脑源性神经营养因子对小鼠视网膜Müller细胞谷氨酸转运体表达的调控

谷氨酸是视网膜主要的兴奋性神经递质,然而在病理性浓度升高时,对视网膜神经节细胞(RGC)具有兴奋毒性作用[1].L-谷氨酸/L-天门冬氨酸转运体(GLAST)是表达在视网膜Müller细胞上最主要的谷氨酸转运体[5],在维持谷氨酸平衡和保护RGC免受谷氨酸兴奋毒性作用中发挥着重要作用[3].     

脑源性神经营养因子对小鼠视网膜Müller细胞谷氨酸转运体表达的调控

谷氨酸是视网膜主要的兴奋性神经递质,然而在病理性浓度升高时,对视网膜神经节细胞(RGC)具有兴奋毒性作用[1].L-谷氨酸/L-天门冬氨酸转运体(GLAST)是表达在视网膜Müller细胞上最主要的谷氨酸转运体[5],在维持谷氨酸平衡和保护RGC免受谷氨酸兴奋毒性作用中发挥着重要作用[3].     

米诺环素在L-谷氨酸诱导的视网膜神经节细胞损伤中的保护作用及分子机制

目的 探讨米诺环素在L-谷氨酸诱导的视网膜神经节细胞(RGC)毒性中的保护作用和分子机制.方法 实验研究.原代小鼠RGCs体外培养24 h后,随机分为3组:对照组,L-谷氨酸组(100 μmol/L、500 μmol/L、1 mmol/L和2 mmol/L)及L-谷氨酸+米诺环素组(30 μmol),观察不同浓度L-谷氨酸对RGC的存活率与轴突生长的损伤作用及米诺环素的保护作用.体内实验,将雌性B6小鼠随机分为实验组(30只)和对照组(30只).两组小鼠腹腔内分别注射米诺环素(实验组,60 mg/kg)或生理盐水(对照组),每天1次,连续7 d.第2天时,两组小鼠玻璃体腔内注射2μl L-谷氨酸(2 mmol/L),诱导RGC损伤.免疫组化染色分析β-Ⅲ-tubulin阳性细胞数目变化及视网膜神经胶质酸性蛋白(GFAP)表达情况,Real-time PCR和免疫印迹法分别检测小鼠视网膜组织中干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素(IL-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、GFAP与波形蛋白(Vimentin)的mRNA及蛋白表达水平.结果 体外实验显示,与对照组相比,L-谷氨酸降低RGC的存活率,与剂量和干预时间呈负相关.同时L-谷氨酸可明显抑制RGC轴突的生长,RGC轴突长度>2BL、1～2 BL、<1 BL占总细胞数比例分别从50.38%、7.83%和3.72%降至31.43%、5.05%和1.29%.而米诺环素能明显减轻L-谷氨酸对RGC的毒性作用,改善RGC轴突生长,各组细胞比例回升至51.00%、8.10%和2.43%,谷氨酸与对照组相比、米诺环素组与谷氨酸相比,差异有统计学意义(F=18.87,P<0.01).体内实验结果显示,与对照组相比,L-谷氨酸组小鼠RGC数目显著减少(45.00±10.21和68.50±2.86),而米诺环素治疗后可明显改善L-谷氨酸诱导的RGC损伤,RGC数目恢复至62.00±11.65,(F=7.6,P<0.01).谷氨酸处理后视网膜组织中GFAP的表达水平明显增高,而米诺环素明显降低视网膜组织中GFAP的表达.同时,L-谷氨酸显著提高小鼠视网膜组织中炎症相关因子IFN-γ、IL-1、TNF-α及胶质细胞相关蛋白Vimentin和GFAP的基因及蛋白表达水平,而米诺环素可显著抑制这些因子的表达.结论 L-谷氨酸损伤可诱导RGC凋亡、抑制RGC轴突生长,并上调炎症因子及视网膜相关胶质蛋白的基因与蛋白表达水平,米诺环素对L-谷氨酸所导致的视网膜神经节细胞损伤具有明显的保护作用.     

视网膜Mueller细胞谷氨酸转运体及其功能调节

谷氨酸的兴奋毒性是造成视网膜神经节细胞损伤和死亡的主要因素之一,而谷氨酸转运体对维持细胞外谷氨酸水平起重要作用。GLAST是表达在Muller细胞膜上的一种重要的谷氨酸转运体,其在分子和蛋白质水平上的调节方式可能为酶底物—诱导的负反馈调节。     

视网膜Müller细胞谷氨酸转运体及其功能调节

谷氨酸的兴奋毒性是造成视网膜神经节细胞损伤和死亡的主要因素之一,而谷氨酸转运体对维持细胞外谷氨酸水平起重要作用.GLAST是表达在Müller细胞膜上的一种重要的谷氨酸转运体,其在分子和蛋白质水平上的调节方式可能为酶底物-诱导的负反馈调节.     

