云南省德钦县犬感染嗜吞噬细胞无形体的调查

目的 了解云南省德钦县犬感染嗜吞噬细胞无形体的状况。方法 对2013-2014年期间在德钦县采集的315份犬血标本,应用巢式聚合酶链反应进行嗜吞噬细胞无形体16S rRNA基因扩增和测序分析,并将所测序列与GenBank中注册的基因序列进行同源性和进化树分析。结果 315份犬血样本中共有18份扩增到目的片段,总阳性率为5.71%(18/315),其中中华田园犬的阳性率为7.14%(12/168),藏犬的阳性率为5.13%(4/78),哈巴犬的阳性率为2.99%(2/67),狼犬中未检出HGA。所检出的嗜吞噬细胞无形体16S rRNA基因与GenBank中收录的部分嗜吞噬细胞无形体16S rRNA基因序列的同源性高达99%～100%。进化树分析结果显示,当地无形体分为2类流行株,将其命名为Yunnan HGA1和Yunnan HGA2,分别占检出菌株的16.67%和83.33%。Yunnan HGA1与在乌拉圭、西伯利亚和远东地区发现的全沟硬蜱中检测到的无形体片段(HM366583)同源性为100%,Yunnan HGA2与加拿大发现的肩突硬蜱中检测到的无形体片段(HG916766)同源性为99%。结论 云南省德钦地区犬存在嗜吞噬细胞无形体的感染,进一步开展相应媒介、宿主及人群感染调查十分必要。     

2019－2020云南省部分地区啮齿动物感染无形体的多样性

  目的  了解云南省小型兽类感染无形体的情况，为当地无形体病的防控提供科学依据。  方法  2019—2020年在云南省西部2个县（市），北部5个县（市）选点，采用笼日法和夹夜法捕获小型兽类，经形态鉴定后取肝、脾脏器组织，提取DNA，用半巢式聚合酶链式反应（PCR）扩增无形体属16S rRNA基因660 bp目的片段，对阳性产物进行测序，所得序列作同源性分析和遗传进化分析。  结果  共捕获小型兽类1 142只，经鉴定分属3目8科21属39种。 PCR扩增阳性21份，总阳性率1.84％。 其中14份为嗜吞噬细胞无形体，6份为绵羊无形体，1份为牛无形体。 阳性小型兽类分属1目2科3属6种，均是啮齿动物。 在孟连县和元谋县的斯氏家鼠、黄胸鼠、褐家鼠中检出嗜吞噬细胞无形体；在元谋县的斯氏家鼠、黄胸鼠、社鼠和大绒鼠中检出绵羊无形体；在孟连县的白腹鼠中检出牛无形体。 统计学分析表明，孟连县和元谋县的小型兽类无形体感染率差异有统计学意义（P<0.01）；不同阳性鼠种的感染率差异有统计学意义（P<0.01），白腹鼠和斯氏家鼠感染率较高；不同性别、年龄、生境和海拔的啮齿目小型兽类感染率差异无统计学意义。  结论  云南省啮齿动物携带多种可导致人群和家畜致病的无形体，宿主种类多，但地域分布相对集中，应当重点关注人群、家畜的无形体病的预防控制。     

新疆古尔图地区长尾黄鼠感染病原体情况调查

目的调查新疆维吾尔自治区（新疆）古尔图地区长尾黄鼠汉赛巴尔通体、伯氏疏螺旋体和嗜吞噬细胞无形体等病原体感染情况,分析该地区自然疫源性疾病流行风险,为制定防控措施提供科学依据。方法2017年5 — 9月采用一日弓形夹法捕捉查岗果勒、布兰布拉克、白石头等地长尾黄鼠86只,无菌采集鼠体肾脏,试剂盒法提取全基因组DNA;运用实时荧光定量聚合酶链式反应方法检测样本汉赛巴尔通体ssrA基因、伯氏疏螺旋体recA基因和嗜吞噬细胞无形体Msp2基因。结果共检测86只长尾黄鼠样本,其中汉赛巴尔通体阳性42份,阳性率为48.84%;伯氏疏螺旋体阳性6份,阳性率为6.98%;嗜吞噬细胞无形体阳性3份,阳性率为3.49%。 布兰布拉克地区的汉赛巴尔通体感染率高于查岗果勒和白石头地区,白石头地区的伯氏疏螺旋体和嗜吞噬无形体感染率高于其他两地。结论新疆古尔图地区长尾黄鼠存在汉赛巴尔通体、伯氏疏螺旋体和嗜吞噬细胞无形体感染。     

