组织因子促进肿瘤侵袭及转移的研究进展

肿瘤导致患者死亡的主要原因是侵袭和转移,涉及癌脱离原发病灶、通过淋巴和血管迁移、躲避免疫监视、黏附血管内皮、穿过淋巴和血管、锚定生长等一系列病理过程。近年发现组织因子(tissue     

靶向抑制皮层肌动蛋白装配对大肠癌细胞侵袭作用的影响

目的 构建能够靶向抑制细胞皮层蛋白装配的重组质粒,观察其对于肿瘤细胞侵袭作用的影响.方法 构建重组质粒EGFP/N2/Repeat,将其和空载体质粒转染入人大肠癌细胞Lo-Vo和HCT-8,分别扩增培养,绘制生长曲线,通过boyden小室模型观察大肠癌细胞侵袭性的改变.结果 实验获得与预期一致的DNA特异性片段,经双酶切和测序证实目的 片段正确的与载体质粒连接,重组质粒经过双酶切证实构建成功.显微镜下观察重组质粒成功转染人大肠癌细胞,细胞生长曲线提示转染与未转染该基因的细胞生长曲线相同;行细胞侵袭力实验,含有EGFP/N2/Repeat的癌细胞、空质粒转染细胞和对照组细胞(未转染)穿膜数分别为LoVo组:35.27±6.70、85.47±5.50、87.47±6.39;HCT-8组:15.07±2.34、26.73±4.43、26.07±3.67,含有拮抗分子的细胞穿膜数较其余两组明显减少,差异有统计学意义(P<0.01).结论 通过抑制皮层肌动蛋白装配可抑制大肠癌细胞的侵袭性.     

组织因子对人胃癌细胞体外侵袭转移特性的影响

目的 构建稳定转染人组织因子(TF)的人胃癌细胞株SGC7901,研究TF对胃癌细胞体外侵袭转移特性的影响.方法 采用巢式PCR技术自人胎盘组织克隆目的基因TF,应用脂质体介导的转染技术将其导入人胃癌细胞株SGC7901,采用G418筛选稳定表达TF的细胞,采用RT-PCR及Western blot法检测TF mRNA及蛋白的表达,并进行Transwell实验及划痕实验观察细胞体外侵袭转移能力的变化.结果 经基因测序证实成功构建了稳定、高效表达TF的人胃癌细胞系SGC7901/TF.转染组TF mRNA及TF蛋白表达增高;与阴性对照组及空白对照组相比,转染组细胞的体外侵袭转移能力增强.结论 TF能够增强人胃癌细胞的体外侵袭转移能力.     

T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1反义寡核苷酸转染对胃癌细胞形态及侵袭移行能力的影响

目的观察T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1（Tiam 1）反义寡核苷酸（ASODN）转染对胃癌细胞形态及体外侵袭、移行能力的影响。方法采用层黏连蛋白黏附法，由胃癌MKN-45细胞株（M0）中筛选获得高侵袭转移亚株（MH）。以脂质体介导将Tiam 1 ASODN转染至MH细胞中，并应用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）及流式细胞技术分别检测Tiam 1 mRNA和蛋白的表达。采用苏木精-伊红染色、细胞骨架蛋白染色、扫描电镜技术及Boyden小室法分别观察转染与未转染MH细胞在形态学及体外侵袭、移行能力方面的变化。结果与对照组相比，应用0．43μmol／L Tiam 1 ASODN转染可特异性抑制胃癌MH细胞中Tiam 1 mRNA和蛋白的表达（P〈0．01）。Tiam 1 ASODN转染MH细胞较未转染MH细胞的体外侵袭、移行能力显著下降（P〈0．05或P〈0．01），同时转染MH细胞较未转染MH细胞膜表面突起及伪足变稀疏或缩短、细胞骨架结构紊乱程度降低、斑点状肌动蛋白小体减少。结论特异性ASODN转染可有效抑制Tiam 1在胃癌细胞中的表达并削弱其体外侵袭、移行能力，这可能是通过调整胃癌细胞骨架结构重组、降低其变形、游走能力而实现的。     

