创伤伤口分泌物中产气荚膜梭菌快速定量检测方法的建立及应用

目的 建立检测创伤伤口分泌物中产气荚膜梭菌的实时荧光定量PCR方法,为气性坏疽的早期快速诊断提供新手段.方法以产气荚膜梭菌16S rDNA基因序列为模板,在其保守区域设计特异性引物及探针,以PCR扩增产物重组质粒作为定量检测的标准品,绘制标准曲线.对荧光定量PCR体系和反应条件进行优化,并验证方法的特异性、敏感性、重复...     

端粒酶活性和p16基因甲基化检测对肺癌早期诊断的价值

目的　从分子生物学的角度探索端粒酶活性和p16基因甲基化检测对肺癌早期诊断意义。方法　用PCR -TRAP -ELISA半定量及PCR -TRAP银染定性法、甲基化相关的PCR法 ,检测 49例肺癌、2 8例肺部良性疾病的纤维支气管镜后痰液脱落细胞端粒酶活性及p16基因甲基化状态 ,检测结果与组织病理、细胞学进行对照研究。结果　肺癌痰液标本的细胞学敏感性为 5 5 .1% ,特异性为 10 0 % ;端粒酶活性的敏感性为 71.4% ,特异性为 89.3% ;p16甲基化的敏感性为 2 8.6 % ,特异性为 10 0 % ;三者联合检测的敏感性为 90 .9% ,特异性为 89.3%。结论　痰液的细胞学、端粒酶活性表达及p16基因甲基化联合检测可提高肺癌痰检的敏感性 ,有助于肺癌早期诊断。     

快速药物敏感性试验

目的应用全自动培养系统并结合纸片琼脂扩散法监测抗生素的耐药性，为临床菌血症等严重感染患提供快速准确诊断。方法采用全自动血液培养系统对474例样品进行增菌培养、分离和检测。结果23种抗生素耐药性监测的药敏结果显示革兰阳性菌，对青霉素、红霉素敏感性较差，对头孢菌素、万古霉素敏感。革兰阴性菌对氯霉素、舒氨西林耐药，对丁胺卡那、头孢他啶、头孢哌酮、头孢噻肟敏感。检出阳性菌为50株，血培养阳性率10．5％，分离出16种菌株。其中革兰阳性菌占58％，革兰阴性菌占42％。结论全自动血液培养系统用于细菌检测和药敏试验，结果快速准确。     

实时荧光定量PCR检测应力性骨折新兵外周血TNFRSF10C mRNA表达

目的:检测TNFRSF10C基因在应力性骨折(SF)患者与正常人之间的表达差异。方法:采用1:1配比的病例对照研究,选取入伍新兵SF病例及正常对照各10例,取受试者空腹肘静脉血,采用实时荧光定量PCR检测TNFRSF10C基因表达,结合管家基因GAPDH进行相对定量分析。结果:设计并合成了一组只特异性结合人TNFRSF10C基因的实时荧光定量PCR引物,结果未发现非特异性扩增。10例SF样本中有7例TNFRSF10C基因表达上调,上调1.4倍至6.7倍,另3例SF样本TNFRSF10C基因表达下调,分别为50%、90%和90%。结论:本研究建立的TNFRSF10C基因实时荧光定量PCR检测体系特异性好、可靠。TNFRSF10C基因表达结果为分析SF发病的分子机制及SF早期诊断提供了重要线索。     

血清降钙素原联合血培养检测对菌血症的早期诊断价值

目的研究血清降钙素原(PCT)联合血培养检测对菌血症的诊断价值。方法对137例发热疑似菌血症患者首诊时检测PCT,并同时进行血培养,分析比较确诊患者的首检PCT阳性率、血培养首日和5d阳性率,以及首检PCT阳性患者的菌血症确诊率。结果在确诊的107例菌血症患者中首次检测PCT阳性为91例,阳性率为85.0%;血培养首日结果为阳性的27例,阳性率为25.2%,5 d后血培养阳性总计43例,血培养阳性率为40.2%。137例疑似患者中,首次检测PCT阳性为99例,其中91例确诊为菌血症,确诊率为91.9%。结论PCT检测对菌血症有较好的敏感性,可作为早期诊断菌血症的参考依据。     