江西省2010年-2014年呼吸道感染腺病毒基因特征分析

目的 了解2010年至2014年江西省儿科呼吸道感染患儿中腺病毒的感染状况及其基因特征.方法 2010年至2014年,共采集呼吸道感染患儿的标本2645份,分别进行了7种常见呼吸道病毒的核酸检测,核酸阳性标本进行病毒分离培养获得毒株.设计可以扩增所有腺病毒基因组Hexon基因片段、feiber基因片段的引物,毒株进行扩增,PCR的产物直接进行测序,测序结果与GenBank的已知型别的序列进行比对,确定腺病毒的型别.结果 在2645份呼吸道标本中,核酸检测腺病毒的阳性标本数为259份,阳性率9.79%,对259份核酸阳性标本进行病毒分离,得到46份毒株,病毒分离率为17.76%.46份标本进行PCR、测序、序列比对分析得知:1型ADV为7例,占15.22%,2型ADV为14例,占30.43%,3型ADV为8例,占17.39%,5型ADV为7例,占15.22%,6型ADV为1例,占2.17%,7型ADV为9例,占19.57%.结论 2010年至2014年,南昌地区的腺病毒感染以2型、3型、7型为主,1型、5型、6型比较少见,暂时未发现新的型别引起的感染.     

深圳汕头地区呼吸道感染患儿人偏肺病毒的检出及病原学初步研究

目的：了解人偏肺病毒（hMPV）在深圳汕头地区的感染情况及临床特征。方法收集2010年10月～2012年6月呼吸道感染住院患儿及健康体检儿童鼻咽抽吸物及咽拭子标本共1217例,采用 RT-PCR方法对其进行 hMPV基因筛查,随机选取5份扩增阳性产物进行核酸测序,将所得序列与 GenBank中的序列进行比较和进化树分析。同时,对阳性标本的临床资料进行分析。结果1137份感染患儿标本中检测到hMPV 51份（阳性率4.49％）,2,3,4月为发病高峰,感染患儿主要在3岁以下,占检出率的80.4％,5份阳性标本基因序列与 GenBank 中公布的多株 hMPV N 基因同源性达80.8％～98.4％。进化树分析显示分属于两个不同的基因进化族。51例阳性患儿临床症状均表现为发热、咳嗽、喘息,临床诊断主要为支气管肺炎24例,喘息型肺炎17例,毛细支气管炎9例,上呼吸道感染1例。80例健康体检儿童的呼吸道标本均未检测到 hMPV特异基因片段。结论 hMPV是引起深圳汕头地区3岁以下儿童呼吸道感染的重要病原体之一,并有一定的季节性,其感染无特异的临床表现。流行的 hMPV株存在两种不同基因型。     

青藏高原岩羊朊蛋白基因及氨基酸序列分析

目的 分析岩羊的朊蛋白基因(PRNP)序列,评估岩羊对羊瘙痒病的易感性.方法 参照GenBank上已经发表的绵羊PRNP序列设计引物,对岩羊的PRNP序列进行扩增,基因测序后与GenBank上的11种哺乳动物的PRNP序列比对和分析.结果 测序结果显示岩羊PRNP由771个核苷酸构成,编码256个氨基酸.序列分析结果显...     

TaqMan MGB 探针实时荧光定量-聚合酶链反应检测人粒细胞无形体Msp2基因方法的建立

目的 建立敏感、特异、实时荧光定量-聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative, FQ-PCR)方法, 用于人粒细胞无形体病的检测。 方法 根据无形体特异外膜蛋白 Msp2基因为靶基因设计引物以及TaqMan MGB探针, 建立FQ-PCR方法,并对湖北省随州和河北省张家口地区的蜱标本进行了检测。 结果 本研究建立的TaqMan MGB探针具有良好的特异性,建立的FQ-PCR标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(r=0.99),灵敏性评估发现每个20 μl PCR反应管中只要有35个拷贝的目的基因即可被检测到,即最低检出浓度为2拷贝/μl,并且具有较好的重复性。共检测蜱标本426只,其中豪猪血蜱253只,共49组,阳性7份。 结论 本研究建立的FQ-PCR方法具有很高的特异性和敏感性, 可用于人粒细胞无形体感染的快速检测。进一步证实了豪猪血蜱可能是粒细胞无形体的媒介宿主。     