组织因子表达对原发性结直肠癌侵袭及转移能力的影响

目的探讨组织因子(TF)表达在原发性结直肠癌侵袭及转移中的作用,分析TF对人类大肠癌HT-29细胞侵袭能力的影响.方法应用免疫组织化学染色法研究85例原发性结直肠癌和6例结直肠良性腺瘤标本TF表达情况,分析TF表达与肿瘤侵袭转移及预后的关系;利用构建有正义/反义TFcDNA的质粒pcDNA3.1/Zeo,以脂质体法转染HT-29细胞; 转染成功的HT-29细胞采用Western印迹分析检测TF表达水平并进行基质胶体外侵袭实验观察细胞侵袭能力的变化.结果85例结直肠癌标本中40例(47.1%)TF表达阳性,正常黏膜和结直肠良性腺瘤均为TF阴性表达;TF阳性表达与结直肠癌的浸润深度密切相关(r=0.895, P<0.01);TF阳性表达与结直肠癌的同时性(r=0.974, P<0.01)和异时性(r=0.963 ,P<0.01)肝转移均密切相关;Logistic回归表明TF表达为结直肠癌肝转移的影响因素(P<0.01),多因素回归分析表明TF表达是影响原发性结直肠癌预后的因素之一(P<0.01);转染了正义TFcDNA的HT-29细胞的TF表达水平较未转染的HT-29细胞升高,转染了反义TFcDNA的HT-29细胞的TF表达水平则降低;转染了正义TFcDNA的HT-29细胞的侵袭能力较未转染的HT-29细胞增强,转染了反义TFcDNA的HT-29细胞的侵袭能力则减弱.结论TF可能参与原发性结直肠癌侵袭及转移的生物学过程,其阳性表达可能作为患者术后肝转移的预测指标应用于临床,TF表达是影响原发性结直肠癌预后的因素之一; TF表达的改变可以影响人类大肠癌HT-29细胞的体外侵袭能力.     

T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1反义核酸抑制胃癌细胞侵袭黏附的研究

T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1（Tiam1）是与胃癌侵袭转移密切相关的细胞骨架调节因子。我们采用反义技术抑制胃癌高侵袭转移细胞株中Tiam 1的表达，并观察对其体外黏附和侵袭、移行能力的影响。[第一段]     

T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1与胃癌细胞侵袭移行能力的相关性研究

目的：检测T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1（Tiam1）在胃癌细胞株中的表达并分析其与胃癌细胞侵袭、移行能力的关系。方法：采用层黏连蛋白黏附法，从胃癌MKN-45细胞株（Mo）中筛选获得高黏附亚株（Mh）和低黏附亚株（ML）。应用RT-PCR和SABC免疫组化技术分别检测Tiam 1mRNA与蛋白在Mo、ML、Mh细胞中的表达。应用Boyden小室测定Mo、ML、Mh细胞的体外侵袭、移行能力并分析其与Tiam1表达间的关系。结果：胃癌MKN-45细胞高黏附亚株（MH）的体外侵袭、移行能力均较MKN-45细胞（Mo）及其低黏附亚株（Mo为强（P〈0.05），但Mo与ML细胞间无差异（P〉0.05）。Tiam 1mRNA和蛋白在MH细胞中的表达均较其在Mo和ML细胞中的表达为强（P〈0.05），但在Mo与ML细胞中的表达无差异（P〉0.05）。Tiam1蛋白和mRNA表达水平与胃癌细胞体外侵袭、移行能力呈正相关（P〈0.05或P〈0.01）。结论：Tiam1基因表达水平升高有可能促进胃癌细胞侵袭、移行能力的增强。     