15种呼吸道病原体的实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

目的 建立15种呼吸道常见病原体的实时荧光定量PCR检测方法,用于新兵发热病因的快速检测.方法 根据生物信息学分析结果选定15种常见呼吸道病原体的检测靶基因,建立实时荧光定量PCR方法.采用15种病原体的培养物和正常人的基因组对检测方法的敏感性和特异性进行测试,并对健康和发热新兵各50例的咽拭子进行检测.结果 所建立的荧光定量PCR方法的有效检测线性范围为1×102～1×109拷贝/ml,最低检测限为5～50拷贝/ml,敏感性和特异性均较高.在50例发热新兵咽拭子中,24.0%嗜肺军团菌阳性,30.0%乙型流感病毒阳性,24.0%肺炎支原体阳性,8.0%甲型流感病毒阳性,对照组上述病原的阳性率依次为20.0%、6.0%(P<0.05)、22.0%和0.0%,而腺病毒、麻疹病毒、SARS相关冠状病毒、人冠状病毒、流行性腮腺炎病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒H5N1、风疹病毒、猪链球菌、肺炎衣原体和肺炎链球菌均阴性.18例(36%)流感病毒感染者急性期血清IgM和IgG阳性率分别为88.9%(16/18)和72.2%(13/18),在恢复期则分别为16.8%(3/18)和100%(18/18).健康新兵的两次血清抗体检测无临床意义.在咽拭子嗜肺军团菌及肺炎支原体阳性个体,发热期和恢复期血清抗体阳性率分别为8.3%和8.3%、&3%和16.7%.结论 成功建立可同时进行15种呼吸道病原体早期诊断的实时荧光定量PCR方法,该方法检测结果表明此次新兵营集训新兵发热病因以流感病毒感染为主.     

多重荧光定量PCR法检测食品中的沙门菌、副溶血弧菌和金黄色葡萄球菌

目的 建立一种可同时检测沙门菌、副溶血弧菌和金黄色葡萄球菌3种食源性致病菌的多重荧光定量PCR技术。方法 利用沙门菌invA毒力基因、副溶血弧菌gyrase基因和金黄色葡萄球菌Sa442基因的特异性引物、探针,建立多重荧光定量PCR反应体系,完成特异性、敏感性评价,并用该法与国标法进行40份留样食品的检测比较。结果 各对引物、探针均能扩增出目标靶序列,3种检测通道无交叉干扰,对非目标菌无扩增信号,对沙门菌、副溶血弧菌和金黄色葡萄球菌的核酸检测限均达到102拷贝/μl;用多重荧光定量PCR法在40份食品样本中检出3份金黄色葡萄球菌阳性样本,其中1份国标法检测为阴性,其他样本检测结果完全一致。结论 建立了一种针对沙门菌、副溶血弧菌和金黄色葡萄球菌的多重荧光定量PCR检测方法,该方法具有良好的特异性与敏感性,可为食品安全提供技术支持。     

聚合酶链反应检测嗜肺军团菌的实验研究

 目的探讨并建立聚合酶链反应(PCR)用于检测嗜肺军团菌的方法.方法用PCR方法扩增嗜肺军团菌巨噬细胞感染增强子基因(mip)片段,琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物;分析其特异性和敏感性.结果在嗜肺军团菌14个血清型参考株均扩增出特异的340bp片段,而三株非嗜肺军团菌及其他需鉴别诊断的常见病原菌均未扩增出此特异条带.检测灵敏度为2.6 pg/ul基因组DNA.结论依据mip基因建立的嗜肺军团菌PCR检测方法具有高度的敏感性和特异性,是诊断与鉴别诊断嗜肺军团菌感染的一种有效手段.     

