丝裂原活化蛋白激酶参与血小板源生长因子刺激的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖(英文)

选择大鼠主动脉平滑肌细胞作为细胞模型 ,观察丝裂原活化蛋白激酶 ( MAPK)信号通路在血小板源生长因子 ( PDGF)诱导的血管平滑肌细胞( VSMC)增殖中的作用。用 [3 H]Td R参入率作为衡量 VSMC增殖的指标 ,以 Western-印迹方法 ,用磷酸化一抗测 MAPK磷酸化的程度作为衡量 MAPK活性的指标 ,实验结果发现 ,PDGF( 0 .0 2 - 2 0μg·L-1)诱导 VSMC增殖呈剂量依赖性。 PDGF( 2μg· L-1)能持续性激活 MAPK。用 PD980 59( 1 0 -1 0 0 mol· L-1)预处理 1 5min后 ,MAPK活性较对照组均有明显差别 ( P<0 .0 5) .MAPK反义寡核苷酸能明显抑制 PDGF诱导的 MAPK的激活 ,并明显抑制 VSMC[3 H]Td R参入。上述结果表明 ,MAPK参与 PDGF促细胞增殖的信号途经 ,它的持续性激活与细胞增殖有关 ,针对 p42 /p44MAPK设计的反义寡核苷酸类能有效抑制 PDGF诱导的血管平滑肌细胞增殖。     

丝裂素活化的蛋白激酶反义寡核苷酸对p42/p44,p38和JNK激酶的靶向选择性及其对血管平滑肌细胞DNA合成的抑制作用

目的:探讨丝裂素活化的蛋白激酶(MAPK)反义寡核苷酸对血清诱导的培养大鼠血管平滑肌细胞增殖的选择性及序列依赖性抑制作用。方法:用脂质体将p42-和p44-MAPK反义寡核苷酸转染入大鼠血管平滑肌细胞,设正义及随机寡核苷酸对照,20％血清刺激后,用Western Blot法测定总p44/p42-MAPK、p38 MAPK及JNKs蛋白水平及磷酸化MAPK表达。[~3H]胸腺嘧啶核苷酸掺入测定平滑肌细胞DNA合成。结果:MAPK反义寡核苷酸能明显抑制血清诱导的血管平滑肌细胞总MAPK蛋白水平及磷酸化MAPK蛋白表达,对p38 MAPK及JNKs表达无影响,并能明显抑制[~3H]胸腺嘧啶核苷酸掺入。结论:针对p42-和p44-MAPK起始部位设计的17-mer反义寡核苷酸能选择性及序列依赖性地抑制血清诱导的血管平滑肌细胞的增殖。     

扇贝裙边糖胺聚糖对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响(英文)

目的　研究扇贝 (Placopectamagellanicus)裙边中提取的糖胺聚糖 (SS GAG)是否如肝素一样抑制血管平滑肌细胞 (VSMC)的增殖。方法　采用胎牛血清和碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)所诱导的大鼠胸、腹主动脉VSMC增殖模型 ,通过细胞计数、结晶紫染色及MTT比色法观察SS GAG对VSMC增殖的影响 ,并运用免疫组织化学技术和计算机图像分析系统检测SS GAG对VSMC的增殖细胞核抗原(PCNA)和血小板衍化生长因子 (PDGF)表达的影响。结果　SS GAG 5 0 ,10 0和 2 0 0mg·L- 1对 2 0 %胎牛血清和 5 0 μg·L- 1bFGF所诱导的VSMC增殖均有明显抑制作用 ,并能抑制VSMC增殖时PCNA和PDGF的表达。结论　SS GAG能抑制VSMC的增殖 ,该作用可能是通过抑制PDGF和PCNA的表达而实现的。     

CCDPK反义寡核苷酸抑制bFGF诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖(英文)

