盾叶薯蓣中甾体皂苷及其体外血小板活性研究

利用大孔吸附树脂柱色谱、硅胶柱色谱、ODS柱色谱及制备液相等方法,从盾叶薯蓣Dioscorea zingiberensis 70%乙醇提取物中分离得到10个化合物,并通过核磁和质谱等波谱学方法分别鉴定它们的结构为胡芦巴皂苷XIIIa(1)、小花盾叶薯蓣皂苷(2)、胡芦巴皂苷IVa(3)、三角薯蓣皂苷(4)、protobioside(5)、lilioglycoside K(6)、盾叶新苷(7)、三角叶皂苷(8)、薯蓣次苷A(9)、延龄草皂苷(10)。其中,化合物1,3,5,6均为首次从该植物中分离得到。化合物1~10的体外血小板活性筛选表明,化合物7和8能够诱导血小板聚集,而化合物9具有显著抑制血小板聚集的作用。     

盾叶薯蓣水溶性成分的研究

目的研究盾叶薯蓣的水溶性化学成分，寻找活性物质。方法用系统溶剂提取，色谱法分离，光谱法鉴定结构，如：^1H—NMR、^13C—NMR135DEPT、HMQC、HMBC、TOCSY。结果从盾叶薯蓣的水溶液中分离到-个薯蓣皂苷、一个苯苷类化合物、一个生物碱类化合物。薯蓣皂苷经测定分析，鉴定为26-O-（β-D-葡萄糖）-（25R）-furost-5-en-3β，26-diol-22-OMe-3-O-{α-L-鼠李糖-（1→4）-[β-D-葡萄糖-（1→3）-β-D-葡萄糖-（1→2）]-β-D-葡萄糖}。结论经文献检索为一新化合物，命名为盾叶薯蓣皂苷E（zingierenin E），另两个化合物在盾叶薯蓣中为首次报道。     

盾叶薯蓣中甾体皂苷的分离与结构鉴定

目的 对盾叶薯蓣进行化学成分研究.方法 利用反相色谱技术分离盾叶薯蓣水相部分中的化学成分,用1H-NMR、13C-NMR、135DEPT、HMQC和HMBC等方法鉴定其结构.结果 从新鲜的盾叶薯蓣根茎分得3个甾体皂苷,分别鉴定为薯蓣皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-[-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅰ)、(25R)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-呋甾烷-5-烯-3β,22ζ-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→3)-β-D-毗喃葡萄糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅰ)、(25R)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-呋甾烷-5-烯-3β,22ζ二醇-7-羰基3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]0β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅱ).结论 化合物Ⅱ为一新甾体皂苷,命名为盾叶薯蓣皂苷H(zingiberenin H).     

盾叶薯蓣鲜根茎中甾体皂苷的分离鉴定

目的 研究盾叶薯蓣Dioscorea zingiberensis鲜根茎中的甾体皂苷成分,寻找新的生物活性物质.方法 运用正相和反相C18硅胶柱色谱对其甾体皂苷成分进行分离,用IR、MS、NMR等光谱方法进行结构鉴定.结果 从乙醇提取物中分离鉴定了3个甾体化合物,分别为纤细皂苷(gracillin,Ⅰ)、盾叶皂苷A(zingiberenin A,Ⅱ)和26-O-βD-吡喃葡萄糖基-3β,26-二醇-25(R)-呋甾烷-5,20(22)-双烯-3-O-{α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)])-β-D-吡喃葡萄糖苷(26-O-β-D-glucopyranosyl-3β,26-dioi-25(R)-furosta-5,20(22)-dien-3-O-{α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)-[β-D-glucopyranosyl-(1→3)-β-D-glucopyranosyl-(1→2)]}-β-D-glucopyranoside,Ⅱ).结论 化合物Ⅰ为一新化合物.命名为盾叶皂苷G(zingiberenin G).     

