5-氮杂-2′-脱氧胞苷逆转RASSF1A基因甲基化对人乳腺癌MCF-7细胞的影响

目的：探讨启动子甲基化对乳腺癌MCF-7细胞RASSF1A基因的作用及5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）干预对启动子甲基化的影响,为临床治疗乳腺癌奠定理论基础.方法：用1,3,5,7,9μmol/L不同浓度的5-Aza-CdR处理MCF-7乳腺癌细胞株,通过MTT检测5-Aza-CdR对MCF-7乳腺癌细胞株存活率的影响;建立5μmol/L,10μmol/L的浓度梯度流式细胞仪检测5-Aza-CdR对MCF-7乳腺癌细胞株生长周期及凋亡率的影响,MSP（甲基化PCR）检测5-Aza-CdR处理前后RASFF1A抑癌基因的甲基化状态,RT-PCR检测处理前后抑癌基因RASSF1A mRNA表达情况.结果：5-Aza-CdR抑制体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞,诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡和细胞周期停滞在G0/G1期,呈浓度依赖性.经5-Aza-CdR处理人乳腺癌MCF-7细胞后,MSP检测RASSF1A基因发生了甲基化,RT-PCR检测RASSF1A mRNA恢复了表达.结论：RASSF1A基因启动子甲基化是导致其失活的主要原因,5-Aza-CdR可以逆转乳腺癌细胞株MCF-7细胞RASSF1A基因启动子甲基化状态,使其重新表达．     

EFFECT OF 5-AZA-CDR ON CELL PROLIFERATION AND MRNA EXPRESSION OF DAPK IN HUMAN HEPATOMA CELL LINE SMMC7721 CELLS

目的:探讨去甲基化药物5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-CdR)对人肝癌细胞株SMMC7721细胞增殖以及对死亡相关蛋白激酶(Death-associated protein kinase,DAPK)基因mRNA表达水平的影响.方法:用不同浓度(0.5,5.0,50.0 μmol/L)的5- Aza-CdR对SMMC7721细胞处理后,采用MTT法检测细胞的增殖情况;半定量RT- PCR法检测各组细胞DAPK mRNA的表达水平.结果:5-Aza-CdR对肝癌细胞株SMMC7721生长有明显抑制作用,并且存在剂量依赖性反应关系(F =242.40,P＜0.01);半定量RT- PCR结果显示,MMC7721细胞中DAPK mRNA表达水平很弱,采用不同浓度5-Aza-CdR处理SMMC7721细胞72 h后,SMMC7721细胞中DAPK mRNA表达水平呈剂量依赖性逐渐升高(F=360.41,P＜0.01).结论:5-Aza-CdR可诱导MMC7721细胞DAPK mRNA表达,并抑制SMMC7721细胞增殖.     

5-氮杂-2’-脱氧胞苷对人肝癌细胞株SMMC7721增殖及DAPK mRNA表达的影响

目的:探讨去甲基化药物5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-CdR)对人肝癌细胞株SMMC7721细胞增殖以及对死亡相关蛋白激酶(Death-associated protein kinase,DAPK)基因mRNA表达水平的影响。方法:用不同浓度(0.5,5.0,50.0μmol/L)的5-Aza-CdR对SMMC7721细胞处理后,采用MTT法检测细胞的增殖情况;半定量RT-PCR法检测各组细胞DAPK mRNA的表达水平。结果:5-Aza-CdR对肝癌细胞株SMMC7721生长有明显抑制作用,并且存在剂量依赖性反应关系(F=242.40,P<0.01);半定量RT-PCR结果显示,MMC7721细胞中DAPK mRNA表达水平很弱,采用不同浓度5-Aza-CdR处理SMMC7721细胞72h后,SMMC7721细胞中DAPK mRNA表达水平呈剂量依赖性逐渐升高(F=360.41,P<0.01)。结论:5-Aza-CdR可诱导MMC7721细胞DAPK mRNA表达,并抑制SMMC7721细胞增殖。     

5-氮-2′-脱氧胞苷对人膀胱癌细胞系T24细胞及其Apaf-1、APC基因甲基化状况的影响

目的观察5-氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人膀胱癌T24细胞增殖、凋亡的影响及其对凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)、结肠腺瘤性息肉病(APC)基因甲基化表达状况的影响。方法应用不同浓度的5-Aza-CdR处理人膀胱癌T24细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞生长抑制率;流式细胞术(FCM)检测细胞周期和凋亡的变化情况;以甲基化特异性PCR方法(MSP法)检测膀胱癌T24细胞株中Apaf-1及APC基因的甲基化状态。结果膀胱癌T24细胞中Apaf-1、APC基因分别呈半甲基化及高甲基化,5-Aza-CdR作用后T24细胞中Apaf-1及APC基因启动子区域均呈去甲基化状态;T24细胞的生长受到明显抑制,0.50、1.00、2.50、5.00μmol/L 5-Aza-CdR作用T24细胞72h后,细胞生长抑制率分别为0.50%、5.40%、20.40%、23.00%,组间比较差异有统计学意义(P<0.05),呈剂量和时间依赖关系。72h后G0/G1期的比例增加,S期比例明显减少,细胞凋亡率明显增加,5.00μmol/L 5-Aza-CdR组凋亡率为(40.35±3.63)%,对照组为(8.17±1.52)%,组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论 5-Aza-CdR能逆转膀胱癌T24细胞中的Apaf-1及APC基因甲基化,恢复该基因的表达,诱导膀胱癌T24细胞凋亡。     