糖尿病视网膜神经节细胞损伤的研究进展

糖尿病性视网膜病变( diabetic retinopathy,DR)是糖尿病严重并发症之一,可对患者造成严重视功能损害。在视网膜出现微血管病变之前,已经出现视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell, RGC)的病变。神经细胞的病理改变是糖尿病早期视功能障碍的重要因素。 RGC的损伤机制可能与高血糖代谢紊乱、氧化应激损伤、神经营养因子缺乏以及谷氨酸兴奋毒性有关。许多实验研究发现神经元保护药物能减少RGC凋亡,一些关于有效性和安全性的临床研究为临床治疗糖尿病视网膜神经细胞病变奠定重要基础。     

藏红花提取液对兔慢性高眼压模型中视网膜相关生长蛋白表达的影响

青光眼患者由于慢性高眼压引起眼部血液循环异常、视神经轴浆流受阻[1,2],加之谷氨酸浓度的升高,反应性胶质细胞的活化及一氧化氮的毒性作用[3],导致视网膜神经节细胞(RGC)凋亡和视神经的损伤,最终导致失明.     

糖尿病视网膜Müller细胞GLAST功能变化的研究进展

糖尿病引起的视网膜神经功能异常可能先于血管损伤,引起这一改变的最主要原因是视网膜细胞外谷氨酸的大量蓄积,持久激活谷氨酸受体以及损伤视网膜神经元。细胞外谷氨酸的蓄积可能与视网膜Müller细胞L-谷氨酸/L-天冬氨酸转运体(GLAST)功能下降有关,致使细胞外的谷氨酸不能及时转运到Müller细胞内。本文就Müller细胞GLAST的作用机制及在糖尿病状态下功能的变化进行综述。     

视网膜Müller细胞谷氨酸转运体GLAST的表达

目的:探讨人、鼠视网膜Muller细胞体外培养的方法,并研究视网膜Muller细胞谷氨酸转运体GLAST(L-谷氨酸/L-门冬氨酸转运体)的表达与分布。方法:采用视网膜组织块的方法培养引产胎儿及产后3 d(P3)乳鼠视网膜Muller细胞,振荡法分离纯化细胞,观察细胞形态和生长特性,并对Muller细胞进行免疫细胞化学荧光染色。结果:采用组织块培养的Muller细胞,约需15~20 d细胞基本融合,振荡法分离的细胞纯度高。培养的细胞神经胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、波形蛋白(Vimentin)及其谷氨酸转运体GLAST抗体染色阳性,GLAST主要分布在Muller细胞膜及突起上。结论:用组织培养的方法可成功培养出人、鼠视网膜Muller细胞,Muller细胞膜上有广泛的谷氨酸转运体GLAST的表达及分布。     

谷氨酸诱导对鼠视网膜Müller细胞谷氨酸转运体的调控

目的 研究底物谷氨酸对视网膜Müller细胞L-谷氨酸和L-天门冬氨酸转运体(GLAST)的调控作用.方法 采用L-3H-谷氨酸摄取分析方法研究底物谷氨酸诱导对GLAST活性影响.并提取细胞总蛋白,采用免疫印迹法分析视网膜Miiller细胞GLAST蛋白质表达量的差异.结果 在培养的鼠视网膜Müller细胞中加入不同浓度的谷氨酸培养30 min后,发现随着底物谷氨酸浓度增加(5～1000 μmol/L),L-3H-谷氨酸的摄取量增加.平均摄取量分别为(3100.7±86.8)、(3247.0±84.2)、(3840.0±118.6)、(4493.7±229.2)、(6429.0±81.5)、(6305.3±31.0)、(6346.3±36.2)cpm·mg-1·ml-1.当谷氨酸浓度为100 μmol/L时,L-3H-谷氨酸摄取量最大.随着谷氨酸浓度的增加,谷氨酸转运体GLAST蛋白质的表达量增加,当谷氨酸浓度为100 μmol/L时,GLAST蛋白质表达量达最大.结论 谷氨酸的底物诱导可增加GLAST摄取活性,且上调GLAST蛋白质的表达.     