盾叶薯蓣中甾体类化合物的分离与结构鉴定

目的:对盾叶薯蓣进行化学成分研究。方法:应用多种色谱法分离盾叶薯蓣中的化学成分,采用多种光谱分析法鉴定它们的结构。结果:从盾叶薯蓣中分离得到6个甾体类化合物,即三角叶薯蓣皂苷(1)、原三角叶薯蓣皂苷(2)、盾叶新苷(3)、薯蓣皂苷(4)、3-O-[β-D-葡萄吡喃糖(1→4)]-β-D-葡萄吡喃糖-薯蓣皂苷元(5)、薯蓣皂苷元(6)。结论:化合物1、2为首次从该植物中分离得到。     

栽培菊叶薯蓣中甾体皂苷成分

菊叶薯蓣Dioscorea composita Hemsl．原产于墨西哥，因其薯蓣皂苷元(diosgenin)的含量和生物产量，是生产合成甾体激素药物原料的重要植物原料之一。Datta对印度引种的菊叶薯蓣不同部位diosgenin的含量进行了详细的分析，含量最高达到3．6％。我国1978年自墨西哥引进菊叶薯蓣在西     

盾叶薯蓣药材甾体总皂苷成分HPLC-ELSD指纹图谱的研究

建立不同产地盾叶薯蓣药材中甾体总皂苷成分HPLC-ELSD指纹图谱的方法.采用Welchrom C₁₈(4.6 mm ×250 mm,5 μm)色谱柱,乙腈(A)-水(B) 作为流动相,梯度洗脱;柱温室温;体积流速1.0 mL·min^-1;蒸发光散射检测器条件:漂移管温度90.0℃,载气(N₂)流速2.8 L·min^-1;进样体积10 μL.通过检测10个批次盾叶薯蓣药材,首次建立了盾叶薯蓣甾体总皂苷成分HPLC-ELSD指纹图谱的共有模式,确定了25共有峰,并利用对照品对照法对其中的10个共有峰进行了成分指认.以共有模式对10批药材进行相似度评价,其相似度全部大于0.80.该方法准确、可靠、重复性好,为全面评价和控制盾叶薯蓣药材的质量提供了科学依据.     

盾叶薯蓣薯蓣皂苷元积累动态研究

目的研究盾叶薯蓣薯蓣皂苷元积累动态,确定适宜的采收期。方法对不同采收期不同根茎中薯蓣皂苷元含量及含水量进行分析。结果种根在6月上旬到10月中上旬之间,薯蓣皂苷元含量呈缓慢的上升趋势,10月下旬以后就急剧下降。新生根茎在6月上旬到8月中下旬之间薯蓣皂苷元含量呈上升趋势,然后逐步下降,到10月下旬同样明显下降;生长期内种根与新生根茎含水量变化趋势不同,而且薯蓣皂苷元含量与含水量无相关关系。结论考虑到产量和薯蓣皂苷元含量两方面因素,10月中下旬采收盾叶薯蓣较为适宜。     

HPLC-ELSD测定盾叶薯蓣中伪原薯蓣皂苷的含量

目的:建立盾叶薯蓣中伪原薯蓣皂苷的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD),Dikma C18色谱柱(4.6 mn×250 mm,5μm),流动相乙腈-水(30:70),流速1.0 mL· min-1;蒸发光散射检测器参数:漂移管温度60℃,气压4.5 kPa.结果:伪原薯蓣皂苷在10 ～40 μg(r =0.9998)线性关系良好,平均回收率98.7％ (RSD 1.6％,n=6).结论:该方法简便、快速、灵敏、准确,可作为盾叶薯蓣的质量控制方法.     

盾叶薯蓣中薯蓣皂苷提取及检测条件的优化

目的:准确、快速测定盾叶薯蓣中薯蓣皂苷的含量。方法:以薯蓣皂苷含量为评价指标,采用高效液相色谱法对薯蓣皂苷的检测条件进行了优化;同时,运用3因素3水平的正交实验,对薯蓣皂苷的提取条件进行了研究。结果:优化后的检测条件为:C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),柱温30℃,乙腈-水(45∶55),进样量20μL,流速1.0mL.min-1,检测波长210nm。最优提取条件为药材称取量2g,用80%乙醇超声提取40min。结论:优化后的提取及检测条件能快速准确测定盾叶薯蓣中薯蓣皂苷的含量。     

反相高效液相色谱法测定盾叶薯蓣中薯蓣皂苷的含量

目的：探讨盾叶薯蓣中薯蓣皂苷含量测定的方法。方法：采用反相高效液相色谱法。色谱柱为DIKMAC18色谱柱（250mm×4．6mm,5μm）,流动相为乙腈-水（52：48）,流速为1．0mL·min^-1,检测波长为203．0nm,柱温为30℃。结果：薯蓣皂苷在0．40-4．01μg范围内线性关系良好,相关系数r=0．9997（n=7）。平均回收率为101．65％,RSD为2．29％（n=6）。结论：该方法简便、准确、快速、灵敏、重现性好,可以作为盾叶著蓣的质量控制方法。     