不同压强持续性CO2对结肠癌细胞侵袭转移的影响

目的探讨不同压强持续性CO2气腹对结肠癌细胞体内侵袭转移能力的影响.方法建立体外气腹模型,将人结肠癌细胞株SW1116分为5组,分别在不同压强CO2气体[6、9、12、15 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)]以及常规培养条件下暴露1 h后,各自注入每组16只裸鼠腹腔(1×106个细胞/裸鼠).2周后,各组裸鼠取10只处死,观察腹腔内肿瘤结节数及各脏器转移情况.各组剩余6只裸鼠观察生存时间.结果各组裸鼠致瘤率对照组10/10例,6 mm Hg组9/10例,9 mm Hg组9/10例,12 mm Hg组9/10例和15 mm Hg组10/10例,差异无统计学意义.裸鼠腹腔内瘤结节数6 mm Hg组(41.70±14.90)与15 mm Hg组(29.70±9.91)之间差异有统计学意义(P＜0.05),其余各组间差异无统计学意义(P＞0.05).各脏器转移情况在各压强组差异无统计学意义(P＞0.05).各组裸鼠生存时间差异无统计学意义(P＞0.05).结论CO2气腹并不增加肿瘤细胞在腹腔内以及对各脏器的侵袭转移能力,对致瘤裸鼠的生存时间无影响.高压强CO2气腹对肿瘤细胞在体内的转移侵袭能力有抑制作用.     

L-NAME对大肠癌细胞侵袭和转移的影响

目的 探讨N-硝基精氨酸甲酯（L-NAME）对人大肠癌细胞（LS-174T）侵袭、运动能力的影响及其可能的机制。方法 用不同浓度的L—NAME干预LS-174T细胞，用硝酸还原酶法测定L-NAME对细胞分泌NO的影响；用重组基底膜侵袭实验观察药物对癌细胞侵袭、运动能力的影响；用RT-PCR法检测MMP2和TIMP2的表达。结果（1）L-NAME降低了sL-174T细胞NO的分泌，呈浓度依赖性。（2）0．2mmol／L，0．4mmol／L，0．8mmol／L和1．0mmol／LL-NAME处理sL-174T细胞72h，对细胞侵袭重建基底膜的抑制率分别为10．29％，19．62％，34．08％和42．23％（P〈0．05或P〈0．01）；（3）对细胞趋化运动抑制率分别为20．76％，24．95％，39．43％和46．85％（P〈0．01），同时可降低细胞MMP2mRNA的表达，而提高TIMP2 mRNA的表达。（4）NO浓度与MMP2mRNA表达呈正相关（r=0．8124，P〈0．01），而与TIMP2mRNA呈负相关（r=-0．7106，P〈0．01）。结论L-NAME具有抑制sL-174T细胞侵袭和转移的作用；L—NAME的抗侵袭活性与肿瘤细胞MMP2mRNA和TIMP2mRNA的表达有关。     

重组组织因子途径抑制物-2对人胰腺癌细胞体外侵袭能力的影响

我们通过脂质体法将组织因子途径抑制物-2（TFPI-2）基因转染人胰腺癌细胞株Pane-1，观察其对胰腺癌细胞体外侵袭、转移能力的影响。     

组织因子对结直肠癌细胞肺转移作用的研究

目的 探讨组织因子表达对结直肠癌细胞血行转移能力的影响。方法 利用构建有正义／反义组织因子cDNA（TFcDNA）的真核表达载体pcDNA3.1／Zeo，以脂质体法转染LOVO细胞，采用Western印迹分析检测转染成功LOVO细胞的组织因子蛋白表达水平。18只裸鼠（Babl／cnu／nu）随机分成3组，分别将转染了正义／反义TFcDNA的LOVO细胞及未转染的LOVO细胞通过尾静脉接种至裸鼠体内。8周后观察裸鼠发生肺转移的数目，以肺转移的数目反映LOVO细胞的转移能力。结果 转染了正义TFcDNA的LOVO细胞的组织因子表达水平及肺转移数目较未转染的LOVO细胞升高（P〈0.05，P〈0.01）；转染了反义TFcDNA的LOVO细胞的组织因子表达水平及肺转移数目较未转染的LOVO细胞相比则降低（P〈0.05，P〈0.01）。结论 组织因子可以增加人类结直肠癌细胞的体内血行转移能力。     