银杏叶提取物对培养的人眼视网膜神经节细胞的保护作用

目的 探讨银杏叶提取物（EGb761）对培养的人眼视网膜神经节细胞(RGC)的保护作用。方法 对照实验研究。将培养的人眼视网膜细胞分为对照组、谷氨酸组、EGb761组及谷氨酸+EGb761组,用Thy-1作为RGC特异性荧光抗体,以免疫流式细胞技术评价EGb761对人眼RGC的保护作用。多组间细胞存活率比较采用重复测量的方差分析,组间两两比较采用LSD t检验。结果 在不同干预因素作用下,RGC存活率呈现不同变化,对照组为(61.94±7.75)％,谷氨酸组为(44.59 +4.19)％,EGb761组为(75.05 +3.90)％,EGb761+谷氨酸组为(63.19±9.44)％;各组间RGC存活率比较差异有统计学意义(F=13.329,P＜0.01)。各组与对照组RGC存活率两两比较,显示谷氨酸组RGC存活率降低(P =0.010),EGb761组RGC存活率升高(P=0.019),EGb761+谷氨酸组与对照组RGC存活率差异无统计学意义(P =0.801);与谷氨酸组相比EGb761组和EGb761+谷氨酸组RGC存活率明显升高(P=0.000,0.020)。死亡RGC中大RGC所占百分比,EGb761组为(24.63+7.21)％,EGb761+谷氨酸组为(25.99±5.05)％,与对照组(36.69±2.92)％比较,两组死亡RGC中大RGC所占百分比均降低(P=0.001,0.002);与谷氨酸组(40.78±3.34)％相比,两组大RGC死亡百分比亦降低(P =0.000,0.000)。结论 EGb761可对抗谷氨酸兴奋性毒性造成的RGC损伤,对体外培养的人眼RGC具有明显的保护作用。     

藏红花对慢性高眼压下兔眼视网膜神经节细胞的保护作用

青光眼的病理基础是在高眼压和(或)视网膜缺血的作用下,视网膜神经节细胞(RGC)及其轴突数目不断减少.在研究对慢性青光眼的损伤和治疗时,通常以RGC数目作为观察指标[1,2].我们将藏红花提取液用于慢性高眼压兔眼模型,通过观察RGC数目变化及其在电子显微镜下的改变,探讨藏红花对慢性高眼压兔眼RGC的保护作用.     

合用多种草药提取液促进轴突切断的视网膜神经节细胞的存活和再生

切断成年大鼠视神经可导致广泛的视网膜神经节细胞 (RGC)死亡 ,而氧化剂和自由基起了重要作用。因此 ,抗氧化剂和自由基清除剂可能对RGC轴突切断后的存活有促进作用。美国五叶人参 (PQE)、二裂片银杏树 (GBE)和金丝桃属植物 (HPE)的提取液都已被证实有抗氧化的性质 ,其中PQE能延缓缺血和谷氨酸兴奋毒性导致的神经元死亡 ,GBE对缺血性损伤、β 淀粉样变和一氧化氮毒性及光导致的光感受器损伤均有保护作用。该研究单独或联合应用这三种草药提取液 ,检测它们对轴突切断的RGC的存活和再生的作用。所有动物均在术后 2小时经食道给药直…     

视网膜神经节细胞谷氨酸毒性的防护研究

目前认为谷氨酸兴奋毒性是触发青光眼和 /或视网膜缺血性神经节细胞损伤级联反应的最主要因素。大量研究表明 ,预防性阻断谷氨酸兴奋毒性可以保护视网膜神经节细胞 ,减少缺血损伤和神经节细胞凋亡。现就近年来抗谷氨酸毒性 ,保护视网膜神经节细胞的方法和药物作一简要综述     

视网膜神经节细胞谷氨酸毒性的防护研究

目前认为谷氨酸兴奋毒性是触发青光眼和／或视网膜缺血性神经节细胞损伤级联反应的最主要因素。大量研究表明，预防性阻断谷氨酸兴奋毒性可以保护视网膜神经节细胞，减少缺血损伤和神经节细胞凋亡。现就近年来抗谷氨酸毒性，保护视网膜神经节细胞的方法和药物作一简要综述。     