结核分枝杆菌及多重耐药性的快速检测:MTB/RIF实验及检测诊断系统

我国是结核病及耐药结核高发地区,年新发结核病例130万,新发结核病例耐药率为5.7％.痰涂片抗酸染色和临床放射影像学是结核病尤其是肺结核的主要诊断手段.但痰涂片阳性率偏低,新发肺结核病例涂阳率仅28％,而且结核病的影像学表现缺乏特异性.缺乏简单、准确、快速的诊断手段一直是我国实现结核病防控目标的瓶颈.结核分枝杆菌/利福平耐药(MTB/RIF)检测诊断系统运用半槽式(hemi-nested)RT-PCR及荧光探针报告技术(beacon technology),特异性扩增并检测结核分枝杆菌特有并与利福平耐药密切相关的rpoB基因片段.以PCR循环阈值反映标本中的结核分枝杆菌载量,进行半定量分析.该系统以结核杆菌培养作为标准对照,对疑诊肺结核患者痰标本的诊断总体敏感性为73.1％～90.0％,特异性99.0％～99.5％;对利福平耐药基因(MDR-TB的分子生物学标记物)诊断的敏感性为97.2％、特异性为98.3％.上样后系统可在2h内自动完成诊断及结果打印程序.由于系统特异性扩增rpoB基因片段,因此与非结核分枝杆菌及呼吸系统常见病原体无交叉反应.除外痰标本,该系统还能用于多种体液(胸腔积液、尿、脑脊液以及支气管肺泡灌洗液等)和肺组织匀浆中结核分枝杆菌的检测.该系统的诊断敏感性较抗酸染色高l00倍,与结核分枝杆菌培养相近,但后者从加样至报告的平均时间为16d(平板培养基)或30d(液体培养基).与传统结核诊断实验室诊断技术相比,本系统还具有操作简便、不产生传染性生物气溶胶等优点.     

酶联免疫吸附试验联合PCR方法检测肺炎支原体感染的临床意义

目的研究血清酶联免疫吸附试验(ELISA)联合肺泡盥洗液PCR方法在肺炎支原体感染检测中的临床意义。方法对我院2008年8月—2010年8月期间住院的332例成人社区获得性肺炎病人分别采用血清ELISA方法和肺泡盥洗液PCR方法检测肺炎支原体(MP)。结果血清ELISA法和肺泡盥洗液PCR法检测肺炎支原体感染敏感性分别为82.45%、75.43%,特异性分别为95C.16%、96.49%。两种方法在检测肺炎支原体感染中敏感性及特异性的差异无统计学意义(P>0.05)。结论 血清ELISA方法联合肺泡盥洗液PCR方法检测可提高诊断阳性率,对早期诊断支原体肺炎有重要临床意义。     

血清降钙素原和C-反应蛋白在细菌感染性疾病诊断中的意义

目的评价血清降钙素原（PCT）和C-反应蛋白（CRP）对细菌感染性疾病诊断的临床价值。方法112例重症监护病房（ICU）细菌感染的患者作为感染组,并以110例ICU非细菌感染性患者作为对照组,测定并比较分析两组患者血清PCT和CRP结果。结果①感染组血清PCT水平显著高于对照组（P〈0.05） 感染组的PCT检测阳性率为94.6%,高于对照组（16.4%）（P〈0.05） ②感染组血清CRP水平显著高于对照组（P〈0.05） 感染组的CRP检测阳性率为31.3%,高于对照组（28.2%）,但两组差异无统计学意义（P〉0.05） ③PCT检测对细菌感染性诊断的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和诊断符合率均高于CRP检测结果,相比较有显著性差异（P〈0.05）。结论PCT对于严重细菌感染性疾病的诊断较CRP敏感,监测血清PCT水平可以作为严重细菌感染的特异性监测指标,对临床诊治具有指导意义。     