组织因子对大肠癌细胞肝转移能力的作用

目的探讨组织因子（TF）表达对大肠癌细胞血行转移能力的影响。方法利用构建有正义／反义组织因子cDNA（TFcDNA）的真核表达载体pcDNA3．1／Zeo，以脂质体法转染LoVo细胞。经验证转染成功的LoVo细胞采用Western blot检测组织因子的蛋白表达水平，再将24只裸鼠（BALB／C nu／nu）随机分成3组，分别将转染了正义／反义TFcDNA的LoVo细胞及未转染的LoVo细胞通过脾接种至裸鼠体内。6周后观察裸鼠发生肝表面转移灶的数目，以肝表面转移灶的数目反映LoVo细胞的转移能力。结果与LoVo细胞相比，转染了正义TFcDNA的LoVo细胞的TF表达水平升高，而转染了反义TFcDNA的LoVo细胞的TF表达水平则降低（F=33．9，P〈0．01），转染了正义TFcDNA的LoVo细胞组比LoVo组的肝转移灶的数目多，而转染了反义TFcDNA的LoVo细胞组则比LoVo组的肝转移灶的数目少（F=52．1，P〈0．01）。结论组织因子可以增加人类大肠癌细胞的体内血行转移能力。     

洛拉曲克对人大肠癌LoVo细胞胸苷酸合酶水平及细胞增殖的影响

目的：研究洛拉曲克体外对人大肠癌LoVo细胞胸苷酸合酶（TS）水平动态变化以及对细胞增殖的影响。方法：采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测不同浓度的洛拉曲克对LoVo细胞抑制率的影响,RT-PCR和Wes tern blot法检测TS基因和蛋白的表达变化,流式细胞术检测细胞凋亡率的变化。结果：洛拉曲克对LoVo细胞有明显的抑制作用,其IC50值约为6.31μmol/L;并可促进细胞凋亡,凋亡率随作用时间的延长而增加。RT-PCR结果显示,在mRNA水平,相同剂量洛拉曲克处理细胞后,随着时间的延长,TS/GAPDH比值与对照组相比,有持续升高的趋势,但是只有48 h和60 h相对于未处理组差异有统计学意义。相同剂量的洛拉曲克处理细胞后,随着时间的延长,其TS蛋白的表达水平亦有持续升高的趋势。结论：洛拉曲克可以明显促进大肠癌细胞的凋亡并可产生TS诱导现象,术后以此可以更好地指导临床用药。     

化学治疗药物对大肠癌细胞端粒酶活性的影响

目的：研究常用化学药物对大肠癌细胞HT－29端粒酶活性的影响。方法：利用端粒酶重复扩增实验（TRAP）结合非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳银染法。测定HT－29细胞经过几种化学药物（顺铂，阿霉素，吡柔比星，丝裂霉素，5－FU）不同浓度和时间作用后端粒酶活性的变化。结果：当各种药物大剂量处理细胞4h后再祛除药物培养20h,顺铂对酶的活性完全抑制，丝裂霉素，吡柔比星，阿霉素和5－FU无明显抑制作用。而未经20h再培养则无作用；小剂量药物处理细胞6d。其结果同大剂量相似。结论：顺铂对大肠癌HT－29细胞端粒酶活性有明显抑制作用，而其他几种化学药物没有明显的抑制作用。     

组织因子表达对人类大肠癌细胞体外及体内侵袭能力的影响

目的研究组织因子(TF)表达对人类大肠癌细胞(HT-29)侵袭能力的影响。方法(1)利用构建有正义/反义TFcDNA的质粒pcDNA3·1/Zeo分别转染HT-29细胞;(2)提取细胞的总蛋白,采用Westernblot检测TF的蛋白表达水平;(3)细胞分别进行体外基质胶(Matrigel)侵袭实验,观察细胞侵袭能力的变化;(4)细胞分别接种裸鼠,观察肿瘤生长,并检测肿瘤内的微血管密度。结果(1)与未转染的HT-29细胞相比,转染了正义和反义TFcDNA的HT-29细胞的TF蛋白表达水平以及细胞的体外侵袭能力分别升高和降低;(2)与未转染的HT-29细胞相比,转染了正义和反义TFcDNA的HT-29细胞在裸鼠体内侵袭能力以及肿瘤微血管密度分别升高和降低。结论组织因子的表达能够增强人类大肠癌HT-29细胞的体外和体内侵袭能力。     