MK-801对大鼠慢性高眼压视网膜神经节细胞的保护作用

目的：探讨MK-801对大鼠慢性高眼压视网膜神经节细胞(retinal ganglial cells, RGC)的保护作用。 方法：制备SD大鼠慢性高眼压模型,36只SD大鼠随机分为空白对照组、慢性高眼压＋生理盐水对照组、慢性高眼压＋MK-801处理组,各组12 只。观察并比较各组大鼠在不同时间点（处理后1, 4, 7和10d）谷氨酸含量、视网膜总厚度和内层厚度、RGC数目及RGC凋亡情况。 结果：在各时间点,慢性高眼压大鼠（MK-801处理组和生理盐水对照组）视网膜谷氨酸含量均较空白对照组高（P<0.05）; MK-801处理组视网膜谷氨酸含量比同期生理盐水对照组明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）。HE染色表明MK-801处理组和空白对照组视网膜总厚度和内层厚度均大于生理盐水对照组（P＜0.05）,RGC数目高于生理盐水对照组（P＜0.05）。MK-801处理组RGC 层凋亡阳性细胞的表达少于生理盐水对照组。 结论：MK-801可通过阻断谷氨酸介导的神经毒性作用,对慢性高眼压RGC起到保护作用。     

金丝桃素对兔急性高眼压视网膜的保护作用

目的 探讨蛋白激酶C抑制剂金丝桃素对兔急性高眼压视网膜谷氨酸含量的影响以及对视网膜的保护作用.方法 将新西兰大白兔随机分成处理组、对照组和正常组.处理组向玻璃体腔内注射0.1 mL的金丝桃素,对照组向玻璃体腔内注射0.1 mL生理盐水,48 h后经前房灌注升高眼压达100 mmHg(1 kPa=7.5 mmHg),持续90 min,24 h后取材.正常组不做上述处理直接取材.高效液相色谱法检测视网膜谷氨酸含量;光镜、电镜观察视网膜超微结构的变化,并采用医学图像分析系统计数视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGC)、测量视网膜总厚度及内层厚度;TUNEL法检测视网膜细胞的凋亡.结果 处理组、对照组和正常组视网膜谷氨酸含量分别为(56.6±2.1)×10-6 mmol·g-1、(84.1±2.7)×10-6 mmol·g-1和(17.1±2.3)×10-6 mmol·g-1,处理组视网膜谷氨酸含量明显低于对照组(P＜0.05);3组长450 μm视网膜片段的RGC数分别为(22.30±0.83)、(15.50±0.56)和(25.50±0.67),处理组和正常组RGC数均明显高于对照组(P＜0.05),而RGC层及内核层内凋亡的细胞数明显少于对照组.结论 金丝桃素能减缓兔急性高眼压视网膜谷氨酸水平的升高、减轻RGC的凋亡,对视网膜具有一定的保护作用.     

视网膜Müller细胞与谷氨酸代谢

视网膜Müller细胞作为重要的星形胶质细胞,在维持视网膜正常功能方面具有重要的作用,在病理状态下也可以通过蛋白表达、反应性胶质增生、谷氨酸(glutamate,Glu)转运体的表达、谷氨酰胺合成酶的改变和分泌神经营养因子等途径对Glu代谢进行干预,从而起到保护视网膜神经元免受Glu神经性毒性损伤的作用.     

青光眼的视神经保护策略

目前对青光眼的治疗方法主要是通过药物或手术降低眼压,然而单纯降低眼压并不足以防止青光眼引起的视神经进行性损害,其他病理机制也很可能导致视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)和视神经的损伤。所有可能造成RGC凋亡的因素如谷氨酸毒性、营养因子中断、血管异常、胶质细胞活化及一氧化氮的毒性等,均可能与青光眼的病变有关。虽然目前尚无一种被完全公认的青光眼发生机制,     

热休克蛋白70在视网膜神经元和Müller细胞中的诱导及其保护作用

目的评价大鼠视网膜神经元(RNs)和Müller细胞中热休克蛋白(HSP)70的诱导表达,及其对低糖和谷氨酸损伤的视网膜神经元的保护作用. 方法大鼠RNs和Müller细胞体外培养体系分别经过热休克处理(42℃下1 h)及免疫细胞化学法检测HSP70表达的时间经过;并对RNs进行低糖(0.56 mmol/L葡萄糖,作用6 h)和谷氨酸(100 μmol/L,作用 6 h)兴奋毒性损伤,四唑盐(MTT)比色法评价细胞存活能力,同时用HSP70抗体阻断其表达. 结果热休克后大鼠RNs和Müller细胞中HSP70高效表达;经热休克预处理,RNs在低糖和谷氨酸盐损伤后的细胞活力明显提高,该现象可被HSP70抗体阻断. 结论热休克能够诱导RNs和Müller细胞高效表达HSP70,从而增强RNs对低糖和谷氨酸兴奋毒性损伤的耐受能力.