌的含量,色谱柱为symmetry fieldTM RP182.1mm×150mm column,流速0.2mL/min,质谱为waters2695,流动相为甲醇与水的梯度,紫外检测波长为250nm。结果不同时间采集的青龙衣中胡桃醌的含量存在一定的差异,但相差不大。结论成熟的青龙衣中胡桃醌的含量较丰富。     

胡桃醌对人结肠癌HCT-8细胞黏附及基质金属蛋白酶活性的影响

目的:观察胡桃醌对人结肠癌HCT-8细胞黏附作用、基质金属蛋白酶（MMP2、MMP9）活性及表达的影响,阐明其抑制肿瘤侵袭转移的可能作用机制。方法：取体外培养处于对数生长期人结肠癌HCT-8细胞,分为胡桃醌1.25、2.50、5.00、10.00和20.00 mg.L^-1组,并设空白对照组,处理72 h后通过细胞黏附实验观察HCT-8细胞黏附率的变化,明胶酶谱法检测MMP2和MMP9活性,Western blotting法检测细胞MMP2和MMP9蛋白表达水平。结果：与空白对照
组比较,1.25、2.50、5.00、10.00和 20.00 mg.L^-1胡桃醌组HCT-8细胞黏附率逐渐降低（P<0.05）;2.50、5.00、10.00和20.00 mg.L^-1胡桃醌组MMP2活性降低（P<0.05）,各浓度胡桃醌处理组MMP9活性均降低（P<0.05）;各浓度胡桃醌处理组MMP2、MMP9蛋白表达水平均降低（P<0.01）。结论：胡桃醌明显抑制HCT-
8细胞黏附,降低MMP2、MMP9活性及蛋白表达水平,提示MMP2和MMP9活性及蛋白表达水平下降可能是胡桃醌在体
外抑制HCT-8细胞黏附的作用机制。     

胡桃醌联合顺铂对肝癌HepG2细胞增殖的影响

目的 探讨胡桃醌与顺铂（DDP）联合应用对人肝癌HepG2细胞增殖的影响.方法采用不同浓度的胡桃醌或（和）顺铂处理肝癌HepG2细胞24 h,采用倒置显微镜观察细胞的形态学变化,通过MTT法检测其对HepG2细胞生长的抑制作用.结果 不同浓度的药物作用可导致HepG2细胞发生形态学变化,MTT比色法测定显示,采用胡桃醌、顺铂合用,可显著抑制HepG2细胞的增殖,单用不同浓度的胡桃醌与顺铂分别作用于肝癌HepG2细胞后可以抑制其增殖且呈剂量依赖性.胡桃醌联合顺铂增强了HepG2细胞的凋亡.结论 胡桃醌联合顺铂与单药相比能更显著抑制人肝癌HepG2细胞的增殖,促进其凋亡,两药对肝癌细胞的杀伤效应具有一定的协同作用.     

胡桃醌抗肿瘤机制的研究进展

近年来,肿瘤已成为威胁人类健康主要疾病之一,随着对肿瘤发病机制的不断深入研究,肽酰脯氨酰异构酶pin1抑制剂胡桃醌在促肿瘤细胞凋亡的作用日益受到人们的重视,本文通过对胡桃醌在分子水平上抗肿瘤的作用进行阐述,对将来胡桃醌的临床应用给予理论上的支持。