^14C—尿素呼气试验对胃幽门螺杆菌感染的诊断价值

目的建立１４Ｃ尿素呼气试验，评价其临床应用价值。方法胃镜下取胃窦粘膜作细胞培养及病理切片，染色阳性为幽门螺杆菌（Ｈｐ）感染的对比指标。对１３８４例临床怀疑为胃及十二指肠疾病的患者进行呼气试验，其中４４例行多时相动态呼气试验，以确定最佳集气时间。结果动态检测示３０分钟为１４Ｃ呼气量峰值，如将Ｈｐ阳性阈值定于呼气比值大于３５，则１４Ｃ呼气试验对Ｈｐ感染检出的灵敏度为９６７％，特异性为９６５％。１４Ｃ呼气试验在成人人群中的阳性率为５０４％，在儿童中为８１２％。结论１４Ｃ呼气试验在胃肠道Ｈｐ感染检测中具有良好的灵敏度及特异性，方法简便可靠，易于临床推广     

IgH基因重排和免疫分型检测在诊断B淋巴细胞增生性疾病中的初步应用

 目的 通过半巢式聚合酶链反应(PCR)技术对免疫球蛋白重链(IgH)基因重排的检测,建立对B淋巴细胞增生性疾病早期诊断的分子生物学方法,进而探讨在疑似B淋巴细胞增生性疾病诊断与鉴别诊断中的价值.方法 通过半巢式PCR技术检测8例已确诊的B淋巴细胞增生性疾病和24例临床疑似B淋巴细胞增生性疾病初诊患者的IgH基因重排;24例中流式细胞术检测了19例患者的免疫分型.结果 检测8例已确诊的B淋巴细胞增生性疾病,该方法敏感性为83.33%(5/6),特异性为100%(10/10);24例疑似B淋巴细胞增生性疾病初诊患者IgH基因重排检出的阳性率为83.33%(20/24),其中FR2A阳性率41.67%(10/24);FR3A阳性率50%(12/24);同时阳性2例.免疫分型结果14例可疑阳性,阳性率73.68%(14/19).结论 通过建立半巢式聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)技术检测IgH基因重排的分子生物学方法,对疑似B淋巴细胞增生性疾病患者的诊断起到了十分重要的作用,并且对反应性和肿瘤性淋巴细胞增生鉴别诊断具有重要的意义,为临床早期诊断、治疗干预提供了新的证据.     

Role of 99mTc Sulesomab in the diagnosis of prosthetic joint infections

BACKGROUND: Investigation of suspected infection in prosthetic joint replacements is a difficult orthopaedic problem with important therapeutic implications. METHODS: We retrospectively analysed the results of 38 patients referred with a clinical suspicion of bone or joint infections. Referrals were made for suspected infection of prosthetic hip joints (17), total knee replacements (13), total elbow replacements (4) and total shoulder replacements (4). Sulesomab imaging was done with 650 MBq of 99mTc Sulesomab. The scintigraphic diagnosis was compared with the final clinical diagnosis and information collected from routine blood tests (erythrocyte sedimentation rate, C-reactive protein and full blood count), plain radiographs, appropriate microbiology, culture and/or histology where available. The final diagnosis was determined by conclusive microbiology, culture and/or histology, intra-operative findings, aspiration, complementary investigations like computed tomography/magnetic resonance imaging and long-term clinical follow-up. RESULTS: The overall sensitivity was 90.90% and specificity 81.48%. The individual sensitivity and specificity of each category were compared. Knee prostheses showed better sensitivity and specificity compared to that for hip prostheses. CONCLUSIONS: 99mTc Sulesomab seems to be useful in excluding infection rather than confirming it, with a high negative predictive value (95.65%).     

实时荧光定量PCR检测莫氏立克次体

目的 采用TaqMan-MGB探针建立检测莫氏立克次体的实时荧光定量PCR.方法 依据莫氏立克次体外膜蛋白B基因(ompB)设计引物和探针,以克隆的ompB作模板建立实时荧光定量PCR方法.结果 建立的定量标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(r=0.995);该方法能检出＜10拷贝的莫氏立克次体DNA,敏感性为普通PCR的1 000倍.用该方法检测莫氏立克次体DNA,结果为阳性,但是检测其他相关细菌DNA的结果均为阴性.用该方法检测莫氏立克次体感染豚鼠血标本,50%样本检测为阳性,而普通PCR检测结果均为阴性.结论 该实时荧光定量PCR具有很高的特异性和敏感性,适合于快速检测样本中微量莫氏立克次体DNA,可用于临床实验室快速确诊地方性斑疹伤寒.     