5-氮杂-2’-脱氧胞苷抑制肾癌细胞增殖及逆转γ-catenin基因甲基化作用

目的:研究甲基化抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人肾癌OS-RC-2细胞生长的抑制作用及对γ-catenin基因甲基化状态的影响,初步探讨肾癌发病机制及临床治疗的可行性.方法:不同浓度5-Aza-CdR处理肾癌细胞OS-RC-2后,采用倒置显微镜观察5-Aza-CdR处理OS-RC-2肾癌细胞株前后细胞形态学变化;四唑蓝(MTT)比色观察细胞经药物处理前后的生长活性:流式细胞仪检测5-Aza-CdR对OS-RC-2肾癌细胞株凋亡的影响;Western blot检测5-Aza-CdR处理OS-RC-2肾癌细胞株后γ-catenin蛋白表达的变化;甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测细胞处理前后γ-catenin基因的甲基化状态.结果:形态学观察显示,用药后癌细胞体积缩小,核固缩,染色质凝聚成块;5-Aza-CdR明显抑制肾癌细胞OS-RC-2的生长;细胞凋亡率增高;药物处理后γ-catenin蛋白表达恢复;未经5-Aza-CdR处理的OS-RC-2细胞中γ-catenin基因肩动子区域高甲基化,经10-5 mol/L 5-Aza-CdR处理72 h后γ-catenin基因启动子区域高甲基化得到逆转.结论:5-Aza-CdR能有效逆转肾癌OS-RC-2细胞γ-catenin基因的异常甲基化,恢复γ-catenin蛋白表达,诱导肾癌细胞凋亡.     

Effects of 5-Aza-2'-deoxycytidine on proliferation and apoptosis by modulating RASSF1A gene expression in human endometrial carcinoma cell line HEC-1-B

目的:探讨甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-CdR)对人子宫内膜癌(Human endometrial cancer,HEC)-1-B细胞增殖和凋亡的作用及其可能机制.方法:应用不同浓度的5-Aza-CdR处理HEC-1-B细胞,甲基化特异PCR(Methylation-specific polymerase chain reaction,MSP)法检测处理前后RAS相关域家族1A(RAS association domain family 1A,RASSF1A)基因甲基化状态,应用RT-PCR方法检测RASSF1A基因mRNA表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡率.结果:HEC-1-B细胞RASSFIA基因启动子区呈高甲基化状态,经过5-Aza-CdR处理后,RASSF1A基因启动子区呈去甲基化状态,其mRNA重新表达,细胞生长受到抑制,细胞凋亡增加.结论:5-Aza-CdR能够逆转RASSFIA基因甲基化状态,调控RASSF1A基因表达,并能有效地抑制HEC-1-B细胞的增殖和诱导细胞调亡.     

5-Aza-CdR对乳腺癌MCF-7细胞增殖及抑癌基因RASSF2A表达的影响

目的研究5-氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对乳腺癌MCF-7细胞增殖及抑癌基因RASSF2A表达的影响。方法用不同浓度的5-Aza-CdR处理MCF-7细胞12~96h,四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法和流式细胞仪分别检测药物处理前后细胞的增殖活性和凋亡率;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各阶段RASSF2A mRNA的表达水平,甲基化特异性PCR(MSP)观察该基因甲基化的改变。结果用1、5、10μmol/L 5-Aza-CdR处理MCF-7细胞24、48、72和96h后,细胞生长均受到抑制,呈时间和剂量依赖性。流式细胞仪分析表明,3种药物浓度处理细胞72h后凋亡率增加,5和10μmol/L组凋亡率分别为(25.5±3.5)%和(58.2±3.2)%,与对照组(13.4±2.0)%相比差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR检测显示,不同浓度药物处理MCF-7细胞后,RASSF2A mRNA表达水平随着药物浓度的增加而逐步上调;进一步MSP检测发现这些癌细胞中RASSF2A甲基化状态得到了不同程度的逆转。结论 5-Aza-CdR可通过逆转RASSF2A基因异常甲基化导致该基因表达上调来抑制MCF-7细胞增殖,RASSF2A是一个乳腺癌相关抑癌基因。     