杭州市急性呼吸道感染儿童中WU多瘤病毒感染的流行病学及基因特征分析

目的 了解杭州市急性呼吸道感染儿童中WU多瘤病毒(WU polyomavirus,WUPyV)流行特征和基因型别。方法 收集2011年3月至2013年6月间至浙江省儿童医院就诊的急性呼吸道感染患儿的鼻咽吸取物,用聚合酶链反应(PCR)法扩增VP2编码基因和VP2/1中间序列,测序后进行分型。选取代表性病毒株进行基因组测序。结果 收集的722份标本中,10份为WUPyV阳性,检出率为1.4%。WUPyV感染主要发生在夏季、秋季和冬季。患儿平均年龄为13.6月龄,男女性别比为9:1,性别差异无统计学意义(P=0.09)。WUPyV感染所致疾病为肺炎、喉炎和细支气管炎。WUPyV基因型别为Ⅰa型。代表性毒株HZ13024的基因组大小为5229 bp,与GenBank中WUPyV基因组序列相似性为99.8%~99.9%。结论 杭州市儿童急性呼吸系统疾病中存在WUPyV感染,感染率较我国其他地区低,基因型别为Ⅰa型。     

某地区东方立克次体基因型和遗传特征研究

目的探讨某地区东方立克次体流行株的基因型和遗传特征。方法采用荧光定量PCR技术对该地区东方立克次体感染患者和鼠类标本Sta56蛋白编码基因片段检测,对阳性标本进行基因分型和测序,并与巢式PCR分型结果相比较;对测序结果与GenBank东方立克次体参考序列进行同源性分析。结果东方立克次体感染患者和鼠类标本中可扩增出Gilliam型523bp目的基因片段,与Kawasaki型相似,同源性为96.3%;鼠类标本中还可扩增出318bp目的基因片段,与TA686型相似,同源性为78.5%。东方立克次体感染患者外周血中东方立克次体核苷酸序列与鼠标本的同源性为100.0%。结论粤北山区东方立克次体至少存在Gilliam型和Kawasaki型相似株,鼠类中存在TA686型相似株。粤北山区人、鼠均存在东方立克次体自然感染,已成为恙虫病自然疫源地。     

杭州地区2009甲型H1N1流感重症患儿中人类偏肺病毒感染状况研究

目的了解杭州地区2009甲型H1N1流感（以下简称甲流）重症患儿中人类偏肺病毒（hMPV）的感染状况。方法采集2009年11月至2010年1月确诊为甲流重症患儿的呼吸道样本79份,用传统逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、荧光定量RT-PCR方法检测hMPV及其他呼吸道病毒。选择hMPV阳性样本PCR扩增产物进行核苷酸测序,将所测序列与GenBank比对分析,并绘制基因进化树。结果79份甲流病毒阳性样本中,hMPV及其它呼吸道病毒阳性率20．25％（16,79）,hMPV阳性PCR扩增产物4份,占甲流重症病例的5．06％（4,79）。其中3份hMPV阳性PCR扩增产物核苷酸序列相似性为99．1％～99．5％,与广东省流行株GD．165,泰国株155N及B1代表株高度相似,并且被GenBank收录。结论杭州地区确诊感染的2009甲型H1N1流感重症病例中存在与hMPV共同感染状况,且hMPV均为B1基因型。     

慢性前列腺炎患者前列腺液细菌16SrRNA基因的检测

目的通过采用聚合酶链反应（PCR）技术对慢性前列腺炎患者前列腺液中细菌16SrRNA基因检测,探讨PCR方法诊断慢性前列腺炎细菌学病因的价值。方法收集102例慢性前列腺炎患者的前列腺液进行细菌培养,同时采用PCR法检测前列腺液中细菌16SrRNA基因,并测定和分析所得片段的DNA序列。对培养结果与PCR法检测结果进行了比较。结果102份前列腺液标本中,细菌培养法18例阳性,84例阴性,阳性率17．7％;PCR法71例阳性,31例阴性,阳性率69．6％。细菌培养法与PCR法检测结果比较,其差异有统计学意义（P〈0．05）。测序结果显示DNA序列与GenBank公布的16SrRNA基因序列具有很高的同源性。结论PCR技术对慢性前列腺炎的临床诊断具有重要意义。     