盾叶薯蓣根状茎不同部位和不同生长期薯蓣皂苷元含量的差异性研究

目的 揭示盾叶薯蓣根状茎不同部位和不同生长期中皂苷的积累与分布以及薯蓣皂苷元含量的差异。方法组织化学和高效液相色谱法(HPLC)。结果 皂苷主要分布在基本组织内，有小维管束分布的区域皂苷积累最丰富，薯蓣皂苷元的含量也最高；其次是无维管束分布的区域：有大维管束分布的区域皂苷积累最少，薯蓣皂苷元的含量最低。结论 雄株3个区域的皂苷元含量均明显的高于雌株，雌雄同株其含量界于雄株和雌株之间。     

加压提取法制备盾叶薯蓣根茎中薯蓣皂苷元

目的建立加压提取法制备盾叶薯蓣根茎中薯蓣皂苷元。方法单因素试验优化乙醇体积分数、提取温度、料液比、提取时间,在优化条件下制备薯蓣皂苷元,并与直接酸水解法、索氏抽提-常压酸水解法、双相联合酸水解法进行比较。结果最佳条件为将药材粉末与20倍量60%乙醇混合后在130℃下加压提取2.0 h,提取液减压回收乙醇,进行加压双相酸水解,薯蓣皂苷元得率达3.56%,高于3种传统提取方法(2.48%、2.96%、3.37%)。结论该方法简便环保,得率更高,可用于制备盾叶薯蓣根茎中薯蓣皂苷元。     

阶梯生物催化协同提取盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元的研究

目的利用阶梯生物催化协同提高提取盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元的收率和质量。方法通过正交试验对阶梯生物催化协同提取薯蓣皂苷元工艺进行研究,确定该工艺最佳条件;用红外光谱和HPLC谱对皂苷元产品进行定性和定量测定;以产品的收率和熔点为考察标准,比较阶梯生物催化法与直接酸水解法、自然发酵法以及酶解法的优劣。结果利用阶梯生物催化法,当纤维素酶和果胶酶复合酶制剂、淀粉酶以及糖化酶按顺序依次加入时,能够将植物中98%的薯蓣皂苷元提取出来,其产品的红外谱图与对照品谱图相吻合,经HPLC谱测定薯蓣皂苷元质量分数95%以上。结论利用阶梯生物催化协同提取薯蓣皂苷元与其他3种工艺相比,能耗降低,皂苷元收率和质量均提高。     

盾叶薯蓣四倍体的鉴定和薯蓣皂苷元的定量分析

目的 提高盾叶薯蓣药材的品质.方法 采用高效液相色谱法,对组织培养条件下诱导获得的盾叶薯蓣四倍体株系试管苗薯蓣皂苷元的量和部分株系一年生田间苗薯蓣皂苷元的量进行了分析,并对部分株系一年生田间苗农艺性状进行了鉴定.结果 经诱导获得的四倍体株系试管苗与对照相比薯蓣皂苷元的量有较大差异;而且四倍体株系试管苗与一年生苗薯蓣皂苷元的量有较强的相关性,大部分四倍体株系表现出典型的多倍体性状.结论 在组织培养的基础上,利用多倍体育种来改善盾叶薯蓣的品质是可行的.     

盾叶薯蓣离体培养体系的建立及薯蓣皂苷元含量分析

以盾叶薯蓣叶片为外植体,研究不同浓度激素组合对盾叶薯蓣愈伤组织、不定芽及再生植株的影响,并对不同材料诱导获得的再生植株中薯蓣皂苷元含量进行了分析。结果表明,诱导愈伤组织的最适培养基为MS+BA2.0mg·L-1+2,4D0.1mg·L-1;诱导不定芽及芽生长的培养基的最适培养基为MS+BA0.1mg·L-1(0.05mg·L-1)+病毒唑5mg·L-1;诱导试管苗生根的最适培养基为MS/2+IAA0.2mg·L-1+NAA0.2mg·L-1。相同外植体诱导的再生植株中薯蓣皂苷元含量差异不明显;不同盾叶薯蓣诱导的再生植株中薯蓣皂苷元含量差异明显。     

不同盾叶薯蓣诱导的再生植株中薯蓣皂苷元含量分析

目的 探讨离体培养中诱导材料对盾叶薯蓣再生植株中薯蓣皂苷元含量的影响.方法 采用高效液相色谱(HPLC)法对不同材料诱导的再生植株中薯蓣皂苷元含量进行分析.结果 薯蓣皂苷元含量高的材料诱导的再生植株中薯蓣皂苷元含量一般也较高;相同材料诱导的再生植株中薯蓣皂苷元含量差异不明显.结论 盾叶薯蓣具有一定的遗传稳定性,要获得薯蓣皂苷元含量不低于2%的皂苷工业原料,选择薯蓣皂苷元含量高的种质引种和培育优良品种是十分重要的.     