AIM: To investigate the role of Ca(2+)-calmodulin dependent protein kinase (CCDPK) on basic fibroblast growth factor (bFGF)-induced vascular smooth muscle cell (VSMC) proliferation and the inhibitory effect of antisense CCDPK oligonucleotides (ODN). METHODS: Before being exposed to bFGF, cultured rat VSMC CCDPK activity was inhibited by pretreatment with either a phosphorothioate-protected 17-mer antisense CCDPK ODN-directed against the initiation of translation sites of the p42 and p44 CCDPK isoform or with CCDPK kinase inhibitor PD98059. All ODN were introduced into cells by liposomal transfection. DNA synthesis was measured by [3H]thymidine incorporation. P44- and p42-CCDPK protein expression and phosphorylation were measured by Western blot. RESULTS: PD98059 inhibited bFGF-induced phosphorylation of CCDPK and DNA synthesis. Antisense CCDPK ODN 0.2-0.8 mumol.L-1 reduced both p44- and p42-CCDPK expression and phosphorylation of CCDPK in a concentration-dependent manner and DNA synthesis induced by bFGF. Lipofectin alone or sense and random CCDPK ODN did not affect p44- and p42-CCDPK protein expression or bFGF-induced phosphorylation of CCDPK or DNA synthesis. CONCLUSION: bFGF-stimulated rat VSMC proliferation is mediated by CCDPK. The antisense CCDPK ODN can inhibit bFGF-induced VSMC proliferation through down-regulating p44- and p42-CCDPK level.     

定量构效关系方程对靶向蛋白激酶 C-α m RNA的反义药物的活性预测(英文)

以往研究对 34个针对蛋白激酶 C- α m RNA二级结构设计的反义药物 (AS- ODNs)进行了定量构效关系 (QSAR)分析并得到 QSAR方程 .本研究再次设计 1 0个 AS- ODNs验证 QSAR方程对药物活性预测的可靠性 .结果显示其中 4个 AS- ODNsIC50 值明显低于阳性对照 ISIS352 1 (P<0 .0 5) . 8个AS- ODNs与 ISIS352 1的实测 IC50 与 QSAR方程预测相符 ,实测与预测 IC50 之间相关系数为 0 .76(P<0 .0 5) .两个 AS- ODNs,AP1 2 61 (2 0 )和 AP0 1 86(2 0 )的实测 IC50 与预测不符 .结果提示 QSAR方程一定程度上反映了 AS- ODNs活性与靶结构的关系 ,对预测反义药物生物活性有益 .但 QSAR方程难以解释的其他因素需进一步研究以优化反义药物设计     

血小板源生生长因子刺激血管平滑肌细胞增殖及其分子机制

目的：探讨血小板源生生长因子（PDGF－BB）刺激血管平滑肌细胞（VSMC）增殖及其分子机制。方法：用Western Blot法测定p44/p42 CCDPK活性。[^3H]脱氧胸腺嘧啶核苷酸掺入测定VSMC DNA合成。原位杂交检测c-myc mRNA的表达。结果：PDGFBB诱导的磷酸化CCDPK蛋白表达和[^3H]脱氧胸腺嘧啶核苷酸掺入呈浓度依赖性,此作用可被PTK抑制剂Genistein,外钙络合剂依他酸和MEK抑制剂PD 98059抑制。PDGF－BB刺激可引起c-myc mRNA的明显表达,此作用可被PD 98059抑制。结论：PDGF－BB通过激活p44/p42 CCDPK,上调c-myc mRNA的表达从而促进VSMC增殖,其作用是由PTK和Ca^2 介导的。     

Effect of antisense mitogen-activated protein kinase oligonucleotides on rat vascular smooth muscle cell proliferation induced by EGF in vitro

目的：探讨丝裂素活化的蛋白激酶（ＭＡＰＫ）反义寡核苷酸（ＯＤＮ）对表皮生长因子（ＥＧＦ）诱导的培养大鼠血管平滑肌细胞增生的抑制作用．方法：用脂质体将ｐ４２和ｐ４４ＭＡＰＫＯＤＮ０．２μｍｏｌ·Ｌ－１转染入大鼠血管平滑肌细胞，设正义及随机ＯＤＮ为对照，用ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ法结合Ｐ８１滤纸法以髓磷脂碱性蛋白为底物测定ＭＡＰＫ活性．［３Ｈ］胸腺嘧啶核苷酸掺入测定平滑肌细胞ＤＮＡ合成．结果：ＭＡＰＫ０ＤＮ能明显抑制ＥＧＦ诱导的ＭＡＰＫ蛋白表达及ＭＡＰＫ活性，并明显抑制血管平滑肌细胞的［３Ｈ］胸腺嘧啶核苷酸掺入．结论：针对ｐ４２和ｐ４４ＭＡＰＫ起始部位设计的１７ｍｅｒＯＤＮ能有效抑制ＥＧＦ诱导的血管平滑肌细胞的增生．     

川芎嗪对家兔主动脉损伤平滑肌细胞增殖的抑制作用(英文)