北京市发热伴血小板减少综合征监测和病原检测分析

目的 分析北京市发热伴血小板或白细胞减少综合征监测和严重发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)感染情况.方法 对符合监测对象定义的病例(体温≥37.5℃伴血小板＜80×109/L或白细胞＜3.0×109/L)进行流行病学调查并采集乙二胺四乙酸抗凝和非抗凝血液标本分别检测嗜吞噬细胞无形体和SFTSV.结果 201...     

胆固醇结石患者胆囊细菌的T-RFLP研究

目的应用T-RFLP分析胆固醇结石中微生物群落结构。方法应用末端标记限制性片段长度多态性（Terminal Restriction Fragment Length Polymorphism,T-RFLP）和克隆文库分析,以微生物群落16S rRNA基因（16S rDNA）为目标,对8例常规细菌培养阴性的纯胆固醇患者胆囊结石和胆汁中的微生物群落结构进行解析和比较。结果发现8例纯胆固醇结石患者胆汁中未找到细菌存在的证据,结石中细菌16S rDNA阳性率为37.5%（3/8）,细菌16S rDNA片段测序表明细菌群落与肠杆菌科和微球菌科的微生物有较高的相似性,同时细菌群落中检出了大量的未培养微生物（Uncultured bacterium clone）。结论运用T-RFLP方法分析16S rDNA克隆片段能够有效评估纯胆固醇结石中的细菌群落结构的多样性。     

High seroprevalence of granulocytic ehrlichiosis distinguishes sheep that were the source of an alimentary epidemic of tick-borne encephalitis

A sheep herd from which contaminated cheese was produced, causing 21 cases of alimentary tick-borne encephalitis (TBE) in human beings, was tested serologically for the presence of specific antibodies against both the TBE virus (TBEV) and Anaplasma phagocytophilum, the cause of tick-borne fever (TBF) in ruminants, and compared with three other herds variously exposed to tick bites but without any TBE history. Virus-neutralisation (VN) with the TBEV strain Hypr and CV-1 cells was used in TBE tests, and indirect immunofluorescence assay (IFA) with neutrophils from goats experimentally infected with A. phagocytophilum was used for TBF testing. In 13 sheep from the incriminated herd (N =41), VN titres ranging from 1/4 to 1/128 traced previous TBE infection and all sheep had elevated titres of A. phagocytophilum antibodies ranging from 1/80 to 1/5120 in IFA, whereas two other herds (N = 8 and 9) were seronegative for TBEV and had significantly lower levels of A. phagocytophilum antibodies, corresponding to a lesser challenge from TBF. A control herd (N = 10) that was grazed on tick-free meadows in north Norway was completely seronegative. The respective distributions of positive titres of A. phagocytophilum and TBEV antibodies in the incriminated herd were not mutually random; the animals with higher anti-A. phagocytophilum titres tended to have lower anti-TBEV titres and vice versa (Spearman correlation coeff. =-0.86, p< or =0.01). The authors hypothesize that the immunosuppressive effect of TBF co-infection in sheep could be a contributory cause of TBE-virus contamination of milk, an aspect of TBE epidemiology that has not been considered thus far.     

2913例妇女生殖道人乳头瘤病毒感染筛查分析

目的了解浙江省台州地区妇女感染人乳头瘤病毒（HPV）和年龄分布,以及各亚型与宫颈病变的关系。 方法采用聚合酶链反应扩增结合DNA芯片反向点杂交技术,对来浙江省台州市中心医院妇科就诊的2913例患者进行生殖道HPV亚型检测。结果HPV总感染率35.08%,检出前5位依次为HPV16（占7.76%）、HPV11（占7.38%）、HPV52（占6.25%）、HPV33（占4.81%）、HPV58（占4.50%）。结论台州地区妇女生殖道HPV人群感染年龄主要分布在40岁以下,以高危型为主,与宫颈病变的发生密切相关。