5-Aza-CdR对人肝癌细胞RASSF1 A甲基化的影响

目的：探讨5-氮杂-2ˊ-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对人肝癌细胞RASSF1A基因启动子甲基化以及mRNA表达的影响。方法体外培养人肝癌细胞株SMMC-7721,分别用0.5、5.0、30.0、50.0μmol/L的5-Aza-CdR与之孵育72 h,甲基化PCR检测处理前后启动子甲基化水平,RT-PCR检测RASSF1A mRNA表达。结果随着药物浓度的增加,甲基化RASSF1A含量逐渐降低,而未甲基化产物逐渐增高;5-Aza-CdR处理后,RASSF1A mRNA的含量随之增高。结论5-Aza-CdR可逆转SMMC-7721细胞株细胞中基因甲基化修饰状态。     

5-Aza-CdR对肾细胞癌Caki-1细胞生长及E-钙黏蛋白基因表达的影响

目的:研究甲基化抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对肾细胞癌细胞株Caki-1增殖抑制作用、对E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)甲基化状态及E-cad蛋白状态的影响。方法:不同浓度5-Aza-CdR处理肾细胞癌细胞株Caki-1后,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色实验观察细胞经药物处理前后的生长活性;甲基化特异性PCR(methylationspecial PCR,MSP)检测细胞处理前后E-cad基因的甲基化状态;蛋白质印迹法检测5-Aza-CdR处理细胞前后E-cad蛋白的表达。结果:5-Aza-CdR能抑制肾细胞癌细胞株Caki-1的增殖;未经药物处理组的基因高甲基化,经10-6mol/L5-Aza-CdR处理72 h,E-cad基因启动子区域高甲基化得到逆转,同时E-cad蛋白表达也得到增强。结论:5-Aza-CdR能够有效逆转Caki-1细胞E-cad基因的异常甲基化,恢复E-cad蛋白表达。     

5-杂氮-2’-脱氧胞苷对BGC823胃癌细胞株RIZ1基因去甲基化转录调控作用

目的:探讨5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdB)对人胃癌细胞系BGC823细胞株RIZ1基因的去甲基化转录调控作用及对细胞株生长增殖的影响,寻找胃癌治疗的新靶点.方法:使用3种不同浓度5-Aza-CdR干预胃癌BGc823细胞,甲基化特异性PCR(MSP)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCB)检测药物干预前后RIZ1基因的甲基化状态和RIZ1 mBNA的表达;MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术分析细胞周期及细胞凋亡的改变.结果:未经5-Aza-CAR处理的BGC823细胞中MZ1基因启动子区域cpG岛高甲基化,且RIZ1 mRNA不表达,经2,5,10 μmol/L 5-Aza-CdB处理48 h后,RIZ1基因启动子区域高甲基化得到逆转,细胞中均有RIZ1 mRNA表达,相对定量值分别为0.509,0.716,0.831;3种浓度5-Aza-CdR处理BGC823细胞后,与对照组比较,细胞增殖速度出现不同程度减慢(P<0.05),随着浓度的增加其抑制作用增强;并显著抑制BGC823细胞生长周期,与对照组相比,G0/G1期细胞数增加,S期细胞数减少,细胞凋亡率明显升高(P<0.05).结论:5-Aza-CdR能有效逆转胃癌BGC823细胞RIZ1基因的异常甲基化,从而激活因高甲基化导致RIZ1基因沉默的再转录,诱导该基因的表达,抑制肿瘤细胞生长.     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

尿微量白蛋白检测在继发性肾脏疾病中的临床意义

目的探讨尿微量白蛋白（m-Alb）检测在继发性肾脏疾病中的临床意义。方法采用Beckman Immage全自动特种蛋白分析仪对糖尿病组、高血压组、心脏病组患者进行了m-Alb测定,同时与健康组结果作对比。结果m-Alb检测糖尿病组为3.7±5.26mg/dl,高血压组为7.5±8.18mg/dl,心脏病组为7.8±3.76mg/dl,健康组为0.66±0.48mg/dl,各试验组m-Alb增高百分率为糖尿病组48.9%,高血压组37.5%,心脏病组26.9%。结论尿蛋白阴性的糖尿病、高血压、心脏病患者进行m-Alb检测,可以监测病程的进展。     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

妊娠晚期重度妊高征的监测

重度妊高征表现为高血压、蛋白尿、浮肿等症状 ,严重可以导致母婴死亡。对妊娠足月的重度妊高征 ,可以根据其临产与否及宫颈条件 ,立即决定其为阴道分娩或是剖宫产术。对于妊娠晚期的重度妊高征 ,因其胎龄不足月 ,胎儿生长发育及胎肺成熟度情况需通过一定时间的治疗 ,根据其病情变化来决定其治疗方案或终止妊娠的时机[1,2 ] 。这就需要我们对这一阶段的治疗进行监测 ,防止母儿并发症的发生。现将 2 0 0 0年至今我院收治妊娠晚期重度妊高征 30例的监测结果回顾分析如下。1　资料和方法1.1　研究对象　选择孕 31～ 36周重度妊高征 30例 ,其中 …