盾叶薯蓣中有效成分含量的影响因素研究

目的:探讨影响盾叶薯蓣中有效成分含量的因素,更好地控制其质量。方法:参照2010年版《中国药典》(一部)测定水分,高效液相色谱法测定薯蓣皂苷元的含量,对含水量、生长年限、产地及土壤类型与薯蓣皂苷元含量的相关性进行研究。结果:生长在沙土地上的盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元含量相对较高,一般生长3~5年薯蓣皂苷元含量达到最大值,而且薯蓣皂苷元含量与盾叶薯蓣根茎中含水量呈正相关,但3个产区的盾叶薯蓣薯蓣皂苷元的含量差别不大。结论:本实验以薯蓣皂苷元为评价盾叶薯蓣质量的指标,分析了生长年限、水分含量、土质、产地等对其质量的影响,为指导工业生产和药农规范化种植,获得更高的经济效益,建立和完善盾叶薯蓣药材的质量标准体系提供参考。     

氮磷钾对盾叶薯蓣产量及薯蓣皂苷元含量的影响

目的:研究大田条件下N、P、K肥料不同配比对盾叶薯蓣根茎产量及薯蓣皂苷元含量的影响.方法:采用肥料单因素正交试验,SPSS11.5统计软件包统计分析.结果:N、P、K可不同程度提高盾叶薯蓣根茎产量及薯蓣皂苷元含量,其中N、K对产量影响达到极显著水平(P＜0.01),P肥达到显著水平(P＜0.05),N、P、K单施对含量影响未达到显著水平(P＞0.05);3种肥料配施以N肥对薯蓣皂苷元含量影响达到显著水平(P＜0.05).表明肥料对薯蓣皂苷元含量影响的顺序为N＞K＞P,对根茎产量影响的顺序为K＞N＞P,综合最优组合为N2K1P2.结论:适当配比的N、P、K肥料可以同时提高盾叶薯蓣根茎产量与薯蓣皂苷元含量.     

低磷胁迫下盾叶薯蓣中甾体皂苷生物合成关键酶基因的筛选及鉴定北大核心CSCD

为了探讨低磷胁迫下盾叶薯蓣甾体皂苷生物合成关键酶基因的响应特征,该研究设置重度磷胁迫组、中度磷胁迫组与正常磷组3种处理,利用盆栽方式模拟盾叶薯蓣的低磷胁迫实验。分别在胁迫初期、胁迫中期、胁迫后期采取盾叶薯蓣植株,利用分光光度法测定盾叶薯蓣不同组织部位的甾体总皂苷含量,确定对低磷胁迫响应的关键时期,并利用BGI 500测序平台获得响应低磷胁迫关键时期盾叶薯蓣样本的转录本信息,构建转录组数据库,分析盾叶薯蓣甾体皂苷生物合成途径催化酶基因的表达量与甾体总皂苷含量的相关性,筛选甾体皂苷生物合成途径中响应低磷胁迫的催化酶基因,并利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析其表达模式。结果发现,低磷胁迫后盾叶薯蓣各组织部位甾体总皂苷含量具有明显的组织特异性,胁迫初期为盾叶薯蓣响应低磷胁迫的关键时期;转录组测序共获得了101593个unigene,有77.35%在NT、NR、SwissProt、KOG、GO、KEGG等数据库中得到注释;根据甾体皂苷的生物合成途径,鉴定了其已知甾体皂苷生物合成途径关键酶基因的256个转录本,将其表达量FKRM与总甾体皂苷含量做相关性分析,发现编码18个催化酶的69个转录本的表达量与甾体总皂苷的含量呈显著相关性;qRT-PCR分析表明,低磷胁迫下几个关键的催化酶基因在4个部位中呈现不同的表达模式。因此,低磷胁迫下盾叶薯蓣中甾体总皂苷含量及调控甾体皂苷生物合成关键酶基因的表达均发生变化,该研究为阐明盾叶薯蓣甾体皂苷成分生物合成响应低磷胁迫的分子机制提供一定的生物学信息。