目的:探讨川芎嗪对主动脉球囊损伤平滑肌细胞增殖的抑制作用。方法:20只新西兰大白兔行主动脉球囊术。以川芎嗪(40mg·kg~(-1)·d~(-1),iv)共21天(术前7天,术后14天)处理的兔血清,或直接加入培养基,检测对原代培养的主动脉平滑肌细胞[~3H]胸腺嘧啶核苷酸掺入的影响。并对血管壁组织切片显微测量内膜厚度和管径。结果:球囊扩张处内膜厚度(77±23)μm和管腔狭窄(877±118)μm均较邻近正常处显著增加[分别为,(41±13)μm,P<0.01;(1033±175)μm,P<0.05],而川芎嗪显著降低损伤后内膜的增厚(56±16)μm,(P<0.05)和管腔的变窄(1023±157)μm,(P<0.05)。用川芎嗪治疗后血清培养主动脉平滑肌细胞,显示对[~3H]胸腺嘧啶核苷酸掺入明显抑制,直接加川芎嗪入培养基对掺入抑制呈剂量依赖[(40-4000)μg/well]。结论:川芎嗪对家兔主动脉球囊损伤平滑肌细胞增殖有显著抑制。     

酪氨酸蛋白激酶抑制剂RG50864对血小板衍生生长因子诱导的肺动脉平滑肌细胞增生的影响

目的研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂RG50864对血小板衍生生长因子(PDGF)诱导的肺动脉平滑肌细胞增生的影响。方法用原代培养的小牛肺动脉平滑肌细胞,采用细胞计数法,噻唑蓝(MTT)比色法及Giemsa染色法对PDGF诱导的肺动脉平滑肌细胞增生等情况进行分析。结果与对照组相比,RG50864处理组能在24、48、72h显著地抑制PDGF诱导的肺动脉平滑肌细胞增生,且呈剂量依赖性。结论RG50864可显著地抑制PDGF诱导的肺动脉平滑肌细胞增生。     

重组人白介素-10对大鼠血管平滑肌细胞增殖和细胞周期的影响

目的　观察重组人白介素 10 (rhIL 10 )分别对肿瘤坏死因子 (TNF α)和血小板源性生长因子 (PDGF BB)刺激下离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖和细胞周期的影响。方法　体外培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞 ,采用MTS/PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态 ,应用流式细胞术测定细胞周期。结果　与对照组相比 ,肿瘤坏死因子和血小板源性生长因子均对血管平滑肌细胞增殖具有明显的刺激作用 (P <0 0 5 )。rhIL 10单独应用对血管平滑肌细胞生长没有影响 (P >0 0 5 )。在TNF α和血小板源性生长因子分别刺激下 ,rhIL 10均可抑制血管平滑肌细胞的生长(P <0 0 5 )。流式细胞术测定的结果显示rhIL 10分别可以使TNF α和PDGF BB作用下的VSMCs大部分处于G0 /G1期 ,与对照组相比差异有显著性 (P <0 0 1)。结论　重组人白介素 10可抑制细胞因子和生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖     

拉马克啉对内皮素-1诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖及蛋白激酶C表达的作用

目的：探讨拉马克啉（levcromakalim）对内皮素-1（ET-1）诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖及蛋白激酶C（protein kinase C，PKC）表达的影响。方法：体外培养Wistar大鼠主动脉血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell，VSMCs），用ET-1诱导其增殖，用不同浓度拉马克啉共培养，MTT法评价VSMCs增殖情况，3H—TdR检测DNA合成，流式细胞术检测VSMCs凋亡，逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR），Western blot检测PKCamRNA及蛋白表达。结果：拉马克啉对ET-1所致VSMCs增殖有显著抑制作用，随浓度增加，其MTT活性细胞含量和3H—TdR掺入量都明显减少（P〈0．05）；拉马克啉呈剂量依赖性地增加G0／G1期VSMCs（P〈0．05），促使VSMCs凋亡增多（P〈0．05）；拉马克啉抑制VSMCs内PKCamRNA及蛋白表达。结论：拉马克啉抑制ET-1诱导的VSMCs增殖作用，可能的机制是通过下调VSMCs内PKCa表达水平而影响vSMCs增殖和凋亡。     

Calcineurin-NFAT signaling is involved in phenylephrine-induced vascular smooth muscle cell proliferation