鼻咽刷洗物MSH2和RUNX3基因甲基化在鼻咽癌早期诊断及预后判断中的作用

目的 探讨鼻咽刷洗物检测MSH2和RUNX3基因甲基化在鼻咽癌早期诊断及预后判断中的作用.方法 选择经病理确诊的鼻咽癌患者54例、慢性鼻咽炎患者18例和健康志愿者20例作为研究对象,运用甲基化特异性PCR检测鼻咽刷洗物中MSH2和RUNX3基因启动子区甲基化情况,评估将其用于诊断鼻咽癌的特异度和敏感度,分析基因甲基化与鼻咽癌患者临床病理特征的关系.结果 鼻咽癌患者鼻咽刷洗物MSH2和RUNX3基因甲基化频率分别为70.37％(38/54)和51.85％(28/54),在慢性鼻咽炎患者和健康志愿者中均未检测到MSH2和RUNX3基因启动子甲基化(P＜0.001).鼻咽癌患者鼻咽刷洗物中运用甲基化特异性PCR检测MSH2基因甲基化诊断鼻咽癌的特异度为100％、敏感度70.37％; RUNX3基因甲基化诊断鼻咽癌的特异度为100％、敏感度51.85％;平行联合检测MSH2和RUNX3基因甲基化诊断鼻咽癌的特异度为100％、敏感度90.74％.鼻咽刷洗物中MSH2和RUNX3基因甲基化与患者临床病理特征无显著相关性(P＞0.05).结论 运用甲基化特异性PCR平行联合检测鼻咽刷洗物MSH2和RUNX3基因甲基化对早期诊断鼻咽癌有高度特异性和敏感度,具有潜在的临床应用价值,但目前尚不能作为判断鼻咽癌临床预后预测指标.     

肺炎支原体实验室常见血清学检测方法的临床评价

目的：比较明胶颗粒凝集法（PLA）、胶体金法以及冷凝集试验（CAT）三种实验室常见肺炎支原体（MP）血清学诊断方法的应用价值和临床意义。方法：采集122例临床确诊MP患者及103例健康体检血液样本，分别采用明胶颗粒凝集法、胶体金法以及冷凝集试验检测MP，比较分析三种方法所得结果及其敏感性、特异性、准确度等。结果：胶体金法与PLA检测MP，阳性率较高，假阳性率较低，CAT阳性率较低，假阳性率较高；三种方法中PLA敏感性、特异性、准确度最高，胶体金法次之，CAT最低。结论：PIA法与胶体金法检测MP均具有较高的敏感性、特异性、准确度，但由于胶体金法价格低廉，更适于推广。     

The promising role of 18F-FDG PET in detecting infected lower limb prosthesis implants.

The purpose of this study was to evaluate the feasibility of using 18F-FDG and PET for the detection of infection associated with lower limb arthroplasty. METHODS: Seventy-four prostheses in 62 patients in whom infection was suspected after artificial hip or knee placement were studied with this technique. Images were obtained 60 min after an intravenous injection of FDG. The images were interpreted as positive for infection if tracer uptake was increased at the bone-prosthesis interface. A final diagnosis was made by surgical exploration or clinical follow-up for 1 y. PET results were compared with the follow-up outcome in all patients. RESULTS: The sensitivity, specificity, and accuracy of PET for detecting infection associated with knee prostheses were 90.9%, 72.0%, and 77.8%, respectively. The sensitivity, specificity, and accuracy of PET for detecting infection associated with hip prostheses were 90%, 89.3%, and 89.5%, respectively. Overall, the sensitivity was 90.5% and the specificity was 81.1% for detection of lower limb infections. CONCLUSION: FDG PET is a useful imaging modality for detecting infections associated with lower limb arthroplasty and is more accurate for detecting infections associated with hip prostheses than for detecting infections associated with knee prostheses.