组织因子对大肠癌侵袭能力的影响及其与基质金属蛋白酶-9的关系

目的 探讨组织因子(TF)表达对大肠癌细胞体内侵袭能力的影响及其部分机制。方法 利用转染正义／反义TF cDNA的人类大肠癌HT-29细胞和未转染的HT-29细胞分别接种在裸鼠皮下生成皮下种植瘤来观察大肠癌细胞在体内的侵袭能力的变化,对获得的裸鼠种植瘤标本通过Western blot进行TF、基质金属蛋白酶(MMP)-9表达的检测及相关性分析。结果与HT-29细胞组比较,转染了正义TF cDNA的HT-29细胞组的肿瘤增大,并且侵袭的范围也明显增大,而转染了反义TF cDNA的HT-29细胞组的肿瘤则缩小(F=11.019 P<0.05),同时,转染了正义TF cDNA的HT-29细胞组的肿瘤TF表达水平升高,而转染了反义TF cDNA的HT-29细胞组的肿瘤TF表达水平降低(P<0.05);转染了正义TF cDNA的HT-29细胞组的肿瘤MMP-9表达水平升高,而转染了反义TF cDNA的HT-29细胞组的肿瘤MMP-9表达水平降低(P<0.05).且TF和MMP-9表达差异之间具有显著相关性(r=0.878 P<0.05)。结论TF可以促进大肠癌细胞的体内生长和侵袭能力,其部分机制可能是TF可以上调MMP-9的表达。     

microRNA-133b抑制人结直肠癌细胞迁移和侵袭的研究

目的研究microRNA-133b在结直肠癌细胞中的表达及其对细胞迁移和侵袭能力的影响。方法采用实时定量PCR检测microRNA-133b(miR-133b)在不同恶性程度的结直肠癌细胞及正常结肠细胞中的表达差异;构建miR-133b的真核表达载体并稳定转染SW-620细胞,筛选出稳定表达miR-133b及对照质粒的细胞株SW-620-133b和SW-620-HK,实时定量PCR检测转染后miR-133b表达的变化;划痕实验检测miR-133b对SW-620细胞迁移能力的影响;Transwell侵袭实验检测miR-133b对SW-620细胞侵袭能力的影响。结果正常结肠细胞系CCD-18Co中miR-133b的表达显著高于4种结直肠癌细胞(SW-480,HT-29,LoVo,SW-620)(P0.05),且其在结直肠癌细胞中的表达随着肿瘤细胞恶性程度的增加而降低。稳定转染后,SW-620-133b细胞miR-133b表达量较SW-620及SW-620-HK组显著增高(P0.05);miR-133b对SW-620细胞迁移和侵袭能力有显著的抑制作用,抑制率分别为(42.2±2.6)%及(66.3±8.7)%。结论miR-133b在结直肠癌细胞中呈低表达,miR-133b高表达能显著抑制SW-620细胞的迁移和侵袭能力。     

基质金属蛋白酶与结直肠癌的侵袭和转移

结直肠癌的侵袭和转移是一个相当复杂的过程。基质金属蛋白酶（MMPs）其抑制剂（TIMPs）是细胞外基质降解过程中的重要酶类,与多种病理过程尤其是肿瘤的侵袭和转移有着密切的关系,并在此过程中发挥着重要的作用。现就MMPs、TIMPs的生物学作用及其与结直肠癌侵袭和转移的关系进行综述。     

转染E1AF对膀胱癌细胞侵袭能力的影响

目的 研究腺病毒早期转录单位增强子结合蛋白（Ｅ１ＡＦ）对膀胱癌细胞侵袭能力的影响。方法 构建真核表达载体ｐｃ ＤＮＡ３－Ｅ１ＡＦ,并以此载体转染膀胱癌细胞株ＢＩＵ－８７。采用Ｂｏｙ－ｄｅｎ Ｃｈａｍｂｅｒ穿膜实验分别检测末转染的ＢＩＵ－８７细胞、转染后细胞和转染空载体细胞的体外侵袭能力。将末转染的ＢＩＵ－８７细胞和转染后的细胞分别接种至裸鼠进行体内实验。结果 转染后细胞侵袭能力较转染前明显增加,肿