Aim： Catecholamine-induced vascular smooth muscle cell （VSMC） proliferation is one of the major events in the pathogenesis of atherosclerosis and vascular remodeling. The calcineurin-NFAT pathway plays a role in regulating growth and differentiation in various cell types. We investigated whether the calcineurin-NFAT pathway was involved in the regulation of phenylephrine-induced VSMC proliferation. Methods： Proliferation of VSMC was measured using an MTT assay and cell counts. Localization of NFATcl was detected by immunofluorescence staining. NFATcl-DNA binding was determined by EMSA and luciferase activity analyses. NFATcl and calcineurin levels were assayed by immunoprecipitation. Results： Phenylephrine （PE, an α1-adrenoceptor agonist） increased VSMC proliferation and cell number. Prazosin （an α1-adrenoceptor antagonist）, cyclosporin A （CsA, an inhibitor of calcineurin） and chelerythrine （an inhibitor of PKC） decreased PE-induced proliferation and cell number. Additional treatment of VSMC with CsA or chelerythrine further inhibited proliferation and cell number in the chelerythrine-pretreatment group and the CsA-pretreatment group. CsA and chelerythrine alone had no effect on either absorbance or cell number. CsA decreased PE-induced calcineurin levels and activity. NFATcl was translocated from the cytoplasm to the nucleus upon treatment with PE. This translocation was reversed by CsA. CsA decreased the PE-induced NFATcl level in the nucleus. PE increased NFAT＇s DNA binding activity and NFAT-dependent reporter gene expression. CsA blocked these effects. Conclusion： CsA partially suppresses PE-induced VSMC proliferation by inhibiting calcineurin activity and NFATcl nuclear translocation. The calcineurin-NFATcl pathway is involved in the hyperplastic growth of VSMC induced by phenylephrine.     

普洛托品对兔胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的　观察普洛托品 (Pro)对正常和内皮素 (ET)诱导的血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的影响。方法　采用组织块贴壁法培养兔胸主动脉VSMC ,应用细胞计数、[3 H] TdR参入量、微量MTT比色测定及电镜法 ,观察Pro对VSMC增殖、DNA合成和细胞超微结构的变化。结果　ET对VSMC的增殖和DNA合成有显著的促进作用 ;1、10、10 0μmol·L-1浓度Pro能够逆转ET所致的 [3 H] TdR参入量、MTT比色的吸光度、细胞计数的增多及电镜下细胞超微结构的改变 ,且随着浓度的增加及时间的延长 ,抑制作用愈显著 ;10、10 0 μmol·L-1浓度Pro对未经ET处理的VSMC有抑制其增殖作用 ,但其抑制作用弱于ET处理组。结论　Pro可显著地抑制正常及ET诱导的VSMC增殖 ,并且对ET诱导的VSMC增殖抑制作用更明显 ,提示Pro可作为临床防治动脉粥样硬化的有效药物。     

Endothelin—1 promoted proliferation of vascular smooth muscle cell through pathway of extracellular signal—regulated kinase and cyclin D1

目的:探讨内皮素-1是否通过细胞周期蛋白质D1与细胞外调节蛋白激酶通路促进人脐动脉平滑肌细胞增殖。方法:采用MTT法观察ET-1和PD98059对人脐动脉平滑肌细胞生长的作用;[~3H]TdR法观察对细胞DNA合成的作用;流式细胞仪法观察对细胞增殖周期的影响;蛋白质印迹法观察对细胞外调节蛋白激酶和细胞周期蛋白质D1表达的影响。结果:首先,同没有ET-1组和PD98059组比较,ET-1促进平滑肌细胞增殖(P<0.05)。PD98059抑制ET-1诱导的血管平滑肌细胞增殖。第二,与没有ET-1组比较,ET-1促进平滑肌细胞DNA合成(P<0.05)。第三,ET-1促进平滑肌细胞增殖周期从G_0/G_1期向S期的转变,与没有ET-1组比较,G_0/G_1期细胞百分比明显减少,S期细胞百分比明显增加(P<0.05)。第四,ET-1增加细胞外信号调节性激酶的磷酸化水平和细胞周期蛋白质D1的蛋白表达,ERK的抑制剂可以抑制细胞外信号调节性激酶的磷酸化水平和细胞周期蛋白质D1的蛋白表达,与没有ET-1组比较,磷酸化-ERK和细胞周期蛋白质D1表达明显增强,对非磷酸化ERK表达没有影响。结论:内皮素-1可以通过细胞周期调节素D1与细胞外信号调节性激酶通路促进平滑肌细胞增殖。